CN108572228B - 一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的hplc测定方法 - Google Patents

一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的hplc测定方法 Download PDF

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Abstract

一种5‑丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，包括在高效液相色谱仪上，采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按照比例实施梯度洗：I、样品溶液配制：取5‑丁基苯并三氮唑及其杂质适量，用乙腈‑水=60:40溶解，配置成每1ml含5‑丁基苯并三氮唑及其杂质0.10～0.50mg的样品溶液；II、检测参数设置：流动相流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为215～230nm；III、测定：取样品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，采用峰面积归一化法计算。本发明能同时测定5‑丁基苯并三氮唑及其五种杂质的含量，以进行产品质量控制。

Description

一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法。
背景技术
5-丁基苯并三氮唑是一种新型化工材料，广泛应用于金属（如银、铜、铅、镍、锌等）的缓蚀剂和防锈剂，多作为铜及铜合金的气相缓蚀剂，其用于户外涂料添加剂，可增加镀件光亮度，明显降低颜（涂）料因紫外线破坏引起的褪色。另外该产品在防锈油（脂）类产品、润滑油添加剂、循环水处理剂及汽车防冻液中也非常多见，亦可与多种阻垢剂、杀菌灭藻剂配合使用，对封闭循环冷却水系统缓蚀效果甚佳
在目前5-丁基苯并三氮唑的合成方法中，通过对5-丁基苯并三氮唑的杂质谱分析得知，其杂质主要有五种：1.起始原料（5-丁基苯胺）；2.合成中间体（5-丁基-2硝基乙酰苯胺、5-丁基-2-硝基苯胺、5-丁基-2-氨基苯胺）；3.合成副产物：5-丁基-2，6-二硝基乙酰苯胺。
现阶段尚无专利及文献记载5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，目前普遍采用TLC法来控制有关物质，但该方法适应性差，分离效果不佳，不能准确定量，且上述杂质的检测对反应控制和收率提高有着重要作用。为保证产品5-丁基苯并三氮唑的收率和质量，采用高效液相色谱法（HPLC）对该产品含量及杂质进行分析控制非常必要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱法，能同时测定5-丁基苯并三氮唑及其上述五种杂质的含量，以进行产品质量控制。
一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，在高效液相色谱仪上，采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，色谱柱规格为4.6×250mm，5μm；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按照比例实施梯度洗脱，包括以下步骤：
I、样品溶液配制：取5-丁基苯并三氮唑及其杂质适量，用乙腈-水=60:40溶解，配置成每1ml含5-丁基苯并三氮唑及其杂质0.10～0.50mg的样品溶液；
II、检测参数设置：流动相流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为215～230nm；
III、测定：取样品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，采用峰面积归一化法计算。
所述的按照比例实施梯度洗脱，流动相A与流动相B的比例设置为：
0min，流动相A 40%-50%，流动相B 50%-60%；
20min，流动相A 20%-30%，流动相B 70%-80%；
22min，流动相A 40%-50%，流动相B 50%-60%；
30min，流动相A 40%-50%，流动相B 50%-60%。
优选的是，所述的按照比例实施梯度洗脱，流动相A与流动相B的比例设置为：
0min，流动相A 45%，流动相B 55%；
20min，流动相A 25%，流动相B 75%；
22min，流动相A 45%，流动相B 55%；
30min，流动相A 45%，流动相B 55%。
本发明具有以下有益效果：建立了5-丁基苯并三氮唑及其杂质的高效液相色谱测定方法，仅使用普通的C18色谱柱和简单的乙腈-水系统就可以有效的将5-丁基苯并三氮唑中残留的各步中间体、副产物及降解杂质实现分离，且该方法简单快速、准确有效、灵敏度高、重复性好，可适用于各步反应的监控和中间体质量控制，为合成人员提供了重要的指导意义，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1为本发明实施例1的5-丁基苯并三氮唑及其杂质HPLC分析的系统适应性试验图谱。
图2为本发明实施例2的5-丁基苯并三氮唑及其杂质HPLC分析的系统适应性试验图谱。
图3为本发明实施例3的5-丁基苯并三氮唑及其杂质HPLC分析的系统适应性试验图谱。
图4为本发明实施例4的5-丁基苯并三氮唑及其杂质HPLC分析的系统适应性试验图谱。
图5为本发明实施例5的5-丁基苯并三氮唑及其杂质HPLC分析的系统适应性试验图谱。
图6为本发明实施例7的5-丁基苯并三氮唑的HPLC纯度测定图谱。
具体实施方式
以下结合具体实例对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂及仪器设备为本技术领域常规试剂和仪器设备。
以下实施例中使用的试剂及仪器设备如下：
高效液相色谱仪为Thermo Ultimate 3000，工作站为变色龙色谱工作站，色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），电子分析天平（梅特勒，十万分之一），超纯水机（优普），乙腈（西陇化工股份有限公司，色谱级）。
实施例1
系统适应性溶液的配制：分别精密称取5-丁基苯并三氮唑、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E适量，以乙腈-水（60:40）溶解，配置成含5-丁基苯并三氮唑0.1mg/ml及杂质A、B、C、D、E 0.5mg/ml的混合溶液，用0.22μm滤膜过滤后，作为5-丁基苯并三氮唑系统适应性溶液。
杂质A为5-丁基-2-氨基苯胺，杂质B为5-丁基-2，6-二硝基乙酰苯胺，杂质C为5-丁基苯胺，杂质D为5-丁基-2硝基乙酰苯胺，杂质E为5-丁基-2-硝基苯胺。
1.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE002
1.3 进样：取1.1项下系统适应性溶液按1.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
1.4 结果：记录色谱图，结果见附图1。在该色谱条件下，5-丁基苯并三氮唑与各杂质以及各杂质之间均能完全分离，峰型良好，分析时间较短，达到了5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分析要求，并可通过峰面积归一化法得到5-丁基苯并三氮唑的含量。
实施例2
2.1 系统适应性溶液配制：同实施例1项下系统适应性溶液配制。
2.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE004
2.3 进样：取2.1项下系统适应性溶液按2.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
2.4 结果：记录色谱图，结果见附图2。在该色谱条件下，5-丁基苯并三氮唑与各杂质以及各杂质之间均能完全分离，峰型良好，基本达到了5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分析要求，并可通过峰面积归一化法得到5-丁基苯并三氮唑的含量，但分析时间延长。
实施例3
3.1 系统适应性溶液配制：同实施例1项下系统适应性溶液配制。
3.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE006
3.3 进样：取3.1项下系统适应性溶液按3.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
3.4 结果：记录色谱图，结果见附图3。在该色谱条件下，虽各峰峰型良好，且分析时间缩短，但5-丁基苯并三氮唑与5-丁基-2-氨基苯胺的分离度仅为1.35，5-丁基-2-硝基乙酰苯胺与5-丁基-2，6-二硝基乙酰苯胺分离度仅为1.49，均未能完全分离，未达到5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分析要求。
实施例4
4.1 系统适应性溶液配制：同实施例1项下系统适应性溶液配制。
4.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速0.8ml/min，柱温25℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE008
4.3 进样：取4.1项下系统适应性溶液按4.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
4.4 结果：记录色谱图，结果见附图4。在该色谱条件下，5-丁基苯并三氮唑与各杂质以及各杂质之间能完全分离，且分析时间延长，基本能达到5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分析要求，并可通过峰面积归一化法得到5-丁基苯并三氮唑的含量，但各峰之间的分离度比实施例1中的分离度小。
实施例5
5.1 系统适应性溶液配制：同实施例1项下系统适应性溶液配制。
5.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.2ml/min，柱温35℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE010
5.3 进样：取2.1项下系统适应性溶液按5.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
5.4 结果：记录色谱图，结果见附图5。在该色谱条件下，虽各峰峰型良好，分析时间缩短，且5-丁基苯并三氮唑与各杂质以及各杂质之间达到基线分离，基本达到了5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分离要求，并可通过峰面积归一化法得到5-丁基苯并三氮唑的含量，但各峰之间的分离度比实施例1中的分离度小。
实施例6
6.1 重复性试验溶液的配制：分别精密称取5-丁基苯并三氮唑适量共6份，加乙腈-水（60:40）溶解，配置成含5-丁基苯并三氮唑1.0mg/ml的供试品溶液，并以0.22μm滤膜过滤，备用。
6.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.2ml/min，柱温35℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE012
6.3 进样：取6.1项下重复性试验溶液，分别按1.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul。
6.4 结果：记录色谱图，结果见表1。由表1可知，各供试品溶液中5-丁基苯并三氮唑及各杂质的含量没有明显差异，可见本测定方法的重复性良好。
表1 5-丁基苯并三氮唑重复性试验结果表
Figure DEST_PATH_IMAGE014
实施例7：
7.1 样品溶液的配制：精密称取5-丁基苯并三氮唑适量，加乙腈-水（60:40）溶解，配置成含5-丁基苯并三氮唑1.0mg/ml的样品溶液，并以0.22μm滤膜过滤，备用。
7.2 色谱条件：色谱柱为Dimonsil-C18（2）（4.6×250mm，5μm），流速1.2ml/min，柱温35℃，检测波长220nm，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱。
Figure DEST_PATH_IMAGE016
7.3 进样：取7.1项下样品溶液按2.2项下的色谱条件进样，进样量为20ul，共进样3次。
7.4 结果：记录色谱图（见附图6），计算3次实验结果得：5-丁基苯并三氮唑含量为99.58%，杂质A含量为0.08%，杂质C含量为0.32%，杂质E含量为0.03%，其中杂质B、杂质D及未知单杂均未检出。
综上所述，实施例1的方案是优选方案，在该色谱条件下，5-丁基苯并三氮唑与各杂质以及各杂质之间均能完全分离，峰型良好，分析时间较短，重复性良好，达到了5-丁基苯并三氮唑及其杂质的分析要求，并可通过峰面积归一化法得到5-丁基苯并三氮唑及各杂质的含量。该方法准确快速，高效率、低成本，能有效测定5-丁基苯并三氮唑及其杂质含量，对合成反应的监控、中间体质量控制以及最终产品的质量检测均具有重要意义。

Claims (3)

1.一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，其特征在于：在高效液相色谱仪上，采用十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按照比例实施梯度洗脱，包括以下步骤：
I、样品溶液配制：取5-丁基苯并三氮唑及其杂质适量，用乙腈-水=60:40溶解，配置成每1ml含5-丁基苯并三氮唑及其杂质0.10～0.50mg的样品溶液；
II、检测参数设置：流动相流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为215～230nm；
III、测定：取样品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，采用峰面积归一化法计算;
所述的按照比例实施梯度洗脱，流动相A与流动相B的比例设置为：
0min，流动相 A 40%-50%，流动相B 50%-60%；
20min，流动相A 20%-30%，流动相B 70%-80%；
22min，流动相A 40%-50%，流动相B 50%-60%；
30min，流动相A 40%-50%，流动相B 50%-60%。
2.根据权利要求1所述的一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，其特征在于：所述的按照比例实施梯度洗脱，流动相A与流动相B的比例设置为：
0min， 流动相A 45%，流动相B 55%；
20min，流动相A 25%，流动相B 75%；
22min，流动相A 45%，流动相B 55%；
30min，流动相A 45%，流动相B 55%。
3.根据权利要求1所述的一种5-丁基苯并三氮唑及其杂质的HPLC测定方法，其特征在于色谱柱规格为4.6×250mm，5μm。
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