CN108519421A - 基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法 - Google Patents

基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种基于FESI‑sweeping‑MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，所述有机阴离子为丹参素、原儿茶酸、香草酸的阴离子；本发明以离子液体为胶束实现FESI‑sweeping‑MSS三步富集有机阴离子，同时采用离子液体涂层毛细管，使电渗流反转，实验证明所制备的离子液体涂层毛细管柱不仅改善了有机酸的分离度，而且富集效果较好，还可以耐碱、耐有机溶剂；本发明成功应用于复杂样品基质中目标成分的检测，该方法柱间重复性和柱内重复性<4.46％，方法准确可靠，重现性好，且富集倍数达到1000倍以上，为富集技术的联用提供了新思路，同时扩展了离子液体的应用。

Description

基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子 的方法
(一)技术领域
本发明属于痕量成分富集分析技术领域，具体涉及一种基于FESI-sweeping-MSS(场放大-扫集-有机溶剂堆积)联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法。
(二)背景技术
近年来毛细管电泳在线富集技术发展迅速，查阅相关文献发现，多种富集技术联用已成为毛细管电泳在线富集技术的发展趋势。Quirino等(Grochocki,W.；Markuszewski,M.J.；Quirino,J.P.Three-step stacking by field-enhanced sample injection,sweeping,and micelle to solvent stacking in capillary electrophoresis:Anionicanalytes[J].J Chromatogr A.2016,1442:140-143.Wojciech,Grochocki.；J.Markuszewski.；Joselito P.Quirino.Three-step stacking of cationic analytesby field-enhanced sample injection,sweeping,and micelle to solvent stackingin capillary electrophoresis[J].J Chromatogr A,2015,1424(11):111-117.)曾提出三步富集阳离子及阴离子化合物。其中阳离子化合物富集步骤较为简单，在sweeping和MSS过程中胶束选择阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠即可。而相较之下，阴离子化合物的富集较为复杂。原因在于，富集过程除需要选择合适的阳离子表面活性剂以外，还需采用负压，同时必须逆转电渗流方向，报道阴离子三步在线富集的文献寥寥无几。已报道的文献中，在阳离子化合物的富集中，Quirino等(Quirino,J.P.,Guidote,Jr.A.M.Two-stepstacking in capillary zone electrophoresis featuring sweeping and micelle tosolvent stacking:II.Organic anions[J].J Chromatogr A.2011,1218(7):1004-1010.Guidote,Jr.A.M.,Quirino,J.P.On-line sample concentration of organicanions in capillary zone electrophoresis by micelle to solvent stacking[J].JChromatogr A,2010,1217(40):6290-6295.)将毛细管内壁用1％海美溴铵涂层使电渗流转向，同时采用阳离子十六烷基三甲基溴化铵为胶束。在该条件下，富集倍数可达954倍，检测灵敏度低至6.6ng/mL，为阴离子的在线富集提供了新思路。但除了常用的十二烷基硫酸钠和十六烷基三甲基溴化铵表面活性剂之外，开拓具有更高选择性的新型表面活性剂及其新型替代品是在线富集技术需要努力的方向。
与传统的有机溶剂相比，离子液体具有独特的优点，如稳定性好、不易挥发、可循环使用、对无机和有机化合物表现出良好的溶解能力等。离子液体已逐渐应用于样品前处理领域。Quirino等(Quirino J P,Anres P,Sirieix-Plenet J,et al.Potential of longchain ionic liquids for on-line sample concentration techniques:Applicationto micelle to solvent stacking[J].J Chromatogr A,2011,1218(33):5718-5724.)也成功将长链离子液体1-十二烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐用作胶束毛细管电泳的胶束相，并与十六烷基三甲基溴化铵进行了对照，结果表明离子液体堆积效果更好。Wang等(WangQ,Qiu H D,Han H F,et al.Two-step stacking by sweeping and micelle to solventstacking using a long-chain cationic ionic liquid surfactan[J].J Sep Sci,2012,35(4):589-595.)用另一种长链离子液体N-十六烷基-N-甲基四氢吡咯烷溴化物建立了sweeping-MSS两步富集方法，与传统方法比，灵敏度提高了25到60倍，为在线富集技术提供了更多选择，扩大了离子液体的应用范围。
(三)发明内容
本发明旨在提供一种灵敏、绿色环保、有效测定有机阴离子含量的方法。本发明要点在于以离子液体为胶束实现FESI-sweeping-MSS(场放大-扫集-有机溶剂堆积)三步富集有机阴离子，同时采用离子液体涂层毛细管，使电渗流反转。相比已报道的方法，本发明比已有液相色谱的检出限降低两到三个数量级。同时本发明方法所用的缓冲液主要是水溶液，无需大量使用有机溶剂，安全环保；所需溶剂和样品用量小，使用的空心毛细管柱价格便宜，分析成本低。
本发明的技术方案如下：
一种基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，所述有机阴离子为丹参素、原儿茶酸、香草酸的阴离子，结构式分别如下所示：
所述方法包括如下步骤：
(1)制备阳离子涂层的毛细管柱
取新的石英毛细管，依次用1mol/L的NaOH水溶液、0.1mol/L的NaOH水溶液冲洗进行活化，接着依次用纯水A、离子液体、纯水B冲洗，得到阳离子涂层的毛细管柱备用；
所述离子液体为10～50mM(优选30mM)的1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的水溶液；
具体的，所述步骤(1)为：取新的石英毛细管，在25kV压力下，依次用1mol/L的NaOH水溶液冲洗20min、0.1mol/L的NaOH水溶液冲洗10min进行活化，接着依次用纯水A冲洗10min、离子液体冲洗30min、纯水B冲洗5min，得到阳离子涂层的毛细管柱备用；
所述纯水A、纯水B没有特殊的含义，均指通常意义上的纯水，标记为“A”、“B”只是用于区分不同操作步骤中用到的纯水；
(2)三步在线富集测定标准溶液及构建标准曲线
取丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准品，以0.5％(体积分数)甲醇水溶液为溶剂配制得到混合标准溶液，将所得混合标准溶液进行毛细管电泳检测，得到混合标准溶液毛细管电泳谱图，以所得谱图中各标准品阴离子的峰面积为纵坐标、混合标准溶液中标准品的浓度为横坐标分别绘制丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准曲线，完成标准曲线的构建；
所述混合标准溶液中，丹参素的浓度范围在0.01～2.0μg/mL，原儿茶酸的浓度范围在0.01～2.0μg/mL，香草酸的浓度范围在0.01～2.0μg/mL；
所述毛细管电泳的条件如下：BGS(背景缓冲液)为20mM硼砂水溶液(pH值9.18)；胶束溶液为1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐和硼砂的混合水溶液，其中1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的浓度为6～18mM，硼砂的浓度为10mM；样品基质为纯净水；取步骤(1)准备好的阳离子涂层的毛细管柱，50mbar压力进胶束溶液10～60s、50mbar压力进混合标准溶液10～30s、-10kV电压进混合标准溶液30～270s、50mbar压力进60％(体积分数)甲醇水溶液1～9s，检测波长205nm、分离电压-20kV、温度30℃；
优选的，所述毛细管电泳的条件如下：BGS为20mM硼砂水溶液(pH值9.18)；胶束溶液为1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐和硼砂的混合水溶液，其中1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的浓度为12mM，硼砂的浓度为10mM；样品基质为纯净水；取步骤(1)准备好的阳离子涂层的毛细管柱，50mbar压力进胶束溶液50s、50mbar压力进混合标准溶液20s、-10kV电压进混合标准溶液225s、50mbar压力进60％甲醇水溶液5s，检测波长205nm、分离电压-20kV、温度30℃；
(3)试样检测
在步骤(2)中毛细管电泳的条件下，将混合标准溶液替换为试样溶液，对试样溶液进行检测，得到试样溶液毛细管电泳谱图，将所得谱图中丹参素、原儿茶酸、香草酸阴离子的峰面积分别代入步骤(2)构建的标准曲线中，计算得出试样中丹参素、原儿茶酸、香草酸的含量；
具体的，所述试样例如：中药复方丹参片、生物样品大鼠尿液；
所述试样在毛细管电泳检测前经过如下预处理：
所述中药复方丹参片的预处理方法：将中药复方丹参片研磨成粉末状，按料液比1：20(w/v，g/mL)与甲醇混合，超声提取30min，离心取上清液，于-4℃保存待用。
所述生物样品大鼠尿液的预处理方法：将正常大鼠尿样于13000rpm离心30min，取上清液得大鼠原尿样品，将大鼠原尿样品与甲醇等体积混合，震荡摇匀后于13000rpm离心30min，取上清液即为待测样品。
本发明方法中，三步在线富集的技术原理为：毛细管经过30mM的1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐冲洗后，电渗流反向，由负极指向正极。毛细管中先充满背景缓冲液，压力进一段胶束溶液(离子液体胶束)区带。在FESI前先压力进一段样品作为柱塞后，施加负电压进样品溶液区带，在此过程中，阳离子胶束向负极移动，阴离子待测物向正极移动进样，两个区带相互重叠，开始电动进样联用扫集。进样品结束后压力进一段甲醇溶液。施加负电压，由于待测有机阴离子与阳离子胶束相互作用，胶束携带待测离子向负极方向(进口端)移动。当接触到有机溶剂甲醇时，有机阴离子与胶束之间作用力减弱而释放出来，在负压条件下向正极移动，即有效迁移方向发生反转，直至所有的胶束溶液穿过胶束溶剂堆积界面，待测离子在胶束溶剂堆积界面处堆积。最后待测阴离子在区带电泳模式下分离检测。
在优化的检测条件下，三种有机阴离子类化合物丹参素钠、原儿茶酸、香草酸达到基线分离，富集倍数分别可达2424、1677、1863倍。
相对现有技术，本发明具有如下优点：
1、本发明提出了一种用离子液体快速简单对毛细管内壁改性的方法。实验证明所制备的离子液体涂层毛细管柱与裸毛细管或常规用于电渗流转向的阳离子表面活性剂相比，不仅改善了有机酸的分离度，而且富集效果较好，还可以耐碱、耐有机溶剂。整个制备过程绿色环保、省时，毛细管柱也不需要复杂处理，涂层后的毛细管也成功用于中成药及生物样品等多种复杂样品的检测。
2、本发明建立了FESI-sweeping-MSS三步富集对有机阴离子的堆积方式，并成功应用于复杂样品基质中目标成分的检测。该方法柱间重复性和柱内重复性<4.46％，方法准确可靠，重现性好，且富集倍数达到1000倍以上，为富集技术的联用提供了新思路，同时扩展了离子液体的应用。
(四)附图说明
图1：涂层用阳离子表面活性剂对阴离子分离的影响；
图2：胶束种类对阴离子富集效果的影响；
图3：常规CZE和FESI-sweeping-MSS模式下阴离子分析物电泳图；
图4：FESI-sweeping-MSS模式复方丹参片(A)和尿样(B)中的出峰；
图1～4中各峰代表的物质：1-原儿茶酸，2-丹参素，3-香草酸。
(五)具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：离子液体涂层毛细管柱的考察
(1)离子液体涂层的稳定性
涂层后的毛细管在强酸、碱的条件下都是不稳定的，其涂层的化学稳定性可以根据电渗流的变化判断。下表为离子液体涂层的毛细管经0.1M NaOH、0.1M HCl、丙酮、DMF的冲洗后电渗流的变化情况。从数据可以看出，离子液体涂层的毛细管具有较好的稳定性和可重复性，它在0.1M NaOH、丙酮、DMF冲洗15min后，电渗流降解率小于2.14％，表明离子液体涂层具有较好的稳定性和耐碱耐有机溶剂性。但是经过0.1M HCl冲洗后，电渗流变化大于20％，说明离子液体涂层不耐强酸。但后续分析都是在pH 9.18缓冲条件分离，不影响使用。
表1离子液体涂层的毛细管化学稳定性
分离条件：20mM硼砂溶液(pH 9.18)，内标物为丙酮。
(2)不同涂层毛细管柱分离阴离子性能的比较
实验探究了未经离子液体涂层以及用常规阳离子表面活性剂邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯、海美溴铵与离子液体涂层的毛细管柱分离有机阴离子的性能。图1为三种有机阴离子在不同涂层的毛细管柱的分离效果图(各峰代表的物质：1-丹参素，2-原儿茶酸，3-香草酸，与其他图表中序号一致)。其中裸毛细管未检测到有机阴离子的峰，可能由于在电渗流没有反转的条件下，加负电压分离带负电离子，待测物由于受电渗流向左的速率大于向右的电泳的速率从而从入口端流出。比较邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯、海美溴铵和离子液体涂层的毛细管对阴离子的分离效果图，可以看出离子液体涂层较好，三种阴离子峰面积较高且分离度较好。
实施例2：FASI-sweeping-MSS三步富集方法的建立
(1)不同富集步骤的比较
实验考察了常规进样模式、FASI一步富集、FASI-sweeping两步富集和FASI-sweeping-MSS三步富集方法对阴离子的分离及富集效果。结果表明，FASI-sweeping-MSS和常规进样模式相比，富集效果显著，FASI模式峰展宽明显，FASI-sweeping两步富集有效改善了峰型，但富集效果比FASI-sweeping-MSS差。
(2)富集条件的优化
a.胶束种类及浓度的选择
常用的阳离子表面活性剂有十六烷基三甲基溴化铵和氯化-N,N,N-三甲基-1-十二铵，本实验探究了胶束中离子液体与这两种阳离子表面活性剂对目标分析物的富集效果及分离度的比较，结果如图2。比较可以得出，氯化-N,N,N-三甲基-1-十二铵作胶束中阳离子表面活性剂时，三种阴离子待测物峰较宽，且香草酸响应较低。而十六烷基三甲基溴化铵作阳离子表面活性剂时待测物峰面积较离子液体小，富集效果较离子液体差。最终实验选择离子液体作胶束溶液中的阳离子表面活性剂。实验探究了离子液体的浓度(6mM，9mM，12mM，15mM，18mM)对富集效果的影响，胶束中表面活性剂浓度较低时，不利于sweeping过程，浓度太高又会因其与有机阴离子的结合力过大影响MSS过程。最终，实验选择离子液体最佳浓度为12mM。
b.FESI时间与MS进样时间比值的优化
实验考察了胶束溶液和样品溶液进样时间的比值。固定胶束溶液进样时间为20s，进样压力为50mbar，优化FESI时间，结果显示随着FESI进样时间延长，样品进样量增大，峰高有增大的趋势，但峰展宽更明显。对三种有机阴离子峰面积考察，当FESI时间为30-90s时，峰面积逐渐增大，继续增大FESI时间，三种阴离子峰面积没有增加的趋势。综合考虑峰形及富集效果，最终选择FESI：MS时间为90s：20s。
c.FESI时间的选择
确保FESI时间与MS进样时间为9：2(90s：20s)的条件下，增大FESI时间为135s、180s、225s、270s，随着FESI时间增大，富集效果更好，但丹参素和香草酸的峰展宽明显，影响分离和富集。在保证峰形的条件下选择富集效果较好的FESI：MS时间为225s：50s作为后续探究的条件。
实施例3：建立标准曲线、方法的线性范围、检出限、重现性和富集倍数
(1)制备阳离子涂层的毛细管柱
取新的未涂层石英毛细管(内径50μm，总长50cm，有效长度41.5cm，河北永年锐沣色谱器件有限公司)，在25kV压力下，依次用1mol/L的NaOH水溶液冲洗20min、0.1mol/L的NaOH水溶液冲洗10min进行活化，接着依次用纯水冲洗10min、离子液体(30mM的1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的水溶液)冲洗30min、纯水B冲洗5min，得到阳离子涂层的毛细管柱备用；
(2)三步在线富集测定标准溶液及构建标准曲线
取丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准品，以0.5％(体积分数)甲醇水溶液为溶剂配制得到各标准品浓度为1mg/mL的混标储备液，取所得混标储备液，准确配制各标准品浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0μg/mL的混标溶液，将所得混标溶液进行毛细管电泳检测，平行测定三次，得到混标溶液毛细管电泳谱图，以所得谱图中各标准品阴离子的峰面积为纵坐标、混标溶液中标准品的浓度为横坐标分别绘制丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准曲线，完成标准曲线的构建。
毛细管电泳的条件如下：BGS为20mM硼砂水溶液(pH值9.18)；胶束溶液为1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐和硼砂的混合水溶液，其中1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的浓度为12mM，硼砂的浓度为10mM；样品基质为纯净水；取步骤(1)准备好的阳离子涂层的毛细管柱，50mbar压力进胶束溶液50s、50mbar压力进混标溶液20s、-10kV电压进混标溶液225s、50mbar压力进60％甲醇水溶液5s，检测波长205nm、分离电压-20kV、温度30℃。
结果表明，在0.01-2.0μg/mL之间，丹参素、原儿茶酸和香草酸的线性关系良好。将2μg/mL混标溶液在同一毛细管柱连续进样6次评价柱内精密度，3根涂层毛细管柱每根柱连续进样3次评价柱间精密度，结果得到的峰面积RSD均小于4.46％，证明该方法重现性好。实验结果见表2。本方法对丹参素、原儿茶酸、香草酸的SEF分别为2424、1677和1863倍，常规进样模式与富集模式的电泳图如图3。
表2方法的线性范围、检出限、重现性和富集倍数
SEF＝(本方法待测物的峰面积/常规待测物的峰面积)×稀释倍数。
实施例4：FASI-sweeping-MSS在实际样品中的应用
为了考察方法的实用性，在较优条件下，将实验创建的离子液体修饰的FASI-sweeping-MSS富集技术用于中药复方丹参片图4(A)和生物样品大鼠尿液见图4(B)中有机阴离子的检测。实验证明该方法适用于复杂样品中有机阴离子的检测，且富集效果显著，具体操作过程如下：
中药复方丹参片的预处理方法：将中药复方丹参片样品研磨成粉末，准确称取0.5g，加入10mL甲醇，超声提取30min，离心取上清液，于-4℃保存待用。
生物样品大鼠尿液的预处理方法：将正常大鼠尿样于13000rpm离心30min，取上清液得大鼠原尿样品，将大鼠原尿样品1mL加入1mL甲醇，震荡摇匀后13000rpm离心30min去除部分蛋白质，取上清液即得处理后的大鼠尿样。
在实施例3中毛细管电泳的条件下，将混标溶液替换为试样溶液，对试样溶液进行检测，得到试样溶液毛细管电泳谱图，将所得谱图中丹参素、原儿茶酸、香草酸阴离子的峰面积分别代入步骤(2)构建的标准曲线中，计算得出试样中丹参素、原儿茶酸、香草酸的含量。结果如下：
中药复方丹参片中，丹参素含量0.3452mg/g、原儿茶酸含量0.5635mg/g、香草酸未检测到。
生物样品大鼠尿液中，丹参素含量0.4198μg/mL、原儿茶酸含量0.5431μg/mL、香草酸含量0.5763μg/mL。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，所述有机阴离子为丹参素、原儿茶酸、香草酸的阴离子，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备阳离子涂层的毛细管柱
取新的石英毛细管，依次用1mol/L的NaOH水溶液、0.1mol/L的NaOH水溶液冲洗进行活化，接着依次用纯水A、离子液体、纯水B冲洗，得到阳离子涂层的毛细管柱备用；
所述离子液体为10～50mM的1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的水溶液；
(2)三步在线富集测定标准溶液及构建标准曲线
取丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准品，以体积分数0.5％甲醇水溶液为溶剂配制得到混合标准溶液，将所得混合标准溶液进行毛细管电泳检测，得到混合标准溶液毛细管电泳谱图，以所得谱图中各标准品阴离子的峰面积为纵坐标、混合标准溶液中标准品的浓度为横坐标分别绘制丹参素、原儿茶酸、香草酸的标准曲线，完成标准曲线的构建；
所述混合标准溶液中，丹参素的浓度范围在0.01～2.0μg/mL，原儿茶酸的浓度范围在0.01～2.0μg/mL，香草酸的浓度范围在0.01～2.0μg/mL；
所述毛细管电泳的条件如下：BGS为20mM硼砂水溶液，pH值9.18；胶束溶液为1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐和硼砂的混合水溶液，其中1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的浓度为6～18mM，硼砂的浓度为10mM；样品基质为纯净水；取步骤(1)准备好的阳离子涂层的毛细管柱，50mbar压力进胶束溶液10～60s、50mbar压力进混合标准溶液10～30s、-10kV电压进混合标准溶液30～270s、50mbar压力进体积分数60％甲醇水溶液1～9s，检测波长205nm、分离电压-20kV、温度30℃；
(3)试样检测
在步骤(2)中毛细管电泳的条件下，将混合标准溶液替换为试样溶液，对试样溶液进行检测，得到试样溶液毛细管电泳谱图，将所得谱图中丹参素、原儿茶酸、香草酸阴离子的峰面积分别代入步骤(2)构建的标准曲线中，计算得出试样中丹参素、原儿茶酸、香草酸的含量。
2.如权利要求1所述的基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述离子液体为30mM的1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的水溶液。
3.如权利要求1所述的基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，其特征在于，所述步骤(1)为：取新的石英毛细管，在25kV压力下，依次用1mol/L的NaOH水溶液冲洗20min、0.1mol/L的NaOH水溶液冲洗10min进行活化，接着依次用纯水A冲洗10min、离子液体冲洗30min、纯水B冲洗5min，得到阳离子涂层的毛细管柱备用。
4.如权利要求1所述的基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述毛细管电泳的条件如下：BGS为20mM硼砂水溶液，pH值9.18；胶束溶液为1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐和硼砂的混合水溶液，其中1-十二烷基-3-甲基咪唑硫酸氢盐的浓度为12mM，硼砂的浓度为10mM；样品基质为纯净水；取步骤(1)准备好的阳离子涂层的毛细管柱，50mbar压力进胶束溶液50s、50mbar压力进混合标准溶液20s、-10kV电压进混合标准溶液225s、50mbar压力进60％甲醇水溶液5s，检测波长205nm、分离电压-20kV、温度30℃。
5.如权利要求1所述的基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述试样为中药复方丹参片，所述试样在毛细管电泳检测前经过如下预处理：将中药复方丹参片研磨成粉末状，按料液比1：20与甲醇混合，超声提取30min，离心取上清液，于-4℃保存待用。
6.如权利要求1所述的基于FESI-sweeping-MSS联用在线富集测定痕量有机阴离子的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述试样为生物样品大鼠尿液，所述试样在毛细管电泳检测前经过如下预处理：将正常大鼠尿样于13000rpm离心30min，取上清液得大鼠原尿样品，将大鼠原尿样品与甲醇等体积混合，震荡摇匀后于13000rpm离心30min，取上清液即为待测样品。
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