CN108517017A - 一种枸杞多糖的提取方法 - Google Patents

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孙军涛
宋春美
李光辉
朱凯
张凡
张一凡
张琼琼
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Abstract

本发明公开了一种枸杞多糖的提取方法，如下：将枸杞洗净，烘干，冷却，粉碎，过筛，得枸杞粉；在枸杞粉中加入石油醚‑甲醇混合液，脱脂；对所得产物过滤，得滤渣；滤渣中加水，恒温加热并超声浸提；对所得产物进行常温离心，取上清液，过滤并收集滤液；对滤液进行旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；浓缩液中加入乙醇，静置醇沉，倒出乙醇，干燥得枸杞多糖。本发明将枸杞原料干燥、粉碎、脱脂，再选择最佳条件进行提取、分离、浓缩，可最大限度的从枸杞中提取多糖，同时设备要求简单，操作容易，成本低廉，适合中小型企业的大规模生产，而且采用本方法得到的多糖可以改善膳食肥胖小鼠的糖代谢紊乱。

Description

一种枸杞多糖的提取方法
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种枸杞多糖的提取方法。
背景技术
枸杞为我国传统名贵中药材，具有保肝滋肾、明目益气、调节免疫系统等作用。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide)是枸杞的主要活性成分，动物实验结果表明枸杞多糖可降血糖、降血脂、增强免疫力、抑制肿瘤生长等，是一种有着广阔应用前景的天然产物。
常用的枸杞多糖提取办法包括：浸提法、酶发酵法、微波辅助法等。其中酶发酵法因需消耗大量的酶，提取成本高；超声和微波辅助法需要许多特殊设备。
发明内容
本发明的目的在于克服上述问题，提供一种设备要求简单，容易操作，提取效率高，降低生产成本的枸杞多糖的制备方法。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案具体如下：
一种枸杞多糖的提取方法，包括如下步骤：
（1）将枸杞洗净，烘干，冷却后粉碎机粉碎，过筛，得枸杞粉，备用；
（2) 在步骤（1）所得枸杞粉末中加入石油醚-甲醇混合溶液，脱脂至近无色；
（3) 对步骤（2）所得产物进行过滤，收集滤渣；
（4) 在步骤（3）所得滤渣中加入蒸馏水，恒温加热并辅以超声浸提；
（5) 对步骤（4）所得产物进行常温离心，取上清液，过滤并收集滤液；
（6) 对步骤（5）所得滤液进行真空、旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；
（7) 浓缩液中加入乙醇，静置醇沉，倒出乙醇，干燥得枸杞多糖。
优选的，步骤（1) 中所述枸杞优选为市售宁夏枸杞；烘干条件为于80-100℃干燥10-12h；过筛数目为100目。
优选的，步骤（2)中所述石油醚-甲醇混合溶液中石油醚和甲醇的体积比为2:1。
优选的，步骤（4)中所述蒸馏水的加入量为枸杞粉的20-35倍；浸提的温度为80-100℃；浸提时间为4-6h。
优选的，步骤（5)中所述离心条件为于4000-6000rpm下离心5-10min。
优选的，步骤（6)中所述旋转蒸发的温度为40-60℃。
优选的，步骤（7)中所述浓缩液：乙醇的体积比为1:（2-5）；静置时间为4-8h。
本发明的有益效果是：
本发明所述的枸杞粗多糖提取方法，将枸杞原料干燥、粉碎、脱脂，再选择最佳条件进行提取、分离、浓缩，可最大限度的从枸杞中提取多糖，同时设备要求简单，操作容易，成本低廉，适合中小型企业的大规模生产，而且采用本方法得到的多糖可以改善膳食肥胖小鼠的糖代谢紊乱。
附图说明
图1为饲养16周后，高脂饲料组和正常饲料对照组小鼠的空腹血糖变化图；
图2为饲养16周后，高脂饲料组和正常饲料对照组小鼠的OGTT变化曲线图；
图3为枸杞多糖对高脂膳食肥胖小鼠空腹血糖影响结果图；
图4为枸杞多糖对高脂膳食肥胖小鼠口服糖耐量的影响结果图；
图5为枸杞多糖对高脂膳食肥胖小鼠血清中FFA的影响结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
一种枸杞粗多糖的提取方法，包括如下步骤：
（1）将枸杞洗净，于80℃干燥12h，冷却后粉碎机粉碎，过100目筛，得枸杞粉，备用；
（2) 在步骤（1）所得枸杞粉末中加入体积比为2:1的石油醚-甲醇混合溶液，脱脂至近无色；
（3) 对步骤（2）所得产物进行过滤，收集滤渣；
（4) 在步骤（3）所得滤渣中加入20倍枸杞粉的蒸馏水，恒温加热并辅以于80℃超声浸提6h；
（5) 对步骤（4）所得产物于4000rpm下常温离心10min，取上清液，过滤并收集滤液；
（6) 对步骤（5）所得滤液进行40℃旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；
（7) 以1:2的体积比在浓缩液中加入乙醇，静置8h醇沉，倒出乙醇，干燥得多糖。
实施例2
一种枸杞粗多糖的提取方法，包括如下步骤：
（1）将枸杞洗净，于90℃干燥11h，冷却后粉碎机粉碎，过100目筛，得枸杞粉，备用；
（2) 在步骤（1）所得枸杞粉末中加入体积比为2:1的石油醚-甲醇混合溶液，脱脂至近无色；
（3) 对步骤（2）所得产物进行过滤，收集滤渣；
（4) 在步骤（3）所得滤渣中加入25倍枸杞粉的蒸馏水，恒温加热并辅以于90℃超声浸提5h；
（5) 对步骤（4）所得产物于5000rpm下常温离心8min，取上清液，过滤并收集滤液；
（6) 对步骤（5）所得滤液进行50℃旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；
（7) 以1: 3的体积比在浓缩液中加入乙醇，静置6h醇沉，倒出乙醇，干燥得多糖。
实施例3
一种枸杞粗多糖的提取方法，包括如下步骤：
（1）将枸杞洗净，于100℃干燥10h，冷却后粉碎机粉碎，过100目筛，得枸杞粉，备用；
（2) 在步骤（1）所得枸杞粉末中加入体积比为2:1的石油醚-甲醇混合溶液，脱脂至近无色；
（3) 对步骤（2）所得产物进行过滤，收集滤渣；
（4) 在步骤（3）所得滤渣中加入35倍枸杞粉的蒸馏水，恒温加热并辅以于100℃超声浸提4h；
（5) 对步骤（4）所得产物于6000rpm下常温离心5min，取上清液，过滤并收集滤液；
（6) 对步骤（5）所得滤液进行60℃旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；
（7) 以1: 5的体积比在浓缩液中加入乙醇，静置4h醇沉，倒出乙醇，干燥得多糖。
实施例4 枸杞多糖对糖代谢的影响
采用本发明实施例2所得枸杞多糖进行枸杞多糖对糖代谢的影响实验，通过测定肥胖小鼠的空腹血糖、口服糖耐量等指标来反映枸杞多糖对糖代谢的影响。
1、动物实验及方法
C57BL/6J小鼠，清洁级，雄性，4周龄，体重为 20.53 g ± 1.23 g，实验前小鼠适应性喂养l周，自由饮水，无不良反应、进食、饮水和活动正常小鼠纳入实验。室内照明控制在12h/12 h光暗周期节律。室内平均气温23°C，相对对湿度50%-60%。实验前称小鼠体重，根据体重随机分为两组，正常饲料对照组（6只，C），高脂饲料组（24只，HF），正常饲料对照组进食普通饲料（10%热量来自于脂肪），高脂饲料组进食高脂造模饲料（60%热量来自于脂肪）。
高脂饲料喂养16周后，高脂饲料组随机分为2组，高脂模型组（12只，HF1），枸杞多糖组（12只，GQ），经灌胃给药4周。给药期间，继续给予高脂饮食，枸杞多糖组采用口服灌胃枸杞多糖（10mg/kg 体重·day）方式给药，模型组采用口服灌胃生理盐水作为对照。4周后，小鼠禁食12 h，称重，测空腹血糖及口服糖耐量，随后腹腔静脉取血，血样室温静置2 h后，2000 rpm离心20 min，取上清液。测定丙氨酸转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、游离脂肪酸（FFA）。
2、动物实验结果
2.1如图1所示，高脂饲料组连续饲养16周，与对照组相比，高脂饲料组小鼠的空腹血糖显著增高（p<0.01）；如图2所示，高脂饲料组连续饲养16周，与对照组相比，高脂饲料组小鼠的口服糖耐量显著性降低。
2.2 如图3所示，本发明所得枸杞多糖可以降低肥胖小鼠的空腹血糖；如图4所示，枸杞多糖可以改善口服糖耐量。
2.3如表1所示，本发明所得枸杞多糖可以降低肥胖小鼠血清中的天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）的水平，分别降低了13.9%和22%。
表1 枸杞多糖对高脂膳食肥胖小鼠肝功能指标的影响
2.4如图5所示，本发明所得枸杞多糖可以降低肥胖小鼠血清中游离脂肪酸FFA的水平。

Claims (7)

1.一种枸杞多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将枸杞洗净，烘干，冷却后粉碎，过筛，得枸杞粉，备用；
（2) 在步骤（1）所得枸杞粉中加入石油醚-甲醇混合溶液，脱脂至近无色；
（3) 对步骤（2）所得产物进行过滤，收集滤渣；
（4) 在步骤（3）所得滤渣中加入蒸馏水，恒温加热并超声浸提；
（5) 对步骤（4）所得产物进行常温离心，取上清液，过滤并收集滤液；
（6) 对步骤（5）所得滤液进行旋转蒸发，所得产物依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，然后真空干燥，得浓缩液；
（7) 浓缩液中加入乙醇，静置醇沉，倒出乙醇，干燥得枸杞多糖。
2. 根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（1) 中所烘干条件为于80-100℃干燥10-12h；过筛数目为100目。
3.根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（2)中所述石油醚-甲醇混合溶液中石油醚和甲醇的体积比为2:1。
4.根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（4)中所述蒸馏水的加入量为枸杞粉的20-35倍；浸提的温度为80-100℃；浸提时间为4-6h。
5.根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（5)中所述离心条件为于4000-6000rpm下离心5-10min。
6.根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（6)中所述旋转蒸发的温度为40-60℃。
7.根据权利要求1所述枸杞多糖的提取方法，其特征在于，步骤（7)中所述浓缩液：乙醇的体积比为1:（2-5）；静置时间为4-8h。
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