CN108484733B - 双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒 - Google Patents

双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及纳米药物领域，具体公开了双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒。所述双亲性靶向穿膜肽的序列为：Ac‑RGDDK(C12‑C18)CK(C12‑C18)DR/KGDR/K‑COOH。将本发明所述双亲性靶向穿膜肽溶解在含有疏水性药物或荧光探针的有机溶剂中，得混合液；将所述混合液分散于水或磷酸缓冲液(PBS)中，超声处理，使所述双亲性靶向穿膜肽在自组装过程中包裹所述疏水性药物或荧光探针形成疏水性核心，即得载药纳米颗粒或纳米探针。本发明所述的双亲性靶向穿膜肽自组装形成的纳米载体对疏水性药物载药量高，对αv整合素和神经纤毛蛋白‑1(NRP‑1)阳性肿瘤具有高亲和力和穿膜功效，极大提高了肿瘤靶向和药物递送效率。

Description

双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒
技术领域
本发明涉及纳米药物领域，具体地说，涉及双亲性靶向穿膜肽及其自组装的纳米探针、载药纳米颗粒与应用。
背景技术
纳米级药物载体是一种纳米级的药物输送系统，通过设计具有特定功能的药物载体，可以制备出生物相容性好、结构稳定、功能多样的纳米载药体系。近年来用于肿瘤靶向和药物递送的自组装纳米系统由于其在肿瘤诊断和治疗中的巨大潜力而被广泛研究。然而，把药物高效特异地递送至肿瘤组织仍面临许多困难。这可以归因于肿瘤组织中的血管壁和细胞膜屏障，此外，肿瘤的异质性和致密的基质也会阻止这些纳米颗粒深入转运到肿瘤组织。为了克服这些障碍，需要精心设计同时具有靶向和穿膜功效的新型纳米体系。
多肽由于其良好的生物相容性和较低的合成成本而被广泛用于靶向肿瘤，基于多肽的纳米系统由于其良好的生物相容性，稳定性和高靶向效率而被广泛研究。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
本发明首先提供了一种含有RGD和R/KGDR/K基序的双亲性靶向穿膜肽。
其序列为：Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DR/KGDR/K-COOH；
该序列的RGD部分被设计为与细胞表面的αv整合素特异性地相互作用，R/KGDR/K基序被设计为与细胞膜上的神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体相互作用以介导细胞内吞作用。
额外的两个天冬氨酸(D)被加入以增加亲水头部的电负性和亲水性。在特异性靶向αv整合素和神经纤毛蛋白-1受体的靶向穿膜肽的赖氨酸侧链偶联疏水性功能分子，得到双亲性靶向穿膜肽。
所述序列中：R为精氨酸，G为甘氨酸，D为天冬氨酸，K为赖氨酸，C为半胱氨酸，R/K为精氨酸或赖氨酸，Ac为乙酰基，-COOH为裸露羧基端，(C12-C18)为赖氨酸侧链偶联的疏水性功能分子，所述疏水性功能分子为C12-C18的直链脂肪酸或胆固醇。
即，所述双亲性靶向穿膜肽为下列(1)-(4)之一：
(1)Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DRGDR-COOH；
(2)Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DRGDK-COOH；
(3)Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DKGDR-COOH；
(4)Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DKGDK-COOH。
作为优选，所述双亲性靶向穿膜肽的序列为：
Ac-RGDDK(C12-C18)CK(C12-C18)DRGDK-COOH。
其结构式为：
Figure BDA0001586333370000021
所述双亲性靶向穿膜肽是采用本领域常用的Fmoc固相合成法制备得到，本发明对此不另做限定。
上述优选的双亲性靶向穿膜肽的亲水性部分为：Ac-RGDDKCKDRGDK-COOH，除了靶向功能的序列外，添加了两个天冬氨酸以增加亲水性和自组装后纳米载体的电负性；疏水性部分为C12-18的直链脂肪酸或胆固醇。与胆固醇等疏水性功能分子相比，直链脂肪酸更容易与多肽反应，所得的双亲性靶向穿膜肽更稳定，且直链脂肪酸无其他侧链基团，更有利于后期的自组装。
因此，作为优选，所述疏水性功能分子可采用十二烷酸、十四烷酸、十六烷酸、十八烷酸；最优选为C18直链脂肪酸。
所述疏水性功能分子采用化学方法偶联到前述对应的两个赖氨酸的侧链上，即得双亲性靶向穿膜肽。
本发明进一步提供一种纳米载体，由所述双亲性靶向穿膜肽通过自组装而成，所述纳米载体为球形结构，其粒径为25-60nm。
其中，所述自组装在超声条件下完成，超声频率30-50kHz(优选40-50kHz)，超声功率50-100W，超声时间5-15min。
在此基础上，本发明进一步提供一种纳米颗粒或纳米探针，由所述纳米载体包裹目标分子而成。
其中，所述目标分子包括疏水性药物或荧光探针。
所述疏水性药物优选为阿霉素。
更为具体地，本发明以目标分子为疏水性药物或荧光探针为例，提供上述纳米颗粒或纳米探针的制备方法：
将本发明所述双亲性靶向穿膜肽溶解在含有疏水性药物或荧光探针的有机溶剂中，得混合液；将所述混合液分散于水或磷酸缓冲液(PBS)中，超声处理，使所述双亲性靶向穿膜肽在自组装过程中包裹所述疏水性药物或荧光探针形成疏水性核心，即得；
所述超声处理的频率为30-50kHz(优选40-50kHz)，功率为50-100W，超声时间为5-15min。
本发明所述的纳米颗粒以αv整合素和神经纤毛蛋白-1受体为靶点，自组装的纳米载体能通过RGD序列特异性与αv整合素结合，同时通过暴露在羧基端的RGDK基序与神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体相互作用，介导自组装纳米载体穿膜进入细胞。对于许多肿瘤细胞系，αv整合素和NRP-1受体是过表达的，因此可以作为肿瘤靶向穿膜药物递送的靶标。
所述有机溶剂选自二甲基亚砜、二氯甲烷或甲醇。其中，本发明最优选的溶剂为二甲基亚砜。以二甲基亚砜溶解所述双亲性靶向穿膜肽，双亲性靶向穿膜肽可顺利自组装包载疏水药物或荧光探针，药物的包封率高，且得到的自组装纳米颗粒稳定性好，粒径均一，且具有良好的生物相容性。
所述疏水性药物或荧光探针与所述双亲性靶向穿膜肽的摩尔比为1：(5-15)。
所述水或磷酸缓冲液的用量体积，为所述有机溶剂用量体积的100-200倍。
优选地，所述制备方法还包括在超声结束后，室温静置1-2h，采用超滤管超滤去除未包载的疏水性药物及荧光探针。其中，所用超滤管的截留分子量为30kD。
本发明所提供的双亲性靶向穿膜肽对疏水性药物和疏水性荧光探针都具有非常好的包封率。其中，所述双亲性靶向穿膜肽可同时包载一种或几种的疏水性药物和荧光探针，具体可依据实际需要而定。
研究发现，当所述双亲性靶向穿膜肽赖氨酸侧链偶联有C18直链脂肪酸时，自组装对于广谱疏水性化疗药物阿霉素的包封率很高，得到的载药纳米颗粒可用于乳腺癌等的靶向治疗。
进一步地，本发明还提供了所述纳米颗粒或纳米探针在制备肿瘤诊断试剂或肿瘤靶向治疗药物中的应用。
所述肿瘤包括但不限于αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)阳性肿瘤。
本发明利用靶向穿膜肽和疏水性功能分子偶联得到两亲性多肽，通过自组装方式包载疏水性抗肿瘤药物和荧光探针以形成纳米颗粒和纳米探针，这种纳米颗粒或荧光纳米探针可以通过两个步骤富集于肿瘤部位：RGD基序特异性结合肿瘤血管内皮细胞上的αv整合素，然后R/KGDR/K基序与神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体特异性相互作用，介导纳米颗粒内吞进入细胞和组织，从而实现肿瘤的特异性诊断和治疗。本发明的双亲性靶向穿膜肽自组装形成高度有序的纳米结构，自组装过程中不产生共价键，没有逆反应，用于肿瘤的诊断和治疗具有生物相容性好、无生物毒性等优势。
本发明设计的基于靶向穿膜肽自组装形成的多功能纳米载体对疏水性药物载药量高，对αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)阳性肿瘤具有高亲和力和穿膜功效，极大提高了肿瘤靶向和药物递送效率。自组装得到的纳米载体粒度分布均一，稳定性高，生物相容性好，生物安全性高。本发明的制备方法简单，制备的纳米颗粒可作为纳米探针用于肿瘤诊断和纳米载体用于靶向肿瘤穿膜性药物递送，在肿瘤诊断及抗肿瘤纳米药物领域具有巨大的应用潜力。
附图说明
图1是实施例1制备得到的载药纳米颗粒在水溶液中的形貌图；
图2是实施例1制备得到的载药纳米颗粒的粒径分布；
图3是实施例1制备得到的载药纳米颗粒的稳定性图像；其中，左侧为载药后1h的形貌图，右侧为载药后24h的形貌图；
图4是实施例1制备得到的载药纳米颗粒与肿瘤细胞的相互作用及在肿瘤细胞内的分布结果图；
图5是实施例1制备得到的纳米探针应用于小鼠活体荧光成像生物学实验结果图；
图6是实施例1制备得到的载药纳米颗粒用于小鼠移植瘤模型治疗期间肿瘤的生长曲线。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1双亲性靶向穿膜肽自组装载药纳米颗粒及荧光纳米探针
1、实验方法
(1)双亲性靶向穿膜多肽分子的设计：本发明设计了一条含有RGD和R/KGDR/K基序的双亲性靶向穿膜肽，命名为APPA，其序列优选为Ac-RGDDK(C18)CK(C18)DRGDK-COOH。该序列的RGD部分被设计为与细胞表面的αv整合素特异性地相互作用，RGDK基序被设计为与细胞膜上的神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体相互作用以介导细胞内吞作用。额外的两个天冬氨酸(D)被加入以增加亲水头部的电负性和亲水性。为了避免被淋巴管所表达蛋白酶的酶解，N-末端用乙酰基(Ac)保护。两个十八烷酸链(C18)作为疏水尾部分别连接到2个赖氨酸残基的侧链上。当疏水性化疗药物(如阿霉素等)添加到含有所述多肽的水溶液中时，设计的两亲性肽APPA单体可以自组装成稳定的纳米颗粒。负载有阿霉素的纳米颗粒(PAD)或荧光纳米探针(PA-DiR)可以通过两个步骤富集于肿瘤位点：RGD基序特异性结合肿瘤血管内皮细胞上的αv整合素，然后RGDK基序与神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体相互作用，介导所述自组装纳米颗粒穿膜进入细胞和组织。由于αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体在很多肿瘤细胞系的高表达，PAD和PA-DiR纳米颗粒可以高效的用于肿瘤诊断和治疗。
(2)靶向穿膜肽的制备：称量树脂并投入到多肽固相合成管(以下简称反应器)中，加入适量的DMF溶胀半小时以上。抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，置于摇床上10min。抽掉去保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从反应器中取少量树脂(约5～10mg)于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测并记录颜色，准备投料，进入氨基酸缩合反应。按照SEQ IDNO.1亲水性头部肽的氨基酸序列顺序取相应氨基酸、HBTU(氨基酸：HBTU＝1:1)，用反应液溶解，投入到反应器中，搅拌反应。1-2h后，从反应器中取少量树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测。抽掉反应器中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂。对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc去保护—氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸反应完毕，反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂2-3次，甲醇洗两次，继续抽干15-20min。反应器中取出合成完的部分肽树脂，在室温下于裂解液(裂解液先冰浴20min)中裂解2h。将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，用无水乙醚(冰浴)洗3次。粗肽使用制备型反相HPLC纯化，使用HPLC检测纯度>90％。所得到的纯肽使用质谱(MS,electrospray)鉴定，冷冻干燥即得靶向穿膜肽，命名为PPA。
(3)双亲性靶向穿膜肽分子的制备：取10mg采用上述方法制备得到的靶向穿膜肽PPA，溶于1mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中，向其中加入70mg十八烷酸、0.4mL催化剂二异丙基乙胺(DIEA)，室温条件下反应12h。停止反应后将液体滴加入无水乙醚中，立即出现白色沉淀。离心(转速为5000rpm，时间为5min)分离上述悬浊液去除上清液，冷冻干燥，收集白色粉末，即得双亲性靶向穿膜肽分子。
(4)载药纳米颗粒及荧光纳米探针的制备：对于包载有疏水性化疗药物纳米颗粒或荧光纳米探针的制备，将0.5mg的肽和0.05mg疏水性化疗药物(如阿霉素)或0.02mg荧光探针(如DiR)分别溶解在10μL的DMSO中并混合在一起，然后将混合物加入到1mL PBS中并超声处理10min(功率：50-100W)，之后室温下孵育约1h，最后8000rpm离心5min，收集上清，超滤管离心纯化所得即为所制备的载药纳米颗粒PAD或荧光纳米探针PA-DiR。
(5)阴性对照双亲性肽的设计及其纳米颗粒、纳米探针的制备：为了突出所设计的靶向穿膜双亲性肽APPA纳米体系的功效，本实验同时也设计了一条阴性对照双亲性肽，命名为APPC。该阴性对照双亲性肽APPC与靶向穿膜双亲性肽APPA具有相同的氨基酸组成，但是多肽序列不一样，APPC不含有RGD基序和在羧基端暴露的R/KGDR/K基序，因此基于APPC自组装的纳米颗粒不能通过RGD基序与细胞表面的αv整合素特异性地相互作用，也不能通过R/KGDR/K基序与细胞膜上的神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体相互作用，从而与靶向穿膜双亲性肽APPA自组装的纳米颗粒形成对照，突出APPA纳米体系良好的靶向穿膜功效。APPC的序列为：Ac-DDRGK(C18)CK(C18)RDKDG-COOH。阴性对照双亲性肽APPC的制备与APPA的一样，同时基于APPC的载药纳米颗粒PCD及纳米探针PC-DiR的制备也与前述的载药纳米颗粒PAD和纳米探针PA-DiR的制备一样。
2、实验结果
(1)形态观察
使用电镜观察实施例1的纳米颗粒，发现制备的纳米载体在包载有疏水性纳米颗粒的情况下能形成大小较均一、稳定的球形结构，平均粒径约为35nm(图1)，使用动态光散射测得粒径分布在25-60nm，与电镜观察到的相符，测得表面电势约为-16毫伏(图2)。
(2)纳米颗粒稳定性
对实施例1制备得到的载药纳米颗粒的药物稳定性进行了测试，将其置于含有10％血清的磷酸缓冲液PBS中37℃孵育24h，然后用生物透射电镜观察其形貌，结果如图3所示，从图中可以看出，载药的纳米颗粒在孵育24h后，依然能观察到球状结构，证明制备的载药纳米颗粒具有良好的稳定性，可进一步用于体内实验。
实施例2免疫荧光法检测所制备的载药纳米颗粒PAD对αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)阳性细胞的靶向性和穿膜功效
1、实验方法
将αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)高表达细胞株HUVEC悬浮于含10％热灭活胎牛血清的DMEM培养液中，以3000-5000个/皿的密度接种于3个confocal小皿中。培养24h后，吸净小皿中的培养基，然后分别加入实施例1所制备的载药纳米颗粒PAD于200μL培养基中(1μM阿霉素)，阴性对照组加入等量的实施例1设计制备好的阴性对照双亲性肽APPC自组装负载阿霉素的纳米颗粒PCD(1μM阿霉素)，37℃培养箱中避光孵育不同时间段，细胞核用Hoechst试剂染色，使用按照1：2000稀释。PBS清洗，重复洗3次后，加入200μL PBS，使用激光共聚焦显微镜观测荧光信号。
2、实验结果
由图4可以看出，实施例1所制备的PAD纳米颗粒可特异性与αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)高表达细胞株HUVEC相互作用并通过受体介导的内吞进入细胞，说明本发明所制备的PAD纳米颗粒具有高效靶向和穿透αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)高表达细胞株的功效。
实施例3小鼠活体成像检测所制备的荧光纳米探针对αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)阳性肿瘤的亲和性和靶向性
1、实验方法
将106的4T1细胞接种到5-6周大小的Balb/c雌性裸鼠右腿部位建立移植瘤。接种10天后移植瘤长至6-8mm大小时进行后续实验。将100μL实施例1基于靶向穿膜双亲性肽APPA所制备的浓度为0.02mg/mL的荧光纳米探针PA-DiR和基于阴性对照双亲性肽APPC所制备的纳米探针PC-DiR分别经尾部静脉注射到裸鼠体内，静脉注射后在不同的时间点将麻醉的小鼠置于小动物活体成像系统内扫描信号。激发波长和发射波长分别为750nm和779nm。主要器官及实体瘤以相同的方法进行荧光成像。
2、实验结果
由图5可以看出，对于注射荧光纳米探针PA-DiR的小鼠，在注射后1h心脏和肺中的信号高于其他部分，注射后3h，肿瘤部位周围的信号逐渐增强，注射6h后，可以在整个肿瘤部位检测到高荧光信号，其他部位包括肺部和心脏信号明显减弱。这是因为PA-DiR纳米探针首先通过RGD/αv整合素与肿瘤部位血管内皮细胞相互作用，然后通过RGDK/NRP-1的相互作用介导纳米探针穿膜进入到肿瘤组织中。对于注射阴性对照荧光纳米探针PC-DiR的小鼠，在肝脏中检测到高荧光信号，并且在注射后6h，与PA-DiR组相比，在肿瘤部位的信号非常低。在PC-DiR组中检测到的低荧光信号可以用肿瘤增强的渗透性和保留(EPR)效应来解释。PA-DiR组肿瘤部位的荧光信号在注射50h后仍然可以被检测到。通过对第2组肿瘤和主要器官的荧光信号进行定量，发现注射PA-DiR组肿瘤部位的荧光强度是对照组的10多倍(图5)，这表明本发明实施例1制备的荧光纳米探针PA-DiR对于4T1移植瘤具有高亲和力和特异性。
实施例4检测所制备的载药纳米颗粒对αv整合素和神经纤毛蛋白-1(NRP-1)阳性肿瘤的治疗效果
1、实验方法
将106的4T1细胞接种到5-6周大小的Balb/c雌性裸鼠右腿部位建立移植瘤。接种10天后移植瘤长至6-8mm大小时进行后续实验。将小鼠分成5组(n＝8)，每组的小鼠分别给予磷酸缓冲液PBS，靶向穿膜双亲性肽APPA，疏水性化疗药物阿霉素(DOX)，无靶向穿膜功效的阴性对照载药纳米颗粒PCD和本发明的具有靶向穿膜功效的载药纳米颗粒PAD。药物每3天以5mg/kg的剂量给药。用数字卡尺测量肿瘤大小，并通过公式(L×W2)/2计算体积，其中L是肿瘤的最长直径，W是最短直径。
2、实验结果
通过分析肿瘤生长曲线，可以看出负载阿霉素的自组装纳米颗粒治疗的小鼠肿瘤在第二次给药后停止增长并逐渐减小，5次给药后肿瘤体积减少至约160mm3(减少约30％)，而阴性对照组中的肿瘤体积此时已达到约800mm3(增加约220％)(图6)，这表明我们设计的负载有化疗药物的纳米颗粒具有良好的抗肿瘤效果。
本发明的纳米体系可以包载包括疏水性荧光探针在内的其他疏水性探针，制备成的纳米探针可应用于αv整合素和神经纤毛蛋白-1阳性肿瘤的诊断，同时可以作为包括阿霉素在内的其他疏水性药物递送的载体包载疏水性化疗药物用于肿瘤的靶向治疗。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Arg Gly Asp Asp Lys Cys Lys Asp Arg Gly Asp Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Arg Gly Asp Asp Lys Cys Lys Asp Lys Gly Asp Lys
1 5 10
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Arg Gly Asp Asp Lys Cys Lys Asp Lys Gly Asp Arg
1 5 10

Claims (11)

1.一种含有RGD基序和RGDK基序的双亲性靶向穿膜肽，其特征在于，其序列为：
Ac-RGDDK（C18）CK（C18）DRGDK-COOH；
其中：R为精氨酸，G为甘氨酸，D为天冬氨酸，K为赖氨酸，C为半胱氨酸，Ac为乙酰基，-COOH为裸露羧基端，C18为赖氨酸侧链偶联的疏水性功能分子，所述疏水性功能分子为C18的直链脂肪酸。
2.一种纳米载体，其特征在于，由权利要求1所述的双亲性靶向穿膜肽通过自组装而成，所述纳米载体为球形结构，其粒径为25-60 nm。
3.一种纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，由权利要求2所述的纳米载体包裹目标分子而成。
4.根据权利要求3所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述目标分子包括疏水性药物或荧光探针。
5.根据权利要求4所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述疏水性药物为阿霉素。
6.根据权利要求4或5所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，其制备方法包括：
将权利要求1所述的双亲性靶向穿膜肽溶解在含有疏水性药物或荧光探针的有机溶剂中，得混合液；将所述混合液分散于水或磷酸缓冲液中，超声处理，使所述双亲性靶向穿膜肽在自组装过程中包裹所述疏水性药物或荧光探针，即得；
所述超声处理的频率为30-50 kHz，功率为50-100 W，超声时间为5-15 min。
7.根据权利要求6所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述疏水性药物或荧光探针与所述双亲性靶向穿膜肽的摩尔比为1：(5-15)。
8.根据权利要求6所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述水或磷酸缓冲液的用量体积，为所述有机溶剂用量体积的100-200倍。
9.根据权利要求7所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述水或磷酸缓冲液的用量体积，为所述有机溶剂用量体积的100-200倍。
10.根据权利要求8或9所述的纳米颗粒或纳米探针，其特征在于，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、二氯甲烷和甲醇中的一种。
11.权利要求3-10任一项所述的纳米颗粒或纳米探针在制备肿瘤诊断试剂或肿瘤靶向治疗药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤包括αv整合素和神经纤毛蛋白-1（NRP-1）阳性肿瘤。
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