CN108570472B

CN108570472B - 大豆转录因子GmZF351在植物耐逆性调控中的应用

Info

Publication number: CN108570472B
Application number: CN201710146452.4A
Authority: CN
Inventors: 张劲松; 陈受宜; 李擎天; 卞潇华; 张万科; 马彪; 林晴; 何锶洁
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2017-03-13
Filing date: 2017-03-13
Publication date: 2020-12-04
Anticipated expiration: 2037-03-13
Also published as: CN108570472A

Abstract

本发明公开了大豆转录因子GmZF351在植物耐逆性调控中的应用。本发明将转录因子GmZF351的编码基因转入受体大豆中，得到转基因大豆株系，该转基因大豆与受体大豆或转空载体大豆相比，其耐旱、耐盐性均有提高。说明转录因子GmZF351及其编码基因可以调控植物耐逆性，对培育植物高耐旱性品种具有重要的理论和现实意义。

Description

大豆转录因子GmZF351在植物耐逆性调控中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及大豆转录因子GmZF351在植物耐逆性调控中的应用。

背景技术

环境中物理、化学因素的变化，例如干旱、盐碱、冷害、冻害、水涝等胁迫因素是造成农作物严重减产的原因之一。美国在1939年-1978年的40年间，保险业对作物减产的赔付统计数据表明，由于干旱引起减产的赔付比例约占40.8％，高于涝(16.4％)、低温(13.8％)、冰雹(11.3％)和风(7.0％)，更是远高于虫灾(4.5％)、病害(2.7％)和其他因素。因此，培育耐旱性作物是种植业的主要目标之一。提高作物的耐旱性，除了利用传统的育种方法，目前，分子遗传育种已经成为科技工作者所关注的领域之一。

锌指蛋白是一大类蛋白，参与许多生物学过程，是生命活动中的重要蛋白之一。B-Box锌指蛋白是锌指蛋白中的一个亚家族，其包括含有1-2个B-box基元的B-Box结构域。这是一个较大的亚家族，已知拟南芥中，其成员分别参与侧根和侧枝发育、开花、气孔开闭、节律、病原菌入侵和生物胁迫应答等。在调控非生物胁迫中，STO(BBX24)基因的过表达提高了转基因植株的耐低温和耐盐性。葡萄VvZFPL与植物耐低温相关，转VvZFPL拟南芥表现了高耐冷性。大豆中，GmBBX32过表达则提高了籽粒的产量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何调控植物耐逆性。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了GmZF351蛋白质的新用途；

所述GmZF351蛋白质为a)或b)或c)：

a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；

b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。

本发明提供了GmZF351蛋白质在调控植物耐逆性中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明又提供了与GmZF351蛋白质相关的生物材料的新用途。

本发明提供了与GmZF351蛋白质相关的生物材料在调控植物耐逆性中的应用；

所述与GmZF351蛋白质相关的生物材料，为下述A1)至A12)中的任一种：

A1)编码GmZF351蛋白质的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；

A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；

A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；

A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

上述应用中，A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)其编码序列是序列1的cDNA分子或DNA分子；

2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码GmZF351蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码GmZF351蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。

上述应用中，所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

上述应用中，所述调控为提高。在本发明的实施例中，所述调控具体体现为在吸去植物根部水分或200mM NaCl溶液的条件下，转GmZF351水稻的存活率高于受体植物或转GmZF351水稻的萎蔫程度轻于受体植物。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了一种培育耐逆性提高的转基因植物的方法。

本发明提供的培育耐逆性提高的转基因植物的方法包括提高受体植物中GmZF351蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因植物的步骤；所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物。

上述方法中，所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

上述方法中，所述转基因植物的耐逆性高于所述受体植物体现在如下(1)或(2)：

(1)转基因植物的存活率高于受体植物；

(2)转基因植物的萎蔫程度轻于受体植物。

上述方法中，所述提高受体植物中GmZF351蛋白质的表达量和/或活性的方法为在受体植物中过表达GmZF351蛋白质。

上述方法中，所述过表达的方法为将GmZF351蛋白质的编码基因导入受体植物。

上述方法中，所述GmZF351蛋白质的编码基因的核苷酸序列是序列1所示的DNA分子。

上述方法中，所述GmZF351蛋白质的编码基因是通过含有GmZF351蛋白质的编码基因的重组载体导入受体植物中；所述GmZF351蛋白质的编码基因的重组载体为将所述GmZF351蛋白质的编码基因插入表达载体中得到的载体。所述表达载体可为任意一种双元农杆菌载体或可用于植物微弹轰击的载体等，如pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)。使用GmZF351构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛生素基因Ubiquitin启动子(pUbi)等，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

携带有本发明GmZF351的植物表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物细胞或组织培育成植株。

在本发明的实施例中，所述重组载体具体为将序列表中的序列1所示的DNA分子插入pCAMBIA1301表达载体的SalI和SpeI酶切位点之间得到的载体。

上述方法中，所述受体植物为单子叶植物或双子叶植物，所述单子叶植物可以为水稻、小麦或玉米等，所述双子叶植物可以为大豆、烟草或棉花等；所述双子叶植物具体为大豆，所述大豆具体为大豆Glycine max(L.)Merr.cv Jack。

本发明将转录因子GmZF351的编码基因转入受体大豆中，得到转基因大豆株系，该转基因大豆与受体大豆或转空载体大豆相比，其耐旱、耐盐性均有提高。说明转录因子GmZF351及其编码基因可以调控植物耐逆性，对培育植物高耐旱、耐盐性品种具有重要的理论和现实意义。

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

附图说明

图1为植物表达载体pCAMBIA1301-GmZF351示意图。

图2为GmZF351在干旱处理时的转录模式。

图3为GmZF351在200mM NaCl处理下的转录模式。

图4为转GmZF351基因大豆的分子鉴定。

图5为转GmZF351基因大豆的耐旱表型。

图6为转GmZF351基因大豆在干旱胁迫下的存活率统计。

图7为转GmZF351基因大豆的耐盐表型。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所用引物均由三博生物公司合成。

下述实施例中的大豆黑农44(HN44)记载在如下文献中：满为群等，大豆新品种黑农44的选育及不同种植方式对其产量和品种的影响，黑龙江农业科学2004年5期，1-5；公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得；该大豆2006年获自黑龙江农业科学院大豆研究所；由黑龙江农业科学院大豆研究所2002年经黑龙江省农作物品种审定委员会审定的大豆品种，第一育成人为杜维广研究员，专利号为：CNA20020216.2，审定号为：黑审豆2002003。

下述实施例中的大豆Glycine max(L.)Merr.cv Jack，记载在如下文献中：Thibaud-Nissen F,Shealy RT,Khanna A,Vodkin LO，Clustering of microarray datareveals transcript patterns associated with somatic embryogenesis in soybean，Plant Physiol.，2003May；132(1):118-36.；公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得。

下述实施例中的表达载体pCAMBIA1301记载在如下文献中：Tang W，Additionalvirulence genes and sonication enhance Agrobacterium tumefaciens-mediatedloblolly pine transformation，Plant Cell Rep.，2003Feb；21(6):555-62.Epub2002Nov 26.；公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得。

下述实施例中的农杆菌GV3101，记载在如下文献中：Lee CW等，Agrobacteriumtumefaciens promotes tumor induction by modulating pathogen defense inArabidopsis thaliana,Plant Cell,2009,21(9),2948-62.；公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得，

实施例1、大豆转录因子GmZF351编码基因的cDNA克隆和植物表达载体的构建

1、转录因子GmZF351的获得

(1)提取大豆黑农44幼苗的总RNA，将RNA用逆转录酶反转录合成cDNA。

(2)根据在PlantGDB的大豆基因组序列中GmZF351全长cDNA序列的信息，设计引物，引物序列如下：

GmZF351-up：5’-ATGAGTAGTGTTTTTTCAG(序列3)；

GmZF351-dp：5’-CTACATCAGCAATTCATT(序列4)。

(3)以HN44的cDNA为模板，用GmZF351-up和GmZF351-dp为引物，进行PCR扩增,得到约1Kb的PCR产物。经过测序，该PCR产物为1056bp，其具有序列表中序列1所示的核苷酸，该核苷酸所示的基因为GmZF351，该基因编码的蛋白命名为GmZF351，该蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。

2、植物表达载体的构建

(1)以HN44的cDNA为模板，采用Primer-F和Primer-R进行PCR扩增，获得PCR产物。

Primer-F：ATGTAGGTCGACATGAGTAGTGTTTTTTCAGAACAC；

Primer-R：ACGTAGACTAGTCTACATCAGCAATTCATTCACC。

(2)用限制性内切酶SalI和SpeI分别对PCR产物和植物表达载体pCAMBIA1301进行双酶切，连接，得到连接产物。

(3)将连接产物转入大肠杆菌中，得到转化子。提取转化子的质粒，测序，该质粒为将序列表中的序列1所示的DNA分子插入pCAMBIA1301的SalI和SpeI酶切位点之间得到的载体，将该载体命名为pCAMBIA1301-GmZF351，且序列表中的序列1所示的DNA分子位于CaMV35S启动子之后，以抗草甘膦抗性基因EPSPS为报告基因。重组表达载体pCAMBIA1301-GmZF351结构示意图如图1所示。重组表达载体pCAMBIA1301-GmZF351表达蛋白GmZF351。

实施例2、不同非生物胁迫下大豆叶和根中GmZF351的转录分析

一、干旱胁迫下大豆叶和根中GmZF351的转录分析

1、干旱处理

将大豆黑农44种子播种于装满蛭石的盆中，生长于25±2℃，连续光照，两周后取出大豆苗，操作时注意避免伤根，将豆苗根部小心的吸去水分，置于滤纸上暴露于室温空气中进行干旱处理。

2、RNA提取

分别在0、3、6、12小时收集新鲜叶片和根各1g。将收集的叶片和根分别混合，在液氮中研碎，悬于4mol/L硫氢酸胍中，混合物用酸性苯酚、氯仿抽提，上清中加入无水乙醇沉淀得到叶片和根的总RNA。

3、分析干旱胁迫下GmZF351的表达特征

对GmZF351基因在上述处理时的表达特征进行Real Time PCR分析，引物为GmZF351-up和GmZF351-dp。以大豆GmTubulin基因为内标，所用引物为Primer-TF和Primer-TR。Q-PCR得到的值是基因相对于GmTubulin的表达量。实验重复三次，结果取平均值±标准差。引物序列如下：

GmZF351-up：5’-ATGAGTAGTGTTTTTTCAG-3’(序列3)；

GmZF351-dp：5’-CTACATCAGCAATTCATT-3’(序列4)。

Primer-TF：5’-AACTCCATTTCGTCCATTCCTTC-3’

Primer-TR：5’-TTGAGTGGATTCCCAACAACG-3’

结果如图2所示，GmZF351在干旱胁迫下其转录水平均有不同程度升高。在叶和根中，GmZF351转录自胁迫3小时起即明显上升，至12小时至峰值。但在叶中，上升幅度远大于根中。

二、高盐胁迫下大豆叶和根中GmZF351的转录分析

1、高盐处理

将大豆黑农44种子播种于装满蛭石的盆中，生长于25±2℃，连续光照，两周后取出大豆苗，操作时注意避免伤根，进行如下盐处理：将根浸入200mM NaCl溶液中。

2、RNA提取

3、分析盐胁迫下GmZF351的表达特征

对GmZF351基因在上述处理时的表达特征进行Real Time PCR分析，引物为GmZF351-up和GmZF351-dp。大豆GmTubulin基因为内标，所用引物为Primer-TF和Primer-TR。Q-PCR得到的值是基因相对于GmTubulin的表达量。实验重复三次，结果取平均值±标准差。

结果如图3所示，GmZF351基因在200mM NaCl处理时，在叶中，GmZF351的转录在胁迫初期变化不甚显著，至12小时时方有明显升高。而在根中，处理3小时时即明显增加，6小时达到峰值，至12小时降低，但仍显著高于对照。

综上所述，GmZF351的转录在叶和根中均受盐和干旱胁迫诱导表达。

实施例3、GmZF351在调控植物耐旱/耐盐性中的应用

一、重组农杆菌的获得

将实施例1的步骤2中的重组载体pCAMBIA1301-GmZF351用电击法导入农杆菌GV3101，得到重组菌。

提取重组菌的质粒，经过测序，该质粒为pCAMBIA1301-GmZF351，将含有该质粒的重组菌命名为GV3101/GmZF351，即为重组农杆菌。同时将空载体pCAMBIA1301以同样方法转化GV3101，获得对照农杆菌GV3101/pCAMBIA1301。

二、转GmZF351大豆的获得及鉴定

1、转GmZF351大豆的获得

将重组农杆菌GV3101/GmZF351培养至对数期，然后用子叶节转化法将其转化大豆受体Glycine max(L.)Merr.cv Jack品种(Jack)。经培育后收获种子。将种子播于中蛭石生长，用含有0.1％农达(草甘膦)涂抹大豆叶片，3d后无黄化反应的为转基因阳性植株。

按照上述方法，将重组农杆菌GV3101/GmZF351替换为对照农杆菌GV3101/pCAMBIA1301，获得转空载体大豆。

2、转GmZF351大豆的鉴定

对上述阳性植株进行分子检测。具体步骤如下：提取转基因植株苗RNA，反转录得到cDNA作为模板，引物为：GmZF351-up：5’-ATGAGTAGTGTTTTTTCAG(序列3)；GmZF351-dp：5’-CTACATCAGCAATTCATT(序列4)。进行Real Time-PCR鉴定。大豆GmTubulin基因为内标，所用引物为Primer-TF和Primer-TR。Primer-TF：5’-AACTCCATTTCGTCCATTCCTTC，和Primer-TR：5’-TTGAGTGGATTCCCAACAACG。同时以受体Jack和转空载体大豆为对照。实验重复三次，结果取平均值±标准差。从中选取GmZF351表达量不同的3个株系：转GmZF351大豆株系OE-34、OE-40和OE-73作进一步表型分析。

结果如图4所示，转GmZF351大豆株系OE-34、OE-40和OE-73中GmZF351的相对表达量分别约为0.125±0.025，0.062±0.003和0.065±0.010，受体Jack和转空载体大豆中均未能检测出GmZF351的相对表达量。将上述3个转GmZF351大豆株系繁殖至T3代，每一代单株均经过0.1％农达(草甘膦)涂抹大豆叶片，3d后无黄化反应的为转基因阳性植株的标准进行检测，淘汰阴性植株，获得后代没有分离的T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73。

三、转GmZF351基因大豆的表型分析

1、转GmZF351基因大豆在干旱胁迫下的表型分析

测定大豆受体Jack、转空载体大豆、T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73的耐旱表型。耐旱性的检测过程为：将大豆受体Jack、转空载体大豆、T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73播于蛭石：草炭土比例为1:1的基质中，放室外生长正常浇水至第一片三出复叶完全展开，搬回温室进行干旱处理，停止供水，在25℃、16小时光照/8小时黑暗的条件下培养，大约处理10天后出现表型，处理12天后浇水进行恢复，统计存活率。每个株系取30株的种子，实验重复三次，结果取平均值±标准差。

结果如图5所示，转基因植株包括转空载体植株在正常条件下生长株高略有下降，经干旱处理，停止浇水10天时，Jack对照及转空载体对照均出现重度萎蔫，3个转基因株系出现轻度萎蔫。至干旱处理12天时，两个对照及转基因株系均有较重的萎蔫，但是对照的萎蔫程度远较转基因株系严重。恢复浇水10天后，3个转基因株系有不同程度的恢复，而2个对照继续萎蔫，至死亡。恢复浇水后两个对照及转基因株系的存活率如图6所示。从图中可以看出：Jack和转空载体对照的存活率为0，而T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73的存活率分别为90±19、89±20和82±21％。上述结果表明：GmZF351的过表达显著提高了转基因植株的耐旱性。

2、转GmZF351基因大豆在高盐胁迫下的表型分析

测定大豆受体Jack、转空载体大豆、T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73的耐盐表型。耐盐性的检测过程为：将大豆受体Jack、转空载体大豆、T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73的播于蛭石：草炭土比例为1:1的基质中，放室外生长正常浇水至第一片三出复叶完全展开，搬回温室进行盐处理。2L 200mM NaCl处理大豆幼苗，一周后续加1L 200mM NaCl，三天后继续加1L 300mM NaCl溶液。

结果如图7所示，受体Jack及转空载体对照(CK1和CK2)均表现明显萎蔫，植株下部叶几乎均枯萎，而T3代转GmZF351大豆纯合纯系OE-34、OE-40和OE-73也有不同程度萎蔫，但萎蔫程度明显轻于受体Jack及转空载体对照。上述结果表明：GmZF351的过表达显著提高了转基因植株的耐盐性。

综上所述，GmZF351的过表达显著提高了转基因植株的耐旱性和耐盐性，GmZF351具有提高植物耐逆性的功能。

序列表

<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120>大豆转录因子GmZF351在植物耐逆性调控中的应用

<160>4

<210>1

<211>1056bp

<212>DNA

<213>大豆属大豆（Glycine max (L.) Merrill）

<400>1

atgagtagtg ttttttcaga acacaaattc caacttcaac cctcccacca acttctctcc 60

ctcaagaaat ccctcggaga cattgacatc ccagtcccac caaggaagct cctcacccgc 120

cgctccgccg ccgtccacga cggctccggc gacatttatc tgcctcacag tggctccact 180

gactcctcca ccgacgatga ctccgatggc gacccctatg cctccgacca attccgcatg 240

ttcgagttca aggtccgacg atgtagtcgc agccggagcc atgattggac agactgtccc 300

tttgtgcatc ccggtgagaa ggcccgtcgt cgggaccctc gccggtttta ttactctgga 360

acagtctgtc cagagtttcg ccgcggtcag tgtgaccgcg gcgatgcatg tgagttttca 420

catggggtgt ttgagtgctg gctgcaccct tctaggtata ggaccgaggc ttgcaaggat 480

ggcaagaatt gcaagcgaaa agtttgcttc tttgctcaca cccctcgcca actcagggtt 540

tttcattcca atgacaatag taacaagaaa aagtgcaccg atataagccc tcataataac 600

aacaattgtt gtttggtttg tcattgctct aattctactc gttcaccaac ttctaccttg 660

tttggcatgt ctcatttttc tcctccatta tcaccacctt ctccttcttc gccttctatg 720

tttgagacca acaaccatca tcatggtgtt gtgaaatata ataaggatgt tttctctgag 780

cttgtgtgtt ccatggaggg tttgaatttt gatgaggctt cttcactgtt gtctgctgct 840

tctaagcctc atcatcacaa caatttgtct tcttggcttg atgtttctaa ggatcacaat 900

caaaaacagt tcaatactct taattcgcca accatcactg cttgtggaag tttttccaat 960

aatggaaatg ggggattttt gagagcagaa aatggggttg ttgttgatga tgtcattgcc 1020

ccagatctcg catgggtgaa tgaattgctg atgtag 1056

<210>2

<211>351

<212>PRT

<213>大豆属大豆（Glycine max (L.) Merrill）

<400>2

Met Ser Ser Val Phe Ser Glu His Lys Phe Gln Leu Gln Pro Ser His

1 5 10 15

Gln Leu Leu Ser Leu Lys Lys Ser Leu Gly Asp Ile Asp Ile Pro Val

20 25 30

Pro Pro Arg Lys Leu Leu Thr Arg Arg Ser Ala Ala Val His Asp Gly

35 40 45

Ser Gly Asp Ile Tyr Leu Pro His Ser Gly Ser Thr Asp Ser Ser Thr

50 55 60

Asp Asp Asp Ser Asp Gly Asp Pro Tyr Ala Ser Asp Gln Phe Arg Met

65 70 75 80

Phe Glu Phe Lys Val Arg Arg Cys Ser Arg Ser Arg Ser His Asp Trp

85 90 95

Thr Asp Cys Pro Phe Val His Pro Gly Glu Lys Ala Arg Arg Arg Asp

100 105 110

Pro Arg Arg Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Val Cys Pro Glu Phe Arg Arg

115 120 125

Gly Gln Cys Asp Arg Gly Asp Ala Cys Glu Phe Ser His Gly Val Phe

130 135 140

Glu Cys Trp Leu His Pro Ser Arg Tyr Arg Thr Glu Ala Cys Lys Asp

145 150 155 160

Gly Lys Asn Cys Lys Arg Lys Val Cys Phe Phe Ala His Thr Pro Arg

165 170 175

Gln Leu Arg Val Phe His Ser Asn Asp Asn Ser Asn Lys Lys Lys Cys

180 185 190

Thr Asp Ile Ser Pro His Asn Asn Asn Asn Cys Cys Leu Val Cys His

195 200 205

Cys Ser Asn Ser Thr Arg Ser Pro Thr Ser Thr Leu Phe Gly Met Ser

210 215 220

His Phe Ser Pro Pro Leu Ser Pro Pro Ser Pro Ser Ser Pro Ser Met

225 230 235 240

Phe Glu Thr Asn Asn His His His Gly Val Val Lys Tyr Asn Lys Asp

245 250 255

Val Phe Ser Glu Leu Val Cys Ser Met Glu Gly Leu Asn Phe Asp Glu

260 265 270

Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ala Ala Ser Lys Pro His His His Asn Asn

275 280 285

Leu Ser Ser Trp Leu Asp Val Ser Lys Asp His Asn Gln Lys Gln Phe

290 295 300

Asn Thr Leu Asn Ser Pro Thr Ile Thr Ala Cys Gly Ser Phe Ser Asn

305 310 315 320

Asn Gly Asn Gly Gly Phe Leu Arg Ala Glu Asn Gly Val Val Val Asp

325 330 335

Asp Val Ile Ala Pro Asp Leu Ala Trp Val Asn Glu Leu Leu Met

340 345 350

<210>3

<211>19bp

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

atgagtagtg ttttttcag 19

<210>4

<211>18bp

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

ctacatcagc aattcatt 18

Claims

1.GmZF351蛋白质在调控大豆耐逆性中的应用；所述GmZF351蛋白质是SEQ ID No.2所示的蛋白质；所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

2.与GmZF351蛋白质相关的生物材料在调控大豆耐逆性中的应用；

所述与GmZF351蛋白质相关的生物材料，为下述A1）至A8）中的任一种：

A1）编码GmZF351蛋白质的核酸分子；

A2）含有A1）所述核酸分子的表达盒；

A3）含有A1）所述核酸分子的重组载体；

A4）含有A2）所述表达盒的重组载体；

A5）含有A1）所述核酸分子的重组微生物；

A6）含有A2）所述表达盒的重组微生物；

A7）含有A3）所述重组载体的重组微生物；

A8）含有A4）所述重组载体的重组微生物；

所述GmZF351蛋白质是SEQ ID No.2所示的蛋白质；

所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：A1）所述核酸分子是SEQ ID No.1所示的DNA分子。

4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于：所述调控为提高。

5.一种培育耐逆性提高的转基因大豆的方法，包括提高受体大豆中GmZF351蛋白质的表达量和/或活性，得到转基因大豆的步骤；所述转基因大豆的耐逆性高于所述受体大豆；所述耐逆性为耐旱性和/或耐盐性；

所述GmZF351蛋白质是SEQ ID No.2所示的蛋白质。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述转基因大豆的耐逆性高于所述受体大豆体现在如下（1）或（2）：

（1）转基因大豆的存活率高于受体大豆；

（2）转基因大豆的萎蔫程度轻于受体大豆。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述提高受体大豆中GmZF351蛋白质的表达量和/或活性的方法为在受体大豆中过表达GmZF351蛋白质。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述过表达的方法为将所述GmZF351蛋白质的编码基因导入受体大豆。

9.根据权利要求5-8任一所述的方法，其特征在于：所述GmZF351蛋白质的编码基因的核苷酸序列是SEQ ID No.1所示的DNA分子。