CN108575983A - 一种小型动物切削冷冻包埋方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例适用于标本处理技术领域，提供了一种小型动物切削冷冻包埋方法，该包括以下步骤：制备灌注插管；配制血管造影剂与包埋剂；根据动物样本的体型制作包埋盒；准备与配制麻醉剂以及配制脱毛剂；利用所述麻醉剂对动物样本进行麻醉；利用所述灌注插管对动物样本进行血管灌注；利用脱毛剂对动物样本进行脱毛处理；动物样本处理；动物样本的包埋与冷冻；动物样本的切削。本发明的小型动物切削冷冻包埋方法为实现小型动物数字化提供了技术保障。
Description
技术领域
本发明属于标本处理技术领域，尤其涉及一种小型动物切削冷冻包埋方法。
背景技术
小型动物已成为药理学、生理学、遗传学、营养学、病理学等研究领域最基本的研究工具之一，随着计算机技术的应用和发展，医药学研究从传统的人体和动物实验转向利用计算机现代信息技术进行数字化模拟来完成。而小型动物数据的采集包括了标本处理、机械研制、冷冻保温、自动化控制、图样采集和计算机等多项综合技术，其中仅标本处理一项就包含了多项综合技术。由于小型动物的解剖结构特征与人体大型标本不同，小型动物数据的采集在技术处理方法中与“数字化虚拟人体若干关键技术”的标本处理技术有所区别。
数字化小型动物的研究是一个综合的系统工程，涉及多个学科，在利用计算机进行模拟研究的前提是完成基础数据集的采集，为实现小型动物数字化提供技术上保障，急需提供一种小型动物断层解剖切片包埋技术。
发明内容
本发明实施例所要解决的技术问题在于提供一种小型动物切削冷冻包埋方法，旨在为实现小型动物数字化提供技术上保障。
本发明实施例是这样实现的，提供一种小型动物切削冷冻包埋方法，该方法包括以下步骤：
S1、制备灌注插管；
S2、配制血管造影剂与包埋剂；
S3、根据动物样本的体型制作包埋盒；
S4、准备与配制麻醉剂以及配制脱毛剂；
S5、利用所述麻醉剂对动物样本进行麻醉；
S6、利用所述灌注插管对动物样本进行血管灌注；
S7、利用脱毛剂对动物样本进行脱毛处理；
S8、将脱毛后的动物样本放在盖有纱布的托盘上，按照动物样本的生活特征常规将动物样本卧姿摆放后，将装载有该动物样本的托盘移入冷柜中进行低温冷冻后，作固定包埋；
S9、将所述包埋盒放入冷柜中，加入所述包埋剂至包埋盒中，并覆盖所述包埋盒的底部，然后关上冷柜进行冷冻处理，待所述包埋盒冻结成平滑的底层后，将上述冷冻好的动物样本放入到所述包埋盒里，并保持动物样本身体长轴方向垂直于底层，再加入所述包埋剂至覆盖动物样本后进行冷冻，使动物样本固定在所述包埋盒里；
S10、冷冻包埋后的动物样本经过不同断层间距切削成若干断层切片。
进一步地，在所述S1中：按照实验动物样本的大小及解剖结构特征，购买各种型号注射用的一次性注射针头和静脉针，将所述注射针头的针栓剪除，留下针梗部，用细砂纸将所述注射针头磨平磨光，剪去所述静脉针的针头，用塑料软管部接上所述注塑针头，细线结扎固定，完成灌注插管的制备。
进一步地，在所述步骤S2中，所述血管造影剂的配制过程包括如下步骤：根据动物样本大小，按比例配制出浓度为8％～20％明胶溶液，然后加人氧化铝或朱砂，充分拌匀后待用，并使明胶溶液的温度保持在35℃～45℃之间；
所述包埋剂的配制过程包括如下步骤：按3％～5％的浓度称取适量明胶，溶解过滤明胶，然后加入亚甲基蓝试剂1g/1000ml，搅拌均匀，配成所述包埋剂。
进一步地，在所述步骤S3中：按照实验要求确定卧式切削，测量动物样本的长宽高，选用有机玻璃为制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有机玻璃活动板，经螺丝组装固定成呈长方型的盒子，在盒子内沿长度方向设置四个均匀分布的定位杆，以形成所述包埋盒。
进一步地，在所述S4中，准备的麻醉剂为乙醚试剂，制备的麻醉剂为20g乌拉坦、5g水合氯醛晶体和100ml超纯净水混合制成混合麻醉液。
当选用所述乙醚试剂对动物样本麻醉时，利用所述乙醚试剂对动物样本进行吸入麻醉，并将动物样本放入装有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰卧固定于灌注平台上；当选用所述混合麻醉液对动物样本麻醉时，用注射器抽取混合麻醉液，随即对动物样本进行腹腔注射，待麻醉后将动物仰卧固定于灌注平台上，准备灌注。
进一步地，在所述S4中，所述脱毛剂的配制包括如下两种溶液：(1)取6～10g硫化钠晶体，加入到装有100ml超纯净水的烧杯中，配制成浓度为6％～10％的硫化钠溶液；(2)取15～20g的氢氧化钠晶体，配制浓度为15％～20％的氢氧化钠溶液。
进一步地，在所述S6中，在动物样本麻醉后，于动物样本腹股沟部找到动脉搏动处，作1～2cm的矢状切口，钝性分离出股动脉和股静脉，按照血管大小，选择相适应的所述灌注插管，作动脉、静脉双向插管并结扎固定，然后注射肝素钠抗凝，待2～3分钟后放血处死，灌注相应的所述血管造影剂后，拔掉所述灌注插管，并结扎血管，防止所述血管造影剂渗漏，清理干净动物样本的切口及局部结构，作缝合处理。
本发明实施例与现有技术相比，有益效果在于：本发明的小型动物切削冷冻包埋方法能够为实现小型动物数字化提供技术上保障：1)动物样本切削后获取的断层切面不变形，无明显锐角，内部结构清晰，界限分明，断面整体上无压缩和凹陷；2)灌注后的动物样本血管颜色、骨组织、黏膜组织及肌肉组织等界限分明，易于识别；3)能够顺利地进行图像分割、三维重建等；4)解决了不同种类、不同大小的小型动物所涉及到的包埋盒设计及制作问题，免去了需加工定制包埋盒的麻烦；5)解决了包埋剂在低温下凝结时，体积膨胀并产生压力，导致动物样本形态结构变形的问题。
附图说明
图1是本发明实施例提供的动物样本被包埋于包埋盒里的状态示意图；
图2是图1中的动物样本经切削成若干断层切片的状态示意图。
在附图中，各附图标记表示：
1、包埋盒；11、定位杆；a、腹板切片；c、盆部切片；d、盆部切片；e、盆部切片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供了一种小型动物切削冷冻包埋方法，该方法包括以下步骤：
S1、制备灌注插管：
按照实验动物样本的大小及解剖结构特征，购买各种型号注射用的一次性注射针头和静脉针，将注射针头的针栓(塑料部分)剪除，留下针梗部，用细砂纸将注射针头磨平磨光，剪去所述静脉针的针头，用塑料软管部接上注塑针头，细线结扎固定，完成动物样板灌注用的灌注插管制备。
S2、配制血管造影剂与包埋剂：
血管造影剂的配制过程包括如下步骤：根据动物样本大小，按比例配制出浓度为8％～20％明胶溶液，然后加人氧化铝或朱砂，充分拌匀后配制成该血管造影剂待用，并使该血管造影剂的温度保持在35℃～45℃之间，保证其使用效果的最佳特性。
包埋剂的配制过程包括如下步骤：按3％～5％的浓度称取适量明胶，溶解过滤明胶，然后加入亚甲基蓝试剂1g/1 000ml，搅拌均匀，配成该包埋剂。
S3、根据动物样本的体型制作包埋盒1：
按照实验要求确定卧式切削，测量动物样本的长宽高，选用有机玻璃为制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有机玻璃活动板，经螺丝组装固定成呈长方型的盒子，在盒子内沿长度方向设置四个均匀分布的定位杆11，以形成该包埋盒1，该包埋盒1内设置的定位杆11能够对动物样本起到很好的定位作用，参见如图1所示。
S4、准备与配制麻醉剂以及配制脱毛剂：
准备的麻醉剂为乙醚试剂，制备的麻醉剂为20g乌拉坦、5g水合氯醛晶体和100ml超纯净水混合制成混合麻醉液。
脱毛剂的配制包括如下两种溶液：(1)取6～10g硫化钠晶体，加入到装有100ml超纯净水的烧杯中，配制成浓度为6％～10％的硫化钠溶液；(2)取15～20g的氢氧化钠晶体，配制浓度为15％～20％的氢氧化钠溶液。
S5、利用上述的麻醉剂对动物样本进行麻醉：
按照实验动物样本大小、种类，选用单种药物乙醚试剂或混合药物混合麻醉液对动物样本进行麻醉；一般的较小动物(如小鼠、大鼠等)选用乙醚试剂进行麻醉，当选用该乙醚试剂对动物样本麻醉时，利用乙醚试剂对动物样本吸入麻醉，并将动物样本放入装有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰卧固定于灌注平台上；为防止动物样本苏醒后影响灌注，用20mL左右的塑料试管，加入乙醚棉球后放入至密封容器的底部，然后将塑料试管口半套于动物本体鼻孔上，用于动物持续匀量麻醉。当实验动物样本为较大动物时(如兔、猫等)选用上述制备的混合麻醉液进行麻醉，当选用混合麻醉液对动物样本麻醉时，用注射器抽取混合麻醉液，随即对动物样本进行腹腔注射，待2～3分钟动物出现站立不稳、反应迟钝随即进人昏睡状态，待麻醉后将动物样本仰卧固定于灌注平台上，准备灌注。
S6、利用准备好的灌注插管对动物样本进行血管灌注：
在动物样本麻醉后，于动物样本腹股沟部找到动脉搏动处，作1～2cm的矢状切口，钝性分离出股动脉和股静脉，按照血管大小，选择相适应的灌注插管，作动脉、静脉双向插管并结扎固定，然后注射肝素钠抗凝，待2～3分钟后放血处死，灌注相应的血管造影剂，并且在灌注时保持血管造影剂的温度在35℃～45℃之间，防止过热造成血管平滑肌收缩和保持较好的流动性，在灌注血管造影剂完成后，拔掉灌注插管，并结扎血管，防止所述血管造影剂渗漏，清理干净动物样本的切口及局部结构，作缝合处理。
S7、利用脱毛剂对动物样本进行脱毛处理：
动物样本的脱毛方法有多种，在本实施例中，选用理发剪先将动物样本大部分体毛尽量剪短，然后采用配制好的浓度为6％～10％的硫化钠溶液或浓度为15％～20％的氢氧化钠溶液轻轻擦拭动物样本全身，待体毛逐渐脱落至脱尽后用水冲洗干净。
S8、将脱毛后的动物样本放在盖有纱布的托盘上，按照动物样本的生活特征常规将动物样本卧姿摆放，并使动物样本身体保持呈直线状，尾巴向一侧弯曲，尾尖向前。在造型摆放完毕后将装载有该动物样本的托盘移入冷柜中进行-20℃低温冷冻后，作固定包埋；
S9、将准备好的包埋盒1放入冷柜中进行-20℃低温冷冻，加入准备好的包埋剂至包埋盒1中，并覆盖包埋盒1的底部，然后关上冷柜进行冷冻处理6小时后，待包埋盒1冻结成平滑的底层后，将上述冷冻好造型的动物样本放入到该包埋盒1里，并保持动物样本身体长轴方向垂直于底层，再加入包埋剂至覆盖动物样本后进行冷冻，使动物样本固定在包埋盒1里进行48小时深冻。
S10、冷冻包埋后的动物样本通过不同断层间距切削成若干断层切片，在本实施例中将动物样本切削成头部切片a、腹板切片b、盆部切片c和d、尾部切片e，参见如图2所示。
综上所述，本发明的小型动物切削冷冻包埋方法能够为实现小型动物数字化提供技术上保障：1)动物样本切削后获取的断层切面不变形，无明显锐角，内部结构清晰，界限分明，断面整体上无压缩和凹陷；2)灌注后的动物样本血管颜色、骨组织、黏膜组织及肌肉组织等界限分明，易于识别；3)能够顺利地进行图像分割、三维重建等；4)解决了不同种类、不同大小的小型动物所涉及到的包埋盒1设计及制作问题，免去了需加工定制包埋盒1的麻烦；5)解决了包埋剂在低温下凝结时，体积膨胀并产生压力，导致动物样本形态结构变形的问题。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备灌注插管；
S2、配制血管造影剂与包埋剂；
S3、根据动物样本的体型制作包埋盒；
S4、准备与配制麻醉剂以及配制脱毛剂；
S5、利用所述麻醉剂对动物样本进行麻醉；
S6、利用所述灌注插管对动物样本进行血管灌注；
S7、利用脱毛剂对动物样本进行脱毛处理；
S8、将脱毛后的动物样本放在盖有纱布的托盘上，按照动物样本的生活特征常规将动物样本卧姿摆放后，将装载有该动物样本的托盘移入冷柜中进行低温冷冻后，作固定包埋；
S9、将所述包埋盒放入冷柜中，加入所述包埋剂至包埋盒中，并覆盖所述包埋盒的底部，然后关上冷柜进行冷冻处理，待所述包埋盒冻结成平滑的底层后，将上述冷冻好的动物样本放入到所述包埋盒里，并保持动物样本身体长轴方向垂直于底层，再加入所述包埋剂至覆盖动物样本后进行冷冻，使动物样本固定在所述包埋盒里；
S10、冷冻包埋后的动物样本经过不同断层间距切削成若干断层切片。
2.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S1中：按照实验动物样本的大小及解剖结构特征，购买各种型号注射用的一次性注射针头和静脉针，将所述注射针头的针栓剪除，留下针梗部，用细砂纸将所述注射针头磨平磨光，剪去所述静脉针的针头，用塑料软管部接上所述注塑针头，细线结扎固定，完成灌注插管的制备。
3.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述血管造影剂的配制过程包括如下步骤：根据动物样本大小，按比例配制出浓度为8％～20％明胶溶液，然后加人氧化铝或朱砂，充分拌匀后待用，并使明胶溶液的温度保持在35℃～45℃之间；
所述包埋剂的配制过程包括如下步骤：按3％～5％的浓度称取适量明胶，溶解过滤明胶，然后加入亚甲基蓝试剂1g/1000ml，搅拌均匀，配成所述包埋剂。
4.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述步骤S3中：按照实验要求确定卧式切削，测量动物样本的长宽高，选用有机玻璃为制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有机玻璃活动板，经螺丝组装固定成呈长方型的盒子，在盒子内沿长度方向设置四个均匀分布的定位杆，以形成所述包埋盒。
5.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S4中，准备的麻醉剂为乙醚试剂，制备的麻醉剂为20g乌拉坦、5g水合氯醛晶体和100ml超纯净水混合制成混合麻醉液。
6.如权利要求5所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，当选用所述乙醚试剂对动物样本麻醉时，利用所述乙醚试剂对动物样本进行吸入麻醉，并将动物样本放入装有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰卧固定于灌注平台上；当选用所述混合麻醉液对动物样本麻醉时，用注射器抽取混合麻醉液，随即对动物样本进行腹腔注射，待麻醉后将动物仰卧固定于灌注平台上，准备灌注。
7.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S4中，所述脱毛剂的配制包括如下两种溶液：(1)取6～10g硫化钠晶体，加入到装有100ml超纯净水的烧杯中，配制成浓度为6％～10％的硫化钠溶液；(2)取15～20g的氢氧化钠晶体，配制浓度为15％～20％的氢氧化钠溶液。
8.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S6中，在动物样本麻醉后，于动物样本腹股沟部找到动脉搏动处，作1～2cm的矢状切口，钝性分离出股动脉和股静脉，按照血管大小，选择相适应的所述灌注插管，作动脉、静脉双向插管并结扎固定，然后注射肝素钠抗凝，待2～3分钟后放血处死，灌注相应的所述血管造影剂后，拔掉所述灌注插管，并结扎血管，防止所述血管造影剂渗漏，清理干净动物样本的切口及局部结构，作缝合处理。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180928 |
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