CN108473938A - 用于生产酵母提取物的方法 - Google Patents
用于生产酵母提取物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108473938A CN108473938A CN201680076330.6A CN201680076330A CN108473938A CN 108473938 A CN108473938 A CN 108473938A CN 201680076330 A CN201680076330 A CN 201680076330A CN 108473938 A CN108473938 A CN 108473938A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- amino acid
- yeast
- protease
- seq
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 title claims abstract description 34
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 119
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 109
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 100
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims abstract description 89
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 99
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 97
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 54
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 52
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 48
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 48
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 36
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 35
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 33
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 17
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 13
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 claims description 10
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims description 9
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 7
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000582914 Saccharomyces uvarum Species 0.000 claims description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 5
- 241000228178 Thermoascus Species 0.000 claims description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 241000228182 Thermoascus aurantiacus Species 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 62
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 61
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 10
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 10
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 240000006432 Carica papaya Species 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 3
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 101100316936 African swine fever virus (strain Badajoz 1971 Vero-adapted) Ba71V-104 gene Proteins 0.000 description 2
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- 235000006264 Asimina triloba Nutrition 0.000 description 2
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 102220546833 Nuclear pore complex protein Nup85_A27K_mutation Human genes 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 2
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 102220080264 rs372250472 Human genes 0.000 description 2
- 102220093346 rs876661018 Human genes 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- QOFZZTBWWJNFCA-UHFFFAOYSA-N texas red-X Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(=O)(=O)NCCCCCC(=O)O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 QOFZZTBWWJNFCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O OCUSNPIJIZCRSZ-ZTZWCFDHSA-N 0.000 description 1
- 241001019659 Acremonium <Plectosphaerellaceae> Species 0.000 description 1
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MVBWLRJESQOQTM-ACZMJKKPSA-N Ala-Gln-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MVBWLRJESQOQTM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- NIZKGBJVCMRDKO-KWQFWETISA-N Ala-Gly-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NIZKGBJVCMRDKO-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- OMDNCNKNEGFOMM-BQBZGAKWSA-N Ala-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O OMDNCNKNEGFOMM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N Ala-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- JPOQZCHGOTWRTM-FQPOAREZSA-N Ala-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JPOQZCHGOTWRTM-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- 241000220433 Albizia Species 0.000 description 1
- DCGLNNVKIZXQOJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N DCGLNNVKIZXQOJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BEXGZLUHRXTZCC-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N BEXGZLUHRXTZCC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AIFHRTPABBBHKU-RCWTZXSCSA-N Arg-Thr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O AIFHRTPABBBHKU-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N Arg-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- YNDLOUMBVDVALC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YNDLOUMBVDVALC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- FTNRWCPWDWRPAV-BZSNNMDCSA-N Asn-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FTNRWCPWDWRPAV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FMNBYVSGRCXWEK-FOHZUACHSA-N Asn-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O FMNBYVSGRCXWEK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- NECWUSYTYSIFNC-DLOVCJGASA-N Asp-Ala-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 NECWUSYTYSIFNC-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- ZRUBWRCKIVDCFS-XPCJQDJLSA-N Asp-Leu-Thr-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZRUBWRCKIVDCFS-XPCJQDJLSA-N 0.000 description 1
- GGRSYTUJHAZTFN-IHRRRGAJSA-N Asp-Pro-Tyr Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O GGRSYTUJHAZTFN-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- WAEDSQFVZJUHLI-BYULHYEWSA-N Asp-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WAEDSQFVZJUHLI-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- SFJUYBCDQBAYAJ-YDHLFZDLSA-N Asp-Val-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SFJUYBCDQBAYAJ-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228215 Aspergillus aculeatus Species 0.000 description 1
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 1
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000223651 Aureobasidium Species 0.000 description 1
- 244000236628 Carica candamarcensis Species 0.000 description 1
- 235000008600 Carica candamarcensis Nutrition 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N Cys-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 description 1
- 241001063191 Elops affinis Species 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 235000002756 Erythrina berteroana Nutrition 0.000 description 1
- 241000221999 Filobasidiaceae Species 0.000 description 1
- 241001314401 Fusarium globosum Species 0.000 description 1
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- XXLBHPPXDUWYAG-XQXXSGGOSA-N Gln-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XXLBHPPXDUWYAG-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- BZULIEARJFRINC-IHRRRGAJSA-N Gln-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N BZULIEARJFRINC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N Gln-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N Glu-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QIVPRLJQQVXCIY-HGNGGELXSA-N His-Ala-Gln Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QIVPRLJQQVXCIY-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- WEIYKCOEVBUJQC-JYJNAYRXSA-N His-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WEIYKCOEVBUJQC-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 1
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQSBBHNVAVNZSX-GHCJXIJMSA-N Ile-Ala-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N LQSBBHNVAVNZSX-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N Ile-Ser-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- ANTFEOSJMAUGIB-KNZXXDILSA-N Ile-Thr-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N ANTFEOSJMAUGIB-KNZXXDILSA-N 0.000 description 1
- GVEODXUBBFDBPW-MGHWNKPDSA-N Ile-Tyr-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GVEODXUBBFDBPW-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKNBJXOJTURHCU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N Leu-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- CHJKEDSZNSONPS-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CHJKEDSZNSONPS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N Leu-Ser-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IWMJFLJQHIDZQW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N Lys-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QQPSCXKFDSORFT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 241001221335 Nocardiopsis sp. Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- HAEGAELAYWSUNC-WPRPVWTQSA-N Pro-Gly-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAEGAELAYWSUNC-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N Pro-Tyr-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 241000235344 Saccharomycetaceae Species 0.000 description 1
- 241000222480 Schizophyllum Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- WXUBSIDKNMFAGS-IHRRRGAJSA-N Ser-Arg-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WXUBSIDKNMFAGS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FTVRVZNYIYWJGB-ACZMJKKPSA-N Ser-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FTVRVZNYIYWJGB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- OHKFXGKHSJKKAL-NRPADANISA-N Ser-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OHKFXGKHSJKKAL-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SOACHCFYJMCMHC-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O SOACHCFYJMCMHC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N Ser-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ODRUTDLAONAVDV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 241000228341 Talaromyces Species 0.000 description 1
- 241001540751 Talaromyces ruber Species 0.000 description 1
- LHUBVKCLOVALIA-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LHUBVKCLOVALIA-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- YOSLMIPKOUAHKI-OLHMAJIHSA-N Thr-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YOSLMIPKOUAHKI-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 1
- GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N Thr-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N Thr-His-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SIMKLINEDYOTKL-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N Thr-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 1
- JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N)O JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241001149964 Tolypocladium Species 0.000 description 1
- 241000006364 Torula Species 0.000 description 1
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 1
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTEQZJFSEMXXRK-CFMVVWHZSA-N Tyr-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N MTEQZJFSEMXXRK-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- XKDOQXAXKFQWQJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O XKDOQXAXKFQWQJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QHEGAOPHISYNDF-XDTLVQLUSA-N Tyr-Gln-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N QHEGAOPHISYNDF-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N Tyr-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N ARJASMXQBRNAGI-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 108010064997 VPY tripeptide Proteins 0.000 description 1
- KVRLNEILGGVBJX-IHRRRGAJSA-N Val-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)CC1=CN=CN1 KVRLNEILGGVBJX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QTPQHINADBYBNA-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QTPQHINADBYBNA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N Val-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WUFHZIRMAZZWRS-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- VVIZITNVZUAEMI-DLOVCJGASA-N Val-Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVIZITNVZUAEMI-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710151579 Zinc metalloproteinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKPHPIREJKHECO-UHFFFAOYSA-N butachlor Chemical compound CCCCOCN(C(=O)CCl)C1=C(CC)C=CC=C1CC HKPHPIREJKHECO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001599 direct drying Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050343 histidyl-alanyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108700004896 tripeptide FEG Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6472—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括以下步骤：a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；b)孵育以便水解该蛋白质，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶。
Description
技术领域
本发明涉及使用包含蛋白酶的酶组合物生产酵母提取物的方法。
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表。将该计算机可读形式通过引用结合在此。
发明背景
酵母提取物被广泛地使用，例如，用于食品行业中的调味剂，用于微生物发酵培养基，并且用作保健食品。所述的酵母提取物的生产被描述于文献中，参见例如，Kelly,M.(1982)，Yeast Extract[酵母提取物](在：Industrial Enzymology[工业酶学]中，Godfrey,T.编著)或Chae,H.J.等人，(2001),Bioresource Technology[生物资源技术]76,253-258。它典型地是通过以下步骤制造的：通过酸水解或机械或化学破坏细胞分解酵母，然后通过用内源性酶自溶降来解酵母的大分子结构，尤其是蛋白，为可溶性材料的最大量。可能地，添加外源酶，包括蛋白酶，如木瓜蛋白酶，来增进酵母自身酶的作用。在酶水解之后，将酵母提取物自细胞碎片分离并且可能进行巴氏消毒并且浓缩。
GB 2075054 A披露了一种用于生产酵母提取物的方法，其中木瓜蛋白酶用作蛋白水解酶。WO 2008/077890披露了一种使用衍生自拟诺卡氏菌属物种(Nocardiopsis sp.)NRRL 18262的蛋白酶生产酵母提取物的方法。但仍然希望生产具有高提取物产量的酵母提取物。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产酵母提取物及其酶组合物的改进方法。发明人惊奇地发现使用包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶的酶组合物可以实现同基因效应，例如，这种酶组合物可用于有效提高酵母提取物的产量，同时，本发明制备的酵母提取物的浊度和味道与仅用木瓜蛋白酶作为外源蛋白酶制备的酵母提取物几乎相同。
在一方面，本发明涉及用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：
a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和
b)进行孵育以便水解该蛋白质，
其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
在优选的实施例中，该第二蛋白酶衍生自热子囊菌属(Thermoascus)，优选地衍生自嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)，最优选地衍生自嗜热子囊菌CGMCC编号0670。
在优选的实施例中，该酵母是酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluveromyces)或假丝酵母属(Candida)，优选地所述酵母是酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)。
在优选的实施例中，该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。
在优选的实施例中，基于该蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。
在优选的实施例中，该第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。
在优选的实施例中，基于该蛋白酶活性，该第二蛋白酶以0.001-1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.002-0.2FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.01-0.1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.02-0.04FLPU-A/g酵母干物质的量存在。
在其他方面，本发明涉及包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶的酶组合物，并且涉及该酶组合物生产酵母提取物的用途，并且涉及由本发明生产的酵母提取物。
具体实施方式
蛋白酶
术语“蛋白酶”在此被定义为水解肽键的酶。它包括属于EC 3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶。EC编号参考来自NC-IUBMB的1992年酶命名法[EnzymeNomenclature 1992]，加利福尼亚州圣地亚哥的学术出版社(Academic Press，San Diego，California)，分别包括在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1994，223，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1996，237，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1997，250，1-6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1999，264，610-650中出版的增刊1-5。命名会定期得以增补和更新；参见例如万维网(WWW)于http://www.chem.qmw.ac.uk/iubmb/enzyme/index.html。蛋白酶也称为，例如肽酶、蛋白酶、肽水解酶、或蛋白水解酶。
用于根据本发明所述的用途的蛋白酶属于内部作用于多肽链的内切型(肽链内切酶)。对于用于根据本发明所述用途的蛋白酶的起源没有限制。因此，术语蛋白酶不仅包括自然或野生型的蛋白酶，还包括它们的展示出蛋白酶活性的任一突变体、变体、片段等等，以及合成的蛋白酶，例如改组蛋白酶以及共有蛋白酶。可以例如通过定点诱变、PCR(在PCR反应中使用含有所希望突变的PCR片段作为引物之一)、或随机诱变来制备此类经基因工程改造的蛋白酶，其是本领域通常已知的。共有蛋白质的制备描述于例如EP 897985中。用于本上下文中的蛋白酶变体的实例是其中一个或多个氨基酸已经缺失、插入或被其他氨基酸取代的蛋白酶。
木瓜蛋白酶，也被称为木瓜蛋白酶I，是存在于木瓜(番木瓜)和山木瓜(Vasconcellea cundinamarcensis)中的半胱氨酸蛋白酶(EC 3.4.22.2)。木瓜蛋白酶由具有三个二硫键的单一多肽链和酶活性所需的巯基基团组成。木瓜蛋白酶比胰蛋白酶更广泛地消化大多数蛋白质底物。木瓜蛋白酶表现出广泛的特异性，其切割碱性氨基酸(亮氨酸或甘氨酸)的肽键。
蛋白酶根据其催化机制分为以下几类：丝氨酸蛋白酶(S)、半胱氨酸蛋白酶(C)、天冬氨酸蛋白酶(A)、金属蛋白酶(M)以及未知或还未分类的蛋白酶(U)，参见Handbook ofProteolytic Enzymes[蛋白水解酶手册]，A.J.Barrett,N.D.Rawlings,J.F.Woessner(编辑)，Academic Press[学术出版社](1998)，尤其是概述部分。
在一些优选实施例中，本发明的第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(a)属于EC 3.4.24金属内肽酶的蛋白酶；
(b)属于以上手册的M组的金属蛋白酶；
(c)尚未指定族的金属蛋白酶(名称：宗族MX)，或属于宗族MA、MB、MC、MD、ME、MF、MG、MH中的任一种的金属蛋白酶(如在以上手册的第989-991页所定义的)；
(d)其他家族的金属蛋白酶(如以上手册的第1448-1452页所定义的)；
(e)具有一个HEXXH基序的金属蛋白酶；
(f)具有一个HEFTH基序的金属蛋白酶；
(g)属于家族M3、M26、M27、M32、M34、M35、M36、M41、M43或M47中的任一种的金属蛋白酶(如以上手册的第1448-1452页所定义的)；和
(h)属于家族M35的金属蛋白酶(如以上手册的第1492-1495页所定义)。
在其他具体实施例中，金属蛋白酶是其中肽键上的亲核攻击由水分子(被二价金属阳离子活化的水分子)介导的水解酶。二价阳离子的实例是锌、钴或锰。可以通过氨基酸配体将金属离子保持在适当位置。配体的数目可以是五、四、三、二、一或零。在具体实施例中，数目是二或三，优选是三。
为了确定给定的蛋白酶是否是金属蛋白酶，参照上述手册以及其中指示的原则。可以对所有类型的蛋白酶进行这样的确定，而不论其是天然存在的或野生型蛋白酶；还是基因工程化的或合成的蛋白酶。
两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(The European Molecular BiologyOpenSoftware Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔输出(使用-非简化(-nobrief)选项获得)用作百分比同一性并且如下计算：
(同一的残基X 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
当两个序列在重叠的相同位置上具有相同的氨基酸残基时，发生完全匹配。序列的长度是所述序列中氨基酸残基的数目(例如，本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177的长度是177)。
术语“变体”意指具有蛋白酶活性的、在一个或多个(例如，若干个)位置处包括改变(即，取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占用某一位置的氨基酸；缺失意指去除占用某一位置的氨基酸；并且插入意指在邻接并且紧随占用某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。在描述变体时，以下所述的命名法适于方便参考。采用了已接受的IUPAC单字母和三字母的氨基酸缩写。
在优选实施例中，所述第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
在具体的实施例中，同源多肽具有相差四十、三十五、三十、二十五、二十或十五个氨基酸的氨基酸序列。在另一个实施例中，同源多肽具有相差十、九、八、七、六或五个氨基酸的氨基酸序列。在另一个具体的实施例中，同源多肽与本文中的SEQID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177相差四个、三个、两个氨基酸或一个氨基酸。
在优选的实施例中，本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的片段是具有从这些氨基酸序列的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个氨基酸的多肽。在一个实施例中，片段包含至少75个氨基酸残基、或至少100个氨基酸残基、或至少125个氨基酸残基、或至少150个氨基酸残基、或至少160个氨基酸残基、或至少165个氨基酸残基、或至少170个氨基酸残基、或至少175个氨基酸残基。
等位基因变体表示占用同一染色体基因座的基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异通过突变天然产生，并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
所述变体多肽的氨基酸序列与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的差别可能在于一个或多个氨基酸残基的插入或缺失和/或一个或多个氨基酸残基被不同的氨基酸残基取代。优选地，氨基酸改变的性质较小，也就是说不会显著影响蛋白质折叠和/或活性的保守氨基酸取代；典型地为一个至约30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，例如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达约20-25个残基的小接头肽；或便于通过改变净电荷或另一种功能来纯化的小延伸，如聚组氨酸段(tract)、抗原表位或结合结构域。
保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质]，Academic Press[学术出版社]，纽约描述的。最普遍发生的交换是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly，以及反向的这些。
在一个实施例中，用于根据本发明所述的用途的第二蛋白酶是真菌蛋白酶，该术语真菌是指该蛋白酶衍生自或源自真菌，或是衍生自真菌的类似物、片段、变体或合成的蛋白酶。它可以在该原始野生型真菌菌株、在另一种微生物菌株或植物中产生或表达，即该术语涵盖了野生型、自然发生的蛋白质的表达，以及任一重组、基因工程化或合成蛋白酶在宿主中的表达。
在一个实施例中，所述第二蛋白酶是酵母多肽，例如假丝酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属多肽；或更优选真菌多肽，例如支顶孢属、曲霉属、短柄霉属、隐球菌属、线黑粉菌科、镰孢霉属、腐质霉属、大毁壳属、毛霉属、蚀丝霉属、新美鞭菌、脉孢菌属、拟青霉属、青霉属、梨囊鞭菌属、裂褶菌属、踝节菌属、嗜热子嚢菌属、梭孢壳菌属、弯颈霉属、或木霉属多肽。在另一个实施例中，该多肽是棘孢曲霉、泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、嗜热子囊菌、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉多肽。
在优选的实施例中，第二蛋白酶先前已有描述，例如在WO 2003/048353或WO2011/072191中描述的蛋白酶，WO 2003/048353或WO 2011/072191的内容在本文中作为本发明的一部分引用。
在优选的实施例中，该第二蛋白酶衍生自热子囊菌属的真菌，例如物种嗜热子囊菌，例如菌株嗜热子囊菌CGMCC编号0670，例如具有WO 2003/048353中SEQ ID NO:2的氨基酸-178至177、-159至177、或+1至177，或者本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177的氨基酸序列的多肽。
嗜热子囊菌蛋白酶，其成熟多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177，或由以上组成，是本发明的多肽的一个实例。
在优选实施例中，本发明的第二蛋白酶是SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的蛋白酶的变体，即，它与SEQ ID NO:2的氨基酸1-177不同，因为它与SEQ ID NO:2的氨基酸1-177相比包含至少一个修饰。本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177的第二蛋白酶的变体是本发明的第二蛋白酶的另一个实例，所述变体由以下修饰组成：A27K/D79L/Y82F/S87G/D104P/A112P/A126V/D142L。如WO 2011/072191中“位置编号”部分所述，位置编号是指SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的位置编号。
应理解的是对于前述的物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfectstates)，和其他分类学的等同物(equivalent)，例如无性型(anamorph)，而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员将容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSM)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。
在本发明的方法中，可以纯化所述蛋白酶。如本文使用的术语“纯化的”涵盖基本上不含来自其所衍生的生物体的组分的酶蛋白。术语“纯化的”还涵盖不含来自天然生物体(酶蛋白从其获得)的组分的酶蛋白，这也被称为“基本上纯的”酶，并且可能对于天然存在的并未被基因修饰(例如通过缺失、取代或插入一个或多个氨基酸残基)的酶来说是尤其相关的。
因此，可纯化蛋白酶，即仅存在少量的其他蛋白质。表述“其他蛋白”特别涉及其他的酶。如本文使用的术语“纯化”还是指去除其他组分，特别是存在于蛋白酶的来源细胞中的其他蛋白质并且最特别是其他酶。蛋白酶可为“基本上纯的”，即，基本上不含来自产生其的生物体(例如，针对重组产生的酶的宿主生物体)的其他组分。优选地，所述蛋白酶是至少75％(w/w)纯，更优选至少80％、85％、90％或者甚至至少95％纯。在仍更优选的实施例中，该蛋白酶是至少98％纯的酶蛋白制剂。
然而，针对根据本发明的用途，所述蛋白酶不必那么纯。它可以例如包括其他酶，甚至其他蛋白酶，此时可将其称为蛋白酶制剂。
酶组合物
在另一方面，本发明还涉及包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶的酶组合物，其中该第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
根据本发明的酶组合物的用途可以与其他酶(例如其他蛋白酶)的用途组合使用。额外的酶可以是任何来源的，包括哺乳动物和植物，并且优选是微生物(细菌、酵母或真菌)来源的。
酵母
在本发明的上下文中酵母可以是任何种类的酵母。它可能属于酵母科。在一个具体实施例中，该酵母是酵母属，例如酿酒酵母或葡萄汁酵母。在另一个实施例中，该酵母是克鲁维酵母属，例如脆壁克鲁维酵母。在又另一个实施例中，该酵母是假丝酵母属，例如产朊假丝酵母，也称为圆酵母。
待应用的酵母可以是任何形式，例如特别生长在例如糖蜜上的酵母，或啤酒废酵母，或从酒精发酵中收集的酵母。
待应用的酵母可以是完整的酵母细胞或者全部或部分被破坏或降解的酵母细胞。
本发明的工艺
酵母提取物，其在本发明上下文中与酵母水解产物或酵母自溶产物同义，是来自包含水解蛋白的酵母的可溶性提取物，其被广泛用作例如风味增强剂。
根据本发明，使用外源蛋白酶来生产酵母提取物，用于蛋白质水解。除了添加的蛋白酶外，酵母本身含有多种降解酶，包括脂肪酶、核酸酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和蛋白酶。这些内源性酶的最佳温度和pH值是变化的，并且它们在根据本发明的工艺条件下可以或多或少地具有活性。
在添加蛋白酶之前，所述酵母可以处于水性悬浮液的形式。所述酵母悬浮液的干物质含量可以在5％-50％的范围内，例如10％-30％。可以适当关注所讨论的蛋白酶的特征，以调节酵母悬浮液的pH和温度。在一个实施例中，将酵母悬浮液的pH调节至更碱性，例如，处于pH 5.5-9、优选pH 6-8、或更优选pH 6-7的范围内。pH和温度的调节可以在添加蛋白酶之前、同时或之后进行。
应以有效量应用蛋白酶，即以足以使蛋白质充分水解的量应用。
在一个优选的实施例中，该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/克/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。
在一个优选的实施例中，基于蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。
在一个优选的实施例中，所述第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。
在一个优选的实施例中，基于该蛋白酶活性，该第二蛋白酶以0.001-1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.002-0.2FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.01-0.1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.02-0.04FLPU-A/g酵母干物质的量存在。
在添加蛋白酶之前或之后，酵母细胞可能被破坏，即通过升高温度。任选地，可以添加化学品，例如盐或有机溶剂。这个过程通常被称为质壁分离。由外源蛋白酶引起的质壁分离和蛋白质水解可能同时发生。
酵母细胞内容物的自体消化通常被称为自溶。这种自体消化可以在由外源蛋白酶引起的蛋白质水解之前或与之同时在不同程度上发生。
在一个优选实施例中，同时发生了质壁分离、由外源蛋白酶引起的蛋白质水解和一定程度的自体消化。
在另一个实施例中，首先进行用酵母自身酶的质壁分离和自体消化，并且在单独的澄清步骤中进行用添加的蛋白酶的水解。
添加蛋白酶后的孵育可以在获得所期望程度的蛋白质水解所需的任何方便的温度和孵育时间下进行。本发明上下文中的蛋白质水解可以主要通过添加的蛋白酶来进行，或者其可以是所添加的蛋白酶和酵母的自体消化内源蛋白酶的作用的组合，即术语蛋白质水解包括由添加的蛋白酶进行的蛋白质水解和由酵母自身蛋白酶进行的蛋白质水解(其通常称为自溶)。
在优选的实施例中，孵育温度在从约20℃至约70℃的范围内，优选从约40℃至约60℃，并且孵育时间在从约1小时至48小时的范围内，优选12至30小时。
在孵育过程中的任何时候，pH值和温度都可以任选地调整至更高或更低。
持续进行用蛋白酶的孵育直至获得所需结果，然后可以通过例如热-处理步骤灭活酶来终止反应，或者也可以不终止反应。这种热处理也可用于对酵母提取物进行巴氏杀菌。
在蛋白水解处理之后，可以将酵母提取物与细胞碎片分离，例如通过离心和倾析上清液。由此获得的酵母提取物可以通过本领域已知的任何方法浓缩。
通过以下实例进一步描述本发明，所述实例不应理解为对本发明范围的限制。
材料和方法
酵母：酿酒酵母的新鲜块状酵母可从中国安琪酵母公司(Angel Yeast China)获得；
木瓜蛋白酶：衍生自木瓜，可从中国庞博公司(PangBo China)获得；
AP025用作第二蛋白酶，其来源于嗜热子囊菌并作为本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177披露。
JTP196用作另一种第二蛋白酶，其是AP025(A27K/D79L/Y82F/S87G/D104P/A112P/A126V/D142L)的变体并且在WO 2011/072191中被描述为JTP196。
蛋白酶测定
木瓜蛋白酶活性为2400000U/g酶蛋白，其按照中国国家标准GB/T 23527-2009中描述的方法进行确定。
AP025的活性是500FLPU-A/g酶蛋白，其通过EnzChek蛋白酶测定试剂盒(FLPU-A)使用荧光检测在pH 4.3和65℃下进行确定。EnzChek蛋白酶测定试剂盒含有酪蛋白衍生物，所述酪蛋白衍生物被pH不敏感的红色荧光TR-X染料高度标记，导致缀合物荧光的几乎完全猝灭。蛋白酶催化的水解释放高度荧光的BODIPY TR-X染料标记的肽。在65℃下孵育10分钟后，可用微板荧光读数器测量的伴随的荧光的增加与蛋白酶活性成正比。伴随冷却停止反应，并添加0.1M HCl以降低pH。
实例1木瓜蛋白酶和AP025在生产酵母提取物中的用途
将新鲜酵母块与去离子水混合以达到13％的干物质含量并在室温下搅拌30分钟。将酵母混合物加热至55℃并将pH调节至5.5-6.2。调节温度和pH值后，将不同组的酶添加到样品中。酶的量以mg酶蛋白/g酵母干物质(YDM)计量。在55℃下水解24小时。然后将样品在85℃灭活15min。并通过以4000rpm离心15min来分离样品。倾析后称量提取物的量。干物质通过直接干燥法(中国国家标准GB5009.3-2010)进行测量。将游离氨基氮FAN用茚三酮法进行确定(将氨基酸用茚三酮进行脱羧，氨也被释放；还原的茚三酮与未还原的茚三酮和氨反应成蓝-黄色染料并在570nm处测量)。基于上述测量，计算以下内容：
％提取物产量＝(g离心后的提取物)/(g离心前的酵母混合物)*100
通过HACH 2100AN浊度计以NTU(比浊法浊度单位)测量提取物的浊度。
味道评价：使用小组(例如，至少3名训练有素的人员)评估制备的酵母提取物的苦味、鲜味和香气。
结果在下表1中给出(EP＝酶蛋白，YDM＝酵母干物质)：
AP025可以与酵母提取物应用中的木瓜蛋白酶协同作用，并使得提取物产率明显更高，并且同时不影响酵母提取物的浊度和味道。
实例2木瓜蛋白酶和JTP196在生产酵母提取物中的用途
所有程序和方法与实例1中使用的程序和方法相同，而将JTP196用作第二蛋白酶。结果在下表2中给出(EP＝酶蛋白，YDM＝酵母干物质)。
JTP196也可以与酵母提取物应用中的木瓜蛋白酶协同作用，并使得提取物产率明显更高，并且同时不影响酵母提取物的浊度和味道。
序列表
<110> 诺维信公司
<120> 用于生产酵母提取物的方法
<130> 13318-WO-PCT[2]
<150> PCT/CN2015/099209
<151> 2015-12-28
<160> 1
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 355
<212> PRT
<213> 嗜热子囊菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(19)
<220>
<221> 前肽
<222> (20)..(178)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (179)..()
<400> 1
Met Arg Leu Val Ala Ser Leu Thr Ala Leu Val Ala Leu Ser Val
-175 -170 -165
Pro Val Phe Pro Ala Ala Val Asn Val Lys Arg Ala Ser Ser Tyr
-160 -155 -150
Leu Glu Ile Thr Leu Ser Gln Val Ser Asn Thr Leu Ile Lys Ala
-145 -140 -135
Val Val Gln Asn Thr Gly Ser Asp Glu Leu Ser Phe Val His Leu
-130 -125 -120
Asn Phe Phe Lys Asp Pro Ala Pro Val Lys Lys Val Ser Val Tyr
-115 -110 -105
Arg Asp Gly Ser Glu Val Gln Phe Glu Gly Ile Leu Ser Arg Tyr Lys
-100 -95 -90
Ser Thr Gly Leu Ser Arg Asp Ala Phe Thr Tyr Leu Ala Pro Gly Glu
-85 -80 -75
Ser Val Glu Asp Val Phe Asp Ile Ala Ser Thr Tyr Asp Leu Thr Ser
-70 -65 -60
Gly Gly Pro Val Thr Ile Arg Thr Glu Gly Val Val Pro Tyr Ala Thr
-55 -50 -45 -40
Ala Asn Ser Thr Asp Ile Ala Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Ser Asn Val
-35 -30 -25
Leu Thr Ile Asp Val Asp Gly Ala Ala Ala Ala Thr Val Ser Lys Ala
-20 -15 -10
Ile Thr Pro Leu Asp Arg Arg Thr Arg Ile Ser Ser Cys Ser Gly Ser
-5 -1 1 5
Arg Gln Ser Ala Leu Thr Thr Ala Leu Arg Asn Ala Ala Ser Leu Ala
10 15 20 25
Asn Ala Ala Ala Asp Ala Ala Gln Ser Gly Ser Ala Ser Lys Phe Ser
30 35 40
Glu Tyr Phe Lys Thr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Gln Thr Val Ala Ala
45 50 55
Arg Leu Arg Ala Val Ala Arg Glu Ala Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala
60 65 70
Thr Thr Tyr Tyr Cys Asp Asp Pro Tyr Gly Tyr Cys Ser Ser Asn Val
75 80 85
Leu Ala Tyr Thr Leu Pro Ser Tyr Asn Ile Ile Ala Asn Cys Asp Ile
90 95 100 105
Phe Tyr Thr Tyr Leu Pro Ala Leu Thr Ser Thr Cys His Ala Gln Asp
110 115 120
Gln Ala Thr Thr Ala Leu His Glu Phe Thr His Ala Pro Gly Val Tyr
125 130 135
Ser Pro Gly Thr Asp Asp Leu Ala Tyr Gly Tyr Gln Ala Ala Met Gly
140 145 150
Leu Ser Ser Ser Gln Ala Val Met Asn Ala Asp Thr Tyr Ala Leu Tyr
155 160 165
Ala Asn Ala Ile Tyr Leu Gly Cys
170 175
Claims (15)
1.一种用于生产酵母提取物的方法，该方法包括：
a)向包含蛋白质的酵母中添加酶组合物；和
b)进行孵育以便水解该蛋白质，
其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且该第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
2.如权利要求1所述的方法，其中该第二蛋白酶衍生自嗜热子囊菌属(Thermoascus)，优选地衍生自嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)，并且最优选地衍生自嗜热子囊菌CGMCC编号0670。
3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该酵母是酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluveromyces)或假丝酵母属(Candida)，优选地该酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该木瓜蛋白酶以0.0125mg-12.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.025mg-5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.125mg-2.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.25mg-1.5mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.5mg-1mg/g酵母干物质的量存在。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于该蛋白酶活性，该木瓜蛋白酶以30U-30000U/g酵母干物质的量存在、优选地以60U-12000U/g酵母干物质的量存在、优选地以300U-6000U/g酵母干物质的量存在、优选地以600U-3600U/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以1200U-2400U/g酵母干物质的量存在。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该第二蛋白酶以0.002mg-2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.004mg-0.4mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、优选地以0.02mg-0.2mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.04mg-0.08mg酶蛋白/g酵母干物质的量存在。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于该蛋白酶活性，该第二蛋白酶以0.001-1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.002-0.2FLPU-A/g酵母干物质的量存在、优选地以0.01-0.1FLPU-A/g酵母干物质的量存在、并且最优选地以0.02-0.04FLPU-A/g酵母干物质的量存在。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法进一步包括将酵母悬浮在水性溶液中。
9.如权利要求8所述的方法，该方法进一步包括将所述酵母悬浮液的pH调节至更碱性。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法进一步包括在步骤b)之后进行离心以获得沉淀物和上清液，优选地其中在该上清液中回收该水解的蛋白质。
11.一种酶组合物，该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，其中该第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
12.如权利要求11所述的酶组合物，其中该木瓜蛋白酶或该第二蛋白酶在前述权利要求中任一项中被定义。
13.酶组合物生产酵母提取物的用途，其中该酶组合物包含木瓜蛋白酶和第二蛋白酶，并且所述第二蛋白酶选自由以下组成的组：
(i)多肽，该多肽包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQID NO:2的氨基酸1-177，或由其组成；
(ii)多肽，该多肽包含与本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177具有至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，更优选至少91％，更优选至少92％，甚至更优选至少93％，最优选至少94％，并且甚至最优选至少95％，例如甚至至少96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或由其组成；
(iii)变体，该变体包含本文中的SEQ ID NO:1的氨基酸1-177或WO 2003/048353中的SEQ ID NO:2的氨基酸1-177的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的取代、缺失、和/或插入；和
(iv)具有蛋白酶活性的(i)、(ii)或(iii)的多肽的片段。
14.如权利要求13所述的用途，其中该酵母、该木瓜蛋白酶或该第二蛋白酶在前述权利要求中任一项中被定义。
15.一种通过前述权利要求中任一项所述的方法生产的酵母提取物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNPCT/CN2015/099209 | 2015-12-28 | ||
| CN2015099209 | 2015-12-28 | ||
| PCT/CN2016/112560 WO2017114403A1 (en) | 2015-12-28 | 2016-12-28 | Method for producing a yeast extract |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108473938A true CN108473938A (zh) | 2018-08-31 |
Family
ID=59225862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201680076330.6A Pending CN108473938A (zh) | 2015-12-28 | 2016-12-28 | 用于生产酵母提取物的方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108473938A (zh) |
| WO (1) | WO2017114403A1 (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1158225A (zh) * | 1996-02-29 | 1997-09-03 | 宇宙食品株式会社 | 酵母提取液的制造 |
| JP2003325130A (ja) * | 2002-05-14 | 2003-11-18 | T Hasegawa Co Ltd | 酵母エキスの製造方法 |
| CN101513246A (zh) * | 2008-02-21 | 2009-08-26 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种酵母抽提物、制备方法及其应用 |
| CN101558148A (zh) * | 2006-12-22 | 2009-10-14 | 诺维信公司 | 用于产生酵母提取物的方法 |
| CN103126968A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 安琪酵母股份有限公司 | 富锌酵母精提物及其制备方法 |
| CN103140586A (zh) * | 2010-08-02 | 2013-06-05 | 诺维信北美公司 | 产生发酵产物的方法 |
| CN103987850A (zh) * | 2011-10-11 | 2014-08-13 | 诺维信北美公司 | 用于产生发酵产物的方法 |
| CN105077152A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-25 | 珠海天香苑生物科技发展股份有限公司 | 一种酵母提取物及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20010095724A (ko) * | 2000-04-11 | 2001-11-07 | 최형택 | 맥주부산물을 이용한 효모엑기스 조미료의 제조방법 |
| DE60234468D1 (de) * | 2001-12-07 | 2009-12-31 | Novozymes As | Proteasepolypeptide und dafür kodierende polynukleotide |
-
2016
- 2016-12-28 WO PCT/CN2016/112560 patent/WO2017114403A1/en active Application Filing
- 2016-12-28 CN CN201680076330.6A patent/CN108473938A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1158225A (zh) * | 1996-02-29 | 1997-09-03 | 宇宙食品株式会社 | 酵母提取液的制造 |
| JP2003325130A (ja) * | 2002-05-14 | 2003-11-18 | T Hasegawa Co Ltd | 酵母エキスの製造方法 |
| CN101558148A (zh) * | 2006-12-22 | 2009-10-14 | 诺维信公司 | 用于产生酵母提取物的方法 |
| CN101513246A (zh) * | 2008-02-21 | 2009-08-26 | 安琪酵母股份有限公司 | 一种酵母抽提物、制备方法及其应用 |
| CN103140586A (zh) * | 2010-08-02 | 2013-06-05 | 诺维信北美公司 | 产生发酵产物的方法 |
| CN103987850A (zh) * | 2011-10-11 | 2014-08-13 | 诺维信北美公司 | 用于产生发酵产物的方法 |
| CN103126968A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 安琪酵母股份有限公司 | 富锌酵母精提物及其制备方法 |
| CN105077152A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-25 | 珠海天香苑生物科技发展股份有限公司 | 一种酵母提取物及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2017114403A1 (en) | 2017-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100545010B1 (ko) | 트리펩티딜 아미노펩티다제 생산의 감소 또는 제거 방법 | |
| Kim et al. | Molecular and morphological identification of fungal species isolated from bealmijang meju | |
| JP2022110110A (ja) | 糸状真菌宿主細胞によって発現された組換えシュウ酸デカルボキシラーゼ | |
| Gao et al. | Identification and magnetic immobilization of a pyrophilous aspartic protease from Antarctic psychrophilic fungus | |
| CN106754507B (zh) | 一种复合风味菌剂及其制备方法和在酱油增香中的直投式应用 | |
| CN109371004B (zh) | 热稳定性提高的酸性蛋白酶Bs2688突变体K203E及其基因和应用 | |
| CA2670731C (en) | Method for producing a yeast extract | |
| CN110643549A (zh) | 一种来自海虾的枝芽孢杆菌及其生产方法和应用 | |
| Mateo et al. | Biotechnological characterisation of exocellular proteases produced by enological Hanseniaspora isolates | |
| JP5329923B2 (ja) | 新規プロテアーゼ及びその製造法 | |
| CN108473938A (zh) | 用于生产酵母提取物的方法 | |
| Hamdy et al. | Economic production of tannase by Aspergillus niger van Tiegh adopting different fermentation protocols and possible applications | |
| Tavea et al. | Production and Partial Characterization of an Extracellular Thermophile Alkaline Protease from a Selected Strain of Bacillus sp Isolated from Abattoir Soil in the North Region of Cameroon | |
| CN109810967B (zh) | 热稳定性提高的酸性蛋白酶Bs2688突变体Y282L及其基因和应用 | |
| CN112266906B (zh) | 一种耐高温酸性脂肪酶lip及其基因和应用 | |
| Durieux et al. | Applied microbiology | |
| US8563268B2 (en) | Polypeptide having tyrosinase activity | |
| Liu et al. | Partial Characterization of an Acidic Protease from RN-11 | |
| KR101460566B1 (ko) | 혈전용해효소를 생산하는 싸카로마이세스속 ａｆｙ-1 균주 및 상기 균주를 포함하는 장류 | |
| EP4273220A1 (en) | Yeast extract containing tripeptide and preparation method therefor | |
| Bhattacharya et al. | Extremophilic Fungal Proteases: Screening, Purification, Assay, and Applications | |
| SHAFIQUE et al. | Production of alkaline protease from Aspergillus oryzae via static liquid surface culture technique and its potential application as a detergent additive | |
| Ortiz et al. | Research Article A Comparative Study of New Aspergillus Strains for Proteolytic Enzymes Production by Solid State Fermentation | |
| WO2001096536A2 (en) | Aspartic acid proteases and nucleic acids encoding same | |
| PINTO et al. | Canola Cake as a Potential Substrate for Proteolytic Enzymes Production by a Selected Strain of Aspergillus oryzae: Selection of Process Conditions and Product Characterization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |