CN108484604A - 靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物‑氯乙基亚硝基脲偶联分子及其制备方法和应用，该偶联分子的结构如通式(I)所示：其中R为OH，NH2，N(CH3)2，NHCH3，N(CH2CH3)2，NHCH2CH3中的一种；R1为H，CH3，OCH3，NO2，Cl，Br中的一种；n为2‑6的整数。本发明提供的偶氮芳香氮氧化物‑氯乙基亚硝基脲偶联分子能够靶向性的在低氧区域发挥细胞毒性作用和AGT抑制剂的作用，抑制肿瘤细胞的生长，具有低氧靶向性、抗肿瘤、抗耐药性、抗血管生成的特点。

Description

靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分 子及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物合成技术领域，尤其涉及一种靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子及其制备方法和应用。
背景技术
氯乙基亚硝基脲(CENUs)是一类重要的双官能团抗肿瘤烷化剂，在临床上常应用于脑瘤、骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤和白血病的治疗。由于CENUs易于穿越血脑屏障，在脑脊髓液中的浓度可达到血浆浓度的30～35％，因此尤其对脑瘤具有良好的疗效。CENUs发挥抗癌作用主要是通过导致肿瘤细胞DNA发生股间交联。研究表明，CENUs能够在生理条件下分解，产生的氯乙基碳正离子与DNA鸟嘌呤O6位发生烷化反应生成O6-氯乙基鸟嘌呤，再经过N1,O6-桥亚乙基鸟嘌呤中间体进一步与互补的胞嘧啶发生反应，最终在鸟嘌呤N1位和胞嘧啶的N3位之间产生G-C交联，即形成DNA股间交联。这种DNA股间交联阻碍了肿瘤细胞中DNA的复制和转录过程，导致有丝分裂不能正常进行或使得DNA双链发生断裂，最终诱导肿瘤细胞凋亡。
然而，O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)介导的CENUs耐药性严重阻碍了该类药物的进一步开发。AGT是一种普遍存在于细胞中的DNA修复蛋白，它可将DNA鸟嘌呤O6位上的甲基、氯乙基和苄基等烷基基团转移至自身第145位半胱氨酸残基上，从而修复DNA的烷化损伤。研究表明，AGT通过修复CENUs导致的O6-氯乙基乙基鸟嘌呤和N1,O6-桥亚乙基鸟嘌呤，从而阻断这两种烷化产物进一步与胞嘧啶反应形成DNA股间交联，使得CENUs不能发挥DNA股间交联作用，导致肿瘤细胞对CENUs产生耐药性，最终导致CENUs不能有效抑制肿瘤细胞。因此，为了阻断AGT介导的耐药性、提高CENUs的化疗效果，设计开发具有高活性的AGT抑制剂并将其与烷化剂联合用药，是提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性从而保证化疗效果的重要途径。
O6-苄基鸟嘌呤(O6-BG)和Lomeguatrib(PaTrin-2)均能够有效抑制AGT活性，二者均可作为AGT的假底物与肿瘤细胞中的AGT发生作用，阻断AGT对CENUs导致的O6-烷基鸟嘌呤的修复作用，从而提高肿瘤细胞对CENUs的敏感性，最终消除或降低CENUs的耐药性。然而，现有的AGT抑制剂不具有肿瘤靶向性，这使其在抑制肿瘤细胞AGT活性的同时也抑制了正常细胞中AGT的活性，引起CENUs的毒副作用显著增强。因此，设计具有肿瘤靶向性的新型CENUs或AGT抑制剂是解决上述问题的关键所在。
低氧微环境是多数实体瘤区别于正常组织的重要特征，利用肿瘤低氧探索治疗新策略已成为肿瘤靶向治疗的热点之一。低氧激活前药(HAPs)正是基于肿瘤低氧而设计合成的一类新型化合物，它们对正常组织无毒或毒性较低，而在肿瘤低氧区域可释放具有细胞毒性的药效团，从而实现肿瘤的靶向治疗。低氧激活前药主要包括硝基-芳香族杂环化合物、氮氧化物类、醌类、过渡金属络合物和含有偶氮芳香基团的化合物。TPZ(替拉扎明)是一种芳香氮氧化物低氧激活抗癌前药，其抗癌机制是在肿瘤组织的低氧环境下，通过单电子还原酶的作用被还原为TPZ自由基，进一步反应生成羟基自由基和苯并三嗪自由基，导致DNA损伤，从而发挥抗肿瘤活性。而在有氧环境中，TPZ在单电子还原酶作用下生成的TPZ自由基可被氧气氧化，形成母体化合物TPZ，进而阻断了TPZ生成自由基的反应途径，因而不能发挥抗癌作用。因此，TPZ具有肿瘤低氧靶向性。
发明内容
本发明的第一个目的是针对现有技术存在的缺陷及不足，提供一种同时含有AGT抑制剂药效团、TPZ类似物药效团和偶氮基团的新型联合CENUs前药。
本发明提供的新型联合CENUs前药是一种靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子，其结构如通式(I)所示：
R为OH，NH2，N(CH3)2，NHCH3，N(CH2CH3)2，NHCH2CH3中的一种；
R1为H，CH3，OCH3，NO2，Cl，Br中的一种；
n为2-6的整数。
优选地，当n为2-4的整数、且R1为H、CH3、OCH3、NO2、Cl、Br中的一种时，R为OH、NH2或N(CH3)2。
本发明最优选地，当n为2，R1为H时，R为OH、NH2或N(CH3)2。R。即分别具有如下结构式时，化合物的抗肿瘤活性和选择性最佳。
本发明的第二个目的是提供一种上述靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子的制备方法，所述方法包括以下反应历程：
包括如下步骤：
(1)苯甲酸乙酯与甲醇钠反应得到化合物a；
(2)化合物a与苯并呋咱反应得到化合物b；
(3)化合物b与3-氨基苯甲醇反应得化合物c；
(4)2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷反应得化合物d；
(5)化合物c与化合物d反应得化合物e；
(6)化合物e与Br(CH2)2Br反应得化合物f；
(7)化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐反应得化合物g；
(8)化合物g与水合肼反应得化合物h；
(9)化合物h与2-氯乙基异氰酸酯反应得化合物i；
(10)化合物i与四氟硼酸亚硝鎓反应得化合物j。
其中，步骤(3)化合物b与3-氨基苯甲醇按照1:(1-3)的摩尔比，于0-10℃反应，得化合物c。
步骤(5)中，化合物c与化合物d按照1:(1-3)的摩尔比，于10-35℃反应，得化合物e。
进一步地，步骤(1)苯甲酸酯与甲醇钠按照1:(1-5)的摩尔比，回流反应，得化合物a；
(2)化合物a与苯并呋咱按照1:(1-4)的摩尔比反应，得化合物b；
(4)2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷按照1:(1-7)的摩尔比反应，得化合物d；
(6)化合物e、无机碱、1,2-二卤代乙烷按照1:(1-6):(1-7)的摩尔反应，得化合物f；
(7)化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐按照1:(1-4)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物g；
(8)化合物g与水合肼按照1:(1-5)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物h；
(9)化合物h与2-氯乙基异氰酸酯按照1:(1-8)的摩尔比混合溶于有机溶剂中，得化合物i；
(10)化合物i、冰醋酸、亚硝鎓四氟硼酸盐按照1:(1-5):(1-5)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物j，即通式(I)所示的化合物。
本发明所述偶联分子的制备方法中，优选步骤及参数为：
(1)苯甲酸酯与甲醇钠按照1：(1-5)的摩尔比，于80-100℃回流反应，得化合物a；
(2)化合物a与苯并呋咱按照1：(1-4)的摩尔比，于10-35℃反应，得化合物b；
(3)化合物b与3-氨基苯甲醇按照1：(1-3)的摩尔比，于0-10℃反应，得化合物c；
(4)2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷按照1：(1-7)的摩尔比，于10-35℃反应，得化合物d；
(5)化合物c与化合物d按照1：(1-3)的摩尔比，于10-35℃反应，得化合物e；
(6)化合物e、无机碱、1,2-二卤代乙烷的摩尔比优选为1：(1-6)：(1-7)；于40-60℃反应，得化合物f；其中，所述二卤代烷烃可选自二溴代烷烃或二氯代烷烃，进一步优选为二溴代烷烃，二溴代烷烃具有较高的反应活性，能够保证反应顺利进行，获得较高的收率和较纯的产品。所述无机碱优选为无水碳酸钾；
(7)化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐按照1：(1-4)的摩尔比，于50-70℃反应，得化合物g；其中，所使用的反应溶剂优选为乙腈或N，N-二甲基甲酰胺；
(8)化合物g与水合肼按照1：(1-5)的摩尔比在20-50℃条件下反应，得化合物h；其中，所使用的反应溶剂优选为DMF或甲醇；
(9)化合物h与2-氯乙基异氰酸酯按照1：(1-8)的摩尔比，在0-10℃反应，得化合物i；其中，反应溶剂优选为二氯甲烷，反应完全后蒸馏除去溶剂，得化合物i。
(10)化合物i、冰醋酸、亚硝鎓四氟硼酸盐按照1：(1-5)：(1-5)的摩尔比，在0-10℃条件下反应，得化合物j，即为通式(I)的化合物。其中，反应溶剂优选为乙腈或丙酮。
本发明同时提供了当n＝2，R1为H，R分别为OH，NH2，N(CH3)2时，化合物的制备方法，所述方法的反应历程为：
步骤(1)的具体操作过程为：将苯甲酸酯与甲醇钠用有机溶剂溶解，并在80-100℃下回流反应，得化合物a；其中，苯甲酸酯与甲醇钠的摩尔比为1:(1-5)；所使用的有机溶剂优选乙腈。进一步地，步骤(1)中还包括对化合物a进行提纯的步骤：将回流反应得到的反应液冷却降温，过滤，得到沉淀，用HCl溶液溶解沉淀，采用二氯甲烷进行分层萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，再用二氯甲烷-石油醚进行重结晶，即可得到化合物a。
步骤(2)的具体操作过程为：向步骤(1)中得到的化合物a中加入苯并呋咱，用有机溶剂溶解混匀，加入催化剂，在10-35℃下发生反应，得化合物b；其中化合物a与苯并呋咱的摩尔比为1:(1-4)；所使用的有机溶剂优选乙醇，催化剂优选碳酸钾。进一步地，步骤(2)中还包括对化合物b进行提纯的步骤：将反应液冷却降温，过滤得到沉淀，减压蒸馏除去有机溶剂，再用乙醇进行重结晶，即可得到化合物b。
步骤(3)的具体操作过程为：取3-氨基苯甲醇，加入催化剂，再加入步骤(2)中得到的化合物b，用有机溶剂溶解混匀，在0-10℃下冰浴反应，得化合物c；其中，化合物b与3-氨基苯甲醇的摩尔比为1:(1-3)；所使用的有机溶剂优选乙腈，催化剂优选浓HCl和NaNO2的混合溶液。进一步地，步骤(3)中还包括对化合物c进行提纯的步骤：将冰浴反应后得到的产物用二氯甲烷和水进行分层萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:50逐渐变为到1:10，真空干燥即可得到化合物c。
步骤(4)的具体操作过程为：将2-氨基-6-氯嘌呤和N-甲基吡咯烷用有机溶剂溶解，在10-35℃下反应，得化合物d；其中2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷的摩尔比为1:(1-7)；所使用的有机溶剂优选N-N二甲基甲酰胺(DMF)。进一步地，步骤(4)中还包括对化合物d进行提纯的步骤：将反应得到的产物中加入丙酮进行沉淀，过滤收集沉淀，加入乙醚洗涤两次，即可得到化合物d。
步骤(5)的具体操作过程为：将步骤(3)得到的化合物c和步骤(4)得到的化合物d用有机溶剂溶解，加入催化剂，在氮气保护下于10-35℃下反应，用冰乙酸和水进行猝灭，得化合物e；其中，化合物c与化合物d的摩尔比为1:(1-3)；所使用的有机溶剂优选为N-N二甲基甲酰胺(DMF)，催化剂优选为叔丁醇钾。进一步地，步骤(5)中还包括对化合物e进行提纯的步骤：将反应得到的产物用饱和氯化铵和乙酸乙酯萃取，减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，真空干燥即可得到化合物e。
步骤(6)的具体操作过程为：将步骤(5)中得到的化合物e和1,2-二卤代乙烷用有机溶剂溶解混合，加入无机碱催化剂，在40-60℃下反应，得化合物f；其中，化合物e、无机碱、1,2-二卤代乙烷的摩尔比为1：(1-6)：(1-7)；所使用的有机溶剂优选为丙酮，催化剂优选为K2CO3；1,2-二卤代乙烷优选为二溴代烷烃。进一步地，步骤(6)中还包括对化合物f进行提纯的步骤：将反应得到的产物减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚和乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4，真空干燥即可得到化合物f。
步骤(7)的具体操作过程为：将步骤(6)中得到的化合物f和邻苯二甲酰亚胺钾盐用有机溶剂溶解混合，在50-70℃下反应，得化合物g；其中，化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐的摩尔比为1:(1-4)；所使用的有机溶剂优选为N-N二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈。进一步地，步骤(7)中还包括对化合物g进行提纯的步骤：将反应得到的产物用二氯甲烷和水进行萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，真空干燥即可得到化合物g。
步骤(8)的具体操作过程为：将步骤(7)中得到的化合物g和水合肼用有机溶剂溶解混合，在20-50℃下反应，得化合物h；其中，化合物g与水合肼的摩尔比为1:(1-5)；所使用的有机溶剂优选为N-N二甲基甲酰胺(DMF)或甲醇。进一步地，步骤(8)中还包括对化合物h进行提纯的步骤：将反应得到的产物用三氯甲烷和水进行萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为三乙胺、甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，三乙胺、甲醇和二氯甲烷的体积比从1:30:100逐渐变为到1:20:100，真空干燥即可得到化合物h。
步骤(9)的具体操作过程为：将步骤(8)中得到的化合物h和2-氯乙基异氰酸酯用有机溶剂溶解混合，在0-10℃下冰浴反应，得化合物i；其中，化合物h与2-氯乙基异氰酸酯的摩尔比为1:(1-8)；所使用的有机溶剂优选为二氯甲烷。进一步地，步骤(9)中还包括对化合物i进行提纯的步骤：将反应得到的产物用二氯甲烷和水进行萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，真空干燥即可得到化合物i。
步骤(10)的具体操作过程为：向步骤(9)中得到的化合物i中加入冰乙酸、亚硝鎓四氟硼酸盐，用有机溶剂溶解混合，在0-10℃下冰浴反应，得化合物j；其中，化合物i、冰乙酸、亚硝鎓四氟硼酸盐的摩尔比为1:(1-5):(1-5)；所使用的有机溶剂优选为乙腈或丙酮。进一步地，步骤(10)中还包括对化合物j进行提纯的步骤：将反应得到的产物用乙酸乙酯和水进行萃取得到有机相，减压蒸馏除去有机溶剂，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚和乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4，真空干燥即可得到化合物j，即通式(I)所示的化合物。
本发明的第三个目的是提供一种含上述靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子的药物。
所述药物由上述偶联分子单独制成或由偶联分子和药学上可接收的载体组成；优选所述药用组合物的剂型为药学上常用的剂型，所述剂型优选为注射剂、片剂、胶囊剂。
所述载体为本领域常用物质，如崩解剂、润滑剂、分散剂、乳化剂、稳定剂等。
本发明的第四个目的是上述偶联分子在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选地，所述肿瘤优选为肿瘤为脑瘤、白血病、结肠癌、淋巴癌、肺癌、骨髓瘤、黑色素瘤。
本发明即是利用肿瘤组织存在低氧微环境的特性，设计合成的一种同时含有AGT抑制剂药效团、TPZ类似物药效团和偶氮芳香基团的新型联合CENUs前药，即靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子。该化合物以偶氮芳香氮氧基团作为低氧激活药效团，在肿瘤低氧条件下，偶氮基团的氮氮双键断裂释放出TPZ类似物和O6-苄基鸟嘌呤类似物，靶向性地在低氧区域发挥抗癌干细胞、血管生成抑制剂和AGT抑制剂的作用，提高肿瘤细胞对烷化剂的敏感性，同时该化合物为氯乙基亚硝基脲的衍生物，其CENUs药效团能够分解生成氯乙基碳正离子，导致DNA股间交联，发挥抑制肿瘤细胞生长的作用，释放出TPZ类似物其本身是一种低氧激活抗癌干细胞药物，不仅可起到肿瘤低氧靶向性的作用，还可抑制肿瘤细胞附近血管的生长。
经过体外抗肿瘤筛选试验表明，在低氧条件下，上述任意一种化合物或含上述所述化合物的制剂均对L1210小鼠白血病细胞、HT29人结肠癌细胞、A549人肺细胞、HUT102人T淋巴瘤细胞、人神经胶质瘤细胞SF763、SF126等多种肿瘤细胞系均有明显的抑制作用，而在有氧条件下，上述任意一种化合物或含上述所述化合物的制剂均对上述肿瘤细胞的抑制作用并不明显。由此可见，本发明的化合物或制剂具有良好的靶向性和杀死肿瘤细胞的能力，且能避免了对正常细胞的损伤作用，可以用于靶向性肿瘤化疗药物。
本发明的有益效果在于：本发明的靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子化合物能够选择性地在肿瘤低氧环境下释放TPZ类似药效团和O6-苄基鸟嘌呤类似药效团，靶向性地在肿瘤细胞区域导致DNA股间交联而发挥细胞毒性作用、血管生成抑制剂和AGT抑制剂的作用，降低肿瘤细胞对亚硝基脲类药物的耐药性，抑制肿瘤细胞附近的血管生长，具有低氧靶向性、抗耐药性、抗肿瘤、抗血管生成的特点。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
以下实施例中涉及的化合物1、化合物2、化合物3的结构式如下：
实施例1(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物1)的合成
1)3-(2-羟基苯基)-3-氧代丙腈的合成
称取1.94g水杨酸乙酯(11.7mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入15mL乙腈，再加入1.08g甲醇钠(20mmol)，于90℃回流3小时。冷却至室温后，过滤形成白色沉淀，向白色沉淀中加入50mL去离子水、3mol/L的HCl溶液10mL，再加50mL二氯甲烷萃取混合物。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，然后经无水Na2SO4过夜干燥。30℃减压蒸馏去除溶剂，得到粗产物。将粗产物从二氯甲烷-石油醚中重结晶，得到白色固体3-(2-羟基苯基)-3-氧代丙腈(1.23g,7.6mmol)，产率65％。
UVλ：233，282nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3610.3(O-H)；2201.2(C≡N)；1681.7(C＝O)；1201.5(C-O)；770.4(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.63(s,2H,CH2)；5.39(s,1H,OH)；6.85-7.59(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z162(M+H)+。
2)2-氰基-3-(2-羟基苯基)喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取805mg所得固体3-(2-羟基苯基)-3-氧代丙腈(5.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入680mg苯并呋咱(5.0mmol)，再加入40mL乙醇和4g碳酸钾，将混合物在室温下搅拌8小时。过滤沉淀，用乙醇洗涤，得到黄色固体。然后，从乙醇中重结晶，得到2-氰基-3-(2-羟基苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(623mg,2.2mmol)，产率45％。
UVλ：241,285nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3609.4(O-H)；2235.3(C≡N)；1343.6(N-O)；1209.3(C-O)；771.2(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.42(s,1H,OH)；7.08-7.86(m,4H,C6H4)；8.18-8.79(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z280(M+H)+。
3)(E)-2-氰基-3-(2-羟基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取615mg 3-氨基苯甲醇(5.0mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入1.5mL浓HCl和2.5mLH2O，再加入1.25mL浓度为0.3g/mL的NaNO2水溶液，再加入8mL浓度为175mg/mL的2-氰基-3-(2-羟基苯基)喹喔啉1,4-二氧化物乙腈溶液，冰浴反应12h。用二氯甲烷和水进行萃取，然后加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:50逐渐变为到1:10。30℃真空干燥得到橙黄色固体(E)-2-氰基-3-(2-羟基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(1.1g,2.7mmol)，产率53％。
UVλ：232,277nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3612.7(O-H)；2238.1(C≡N)；1605.7(N＝N)；1342.4(N-O)；1211.6(C-O)；770.5(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.53(s,1H,OH)；4.65(t,2H,CH2)；5.32(s,1H,OH)；7.44-7.86(m,4H,C6H4)；7.26-8.29(m,3H,C6H3)；8.15-8.72(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z414(M+H)+。
4)1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物的合成
称取2g 2-氨基-6-氯嘌呤(11.8mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL N-N二甲基甲酰胺(DMF)和2.8mL N-甲基吡咯烷(26.4mmol)，室温搅拌反应20h后，加入3mL丙酮进行沉淀，过滤收集沉淀，加入乙醚洗涤两次，得到白色固体1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(1.8g,7.1mmol)，产率60％。
UVλ：235,289nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3445.9(N-H)；3275.2(-NH2)；2974.5(C-H)；1717.2(C＝N)；1556.5(C＝C)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.12(s,2H,CH2)；5.42(s,1H,OH)；7.02(s,2H,NH2)；7.44-7.78(m,4H,C6H4)；7.15-8.36(m,3H,C6H3)；8.15-8.75(m,4H,C6H4)；8.66(d,1H,CH)；11.6(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z255(M+H)+。
5)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取3.08g的(E)-2-氰基-3-(2-羟基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(7.5mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL DMF和1.74g叔丁醇钾，再加入1.9g 1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(7.5mmol)，氮气保护下室温搅拌反应4h，然后加入700μL冰乙酸和6mL水进行猝灭。用饱和氯化铵和乙酸乙酯萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(2.8g,5.1mmol)，产率69％。
UVλ：225,283nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3611.4(O-H)；3318.7(N-H)；2231.4(C≡N)；1633.6(C＝C)；1610.2(N＝N)；1340.1(N-O)；1249.8(C-O-C)；1069.1(C-N)；771.2(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.13(s,2H,CH2)；5.38(s,1H,OH)；6.87(s,2H,NH2)；7.54-8.02(m,4H,C6H4)；7.09-8.35(m,3H,C6H3)；8.18-8.77(m,4H,C6H4)；8.57(d,1H,CH)；11.8(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z547(M+H)+。
6)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取840mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.5mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL丙酮、660mg K2CO3和560μL Br(CH2)2Br(6.4mmol)，52℃下反应72h。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(677mg,1mmol)，产率66％。
UVλ：236,285nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3612.3(O-H)；3315.2(N-H)；2236.1(C≡N)；1632.4(C＝C)；1617.6(N＝N)；1338.4(N-O)；1251.2(C-O-C)；1061.5(C-N)；772.6(＝C-H)；687.8(C-Br)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.56(t,2H,CH2)；4.28(t,2H,CH2)；5.23(s,2H,CH2)；5.37(s,1H,OH)；7.05(s,2H,NH2)；7.47-7.89(m,4H,C6H4)；7.13-8.35(m,3H,C6H3)；8.56-8.78(m,4H,C6H4)；8.13(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z653(M+H)+。
7)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取892mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.37mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL DMF，再加入510mg邻苯二甲酰亚胺钾盐(2.76mmol)，65℃下反应6h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(532mg,0.74mmol)，产率54％。
UVλ：252,284nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3616.8(O-H)；3312.1(N-H)；2235.4(C≡N)；1718.4(C＝O)；1635.2(C＝C)；1619.3(N＝N)；1336.6(N-O)；1251.3(C-O-C)；1066.4(C-N)；772.9(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：4.34(t,2H,CH2)；4.72(t,2H,CH2)；5.23(s,2H,CH2)；5.43(s,1H,OH)；6.85(s,2H,NH2)；7.62-7.97(m,4H,C6H4)；7.69-7.87(m,4H,C6H4)；7.24-8.07(m,3H,C6H3)；8.17-8.68(m,4H,C6H4)；8.14(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z720(M+H)+。
8)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取720mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入8mL DMF，再加入600μL N2H4 .H2O，32℃下反应5h。然后用三氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为三乙胺、甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，三乙胺/甲醇/二氯甲烷的体积比从1:30:100逐渐变为到1:20:100，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(376mg,0.64mmol)，产率64％。
UVλ：238,272nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3433.7(-(CH2)2-N-H)；3615.4(O-H)；3316.7(N-H)；2236.1(C≡N)；1639.4(C＝C)；1622.3(N＝N)；1336.9(N-O)；1255.8(C-O-C)；1057.6(C-N)；770.5(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.12(t,2H,CH2)；4.62(t,2H,CH2)；5.18(t,2H,NH2)；5.19(s,2H,CH2)；5.36(s,1H,OH)；7.04(s,2H,NH2)；7.46-7.83(m,4H,C6H4)；7.18-8.37(m,3H,C6H3)；8.05-8.69(m,4H,C6H4)；8.23(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z590(M+H)+。
9)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取410mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.696mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入8mL含100μL 2-氯乙基异氰酸酯(1.18mmol)的二氯甲烷溶液，0℃下反应4h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(275mg,0.4mmol)，产率57％。
UVλ：225,271nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3618.3(O-H)；3312.1(N-H)；2228.6(C≡N)；1755.7(C＝O)；1642.4(C＝C)；1622.5(N＝N)；1331.3(N-O)；1257.5(C-O-C)；1059.2(C-N)；771.2(＝C-H)；734.6(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.35(m,2H,CH2)；3.68(t,2H,CH2)；3.69(m,2H,CH2)；4.55(t,2H,CH2)；5.23(s,2H,CH2)；5.39(s,1H,OH)；6.1(t,1H,NH)；6.2(t,1H,NH)；7.15(s,2H,NH2)；7.55-7.87(m,4H,C6H4)；7.15-8.29(m,3H,C6H3)；8.22-8.72(m,4H,C6H4)；8.13(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z695(M+H)+。
10)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物1)的合成
称取610mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.879mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入6mL含80μL冰乙酸的乙腈溶液，再加入155mg NOBF4(1.32mmol)，0℃下反应5h。然后用乙酸乙酯和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4。30℃真空干燥，得到(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-羟基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(375mg,0.52mmol)，产率59％。
UVλ：232,279nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3619.2(O-H)；3313.5(N-H)；2229.1(C≡N)；1755.5(C＝O)；1641.9(C＝C)；1622.8(N＝N)；1533.8(N＝O)；1325.4(N-O)；1259.8(C-O-C)；1107.7(N-N)；1065.4(C-N)；771.9(＝C-H)；737.2(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.33(t,2H,CH2)；3.61(t,2H,CH2)；3.64(m,2H,CH2)；4.52(t,2H,CH2)；5.18(s,2H,CH2)；5.39(s,1H,OH)；5.8(t,1H,NH)；7.03(s,2H,NH2)；7.55-8.03(m,4H,C6H4)；7.25-8.36(m,3H,C6H3)；8.29-8.67(m,4H,C6H4)；8.04(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z724(M+H)+。
实施例2(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物2)的合成
1)3-(2-氨基苯基)-3-氧代丙腈的合成
称取1.93g邻氨基苯甲酸乙酯(11.7mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入12mL乙腈，再加入1.3g甲醇钠(24mmol)，于88℃回流4小时。冷却至室温后，过滤形成白色沉淀，向白色沉淀中加入50mL去离子水、3mol/L HCl溶液8mL，再加入50mL二氯甲烷萃取混合物。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，然后经无水Na2SO4过夜干燥。30℃减压蒸馏去除溶剂，得到粗产物。将粗产物从二氯甲烷-石油醚中重结晶，得到白色固体3-(2-氨基苯基)-3-氧代丙腈(1.09g,6.8mmol)，产率58％。
UVλ：235,287nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3450.2(N-H)；2208.7(C≡N)；1685.4(C＝O)；1204.7(C-O)；770.8(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.63(s,2H,CH2)；6.31(s,2H,NH2)；6.78-7.59(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z161(M+H)+。
2)2-(2-氨基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取0.8g所得固体3-(2-氨基苯基)-3-氧代丙腈(5.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入870mg苯并呋咱(6.4mmol)，再加入45mL乙醇和5g碳酸钾，将混合物在室温下搅拌反应8小时。过滤沉淀，用乙醇洗涤，得到黄色固体。然后，从乙醇中重结晶，得到2-(2-氨基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(640mg,2.3mmol)，产率46％。
UVλ：243,281nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3449.2(N-H)；2241.2(C≡N)；1349.7(N-O)；1215.7(C-O)；771.5(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.22(s,2H,NH2)；6.72-7.58(m,4H,C6H4)；8.21-8.69(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z279(M+H)+。
3)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取750mg 3-氨基苯甲醇(6.1mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入2mL浓HCl和3mLH2O，再加入1.25mL浓度为0.3g/mL的NaNO2水溶液，再加入12mL浓度为190mg/mL的2-(2-氨基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物乙腈溶液，冰浴反应12h。用二氯甲烷和水进行萃取，然后加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:50逐渐变为到1:10。30℃真空干燥得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.06g,2.58mmol)，产率42％。
UVλ：233,276nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3456.7(N-H)；2242.8(C≡N)；1609.4(N＝N)；1348.2(N-O)；1213.2(C-O)；770.6(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.61(s,1H,OH)；4.72(t,2H,CH2)；6.29(s,2H,NH2)；7.55-8.02(m,4H,C6H4)；6.81-8.22(m,3H,C6H3)；8.26-8.69(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z413(M+H)+。
4)1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物的合成
称取2g 2-氨基-6-氯嘌呤(11.8mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL N-N二甲基甲酰胺(DMF)和2.8mL N-甲基吡咯烷(26.4mmol)，室温搅拌反应20h后，加入3mL丙酮进行沉淀，过滤收集沉淀，加入乙醚洗涤两次得到白色固体1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(1.8g,7.1mmol)，产率60％。
UVλ：235,289nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3445.9(N-H)；3272.9(-NH2)；2975.7(C-H)；1727.9(C＝N)；1563.2(C＝C)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.13(s,2H,CH2)；5.39(s,1H,OH)；6.77(s,2H,NH2)；7.47-7.86(m,4H,C6H4)；7.15-8.43(m,3H,C6H3)；8.18-8.72(m,4H,C6H4)；8.59(d,1H,CH)；11.5(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z255(M+H)+。
5)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取3.09g的(E)-2-(2-氨基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(7.5mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入8mL DMF和2.32g叔丁醇钾，再加入2.1g1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(8.3mmol)，氮气保护下室温搅拌反应4h，然后加入850μL冰乙酸和5mL水进行猝灭。用饱和氯化铵和乙酸乙酯萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(2.9g,5.3mmol)，产率71％。
UVλ：227,286nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3453.8(N-H)；3321.6(N-H)；2235.7(C≡N)；1632.9(C＝C)；1619.7(N＝N)；1345.7(N-O)；1259.6(C-O-C)；1072.3(C-N)；776.7(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.12(s,2H,CH2)；6.32(s,2H,NH2)；6.89(s,2H,NH2)；7.49-7.86(m,4H,C6H4)；6.86-8.23(m,3H,C6H3)；8.29-8.86(m,4H,C6H4)；8.63(d,1H,CH)；11.3(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z546(M+H)+。
6)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取818mg所得固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.5mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL丙酮、720mg K2CO3和665μL Br(CH2)2Br(7.6mmol)，55℃下反应72h。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(540mg,0.83mmol)，产率55％。
UVλ：235,289nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3456.3(N-H)；3312.9(N-H)；2236.2(C≡N)；1636.4(C＝C)；1623.6(N＝N)；1343.6(N-O)；1251.1(C-O-C)；1061.9(C-N)；772.6(＝C-H)；692.9(C-Br)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.76(t,2H,CH2)；4.21(t,2H,CH2)；5.17(s,2H,CH2)；6.36(s,2H,NH2)；7.02(s,2H,NH2)；7.54-7.87(m,4H,C6H4)；6.86-8.23(m,3H,C6H3)；8.33-8.78(m,4H,C6H4)；8.12(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z652(M+H)+。
7)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取977mg所得固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.5mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入12mL DMF，再加入610mg邻苯二甲酰亚胺钾盐(3.3mmol)，62℃下反应6h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(503mg,0.7mmol)，产率47％。
UVλ：247,286nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3463.2.8(N-H)；3319.2(N-H)；2237.1(C≡N)；1723.5(C＝O)；1635.7(C＝C)；1626.3(N＝N)；1335.2(N-O)；1251.7(C-O-C)；1065.8(C-N)；772.5(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：4.08(t,2H,CH2)；4.66(t,2H,CH2)；5.11(s,2H,CH2)；6.35(s,2H,NH2)；6.87(s,2H,NH2)；7.49-7.85(m,4H,C6H4)；7.87-7.93(m,4H,C6H4)；6.63-8.27(m,3H,C6H3)；8.29-8.89(m,4H,C6H4)；8.14(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z719(M+H)+。
8)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取718mg所得固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL DMF，再加入750μL N2H4.H2O，34℃下反应5h。然后用三氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为三乙胺、甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，三乙胺/甲醇/二氯甲烷的体积比从1:30:100逐渐变为到1:20:100，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(441mg,0.75mmol)，产率75％。
UVλ：235,276nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3433.7(-(CH2)2-N-H)；3443.1(N-H)；3315.8(N-H)；2236.9(C≡N)；1639.5(C＝C)；1622.7(N＝N)；1336.9(N-O)；1252.7(C-O-C)；1057.6(C-N)；770.1(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.11(m,2H,CH2)；4.58(t,2H,CH2)；5.13(t,2H,NH2)；5.23(s,2H,CH2)；5.34(s,1H,OH)；6.25(s,2H,NH2)；7.01(s,2H,NH2)；7.55-7.98(m,4H,C6H4)；6.88-8.15(m,3H,C6H3)；8.06-8.75(m,4H,C6H4)；8.08(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z589(M+H)+。
9)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取409mg所得固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.696mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入12mL含125μL 2-氯乙基异氰酸酯(1.475mmol)的二氯甲烷溶液，0℃下反应6h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(263mg,0.38mmol)，产率55％。
UVλ：226,274nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3467.2(N-H)；3313.9(N-H)；2228.1(C≡N)；1755.7(C＝O)；1642.2(C＝C)；1622.5(N＝N)；1336.9(N-O)；1257.2(C-O-C)；1059.2(C-N)；771.2(＝C-H)；743.9(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.43(t,2H,CH2)；3.67(t,2H,CH2)；3.69(m,2H,CH2)；4.62(t,2H,CH2)；5.13(s,2H,CH2)；6.1(t,1H,NH)；6.2(t,1H,NH)；6.86(s,2H,NH2)；7.62-7.98(m,4H,C6H4)；6.89-8.15(m,3H,C6H3)；8.23-8.61(m,4H,C6H4)；8.05(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z694(M+H)+。
10)(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物2)的合成
称取637mg所得固体(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.92mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL含85μL冰乙酸的乙腈溶液，再加入193mg NOBF4(1.64mmol)，0℃下反应5h。然后用乙酸乙酯和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4。30℃真空干燥，得到(E)-2-(2-氨基-5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(369mg,0.51mmol)，产率56％。
UVλ：231,280nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3452.1(N-H)；3313.5(N-H)；2229.2(C≡N)；1763.7(C＝O)；1641.5(C＝C)；1622.8(N＝N)；1543.8(N＝O)；1325.4(N-O)；1259.8(C-O-C)；1107.9(N-N)；1065.4(C-N)；771.9(＝C-H)；732.7(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.41(t,2H,CH2)；3.61(t,2H,CH2)；3.62(m,2H,CH2)；4.63(t,2H,CH2)；5.22(s,2H,CH2)；6.1(t,1H,NH)；6.33(s,2H,NH2)；6.87(s,2H,NH2)；7.56-7.89(m,4H,C6H4)；6.88-8.23(m,3H,C6H3)；8.26-8.77(m,4H,C6H4)；8.11(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z723(M+H)+。
实施例3(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物3)的合成
1)3-(2-(二甲基氨基)苯基)-3-氧代丙腈的合成
称取2.26g 2-二甲基氨基苯甲酸乙酯(11.7mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入12mL乙腈，再加入0.97g甲醇钠(18mmol)，于88℃回流4小时。冷却至室温后，过滤形成白色沉淀，向白色沉淀中加入50mL去离子水、4mol/L HCl溶液12mL，再加入50mL二氯甲烷萃取混合物。将合并的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，然后经无水Na2SO4过夜干燥。30℃减压蒸馏去除溶剂，得到粗产物。将粗产物从二氯甲烷-石油醚中重结晶，得到白色固体3-(2-(二甲基氨基)苯基)-3-氧代丙腈(1.34g,7.1mmol)，产率61％。
UVλ：231,285nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3031.2(C-H)；2215.6(C≡N)；1685.7(C＝O)；1201.9(C-O)；771.7(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.05(s,3H,CH3)；3.62(s,2H,CH2)；6.85-7.77(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z189(M+H)+。
2)2-氰基-3-(2-(二甲基氨基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取940mg所得固体3-(2-(二甲基氨基)苯基)-3-氧代丙腈(5.0mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入789mg苯并呋咱(5.8mmol)，再加入45mL乙醇和6g碳酸钾，将混合物在室温下搅拌反应8小时。过滤沉淀，用乙醇洗涤，得到黄色固体。然后，从乙醇中重结晶，得到2-氰基-3-(2-(二甲基氨基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(744mg,2.43mmol)，产率49％。
UVλ：238,280nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3047.2(C-H)；2243.5(C≡N)；1343.9(N-O)；1211.2(C-O)；771.5(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.07(s,3H,CH3)；6.79-7.65(m,4H,C6H4)；8.21-8.72(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z307(M+H)+。
3)(E)-2-氰基-3-(2-N,N二甲基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取800mg 3-氨基苯甲醇(6.5mmol)于50mL圆底烧瓶中，加入3mL浓HCl和5mLH2O，再加入2mL浓度为0.3g/mL的NaNO2水溶液，再加入10mL浓度为175mg/mL的2-氰基-3-(2-(二甲基氨基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物乙腈溶液，冰浴反应10h。用二氯甲烷和水进行萃取，然后加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:50逐渐变为到1:10。30℃真空干燥得到橙黄色固体(E)-2-氰基-3-(2-N,N二甲基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(1.26g,2.86mmol)，产率44％。
UVλ：233,277nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3044.6(C-H)；2246.2(C≡N)；1605.2(N＝N)；1343.6(N-O)；1215.9(C-O)；770.1(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.05(s,3H,CH3)；3.61(s,1H,OH)；4.62(s,2H,CH2)；7.55-7.89(m,4H,C6H4)；7.01-8.23(m,3H,C6H3)；8.24-8.74(m,4H,C6H4)。ESI-MS：m/z441(M+H)+。
4)1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物的合成
称取2g 2-氨基-6-氯嘌呤(11.8mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL N-N二甲基甲酰胺(DMF)和2.8mL N-甲基吡咯烷(26.4mmol)，室温搅拌反应20h后，加入3mL丙酮进行沉淀，过滤收集沉淀，加入乙醚洗涤两次，得到白色固体1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(1.8g,7.1mmol)，产率60％。
UVλ：233,289nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3445.9(N-H)；3275.2(-NH2)；2974.5(C-H)；1717.3(C＝N)；1552.5(C＝C)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：5.11(s,2H,CH2)；5.36(s,1H,OH)；7.02(s,2H,NH2)；7.55-7.87(m,4H,C6H4)；7.23-8.26(m,3H,C6H3)；8.27-8.72(m,4H,C6H4)；8.61(d,1H,CH)；11.2(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z255(M+H)+。
5)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取3.3g的(E)-2-氰基-3-(2-N,N二甲基-5-((3-(羟甲基)苯基)二氮烯基)苯基)喹喔啉1,4-二氧化物(7.5mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入8mL DMF和2.23g叔丁醇钾，再加入1.72g 1-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基)-1-甲基吡咯烷-1-鎓氯化物(6.8mmol)，氮气保护下室温搅拌反应5h，然后加入750μL冰乙酸和6mL水进行猝灭。用饱和氯化铵和乙酸乙酯萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(3.27g,5.7mmol)，产率76％。
UVλ：227,286nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3042.5(C-H)；3323.9(N-H)；2231.5(C≡N)；1635.7(C＝C)；1610.8(N＝N)；1341.2(N-O)；1252.5(C-O-C)；1069.2(C-N)；771.9(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.11(s,3H,CH3)；5.17(s,2H,CH2)；6.85(s,2H,NH2)；7.47-7.89(m,4H,C6H4)；7.01-8.23(m,3H,C6H3)；8.24-8.78(m,4H,C6H4)；8.92(d,1H,CH)；11.2(d,1H,NH)。ESI-MS：m/z574(M+H)+。
6)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取860mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.5mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入50mL丙酮、800mg K2CO3和726μL Br(CH2)2Br(8.3mmol)，52℃下反应72h。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(584mg,0.86mmol)，产率57％。
UVλ：235,284nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3031.5(C-H)；3315.2(N-H)；2232.3(C≡N)；1639.4(C＝C)；1623.6(N＝N)；1338.4(N-O)；1259.2(C-O-C)；1061.5(C-N)；772.6(＝C-H)；681.4(C-Br)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.07(s,3H,CH3)；3.82(t,2H,CH2)；4.21(t,2H,CH2)；5.15(s,2H,CH2)；6.79(s,2H,NH2)；7.52-7.92(m,4H,C6H4)；7.03-8.27(m,3H,C6H3)；8.31-8.77(m,4H,C6H4)；8.08(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z680(M+H)+。
7)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取930mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-溴乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1.37mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL DMF，再加入582mg邻苯二甲酰亚胺钾盐(3.15mmol)，68℃下反应7h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:40逐渐变为到1:10，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(604mg,0.81mmol)，产率59％。
UVλ：243,288nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3048.1(C-H)；3315.8(N-H)；2235.4(C≡N)；1718.4(C＝O)；1641.1(C＝C)；1619.3(N＝N)；1341.2(N-O)；1251.3(C-O-C)；1066.4(C-N)；771.2(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.02(s,3H,CH3)；4.12(t,2H,CH2)；4.67(t,2H,CH2)；5.22(s,2H,CH2)；6.87(s,2H,NH2)；7.55-7.86(m,4H,C6H4)；7.03-8.25(m,4H,C6H3)；8.31-8.75(m,3H,C6H4)；8.09(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z747(M+H)+。
8)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取746mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(N-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(1mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL DMF，再加入715μL N2H4.H2O，32℃下反应6h。然后用三氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为三乙胺、甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，三乙胺/甲醇/二氯甲烷的体积比从1:30:100逐渐变为到1:20:100，30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(382mg,0.62mmol)，产率62％。
UVλ：226,276nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3433.7(-(CH2)2-N-H)；3044.3(C-H)；3321.2(N-H)；2236.1(C≡N)；1635.2(C＝C)；1622.3(N＝N)；1336.9(N-O)；1251.2(C-O-C)；1057.6(C-N)；770.1(＝C-H)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.05(s,3H,CH3)；3.12(m,2H,CH2)；4.61(t,2H,CH2)；5.12(t,2H,NH2)；5.19(s,2H,CH2)；7.05(s,2H,NH2)；7.62-8.02(m,4H,C6H4)；7.01-8.29(m,3H,C6H3)；8.31-8.78(m,4H,C6H4)；8.08(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z617(M+H)+。
9)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物的合成
称取429mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-氨基乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.696mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入12mL含200μL 2-氯乙基异氰酸酯(2.36mmol)的二氯甲烷溶液，0℃下反应4h。然后用二氯甲烷和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。30℃真空干燥，得到橙黄色固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(310mg,0.43mmol)，产率62％。
UVλ：224,270nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3048.5(C-H)；3312.2(N-H)；2228.6(C≡N)；1752.8(C＝O)；1642.4(C＝C)；1622.5(N＝N)；1327.5(N-O)；1258.4(C-O-C)；1059.2(C-N)；765.3(＝C-H)；734.6(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.02(s,3H,CH3)；3.45(m,2H,CH2)；3.61(t,2H,CH2)；4.55(t,2H,CH2)；5.21(s,2H,CH2)；6.1(t,1H,NH)；6.99(s,2H,NH2)；7.58-7.85(m,4H,C6H4)；7.02-8.23(m,3H,C6H3)；8.31-8.61(m,4H,C6H4)；8.06(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z722(M+H)+。
10)(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(化合物3)的合成
称取634mg所得固体(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)脲基)乙基)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(0.879mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入10mL含125μL冰乙酸的乙腈溶液，再加入204mgNOBF4(1.74mmol)，0℃下反应6h。然后用乙酸乙酯和水萃取，加入无水硫酸钠过夜干燥。减压蒸馏去除溶剂后，用硅胶柱层析分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐变为到1:4。30℃真空干燥得到(E)-2-(5-((3-(((2-氨基-9-(2-(3-(2-氯乙基)1-亚硝基脲)-9H-嘌呤-6-基)氧基)甲基)苯基)二氮烯基)-2-N,N二甲基苯基)-3-氰基喹喔啉1,4-二氧化物(360mg,0.48mmol)，产率55％。
UVλ：232,279nm。IR(KBr压片)v/cm-1：3042.7(C-H)；3322.3(N-H)；2235.4(C≡N)；1755.5(C＝O)；1648.6(C＝C)；1622.8(N＝N)；1533.8(N＝O)；1333.8(N-O)；1259.8(C-O-C)；1107.7(N-N)；1065.4(C-N)；775.7(＝C-H)；728.1(C-Cl)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.08(s,3H,CH3)；3.45(t,2H,CH2)；3.65(t,2H,CH2)；4.58(t,2H,CH2)；5.18(s,2H,CH2)；6.0(t,1H,NH)；7.01(s,2H,NH2)；7.58-7.85(m,4H,C6H4)；7.02-8.23(m,3H,C6H3)；8.23-8.69(m,4H,C6H4)；8.04(s,1H,CH)。ESI-MS：m/z751(M+H)+。
实施例4本发明制得的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子的抗肿瘤活性评价如下：
1、实验材料与仪器
供试化合物：上述实施例中制得的化合物1、化合物2和化合物3；
细胞系：L1210小鼠白血病细胞，HT29人结肠癌细胞，A549人肺细胞，HUT102人T淋巴瘤细胞，人神经胶质瘤细胞SF763，SF126。
2、实验方法
六种肿瘤细胞分别以1000/孔接种96孔板，在37℃，5％CO2培养24小时后，换以系列浓度(1μM、5μM、10μM、50μM、100μM、200μM、400μM和1000μM)的卡莫司汀(阳性对照组)、化合物1、化合物2和化合物3，每组5个复孔，并设置对照组。将上述各组分别在有氧和低氧条件下作用48小时。然后，向每孔中加10μL CCK-8溶液，作用4小时。最后，测定在450nm处的吸光度值，按以下公式计算细胞活性，并通过回归分析计算得到半数抑制率IC50。
细胞存活率(％)＝(A加药组–A空白组)/(A对照组–A空白组)×100
A加药组为具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度；
A空白组为具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度；
A对照组为具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度。
3、实验结果：见表1
表1肿瘤细胞的半数抑制率(IC50μM)
表1结果显示：
在常氧环境下，化合物1、化合物2和化合物3对6种肿瘤细胞的IC50值与阳性对照组(卡莫司汀组)相近，表明在常氧条件下，化合物1、化合物2和化合物3的肿瘤细胞抑制活性与卡莫司汀组差别不大。
在低氧环境下，化合物1、化合物2和化合物3对6种肿瘤细胞的IC50值比阳性对照组(卡莫司汀组)显著降低。这表明化合物1、化合物2和化合物3在低氧环境下偶氮键的断裂，一方面能够释放出O6-苄基鸟嘌呤类似物作为AGT抑制剂，从而阻断了AGT介导的肿瘤细胞耐药性，使肿瘤细胞对亚硝基脲的烷化作用更敏感；另一方面，化合物1、化合物2和化合物3在低氧环境下偶氮键断裂，释放出的TPZ类似物也是一种具有抗肿瘤活性的低氧激活前药，能够特异性地在低氧环境中被还原酶激活，生成活泼自由基导致肿瘤细胞DNA损伤，从而发挥抗肿瘤活性。
对比常氧和低氧环境下化合物1、化合物2和化合物3的IC50值，可以看出，化合物1、化合物2和化合物3在低氧环境下的肿瘤细胞抑制活性比在常氧环境下显著提高，这表明化合物1、化合物2和化合物3具有低氧环境选择性。因此，化合物1、化合物2和化合物3能够选择性地作用于处于低氧状态下的肿瘤细胞，而避免对处于常氧状态下的正常细胞造成损伤，从而达到靶向作用于肿瘤细胞的目的。此外，由于化合物1、化合物2和化合物3在低氧条件下释放出的TPZ类似物也具有抗肿瘤活性，这使得化合物1、化合物2和化合物3在低氧条件下能够同时发挥氯乙基亚硝基脲药效团和TPZ类似物药效团的双重抗肿瘤作用。因此，化合物1、化合物2和化合物3的抗肿瘤效果比目前已有的低氧激活抗肿瘤药物具有显著提高。
实验结果表明，本发明提供的化合物在低氧条件下比现有的氯乙基亚硝基脲和替拉扎明具有更高的肿瘤抑制活性；同时，该类化合物能够特异性的作用于处于低氧环境的实体瘤组织，可用于肿瘤靶向治疗。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子，其特征在于，其结构如通式(I)所示：
R为OH，NH2，N(CH3)2，NHCH3，N(CH2CH3)2，NHCH2CH3中的一种；
R1为H，CH3，OCH3，NO2，Cl，Br中的一种；
n为2-6的整数。
2.如权利要求1所述的靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子，其特征在于，当n为2-4的整数、且R1为H、CH3、OCH3、NO2、Cl、Br中的一种时，R为OH、NH2或N(CH3)2。
3.如权利要求1所述的靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子，其特征在于，当n为2，R1为H时，R为OH、NH2或N(CH3)2。
4.权利要求1-3任一项所述的靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子的制备方法，其特征在于，所述制备方法的反应历程为：
包括以下反应步骤：
(1)苯甲酸乙酯与甲醇钠反应得到化合物a；
(2)化合物a与苯并呋咱反应得到化合物b；
(3)化合物b与3-氨基苯甲醇反应得化合物c；
(4)2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷反应得化合物d；
(5)化合物c与化合物d反应得化合物e；
(6)化合物e与Br(CH2)2Br反应得化合物f；
(7)化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐反应得化合物g；
(8)化合物g与水合肼反应得化合物h；
(9)化合物h与2-氯乙基异氰酸酯反应得化合物i；
(10)化合物i与四氟硼酸亚硝鎓反应得化合物j。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)化合物b与3-氨基苯甲醇按照1:(1-3)的摩尔比，于0-10℃反应，得化合物c。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，化合物c与化合物d按照1:(1-3)的摩尔比，于10-35℃反应，得化合物e。
7.如权利要求4-6任一所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)苯甲酸酯与甲醇钠按照1:(1-5)的摩尔比，回流反应，得化合物a；
(2)化合物a与苯并呋咱按照1:(1-4)的摩尔比反应，得化合物b；
(4)2-氨基-6-氯嘌呤与N-甲基吡咯烷按照1:(1-7)的摩尔比反应，得化合物d；
(6)化合物e、无机碱、1,2-二卤代乙烷按照1:(1-6):(1-7)的摩尔反应，得化合物f；
(7)化合物f与邻苯二甲酰亚胺钾盐按照1:(1-4)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物g；
(8)化合物g与水合肼按照1:(1-5)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物h；
(9)化合物h与2-氯乙基异氰酸酯按照1:(1-8)的摩尔比混合溶于有机溶剂中，得化合物i；
(10)化合物i、冰醋酸、亚硝鎓四氟硼酸盐按照1:(1-5):(1-5)的摩尔比混合溶于有机溶剂中反应，得化合物j，即通式(I)所示的化合物。
8.含有权利要求1-3任一项所述靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子的药物。
9.一种权利要求1-3任一项所述的靶向肿瘤低氧的偶氮芳香氮氧化物-氯乙基亚硝基脲偶联分子在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为脑瘤、白血病、结肠癌、淋巴癌、肺癌、骨髓瘤、黑色素瘤。
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