CN108477221B - 利用生物农药防治根结线虫的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物农药技术领域，公开了利用生物农药防治根结线虫的方法，其包括如下步骤：移栽幼苗时，将生物农药与细沙拌匀，然后穴施在栽移坑中，穴施量控制在5‑50kg/亩。本发明生物农药可以有效地防治根结线虫，还具备一定的增产作用。

Description

利用生物农药防治根结线虫的方法
技术领域
本发明属于生物农药技术领域，具体涉及利用生物农药防治根结线虫的方法。
背景技术
根结线虫（Meloidogyne）是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。已知为害蔬菜的线虫主要有高弓根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫、南方根结线虫、爪哇根结线虫以及甜菜根结线虫等。线虫寄主范围广泛，常危害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害。根结线虫主要为害各种蔬菜的根部，表现为侧根和须根较正常增多，并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。
根结线虫雌雄异体。幼虫呈细长蠕虫状。雄成虫线状，尾端稍圆，无色透明，大小1.0～1.5×0.03～0.04毫米。雌成虫梨形，多埋藏在寄主组织内，大小0.44～1.59×0.26～0.81毫米。雌虫、雄虫和幼虫的口针较长；背食道腺开口离口针基部球较远；雌虫排泄孔位置偏后等与近似种M.incognita不同。卵囊通常为褐色，表面粗糙，常附着许多细小的砂粒。
根结线虫病，必须严格实行以防为主、综合防治的植保方针，着重抓好农业、物理防治措施，配合化学及生物防治，才能有效地预防其危害。化学药剂防治可选用10%克线磷、3%米乐尔、5%益舒宝等颗粒剂，每亩3～5公斤均匀撒施后耕翻入土。也可用上述药剂之一，每亩2～4公斤在定植行两边开沟施入，或随定植穴施入，亩用药量1～2公斤，施药后混土防止根系直接与药剂接触。研究发现阿维菌素对根结线虫有较好的防效。微生物防治用益微双螯的无线爽底施、丢施或者克线宝拌种、沾根、浇苗、冲施或者用复合菌种拌细土苗前撒施后翻地，可有效减轻线虫的发生，且可抑制线虫携带的病菌，改善根部环境。克线宝是日本硅酸盐菌与台湾诺卡氏放线菌结合的新型复合菌种，内含枯草芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、固氮菌、木霉菌、酵母菌为主的10个属80余种菌，配以对驱避线虫和提高植株根系抗逆能力有独特功效的肽蛋白和稀土元素，并运用现代高科技的微生物提取及发酵技术将其组织成国内最新的微生物复合制剂。通过对土壤的净化处理和作物根系的强力调控，对作物土传病害的发生有着良好的抑制和防治作用，尤其对根结线虫、包囊线虫、茎线虫等土传寄生虫效果显著。但是存在成分复杂，制备工艺繁琐等缺陷。电防治法采用物理植保技术可以有效预防植物全生育期病虫害，其中根结线虫病可采用土壤电消毒法或土壤电处理技术进行防治。但是存在设备昂贵，操作难度大，存在安全隐患等缺陷，市场推广效果差。开发一种高效、环保的微生物防治方法是我们需要解决的技术问题。
发明内容
本发明要提供利用生物农药防治根结线虫的方法，以克服现有技术微生物防治方法存在防治效果不理想、菌株协同性能差等缺陷。
为了克服现有技术存在的问题，本发明采用如下技术方案，
利用生物农药防治根结线虫的方法，其包括如下步骤：移栽幼苗时，将生物农药与细沙按照1：50的质量比混匀，然后穴施在栽移坑中，穴施量控制在5-50kg/亩。
进一步地，
所述生物农药的制备方法包括如下步骤：将液体菌剂与载体按照1-2:2-3的质量比混合，300rpm搅拌5min，然后进行低温干燥，干燥温度为18℃，干燥后含水量为6-8％，包装，置于4℃保存。
进一步地，
所述液体菌剂按照如下步骤制备而得：
步骤1）将苏云金芽孢杆菌种子液和球形芽孢杆菌种子液按照1:1的体积比混合，然后按照8%体积比的接种量接入到发酵培养基中，28℃培养24h，得到苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液；
步骤2）将寡孢节丛孢菌种子液按照10%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养48h，得到寡孢节丛孢菌发酵液；
步骤3）将吸水链霉菌种子液按照6%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养36h，得到吸水链霉菌发酵液；
步骤4）将苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液、寡孢节丛孢菌发酵液、吸水链霉菌发酵液按照2-3:4-7:1-2的体积比混合均匀，得到液体菌剂。
进一步地，
所述载体按照如下工艺制备而得：将水稻秸秆用粉碎机粉碎，然后过100目筛，得到秸秆粉，将秸秆粉和腐植酸按照3-5:2-3的质量比混合搅拌均匀得到载体。
优选地，
所述苏云金芽孢杆菌为ATCC13367，所述球形芽孢杆菌为ATCC4525，所述寡孢节丛孢菌为ATCC24927，所述吸水链霉菌为ATCC29253。
优选地，
所述根结线虫选自番茄根结线虫或黄瓜根结线虫。
优选地，
所述步骤1）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉10g/L、葡萄糖8g/L、豆饼粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸锰0.1mg/L。
优选地，
所述步骤2）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉12g/L、糖蜜10g/L、酵母膏2g/L、磷酸氢二钾0.5g/L和硫酸镁0.1g/L。
优选地，
所述步骤3）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉16g/L、硫酸铵5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硝酸钾1.0g/L、硫酸镁0.8g/L、氯化钠0.5g/L和硫酸亚铁0.1g/L。
需要说明的是，本发明种子培养以及发酵罐培养方式是本领域常规技术，限于篇幅，并不详述。
本发明所用的耗材均可以从商业途径购买获得。
本发明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下几个方面：
本发明生物农药采用微生物制剂，从众多菌类中选择四种菌株，其杀虫机理不完全相同，能够协同杀虫，配伍合理，共生协调，互不拮抗，制备工艺也相对简单；
寡孢节丛孢菌可产生三维菌网来捕获杀灭线虫，在线虫密度低时，有一定的防治效果，但是线虫密度高时，杀伤效果下降明显；吸水链霉菌能够分泌毒素，杀灭根结线虫；苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌可以共生，相互促进产生杀虫物质，而且能够与根结线虫进行营养与空间竞争；
本发明采用秸秆粉和腐植酸作为载体，不仅增强菌株的存活时间及在土壤中的定植能力，还能够提高土壤的营养物质；
本发明复合微生物制剂还可以促进植物吸收养分，具备壮苗增产的作用。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例1
利用生物农药防治根结线虫的方法，其包括如下步骤：移栽幼苗时，将生物农药与细沙按照1：50的质量比混匀，然后穴施在栽移坑中，穴施量控制在10kg/亩。
所述生物农药的制备方法包括如下步骤：
将苏云金芽孢杆菌种子液（1×108cfu/ml）和球形芽孢杆菌种子液（1×108cfu/ml）按照1:1的体积比混合，然后按照8%体积比的接种量接入到发酵培养基中，28℃培养24h，得到苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉10g/L、葡萄糖8g/L、豆饼粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸锰0.1mg/L；
将寡孢节丛孢菌种子液（1×107cfu/ml）按照10%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养48h，得到寡孢节丛孢菌发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉12g/L、糖蜜10g/L、酵母膏2g/L、磷酸氢二钾0.5g/L和硫酸镁0.1g/L；
将吸水链霉菌种子液（1×107cfu/ml）按照6%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养36h，得到吸水链霉菌发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉16g/L、硫酸铵5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硝酸钾1.0g/L、硫酸镁0.8g/L、氯化钠0.5g/L和硫酸亚铁0.1g/L；
将苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液、寡孢节丛孢菌发酵液、吸水链霉菌发酵液按照2:4:1的体积比混合均匀，得到液体菌剂；
将水稻秸秆用粉碎机粉碎，然后过100目筛，得到秸秆粉，将秸秆粉和腐植酸按照3:2的质量比混合搅拌均匀得到载体；
将液体菌剂与载体按照1:2的质量比混合，300rpm搅拌5min，然后进行低温干燥，干燥温度为18℃，干燥后含水量为8％，包装，置于4℃保存。
所述苏云金芽孢杆菌为ATCC13367，所述球形芽孢杆菌为ATCC4525，所述寡孢节丛孢菌为ATCC24927，所述吸水链霉菌为ATCC29253。
实施例2
利用生物农药防治根结线虫的方法，其包括如下步骤：移栽幼苗时，将生物农药与细沙按照1：50的质量比混匀，然后穴施在栽移坑中，穴施量控制在20kg/亩。
所述生物农药的制备方法包括如下步骤：
将苏云金芽孢杆菌种子液（1×108cfu/ml）和球形芽孢杆菌种子液（1×108cfu/ml）按照1:1的体积比混合，然后按照8%体积比的接种量接入到发酵培养基中，28℃培养24h，得到苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉10g/L、葡萄糖8g/L、豆饼粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸锰0.1mg/L；
将寡孢节丛孢菌种子液（1×107cfu/ml）按照10%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养48h，得到寡孢节丛孢菌发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉12g/L、糖蜜10g/L、酵母膏2g/L、磷酸氢二钾0.5g/L和硫酸镁0.1g/L；
将吸水链霉菌种子液（1×107cfu/ml）按照6%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养36h，得到吸水链霉菌发酵液；所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉16g/L、硫酸铵5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硝酸钾1.0g/L、硫酸镁0.8g/L、氯化钠0.5g/L和硫酸亚铁0.1g/L；
将苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液、寡孢节丛孢菌发酵液、吸水链霉菌发酵液按照3:7:2的体积比混合均匀，得到液体菌剂；
将水稻秸秆用粉碎机粉碎，然后过100目筛，得到秸秆粉，将秸秆粉和腐植酸按照5:3的质量比混合搅拌均匀得到载体；
将液体菌剂与载体按照2:3的质量比混合，300rpm搅拌5min，然后进行低温干燥，干燥温度为18℃，干燥后含水量为6％，包装，置于4℃保存。
所述苏云金芽孢杆菌为ATCC13367，所述球形芽孢杆菌为ATCC4525，所述寡孢节丛孢菌为ATCC24927，所述吸水链霉菌为ATCC29253。
实施例3
生物活性实施例
1、设置制剂组别：
实验组为实施例2；对照组1: 仅采用苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液和寡孢节丛孢菌发酵液，其余同实施例2；对照组2：仅采用苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液和吸水链霉菌发酵液，其余同实施例2；对照组3：仅采用寡孢节丛孢菌发酵液和吸水链霉菌发酵液，其余同实施例2；对照组4：仅采用苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液，其余同实施例2。
2、根结线虫悬浮液的制备：从根结线虫发病比较严重的番茄根结上挑取根结线虫的卵块，放置于培养皿内，加适量蒸馏水，置于25℃培养箱孵化培养，24h后收集二龄幼虫配制成线虫悬浮液，每1ml悬浮液中含有约1000头的二龄幼虫，备用。
3、将待测试制剂分别添加到10、20倍重量的水中，搅拌均匀，得到稀释液；
4、取线虫悬浮液10ml置于多个培养皿中，分别添加各制剂稀释液1ml，混匀，25℃静置处理24小时；检查根结线虫的存活数量和死亡数量，计算死亡率和校正死亡率。每个处理均设置3个重复，取平均值。 死亡率＝（死亡线虫数/处理线虫数）×100％。
具体实验结果见表1：
表1
组别 10倍稀释死亡率% 20倍稀释死亡率%
对照组1 94.9 82.3
对照组2 97.2 86.5
对照组3 96.1 78.9
对照组4 83.8 57.1
实验组 100 95.4
结论：通过表1可知，采用10倍水对制剂进行稀释，其中实验组的杀虫率达到100%，对照组1-3可达到90%以上，对照组4最低，仅为83.8%；采用20倍水对制剂进行稀释，其中实验组对番茄根结线虫杀虫率分别为95.4%，对照组1-3为80%左右，对照组4最低，仅为57.1%；上述结果提示，本发明采用的四种菌株配伍协同效果较好，采用不同的杀虫机理相互配合，能够有效防治番茄根结线虫。
实施例4
大田药效试验
小区约60m2，种植黄瓜，每小区种植30株；
制剂预处理：将制剂与50倍重量的细沙拌匀得到药沙。
试验方法：药沙随黄瓜幼苗移栽时穴施到移栽坑中，用药量为20g/株；
设置制剂组别：
实验组为实施例1；对照组1: 仅采用苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液和寡孢节丛孢菌发酵液，其余同实施例1；对照组2：仅采用苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液和吸水链霉菌发酵液，其余同实施例1；对照组3：仅采用寡孢节丛孢菌发酵液和吸水链霉菌发酵液，其余同实施例1；空白对照组（不施加生物农药）。
检测方法：每个组别采用三个小区进行种植，种植条件具备可比性；每小区抽样调查10株施药后30d作物根际的根系，调查病情指数。对根系进行分级，根结划分为 0-4级，各级指标为：根系完整，无根结；1级，有少量根结(占根系量的11-25％)；2级，根结形成中等数量(占根系量的26％-50％)；3级，根结数量较多(占根系量的51％-75％)；4级，根结特多且较大(占根系量的76％-100％)。根结指数计算：『（各级病株数×相应级数值）的总和』×100/（总株数×4）；根结指数越小说明防治效果越好。具体结果见表2：
表2
组别 根结指数 增产%
对照组1 15.1 8.3
对照组2 18.4 6.8
对照组3 21.6 7.1
空白对照组 68.5 ---
实验组 7.5 11.6
结论：由上表2可知，与对照组1-3以及空白对照组相比，本发明生物农药可以有效地防治黄瓜根结线虫，还具备一定的增产作用。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.利用生物农药防治根结线虫的方法，其包括如下步骤：移栽幼苗时，将生物农药与细沙按照1：50的质量比混匀，然后穴施在栽移坑中，穴施量控制在5-50kg/亩；
所述生物农药的制备方法包括如下步骤：将液体菌剂与载体按照1-2:2-3的质量比混合，300rpm搅拌5min，然后进行低温干燥，干燥温度为18℃，干燥后含水量为6-8wt％，包装，置于4℃保存；
所述液体菌剂按照如下步骤制备而得：
步骤1）将苏云金芽孢杆菌种子液和球形芽孢杆菌种子液按照1:1的体积比混合，然后按照8%体积比的接种量接入到发酵培养基中，28℃培养24h，得到苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液；
步骤2）将寡孢节丛孢菌种子液按照10%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养48h，得到寡孢节丛孢菌发酵液；
步骤3）将吸水链霉菌种子液按照6%体积比的接种量接入到发酵培养基中，30℃培养36h，得到吸水链霉菌发酵液；
步骤4）将苏云金芽孢杆菌-球形芽孢杆菌混合发酵液、寡孢节丛孢菌发酵液、吸水链霉菌发酵液按照2-3:4-7:1-2的体积比混合均匀，得到液体菌剂；
所述载体按照如下工艺制备而得：将水稻秸秆用粉碎机粉碎，然后过100目筛，得到秸秆粉，将秸秆粉和腐植酸按照3-5:2-3的质量比混合搅拌均匀得到载体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苏云金芽孢杆菌为ATCC13367，所述球形芽孢杆菌为ATCC4525，所述寡孢节丛孢菌为ATCC24927，所述吸水链霉菌为ATCC29253。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根结线虫选自番茄根结线虫或黄瓜根结线虫。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉10g/L、葡萄糖8g/L、豆饼粉5g/L、硫酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸锰0.1mg/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉12g/L、糖蜜10g/L、酵母膏2g/L、磷酸氢二钾0.5g/L和硫酸镁0.1g/L。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中，发酵培养基的配方为：玉米淀粉16g/L、硫酸铵5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硝酸钾1.0g/L、硫酸镁0.8g/L、氯化钠0.5g/L和硫酸亚铁0.1g/L。
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