CN108478603B - 一种灭活丁酸梭菌注射剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗菌和抗病毒的注射剂，属于生物医药领域。这种药物的主要成分是灭活丁酸梭菌，通过将活的丁酸梭菌灭活制备得到，灭活丁酸梭菌注射给药具有抗菌和抗病毒作用，可用于人或动物的各种细菌性疾病和病毒性疾病的预防、治疗或辅助治疗，具有广阔的应用前景。

Description

一种灭活丁酸梭菌注射剂
技术领域
本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种抗菌、抗病毒的注射剂。
背景技术
丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，是从健康人和动物肠道中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。目前研究发现丁酸梭菌具有维持肠道菌群平衡、增强机体免疫功能、生成营养物质、防治肠炎等良好的益生特性。目前人医上将活的丁酸梭菌制剂口服用于肠炎的防治，在畜禽养殖业中将活的丁酸梭菌多作为饲料添加剂用于畜禽消化道的保健。有人从成人和幼儿的粪便中分离了2株丁酸梭菌，并确认这2株丁酸梭菌口服对于多种RNA病毒及DNA病毒显示出优异的抗病毒活性和免疫增强作用(专利公开号：CN107075460A)。到目前为止，国内外尚无将丁酸梭菌灭活作为注射剂用于疾病防治的研究报道。
以往我们研究发现将灭活的乳酸菌对小鼠、牛、猪、狗等动物静脉给药具有良好的免疫增强、抗菌和抗病毒等作用，并申报了国际和国家多项专利(专利申请号如下：PCT/CN2016/09844，201610809584.6，201610811028.2，201610810757.6，201610810758.0，201610809345.0，201610809582.7，201610809583.1，201610809676.4，201610811285.6，201610811770.3)。基于以上的研究，我们推测将丁酸梭菌灭活制成注射剂对动物注射给药也应该具有抗菌、抗病毒作用。我们通过研究证实，将灭活丁酸梭菌注射给药的确具有良好的抗菌和抗病毒作用。该药物对动物用药还具有成本低、无药物残留等优势，特别对家畜疫病防控具有广阔的应用前景。
发明内容
一种抗菌、抗病毒的注射剂，该注射剂的主要成分为灭活丁酸梭菌完整形态菌体。
所述的注射剂每ml包含灭活丁酸梭菌数量为105—1012个。
进一步，丁酸梭菌的灭活方法选自高温灭活、高温高压灭活、紫外线灭活、化学试剂灭活或辐射灭活中的任一种。
再进一步，所述的注射剂还包含药学上可接受的佐剂，佐剂中含有足够的盐或单糖以保证注射剂悬浮液与血液渗透压相同或相近。
用于本发明的制备灭活丁酸梭菌注射剂的剂型包括：粉针剂、混悬注射剂等。所述的粉针剂通过喷雾干燥或冷冻干燥制成，应用时制成混悬液。
所述制剂为注射剂。
所述的注射剂的佐剂选自辛苯氧基聚乙氧乙醇、四丁酚醛、山梨醇酐聚乙二醇单油酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯衍生物、吐温-80、聚烷基苯磺酸钠、月桂基硫酸酯钠、多糖硫酸酯碱金属盐、葡聚糖硫酸酯钠、磺基琥珀酸双辛酯、金合欢胶、阿拉伯乳胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅酸乙酯、乙醇、甘油、山梨醇、蜂蜜、琼脂、淀粉、右旋糖、果糖、麦芽浸膏、可可粉、酒石酸、枸橼酸、枸橼酸钠、角叉酸、海藻酸、海藻酸钠、鞣酸、环己烷氨基磺酸、矿物油、优卡林、糖精钠、印度树胶、刺梧桐树胶、西黄蓍胶、果胶、鹿角菜胶、明胶、羧甲基纤维素、硫酸纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、醋酸硫酸纤维素钠、羟乙基纤维素钠、甲基聚硅、山梨酸钾、高岭土、硅藻土、膨润土、硅酸铝、氢氧化铝、胶体氢氧化铝、硅酸镁铝、蒙脱土镁、三聚硅酸镁、硅酸铝镁钠、碳酸氢钠、碳酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、乙基香草醛、柠檬油、橙皮油、香草醛、干酪素等。
进一步研究发现，将灭活丁酸梭菌注射给药，可以有效地防治细菌病与病毒病。
本发明所述的灭活丁酸梭菌注射剂可用于人或动物的各种细菌性疾病、病毒性疾病的预防、治疗或辅助治疗。
此前没有人尝试用灭活丁酸梭菌注射给药用于抗菌和抗病毒的研究，可能主要考虑灭活丁酸梭菌注射给药存在安全性问题，与日常使用的水溶性静脉注射剂相比较，灭活丁酸梭菌注射剂呈颗粒性混悬液，将这样的颗粒性物质进行静脉给药，认为风险较高。但目前人医临床上已经有将有害菌的菌体进行注射给药的药物，如卡介苗，是结核活菌苗，可通过口服、皮下、腹腔或瘤内注射用于预防结核病和肿瘤的辅助治疗。短小棒状杆菌制剂，为短小棒状杆菌的死菌悬液，经皮下、肌肉、瘤内或静脉滴注等用于一些肿瘤的辅助治疗。此外，还有A群链球菌制剂、铜绿假单胞菌制剂、草分枝杆菌制剂等。另外，还有人将红球菌属、戈登氏菌属、诺卡氏菌属、迪茨氏菌属、冢村氏菌属和类诺卡氏菌属的完整细菌细胞注射给药作为免疫调节剂(专利公开号：CN1735431A)。而本发明经过研究发现，灭活丁酸梭菌静脉注射具有防治细菌病和病毒病的作用。丁酸梭菌作为一种益生菌将其灭活注射给药具有更安全的特性。注射灭活丁酸梭菌具有抗菌和抗病毒的机制可能与增强机体免疫功能有关，也可能是灭活丁酸梭菌静脉给药后被机体分解代谢后产生的物质发挥作用。
附图说明
图1活的丁酸梭菌革兰氏染色油镜观察照片
图2灭活丁酸梭菌革兰氏染色油镜观察照片
具体实施方式
实施例1
将丁酸梭菌(拉丁名称：Clostridium butyricum，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号：CICC 20036)接种于MRS肉汤培养基，于37℃厌氧发酵36-48小时，然后3000转离心5分钟，去除上层培养液保留沉淀，加入无菌生理盐水清洗沉淀，离心5分钟，重复清洗3次后，加入无菌生理盐水，与沉淀混匀，制成混悬液。取一定量的丁酸梭菌生理盐水混悬液，经过THOMA细菌计数板进行细菌计数，使每ml混悬液含有约109个丁酸梭菌。将配制好的丁酸梭菌生理盐水混悬液于121℃、压力0.12MPa，灭活15min，得到灭活丁酸梭菌注射剂。将活的丁酸梭菌和灭活的丁酸梭菌分别进行革兰氏染色，在油镜下观察菌体形态(参见附图1和附图2)，对比发现，灭活菌与活菌保持一致的菌体轮廓和形态，细菌计数发现灭活前后菌体数量未发生明显变化。对灭活丁酸梭菌生理盐水混悬液进行离心，弃上清留沉淀，提取DNA，采用PCR扩增16SrDNA，通过测序还可以进行丁酸梭菌种类鉴别。
实施例2
检测实施例1制备的灭活丁酸梭菌注射剂对沙门氏菌感染小鼠的防治作用。将体重为18-22g的清洁级昆明种小白鼠分为3组，即正常对照组、沙门氏菌组和灭活丁酸梭菌注射剂组，每组30只小鼠，雌雄各半。正常对照组和沙门氏菌组的小鼠尾静脉注射无菌生理盐水，灭活丁酸梭菌注射剂组小鼠尾静脉注射灭活丁酸梭菌混悬液，各组小鼠给药体积均为0.1mL/10g。给药后间隔24小时，沙门氏菌组和灭活丁酸梭菌注射剂组的小鼠分别尾静脉注射肠炎沙门氏菌(中国兽医微生物菌种保藏管理中心，编号CVCC 3377)。连续观察20天，记录小鼠每天的死亡数。采用SPSS 11.5软件对实验数据进行卡方检验，结果见表1。由表1可知，与沙门氏菌组比较，灭活丁酸梭菌注射剂组极显著地降低了小鼠的死亡数。说明灭活丁酸梭菌静脉给药对沙门氏菌感染小鼠具有防治作用。
表1灭活丁酸梭菌静脉给药防治沙门氏菌对小鼠致死作用的结果
Figure BDA0001635490410000041
注：**表示与正常对照组比较差异极显著P＜0.01，*表示与正常对照常组比较差异显著P＜0.05；△△表示与沙门氏菌组比较差异极显著P＜0.01，△表示与沙门氏菌组比较差异显著P＜0.05。
实施例3
检测实施例1制备的灭活丁酸梭菌注射剂对流感病毒PR8株感染小鼠死亡数的影响。实验选用18-22g清洁级昆明种小白鼠分为正常对照组、PR8株模型组(即流感病毒PR8株感染小鼠模型组)和灭活丁酸梭菌注射剂组。每组30只小鼠，雌雄各半。正常对照组和PR8株模型组小鼠尾静脉注射无菌生理盐水，灭活丁酸梭菌注射剂组的小鼠尾静脉注射灭活丁酸梭菌混悬液，各组给药体积均为0.1mL/10g。各组小鼠于给药1次后间隔24小时，除正常对照组外，其他各组小鼠在乙醚轻度麻醉下于鼻腔内接种含流感病毒PR8株的鸡胚尿囊液，每只0.05mL，使流感病毒PR8株感染小鼠。此后观察记录10天内各组小鼠死亡数。采用SPSS 11.5软件对实验数据进行卡方检验，结果见表2。由表2可知，灭活丁酸梭菌注射剂组与PR8株模型组比较，极显著降低了小鼠死亡数。以上说明灭活丁酸梭菌注射给药可以用于病毒性疾病防治。
表2灭活丁酸梭菌静脉给药对流感病毒PR8株感染小鼠的影响结果
Figure BDA0001635490410000042
注：**表示与正常对照组比较差异极显著P＜0.01，*表示与正常对照常组比较差异显著P＜0.05；△△表示与PR8株模型组比较差异极显著P＜0.01，△表示与PR8株模型组比较差异显著P＜0.05。

Claims (3)

1.一种注射剂在制备抗流感病毒药物中的用途，该注射剂的主要成分为灭活丁酸梭菌，其特征在于，对所述的灭活丁酸梭菌进行革兰氏染色，在油镜下观察，灭活丁酸梭菌保持完整菌体形态，每ml注射剂包含灭活丁酸梭菌数量为105—1012个,所述注射剂为混悬液，给药方式为静脉注射给药，所述的丁酸梭菌拉丁名称：Clostridium butyricum，保藏编号：CICC 20036；
所述注射剂的制备方法为：
将丁酸梭菌接种于MRS肉汤培养基，于37℃厌氧发酵36-48小时，然后 3000转离心5分钟，去除上层培养液保留沉淀，加入无菌生理盐水清洗沉淀，离心5分钟，重复清洗3次后，加入无菌生理盐水，与沉淀混匀，制成混悬液；取一定量的丁酸梭菌生理盐水混悬液，经过THOMA细菌计数板进行细菌计数，使每ml混悬液含有109个丁酸梭菌；将配制好的丁酸梭菌生理盐水混悬液于121℃、压力0.12MPa，灭活15min，得到灭活丁酸梭菌注射剂。
2.根据权利要求1所述的注射剂的用途，其特征在于，所述的注射剂还包含药学上可接受的佐剂，佐剂中含有足够的盐或单糖以保证注射剂悬浮液与血液渗透压相同或相近。
3.根据权利要求1所述的注射剂的用途，其特征在于，所述的注射剂通过喷雾干燥或冷冻干燥制作成粉针剂，应用时配制成混悬液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB202013874D0 (en) * 2020-09-03 2020-10-21 Sporegen Ltd Treatment and prevention of viral infections
CN114437996B (zh) * 2022-03-25 2024-03-15 广西医科大学第一附属医院 一种用于预防或治疗哮喘的热灭活酪酸梭菌及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102321552A (zh) * 2011-08-12 2012-01-18 北京金泰得生物科技股份有限公司 一株饲用丁酸梭菌及其应用
CN102550818A (zh) * 2012-02-16 2012-07-11 上海创博生态工程有限公司 一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂及其制备方法
CN105779351A (zh) * 2016-04-13 2016-07-20 南京工业大学 一种酪丁酸梭菌及其培养方法与应用
CN107075460A (zh) * 2015-03-26 2017-08-18 韩国生命工学研究院 具有增强免疫及抗病毒活性的丁酸梭菌菌株及其用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102321552A (zh) * 2011-08-12 2012-01-18 北京金泰得生物科技股份有限公司 一株饲用丁酸梭菌及其应用
CN102550818A (zh) * 2012-02-16 2012-07-11 上海创博生态工程有限公司 一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂及其制备方法
CN107075460A (zh) * 2015-03-26 2017-08-18 韩国生命工学研究院 具有增强免疫及抗病毒活性的丁酸梭菌菌株及其用途
CN105779351A (zh) * 2016-04-13 2016-07-20 南京工业大学 一种酪丁酸梭菌及其培养方法与应用

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