CN108473587A

CN108473587A - 用于治疗癌症的ox40激动剂和4-1bb激动剂单克隆抗体的组合

Info

Publication number: CN108473587A
Application number: CN201780007730.6A
Authority: CN
Inventors: H.龙; A.D.萨尔
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 2016-01-25
Filing date: 2017-01-17
Publication date: 2018-08-31
Also published as: AU2020210145A1; WO2017130076A1; JP6783312B2; HK1259253A1; BR112018014016A2; CA2955184A1; AU2017211540A1; MX2018008995A; AU2017211540B2; KR20180103150A; KR20210013777A; RU2018127164A; US20190031765A1; JP2019506403A; RU2748949C2; RU2018127164A3; EP3408294A1

Abstract

本公开内容描述了包含OX40的激动剂和4‑1BB的激动剂的联合治疗，以及联合治疗在治疗癌症中的用途。

Description

用于治疗癌症的OX40激动剂和4-1BB激动剂单克隆抗体的组合

技术领域

本发明涉及可用于治疗癌症的联合治疗。特别地，本发明涉及联合治疗，其包含OX40蛋白的激动剂和4-1BB蛋白的激动剂。

背景技术

增强抗肿瘤T细胞功能代表了一种强大而新颖的癌症治疗方法。涉及产生有效的抗肿瘤T细胞应答的关键组分包括增强CD4+辅助T细胞活性以促进抗肿瘤溶细胞性T细胞的产生，以及为记忆和效应T细胞提供存活信号。

OX40受体（OX40）（也称为CD134、TNFRSF4、ACT-4、ACT35和TXGP1L）是TNF受体超家族的成员。发现OX40在活化的T-细胞上表达。已经在肿瘤（肿瘤浸润淋巴细胞）和癌症患者的引流淋巴结中证实了大数目的OX40+ T细胞（Weinberg, A.等人，J. Immunol. 164:2160-69, 2000; Petty, J.等人，Am. J. Surg. 183: 512-518, 2002）。在小鼠的肿瘤模型中显示，与对照治疗的小鼠相比，肿瘤引发（tumor priming）期间OX40在体内的参与显著延迟并阻止肿瘤的出现（Weinberg等人，2000）。因此，已经设想通过使用OX40激动剂使OX40参与来增强哺乳动物对抗原的免疫应答（WO 99/42585；Weinberg等人，2000）。

首先被鉴定为在活化的T细胞上表达的诱导型共刺激受体的4-1BB（CD137和TNFRSF9）是肿瘤坏死因子（TNF）受体超家族的跨膜糖蛋白。目前对4-1BB的理解表明，表达通常是活化依赖性的，并且包括广泛的免疫细胞亚群，包括活化的NK和NKT细胞；调节T细胞；树突细胞（DC），包括小结DC；刺激的肥大细胞，分化髓样细胞，单核细胞，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞（Wang C等人，Immunol Rev. 229（1）：192-215, 2009）和活化的B细胞（ZhangX等人，J Immunol. 184(2):787-795, 2010）。4-1BB的表达也已经在肿瘤脉管系统（BrollK等人，Am J Clin Pathol. 115(4):543-549, 2001; Seaman S等人，Cancer Cell 11(6):539-554, 2007）和动脉粥样硬化内皮（21）（Olofsson PS等人，Circulation (117(10):1292-1301, 2008）上得到了证明。刺激4-1BB的配体（4-1BBL）在活化的抗原呈递细胞（APCs）、髓样祖先细胞和造血干细胞上表达。

在B细胞受体参与时，活化的正常人B细胞上的4-1BB与其配体的相互作用刺激增殖并增强存活（Zhang X等人，J Immunol. 184(2):787-795, 2010）。已经在两项已发表的研究中研究了B细胞淋巴瘤中4-1BB参与的潜在影响。对几种类型的人初级NHL样品的评价表明，4-1BB主要在浸润T细胞而非淋巴瘤细胞上表达（Houot R等人，Blood 114(16):3431-3438, 2009）。向B淋巴瘤细胞与利妥昔单抗（rituximab）和NK细胞的体外培养物中添加4-1BB激动剂导致增加的淋巴瘤杀伤（Kohrt HE等人，Blood 117(8):2423-2432, 2011）。此外，在食蟹猴中使用剂量为0.001-100 mg/kg的PF-05082566的两个实验中进行了B细胞免疫表型；在这些实验中，外周血B细胞数目不变或减少。

4-1BB在幼稚T细胞表面检测不到，但表达在激活时增加。在4-1BB激活时，作为TNFR相关因子（TRAF）家族的促存活（pro-survival）成员的TRAF1和TRAF2被募集到4-1BB胞质尾区，从而导致NFkB和包括Erk、Jnk和p38 MAP激酶的促分裂原活化蛋白（MAP）激酶级联的下游活化。NFkB活化导致Bcl-2家族的促存活成员Bfl-1和Bcl-XL的上调。促凋亡（pro-apoptotic）蛋白Bim以TRAF1和Erk依赖性方式下调（Sabbagh L等人，J Immunol. 180(12):8093-8101, 2008)。

报道已显示4-1BB激动剂mAbs增加共刺激分子表达并显著增强溶细胞T淋巴细胞应答，从而导致各种模型中的抗肿瘤功效。4-1BB激动剂mAbs已在预防和治疗环境以及单一治疗（monotherapy）和联合治疗肿瘤模型中显示出功效，并已建立持久的抗肿瘤保护性T细胞记忆反应（Lynch DH. Immunol Rev. 222:277-286, 2008）。4-1BB激动剂还在多种自身免疫模型中抑制自身免疫反应（Vinay DS等人，J Mol Med. 84(9):726-736, 2006）。

需要用于治疗癌症的改进疗法。此外，需要比现有疗法具有更大功效的疗法。本发明的优选联合治疗显示出比用单独的任一种治疗剂治疗更大的功效。

发明内容

本发明涉及用于治疗癌症的治疗方案。

在一个实施方案中，本发明提供了治疗个体癌症的方法，包括向所述个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗。

在另一个实施方案中，本发明提供了包含OX40激动剂的药物，用于与4-1BB激动剂组合用于治疗癌症。

在另一个实施方案中，本发明提供了包含4-1BB激动剂的药物，用于与OX40激动剂组合用于治疗癌症。

其它实施方案提供了OX40激动剂在制备药物中的用途，所述药物用于在与4-1BB激动剂组合施用时治疗个体中的癌症，和4-1BB激动剂在制备药物中的用途，所述药物用于在与OX40激动剂组合施用时治疗个体中的癌症。

在另一个实施方案中，本发明提供了OX40激动剂和4-1BB激动剂在制备用于治疗个体癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述药物包含试剂盒，并且所述试剂盒还包含包装插页，所述包装插页包含与4-1BB激动剂组合使用OX40激动剂以治疗个体癌症的说明书。

在本文提供的治疗方法、药物、组合物、试剂盒和用途的实施方案中，OX40激动剂结合OX40的胞外域并且能够激动（agonizing）OX40。在上述治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体。在一个实施方案中，OX40激动剂是包含重链和轻链的OX40抗体，并且其中重链和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：7中所示的重链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：8中所示的轻链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：7中所示的重链可变区氨基酸序列，并且还包含如SEQ ID NO：8中所示的轻链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：9中所示的重链氨基酸序列，并且还包含如SEQ ID NO：10中所示的轻链氨基酸序列，附带条件是SEQ IDNO：9的C-末端赖氨酸残基任选不存在。

在本文提供的治疗方法、药物、试剂盒、组合物和用途的实施方案中，4-1BB激动剂结合4-1BB的胞外域并且能够激动4-1BB。在上述治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体。

在一个实施方案中，分离的4-1BB抗体在位于SEQ ID NO：21的氨基酸残基115-156内的表位结合人4-1BB。在一些实施方案中，4-1BB抗体包含SEQ ID NO：11的H-CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO：12的H-CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO：13的H-CDR3氨基酸序列。在一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含SEQ ID NO：14的L-CDR1氨基酸序列、SEQ IDNO：15的L-CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO：16的L-CDR3氨基酸序列。

在一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：17中所示的重链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：18中所示的轻链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：17中所示的重链可变区氨基酸序列，并且还包含如SEQ ID NO：18中所示的轻链可变区氨基酸序列。

在一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：19中所示的重链氨基酸序列，并且还包含如SEQ ID NO：20中所示的轻链氨基酸序列，附带条件是SEQID NO：19的C-末端赖氨酸残基任选不存在。

在本发明的治疗方法、药物、组合物、试剂盒和用途的一些实施方案中，个体是人并且癌症是实体瘤，并且在一些实施方案中，实体瘤是膀胱癌、乳腺癌、透明细胞肾癌、结肠癌、头/颈鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、恶性黑素瘤、非小细胞肺癌（NSCLC）、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、小细胞肺癌（SCLC）、肝细胞癌或三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是晚期实体瘤恶性肿瘤。

在本发明的治疗方法、药物、组合物、试剂盒和用途的其他实施方案中，个体是人，且癌症是血红素恶性肿瘤。在一些实施方案中，血红素恶性肿瘤是非何杰金淋巴瘤（NHL）。在一些实施方案中，血红素恶性肿瘤是弥漫性大B-细胞淋巴瘤（DLBCL）、EBV-阳性DLBCL、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性髓细胞样白血病（CML）、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤（MCL）、小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤（HL），多发性骨髓瘤（MM）、髓样细胞白血病-1蛋白（Mcl-1）或骨髓异常增生综合征（MDS）。

在实施方案中，本文提供的药物包含药学上可接受的赋形剂。

在实施方案中，本文提供了试剂盒，其包含第一容器、第二容器和包装插页，其中第一容器包含至少一、二、三、四、五或十剂包含OX40激动剂的药物，第二容器包含至少一、二、三、四、五或十剂包含4-1BB激动剂的药物，并且包装插页包含使用所述药物治疗个体癌症的说明书。

在实施方案中，本文提供的试剂盒包含至少一个容器和包装插页，其中所述容器包含至少一、二、三、四、五或十剂包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的药物，并且包装插页包含使用所述药物治疗个体癌症的说明书。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，个体是人，并且OX40激动剂是特异性结合人OX40的单克隆抗体。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是单克隆抗体，其分别包含SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的重链和轻链可变区。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含：（a）SEQ ID NOs：1、2和3的重链CDRs和SEQ ID NOs：4、5和6的轻链CDRs；或（b）SEQ ID NOs：22、23和24的重链CDRs和SEQ ID NOs：25、26和27的轻链CDRs。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含：（a）包含SEQ ID NO：7的重链可变区和包含SEQ ID NO：8的轻链可变区；或（b）包含SEQ ID NO：28的重链可变区和包含SEQ ID NO：29的轻链可变区。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含：（a）包含SEQ ID NO：9的重链和包含SEQ ID NO：10的轻链；或（b）包含SEQ ID NO：30的重链和包含SEQ ID NO：31的轻链。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，4-1BB激动剂是包含SEQ ID NOs：11、12和13的重链CDRs和SEQ ID NOs：14、15和16的轻链CDRs的单克隆抗体。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，4-1BB激动剂是包含包含SEQ ID NO：17的重链可变区和包含SEQ ID NO：18的轻链可变区的单克隆抗体。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，4-1BB激动剂是包含包含SEQ ID NO：19的重链和包含SEQ ID NO：20的轻链的单克隆抗体。

在实施方案中，在本文提供的涉及癌症的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，癌症是实体瘤。

在实施方案中，在本文提供的涉及癌症的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，癌症是癌、淋巴瘤、白血病、胚细胞瘤、肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、透明细胞肾癌、子宫颈癌、头/颈鳞状细胞癌（HNSCC）、肺鳞状细胞癌、恶性黑素瘤、非小细胞肺癌（NSCLC）、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌（RCC）、肝细胞癌、小细胞肺癌（SCLC）、三阴性乳腺癌、非何杰金淋巴瘤（NHL）、弥漫性大B-细胞淋巴瘤（DLBCL）、EBV-阳性DLBCL、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性髓细胞样白血病（CML）、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤（MCL）、小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤（HL）、多发性骨髓瘤（MM）、髓样细胞白血病-1蛋白（Mcl-1）、骨髓异常增生综合征（MDS）、骨髓瘤、神经胶质瘤、肾癌、肝癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、甲状腺癌、骨癌、脑癌、胃癌、肝细胞瘤、头和颈癌、肝胆癌（hepatobiliary cancer）、中枢神经系统癌、食管癌、梅克尔细胞癌、睾丸癌、皮肤癌、小肠癌、胆癌（biliary cancer）、神经内分泌肿瘤、间皮瘤、子宫癌、外阴癌（vulvar cancer）、阴茎癌（penile cancer）、肛门癌、绒毛膜癌、胸腺癌和口腔癌（oral cancer）。

在实施方案中，在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，该个体先前未对晚期实体恶性肿瘤进行治疗。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，4-1BB激动剂是PF-05082566。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是PF-04518600。

在实施方案中，本文提供了治疗个体癌症的方法，包括向所述个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，其中OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述OX40激动剂和4-1BB激动剂同时或序贯施用。任选地，OX40激动剂在与4-1BB激动剂分开的时间施用。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，每两周施用OX40激动剂并且每四周施用4-1BB激动剂。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，每一周、两周、三周或四周施用OX40激动剂，并且每一周、两周、三周或四周施用4-1BB激动剂。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述OX40激动剂每两周以选自0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg的剂量施用，且所述4-1BB激动剂每四周以选自1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200和500 mg的固定剂量/受试者施用。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述OX40激动剂每一周、两周、三周或四周以选自0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg和20 mg/kg的剂量施用，且所述4-1BB激动剂每一周、两周、三周或四周以：a）选自1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200和500 mg的固定剂量/受试者，或b）选自0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg和20 mg/kg的剂量施用。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述OX40激动剂约每一周、两周、三周、四周、五周或六周以：a）选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg的固定剂量/受试者，或b）选自约0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg和25 mg/kg的剂量施用。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述4-1BB激动剂约每一周、两周、三周、四周、五周或六周以：a）选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg的固定剂量/受试者，或b）选自约0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg和25 mg/kg的剂量施用。

在本文提供的涉及治疗个体癌症的方法的实施方案中，所述方法包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗，所述OX40激动剂约每一周、两周、三周、四周、五周或六周以：a）选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg的固定剂量/受试者，或b）选自约0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg和25 mg/kg的剂量施用，且所述4-1BB激动剂约每一周、两周、三周、四周、五周或六周以：a）选自约0.1、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg的固定剂量/受试者，或b）选自约0.01mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg和25 mg/kg的剂量施用。

在实施方案中，本文提供了包含OX40激动剂的药物，用于与4-1BB激动剂组合用于治疗个体的癌症，其中OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。

在实施方案中，本文提供了包含4-1BB激动剂的药物，用于与OX40激动剂组合用于治疗个体的癌症，其中OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体。，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，将OX40激动剂配制成液体药物，其包含10 mg/ml OX40激动剂、赋形剂和组氨酸缓冲液，pH 5.5。

在实施方案中，在本文提供的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，将4-1BB激动剂配制成液体药物，其包含10 mg/ml 4-1BB激动剂、α,α-海藻糖脱水物、二水合物、乙二胺四乙酸二钠脱水物、聚山梨醇酯80和组氨酸缓冲液，pH 5.5。

在实施方案中，本文提供了试剂盒，其包含第一容器、第二容器和包装插页，其中第一容器包含至少一剂包含OX40激动剂的药物，第二容器包含至少一剂包含4-1BB激动剂的药物，并且包装插页包含使用所述药物治疗个体癌症的说明书，其中所述OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中所述4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ IDNO：19和SEQ ID NO：20。

在实施方案中，本文提供了包含用于治疗癌症的OX40激动剂的组合物，其中OX40激动剂用于与4-1BB激动剂组合分开、序贯或同时使用，并且其中所述OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中所述抗-4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。

在实施方案中，本文提供了包含用于治疗癌症的4-1BB激动剂的组合物，其中4-1BB激动剂用于与OX40激动剂组合分开、序贯或同时使用，并且其中所述OX40激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10；且其中所述4-1BB激动剂是包含重链和轻链的单克隆抗体，其中重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20。

在实施方案中，在本文提供的包含OX40激动剂的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，OX40激动剂是特异性结合OX40的单克隆抗体，并且包含：重链可变区（VH）；和轻链可变区（VL），所述重链可变区（VH）包含包含SEQ ID NO 7中所示的氨基酸序列的VH的VH互补性决定区一（CDR1）、VH CDR2和VH CDR3，且所述轻链可变区（VL）包含包含SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在实施方案中，OX40单克隆抗体包含包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列的VH CDR1、包含SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的VH CDR2、包含SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的VH CDR3、包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的VL CDR1、包含SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列的VL CDR2和包含SEQ IDNO：6中所示的氨基酸序列的VL CDR3。在实施方案中，OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

在实施方案中，在本文提供的包含4-1BB激动剂的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，4-1BB激动剂是特异性结合4-1BB的单克隆抗体，并且包含：VH；和VL，所述VH包含包含SEQ ID NO：17中所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；且所述VL包含包含SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在实施方案中，4-1BB单克隆抗体包含包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的VH CDR1、包含SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列的VH CDR2、包含SEQ ID NO：13中所示的氨基酸序列的VH CDR3、包含SEQ ID NO：14中所示的氨基酸序列的VL CDR1、包含SEQ ID NO：15中所示的氨基酸序列的VL CDR2和包含SEQ ID NO：16中所示的氨基酸序列的VL CDR3。在实施方案中，4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

在实施方案中，本文提供了试剂盒，其包含第一容器、第二容器和包装插页，其中第一容器包含至少一剂包含OX40激动剂的药物，第二容器包含至少一剂包含4-1BB激动剂的药物，并且包装插页包含使用所述药物治疗个体癌症的说明书。

在实施方案中，本文提供了包含用于治疗癌症的OX40激动剂的组合物，其中OX40激动剂用于与4-1BB激动剂组合分开、序贯或同时使用。在实施方案中，本文提供了包含用于治疗癌症的4-1BB激动剂的组合物，其中4-1BB激动剂用于与OX40激动剂组合分开、序贯或同时使用。

在实施方案中，本文提供了包含用于治疗癌症的OX40激动剂和用于治疗癌症的4-1BB激动剂的组合物，其中OX40激动剂和4-1BB激动剂组合或共同配制。

在实施方案中，在本文提供的包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的方法、药物、用途、组合物或试剂盒中，通过静脉内、肌内或皮下途径施用一种或两种激动剂。

附图说明

图1描绘了总结响应于治疗的肿瘤体积的图。

具体实施方式

I. 定义

为了可以更容易地理解本发明，下面具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文件的其他地方特别定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语都具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。

当用于修饰数字限定的参数（例如，OX40激动剂或4-1BB激动剂的剂量，或本文所述的联合治疗的治疗时间长度）时，“约”表示参数可以变化多达低于或高于该参数的规定数值10％。例如，约5 mg/kg的剂量可以在4.5 mg/kg至5.5 mg/kg之间变化。

如本文所用的，包括所附权利要求，除非上下文另有明确规定，否则诸如“一个（a）”、“一种（an）”和“该（the）”的单数形式包括它们相应的复数参考。

适用于动物、人、实验对象、细胞、组织、器官或生物流体的“施用”和“治疗”指外源药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、对象、细胞、组织、器官或生物流体接触。细胞的治疗包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中流体与细胞接触。“施用”和“治疗”还意指例如细胞由试剂、诊断剂、结合化合物或另一种细胞体外和先体外后体内治疗。术语“对象”包括任何生物，优选动物，更优选哺乳动物（例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔），且最优选人。

“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点特异性结合靶的免疫球蛋白分子，所述靶例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。如本文所用的，该术语不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，而且除非另有具体说明，否则还包括与完整抗体竞争特异性结合的任何抗原结合部分、包含抗原结合部分的融合蛋白和包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型。抗原结合部分包括，例如，Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、结构域抗体（dAb，例如鲨鱼和骆驼科动物（camelid）抗体）、包括互补性决定区（CDRs）的片段、单链可变区片段抗体（scFv）、大抗体（maxibodies）、小抗体（minibodies）、胞内抗体、双抗体、三链抗体、四链抗体（tetrabodies）、v-NAR和bis-scFv，以及含有至少一部分足以赋予多肽特异性抗原结合的免疫球蛋白的多肽。抗体包括任何类别的抗体，例如IgG、IgA或IgM（或其亚类），并且抗体不需要是任何特定类别。依赖于其重链恒定区的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分配到不同的类别。存在五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且这些中的几种可以进一步分为亚类（同种型），例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。

如本文所用的，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”指完整抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合给定抗原（例如，OX40或4-1BB）的能力。抗体的抗原结合功能可以通过完整抗体的片段执行。包含在术语抗体的“抗原结合片段”内的结合片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段、单结构域抗体（dAb）片段（Ward等人，Nature 341：544-546, 1989）和分离的互补性决定区（CDR）。

“优先结合”或“特异性结合”（在本文中可互换使用）靶（例如，OX40受体）的抗体、抗体缀合物或多肽是本领域熟知的术语，且确定这种特异性或优先结合的方法也是本领域熟知的。如果与其他细胞或物质相比，分子更频繁地、更快速地、更长持续时间地和/或以更大的亲和力与特定细胞或物质反应或结合，则称该分子表现出“特异性结合”或“优先结合”。如果抗体以比与其他物质结合更大的亲和力、亲合力、更容易地和/或更长持续时间地结合，则“特异性结合”或“优先结合”靶。例如，特异性或优先结合OX40表位的抗体是以比其结合其他OX40表位或非OX40表位更大的亲和力、亲合力、更容易地和/或更长持续时间地结合这个表位的抗体。还应理解，通过阅读该定义，例如，特异性或优先结合第一靶的抗体（或部分或表位）可以或可以不特异性或优先结合第二靶。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要（尽管它可以包括）排他性结合。通常但不是必需地，提及结合意味着优先结合。

抗体的“可变区”指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区，不论单独的还是组合的。如本领域已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补性决定区（CDR）连接的四个构架区（FR）组成，所述三个互补性决定区也称为高变区。每条链中的CDRs由FRs紧密靠近地保持在一起，并且与来自另一条链的CDRs一起促成抗体的抗原结合部位的形成。至少有两种用于确定CDRs的技术：（1）基于跨物种序列变异性的方法（即，Kabat等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest，（第5版，1991，National Institutes of Health，Bethesda MD））；和（2）基于抗原-抗体复合体的晶体学研究的方法（Al-lazikani等人,1997, J. Molec. Biol. 273:927-948）。如本文所用的，CDR可以指由任一种方法、两种方法的组合或本文提供的任何其他CDR定义所定义的CDRs。

可变区的“CDR”是可变区内的氨基酸残基，其根据Kabat、Chothia、Kabat和Chothia两者的累加、AbM、接触、和/或构象定义或任何本领域众所周知的CDR确定方法的定义鉴定。抗体CDRs可以鉴定为最初由Kabat等人定义的高变区。参见，例如，Kabat等人，1992，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService，NIH，Washington D.C.。CDRs的位置也可以鉴定为最初由Chothia和其他人描述的结构环结构。参见，例如，Chothia等人，Nature 342：877-883, 1989。CDR鉴定的其他方法包括“AbM定义”，这是Kabat和Chothia之间的折衷，并且使用Oxford Molecular的AbM抗体建模软件（现在的Accelrys®）得到，或基于观察到的抗原接触的CDRs的“接触定义”，其在MacCallum等人，J. Mol. Biol., 262：732-745, 1996中陈述。在另一种方法中，在本文中称为CDRs的“构象定义”，CDRs的位置可以被鉴定为对抗原结合产生焓贡献的残基。参见，例如，Makabe等人，Journal of Biological Chemistry，283：1156-1166, 2008。其他CDR边界定义可能不严格遵循上述方法之一，但仍然将与Kabat CDRs的至少一部分重叠，尽管根据特定残基或残基组或甚至整个CDRs都不会显著影响抗原结合的预测或实验结果，它们可能会缩短或延长。如本文所用的，CDR可以指通过本领域已知的任何方法定义的CDRs，包括方法的组合。本文使用的方法可以利用根据任何这些方法定义的CDRs。对于包含多于一个CDR的任何给定实施方案，CDRs可以根据Kabat、Chothia、扩展的、AbM、接触、和/或构象定义中的任一个来定义。

“嵌合抗体”指其中一部分重链和/或轻链与衍生自特定物种（例如人）或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种（例如小鼠）或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体，以及这种抗体的片段，只要它们表现出所需的生物学活性。

“人抗体”指仅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗体。如果在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中生产，人抗体可含有鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”是指分别仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。

“人源化抗体”指含有来自非人（例如鼠）抗体以及人抗体的序列的抗体形式。这种抗体含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗体将包含至少一个、且一般两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部高变环对应于非人免疫球蛋白的那些，且全部或基本上全部FR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选还将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区（Fc），一般是人免疫球蛋白的恒定区。当需要区分人源化抗体与亲本啮齿类动物抗体时，将前缀“hum”、“hu”或“h”添加到抗体克隆名称中。啮齿类动物抗体的人源化形式将通常包含亲本啮齿类动物抗体的相同CDR序列，尽管可包括某些氨基酸取代以增加亲和力、增加人源化抗体的稳定性或出于其他原因。

术语“癌症”、“癌的”或“恶性”指或描述哺乳动物中一般以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、白血病、胚细胞瘤和肉瘤。这种癌症的更具体的例子包括鳞状细胞癌、骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌（NSCLC）、头和颈鳞状细胞癌（HNSCC）、神经胶质瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤（DLBCL）、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性髓细胞样白血病（CML）、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤（MCL）、小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、髓样细胞白血病-1蛋白（Mcl-1）、骨髓异常增生综合征（MDS）、胃肠（道）癌、肾癌、卵巢癌、肝癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑素瘤、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性成胶质细胞瘤、胃癌、骨癌、尤因氏肉瘤、子宫颈癌、脑癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、肝细胞癌（HCC）、透明细胞肾细胞癌（RCC）、头和颈癌、肝胆癌（hepatobiliary cancer）、中枢神经系统癌、食管癌、恶性胸膜间皮瘤、全身性轻链淀粉样变性、淋巴浆细胞性淋巴瘤（lymphoplasmacyticlymphoma）、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、神经内分泌肿瘤、梅克尔细胞癌、睾丸癌和皮肤癌。

“生物治疗剂”指生物分子，例如抗体或融合蛋白，其阻断支持肿瘤维持和/或生长或抑制抗肿瘤免疫应答的任何生物学途径中的配体/受体信号传导。

“化学治疗剂”指可导致癌细胞死亡或干扰癌细胞的生长、分裂、修复和/或功能的化学或生物物质。化学治疗剂的实例包括WO 2006/129163和US 20060153808中公开的那些，其公开内容在此引入作为参考。化学治疗剂的种类包括但不限于：烷化剂、抗代谢物、激酶抑制剂、纺锤体抑制剂植物生物碱、细胞毒性（cytoxic）/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、光敏剂、抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂（SERMs）、抗孕酮、雌激素受体下调因子（ERDs）、雌激素受体拮抗剂、促黄体生成激素释放激素激动剂、抗雄激素、芳化酶抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、抑制与异常细胞增殖或肿瘤生长牵连的基因表达的反义寡核苷酸。可用于本发明治疗方法的化学治疗剂包括细胞抑制剂和/或细胞毒性剂。

本公开内容提供的抗体和组合物可以通过任何合适的肠途径或肠胃外施用途径施用。术语施用的“肠途径”指通过胃肠道的任何部分施用。肠途径的实例包括口服、粘膜、口腔和直肠途径，或胃内途径。施用的“肠胃外途径”指除肠途径以外的施用途径。肠胃外施用途径的实例包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、瘤内、膀胱内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、气管内、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内、皮下或局部施用。本公开内容的抗体和组合物可以使用任何合适的方法施用，例如通过口服摄入、鼻胃管（nasogastric tube）、胃造口术管、注射、输注、可植入的输注泵和渗透泵。合适的施用途径和方法可以依赖于许多因素而变化，例如所用的具体抗体、所期望的吸收速率、所使用的具体制剂或剂型、所治疗的病症的类型或严重程度、具体的作用部位和患者的状况，并且可以由本领域技术人员容易地选择。

如本文所用的与药物施用有关的术语“同时施用”指药物的施用，从而使得个别药物同时存在于受试者中。除了药物的伴随施用（通过相同或替代途径）之外，同时施用可包括在不同时间施用药物（通过相同或替代途径）。

如本文所用的“Chothia”指Al-Lazikani等人，JMB 273：927-948（1997）中描述的抗体编号系统。

“保守修饰的变体”或“保守取代”指蛋白质中的氨基酸被具有相似特征（例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等）的其他氨基酸取代，从而使得在不改变蛋白质的生物活性或其他所需特性（例如抗原亲和力和/或特异性）的情况下，可以经常进行改变。本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代基本上不改变生物活性（参见，例如，Watson等人，(1987) Molecular Biology of the Gene, TheBenjamin/Cummings Pub. Co., 第224页（第4版））。此外，结构上或功能上相似的氨基酸的取代不太可能破坏生物活性。示例性保守取代于下表1中陈述。

表1. 示例性保守氨基酸取代

如在说明书和权利要求书中自始至终所使用的“基本上由……组成（consistsessentially of）”及变化形式如“基本上由……组成（consist essentially of）”或“基本上由……组成（consisting essentially of）”表示包括任何所述的要素或要素组，以及任选包括具有与所述要素相似或不同的性质的其他要素，其不显著改变具体限定的剂量方案、方法或组合物的基本或新颖性质。作为非限制性实例，基本上由所述氨基酸序列组成的OX40激动剂还可包括一个或多个氨基酸，包括一个或多个氨基酸残基的取代，其不显著影响结合化合物的性质。

如本文所用的“构架区”或“FR”指除去CDR区的免疫球蛋白可变区。

“同源性”指两个多肽序列在最佳比对时的序列相似性。当两个比较序列中的位置被相同的氨基酸单体亚基占据时，例如，如果两个不同的Abs的轻链CDR中的位置被丙氨酸占据，则两个Abs在该位置是同源的。同源性百分比是两个序列共有的同源位置数除以比较的总位置数×100。例如，如果在序列最佳比对时两个序列中10个位置中的8个匹配或同源，则这两个序列是80％同源的。通常，当比对两个序列时进行比较以给出最大百分比同源性。例如，可以通过BLAST算法执行比较，其中选择算法的参数以在各个参考序列的整个长度上给出各个序列之间的最大匹配。

以下参考文献涉及经常用于序列分析的BLAST算法：BLAST算法（BLASTALGORITHMS）: Altschul, S.F.等人, (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410；Gish, W.等人, (1993) Nature Genet. 3:266-272；Madden, T.L.等人, (1996) Meth. Enzymol.266:131-141；Altschul, S.F.等人, (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402；Zhang,J.等人, (1997) Genome Res. 7:649-656；Wootton, J.C.等人, (1993) Comput. Chem.17:149-163；Hancock, J.M.等人, (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70；比对评分系统（ALIGNMENT SCORING SYSTEMS）: Dayhoff, M.O.等人, "A model of evolutionarychange in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol.5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found.,Washington, DC；Schwartz, R.M.等人, "Matrices for detecting distantrelationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5,suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found.,Washington, DC；Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565；States, D.J.等人, (1991) Methods 3:66-70；Henikoff, S.等人, (1992) Proc. Natl. Acad. Sci.USA 89:10915-10919；Altschul, S.F.等人, (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300；比对统计学（ALIGNMENT STATISTICS）: Karlin, S.等人, (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA87:2264-2268；Karlin, S.等人, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877；Dembo, A.等人, (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039；和Altschul, S.F. "Evaluatingthe statistical significance of multiple distinct local alignments." inTheoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.),(1997) pp. 1-14, Plenum, New York。

“分离的抗体”和“分离的抗体片段”指纯化状态，并且在这种情况下意味着指定的分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，例如细胞碎片和生长培养基。通常，术语“分离的”并不意图指完全不存在这种材料或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以显著干扰如本文所述的结合化合物的实验或治疗用途的量存在。

如本文所用的“Kabat”指由Elvin A. Kabat（（1991）Sequences of Proteins ofImmunological Interest，5th Ed. Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.）首创的免疫球蛋白比对和编号系统。

如本文所用的，“单克隆抗体”或“mAb”或“Mab”指基本上均质的抗体群体，即，构成群体的抗体分子在氨基酸序列上是相同的，除了可能少量存在的可能天然发生的突变。相反，常规（多克隆）抗体制剂一般包括在其可变结构域特别是其CDRs中具有不同氨基酸序列的众多不同抗体，其经常对不同表位具有特异性。修饰语“单克隆”表示抗体从基本上均质的抗体群体获得的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法生产抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler等人(1975) Nature 256: 495首次描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法制备（参见，例如，美国专利号4,816,567）。还可以使用例如Clackson等人(1991) Nature 352: 624-628和Marks等人(1991) J. Mol. Biol. 222:581-597描述的技术从噬菌体抗体文库分离“单克隆抗体”。也参见Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731。

“患者”或“受试者”指需要治疗或参与临床试验、流行病学研究或用作对照的任何单个受试者，包括人和哺乳动物兽医患者，例如牛、马、狗和猫。

如本文所用的“RECIST 1.1应答标准”指Eisenhauer等人, E.A.等人, Eur. J Cancer 45:228-247 (2009)中基于测量应答的背景适当地对于靶病灶或非靶病灶陈述的定义。

“持续应答”指在用治疗剂治疗或本文所述的联合治疗停止后的持续治疗效果。在一些实施方案中，持续应答的持续时间至少与治疗持续时间相同，或者为治疗持续时间的至少1.5、2.0、2.5或3倍。

“组织切片”是指组织样品的单个部分或片，例如从正常组织或肿瘤样品切下的薄组织切片。

如本文所用的，“治疗（treat）”或“治疗（treating）”癌症指将一种或多种治疗剂（例如OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗）施用给患有癌症或被诊断为患有癌症的受试者，以实现至少一种积极的治疗效果，例如减少数目的癌细胞、减小的肿瘤大小、降低的癌细胞浸润到外周器官中的速率或降低的肿瘤转移或肿瘤生长速率。可以以多种方式测量癌症中的积极治疗效果（参见W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S（2009））。例如，就肿瘤生长抑制而言，根据NCI标准，T/C≦42％是抗肿瘤活性的最低水平。T/C<10％被认为是高抗肿瘤活性水平，T/C（％）=治疗的中值肿瘤体积/对照的中值肿瘤体积×100。在一些实施方案中，通过本发明的组合实现的治疗是PR、CR、OR、PFS、DFS和OS中的任一个。PFS，也称为“肿瘤进展时间”表示治疗期间和之后癌症不生长的时间长度，且包括患者已经历CR或PR的时间量，以及患者已经历SD的时间量。DFS指治疗期间和之后患者保持无疾病的时间长度。OS指与首次用于实验的或未经治疗的个体或患者相比，生命期望的延长。在一些实施方案中，对本发明组合的响应是使用RECIST 1.1应答标准评估的PR、CR、PFS、DFS、OR或OS中的任何一个。有效治疗癌症患者的本发明组合的治疗方案可根据诸如患者疾病状态、年龄和重量的因素以及治疗在受试者中引起抗癌反应的能力而变化。虽然本发明任何方面的实施方案都可能不在每个受试者中都有效获得积极的治疗效果，但是它应该在统计学上显著数目的受试者中有效获得积极的治疗效果，如通过本领域已知的任何统计学检验所确定的，例如斯氏t-检验、卡方检验、根据Mann和Whitney的U-检验、Kruskal-Wallis检验（H-检验）、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验。

术语“治疗方案”、“给药规程”和“给药方案”可互换使用，以指本发明组合中每种治疗剂的施用剂量和时间控制。

如本文所用的，“治疗”是用于获得有益或期望的临床结果的方法。对本发明来说，有益或期望的临床结果包括但不限于以下一种或多种：减少赘生性细胞或癌细胞的增殖（或破坏赘生性细胞或癌细胞）、抑制赘生性细胞的转移、或缩小或降低肿瘤大小。

如本文所用的，“改善”指与不施用OX40激动剂和4-1BB激动剂相比，减轻或改善一种或多种症状。“改善”还包括缩短或减少症状的持续时间。

如本文所用的，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现任何一种或多种有益或期望的结果的量。对于预防性用途，有益或期望的结果包括消除或降低风险、减轻严重程度或延迟疾病的开始，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，其并发症和在疾病发展过程中呈现的中间病理表型。对于治疗性用途，有益或期望的结果包括临床结果，例如降低各种疾病或状况（例如癌症）的一种或多种症状的发生率或将其改善、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、增强另一种药物的效果和/或延迟患者疾病的进展。有效剂量可以在一次或多次施用中施用。对本发明来说，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景中所理解的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量可以或可以不与另一种药物、化合物或药物组合物一起实现。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效剂量”，并且如果与一种或多种其他试剂一起可能实现或已实现期望的结果，则可以认为单一试剂以有效量给予。

术语“药学上可接受的载体”指适合用于制剂中用于递送结合分子的任何无活性物质。载体可以是抗粘附剂、粘合剂、包衣、崩解剂、充填剂或稀释剂、防腐剂（如抗氧化剂、抗菌剂或抗真菌剂）、增甜剂、吸收延迟剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。合适的药学上可接受的载体的实例包括水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等）右旋糖、植物油（例如橄榄油）、盐水、缓冲液、缓冲的盐水和等渗剂例如糖、多元醇、山梨糖醇和氯化钠。

“肿瘤”当适用于被诊断患有或怀疑患有癌症的受试者时指任何大小的恶性或潜在恶性肿瘤或组织块，并且包括原发性肿瘤和继发性肿瘤。实体瘤是通常不含囊肿或液体区域的异常组织生长或组织块。不同类型的实体瘤以形成它们的细胞类型命名。实体瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病（血液癌症）通常不形成实体瘤（National CancerInstitute，Dictionary of Cancer Terms）。

“晚期实体瘤恶性肿瘤”和“晚期实体瘤”可互换使用以指在局部晚期后已复发、进展、转移和/或对于最初或一线治疗难治的肿瘤。晚期实体瘤包括但不限于骨、脑、乳腺、肝、肺、淋巴结、胰、前列腺和软组织（肉瘤）中的转移性肿瘤。

“肿瘤负荷（tumor burden）”也称为“肿瘤负荷（tumor load）”，指遍布全身的肿瘤材料的总量。肿瘤负荷指整个身体中癌细胞的总数目或肿瘤的总大小，包括淋巴结和骨髓（bone narrow）。肿瘤负荷可通过本领域已知的多种方法确定，例如，通过例如在从受试者取出时使用测径器测量肿瘤的尺寸，或当在体内时使用成像技术（例如，超声、骨扫描、计算层析X射线照相术（CT）或磁共振成像（MRI）扫描）测量肿瘤的尺寸。

术语“肿瘤大小”指肿瘤的总大小，其可以作为肿瘤的长度和宽度来测量。肿瘤大小可以通过本领域已知的多种方法确定，例如，通过例如在从受试者取出时使用测径器测量肿瘤的尺寸，或当在体内时使用成像技术（例如，骨扫描、超声、CT或MRI扫描）测量肿瘤的尺寸。

如本文所用的术语“OX40抗体”指能够结合人OX40受体的如本文所定义的抗体。

术语“OX40”和“OX40受体”在本申请中可互换使用，并且指任何形式的OX40受体，以及保留OX40受体活性的至少一部分的其变体、同种型和物种同源物。因此，如本文所定义和公开的结合分子也可以结合来自除人以外的物种的OX40。在其他情况下，结合分子可以对人OX40完全特异，并且可以不表现出物种或其他类型的交叉反应性。除非有不同的说明，例如通过具体参考人OX40，否则OX40包括天然序列OX40的所有哺乳动物物种，例如人、犬科动物、猫科动物、马科动物和牛科动物。一种示例性人OX40是277个氨基酸的蛋白质（UniProt登录号P43489）。

如本文所用的“OX40激动剂抗体”指如本文所定义的任何抗体，其在结合OX40时，（1）刺激或激活OX40，（2）增强、增加、促进、诱导或延长OX40的活性、功能或存在，或（3）增强、增加、促进或诱导OX40的表达。可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途的OX40激动剂包括特异性结合OX40的单克隆抗体（mAb）。

结合人OX40并且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的mAbs的实例描述于，例如，美国专利号7,960,515、PCT专利申请公开No. WO2009079335、WO201302823和WO2013119202以及美国专利申请公开No. 20150190506，其整体在此引入作为参考。在一些实施方案中，可用于本文公开的治疗、方法、药物和用途的抗-OX40抗体是完全人激动剂单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQID NO：7和SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，可用于本文公开的治疗、方法、药物和用途的抗-OX40抗体是完全人激动剂单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：28和SEQ ID NO：29中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗-OX40抗体是完全人IgG2或IgG1抗体。

下表2提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性抗-OX40抗体序列。

如本文所用的术语“4-1BB抗体”指能够结合人4-1BB受体的如本文所定义的抗体。

术语“4-1BB”和“4-1BB受体”在本申请中可互换使用，并且指任何形式的4-1BB受体，以及保留4-1BB受体活性的至少一部分的其变体、同种型和物种同源物。因此，如本文所定义和公开的结合分子也可以结合来自除人以外的物种的4-1BB。在其他情况下，结合分子可以对人4-1BB完全特异，并且可以不表现出物种或其他类型的交叉反应性。除非有不同的说明，例如通过具体参考人4-1BB，否则4-1BB包括天然序列4-1BB的所有哺乳动物物种，例如人、犬科动物、猫科动物、马科动物和牛科动物。一个示例性人4-1BB是255个氨基酸的蛋白质（登录号NM_001561；NP_001552）。SEQ ID NO：21中提供了完整的人4-1BB氨基酸序列的一个实施方案。

4-1BB包含信号序列（氨基酸残基1-17），随后是胞外域（169个氨基酸）、跨膜区（27个氨基酸）和胞内域（42个氨基酸）（Cheuk ATC等人，2004 Cancer Gene Therapy 11: 215-226）。受体在细胞表面以单体和二聚体形式表达，并且可能与4-1BB配体三聚化以发信号。

如本文所用的“4-1BB激动剂”指如本文所定义的任何化合物或生物分子，其在结合4-1BB时，（1）刺激或激活4-1BB，（2）增强、增加、促进、诱导或延长4-1BB的活性、功能或存在，或（3）增强、增加、促进或诱导4-1BB的表达。可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途的4-1BB激动剂包括特异性结合4-1BB的单克隆抗体（mAb）。4-1BB的替代名称或同义词包括CD137和TNFRSF9。在其中正在治疗人类个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，4-1BB激动剂增加4-1BB-介导的反应。在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂显著增强细胞毒性T-细胞应答，从而导致几种模型中的抗肿瘤活性。

结合人4-1BB并且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的mAbs的实例描述于US8,337,850和US 2013-0078240中，其各自整体在此引入作为参考。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作4-1BB激动剂的特异性抗人4-1BB mAbs包括例如PF-05082566。PF-05082566是一种靶向4-1BB的完全人源化的IgG2激动剂单克隆抗体。

在一些实施方案中，可用于本文公开的治疗、方法、药物和用途的抗-4-1BB抗体是完全人源化的IgG2激动剂单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列。

下表3提供了用于本发明的治疗方法、药物和用途的示例性抗-4-1BB抗体序列。

mAb可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在一些实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗体选自Fab、Fab'-SH、F(ab')₂、scFv和Fv片段。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂是单克隆抗体，其包含：（a）轻链CDR SEQ ID NOs：14、15和16以及重链CDR SEQ ID NOs：11、12和13。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂是单克隆抗体，其包含：（a）轻链CDR SEQ ID NOs：4、5和6，和重链CDR SEQ ID NOs：1、2和3。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂是特异性结合人4-1BB的单克隆抗体，并且包含（a）包含SEQ ID NO：17或其变体的重链可变区，和（b）轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：18或其变体的氨基酸序列。

除了在构架区中（即，在CDRs外）具有多达17个保守氨基酸取代，并且优选在构架区中具有少于10个、9个、8个、7个、6个或5个保守氨基酸取代，重链可变区序列的变体与参考序列相同。除了在构架区中（即，在CDRs外）具有多达5个保守氨基酸取代，并且优选在构架区中具有少于4个、3个或2个保守氨基酸替代，轻链可变区序列的变体与参考序列相同。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂是特异性结合人OX40的单克隆抗体，并且包含（a）包含SEQ ID NO：7或其变体的重链可变区，和（b）轻链可变区，其包含选自SEQ ID NO：8或其变体的氨基酸序列。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，4-1BB激动剂是特异性结合人4-1BB的单克隆抗体，并且包含（a）如SEQ ID NO：19中所述的重链氨基酸序列，和（b）如SEQ ID NO：20中所述的轻链氨基酸序列，附带条件是SEQ ID NO：19的C-末端赖氨酸残基任选不存在。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂是特异性结合人OX40的单克隆抗体，并且包含（a）如SEQ ID NO：9中所述的重链氨基酸序列，和（b）如SEQID NO：10中所述的轻链氨基酸序列，附带条件是SEQ ID NO：9的C-末端赖氨酸残基任选不存在。

在本发明的治疗方法、药物和用途的一些实施方案中，OX40激动剂是PF-04518600。PF-04518600是一种作为OX40受体的激动剂起作用的完全人的IgG2单克隆抗体（mAb）。

应当理解，在本文中使用措辞“包含”描述实施方案的任何地方，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”的措辞描述的其他方面类似的实施方案。

在根据马库什组或其他替代方案分组描述本发明的方面或实施方案的情况下，本发明不仅包括作为一个整体列出的整个组，而且包括组中的个别每个成员以及主要组中的所有可能的亚组，而且还包括缺乏一个或多个组成员的主要组。本发明还设想明确排除请求保护的发明中的任何组成员中的一个或多个。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。如果发生冲突，则将以本说明书为准，包括定义。在整个说明书和权利要求书中，词语“包含（comprise）”或诸如“包含（comprises）”或“包含（comprising）”的变化形式将被理解为暗示包括所述整数或整数组但不排除任何其他整数或整数组。除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，且复数术语应包括单数。术语“如（e.g.）”或“例如（for example）”之后的任何示例并不意味着穷举或限制。

本文描述了示例性方法和材料，尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料也可以用于本发明的实践或测试。材料、方法和实施例仅是说明性的而不意图是限制性的。

II. 方法、用途和药物

在本发明的一个方面，本发明提供了治疗个体癌症的方法，包括向个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗。

联合治疗还可包含一种或多种另外的治疗剂。另外的治疗剂可以是例如化学治疗剂、生物治疗剂（包括但不限于针对VEGF、VEGFR、EGFR、Her2/neu、其他生长因子受体、CD20、CD40、CD-40L、CTLA-4、PD-L1和ICOS的抗体）、免疫原性剂（例如，减毒癌细胞、肿瘤抗原、抗原呈递细胞如用肿瘤衍生的抗原或核酸脉冲的树突细胞、免疫刺激细胞因子（例如，IL-2、IFNα2、GM-CSF）和用编码免疫刺激细胞因子（例如但不限于GM-CSF）的基因转染的细胞）。

化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、二丙胺磺酯和哌泊舒凡；氮丙啶，例如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙烯亚胺和甲基蜜胺（methylamelamines），包括六甲密胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺（trietylenephosphoramide）、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺（trimethylolomelamine）；多聚乙酰（acetogenins）（尤其是布拉它辛（bullatacin）和布拉它辛酮（bullatacinone））；喜树碱（包括合成类似物拓扑替康）；苔藓虫素（bryostatin）；卡利他汀（callystatin）；CC-1065（包括其阿多来新（adozelesin）、卡折来新（carzelesin）和比折来新（bizelesin）合成类似物）； cryptophycins（特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8）；多拉司他汀（dolastatin）； duocarmycin（包括合成类似物，KW-2189和CBI-TMI）；软珊瑚醇（eleutherobin）；水鬼蕉碱（pancratistatin）；匍枝珊瑚醇（sarcodictyin）；海绵抑制素（spongistatin）；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺（cholophosphamide）、雌莫司汀、异环磷酰胺、恩比兴（mechlorethamine）、盐酸氧化氮芥（mechlorethamine oxide hydrochloride）、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、三芥环磷酰胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲（nitrosureas），如卡莫司汀、氯脲菌素、福泰氮芥、洛莫氮芥、尼莫司汀、雷诺氮芥；抗生素如烯二炔类（enediyne）抗生素（例如，卡奇霉素（calicheamicin），尤其是卡奇霉素γ1l和卡奇霉素phil1，参见例如Agnew, Chem. Intl.Ed. Engl., 33:183-186 (1994)；达内霉素（dynemicin），包括达内霉素A；二膦酸盐，如骨膦；埃斯培拉霉素（esperamicin）；以及新制癌菌素发色团和相关的色素蛋白烯二炔类抗生素发色团（chromomophores））、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素（authramycin）、偶氮丝氨酸（azaserin）、博莱霉素、放线菌素C（cactinomycin）、卡柔比星（carabicin）、洋红霉素（caminomycin）、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、二乙氧醋酰阿霉素、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素（包括吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯啉基-阿霉素和脱氧阿霉素）、表柔比星、去羟阿霉素、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加拉霉素、橄榄霉素、培来霉素、泼非霉素（potfiromycin）、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星（rodorubicin）、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、羟氨苯丁酰亮氨酸、新制癌菌素、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶（5-FU）；叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸、曲美沙特；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫唑鸟嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如环胞苷、氮杂胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿啶、依诺他宾、氟尿苷；雄激素如卡鲁睾酮、羟甲雄酮丙酸酯、环硫雄醇、甲环硫甾烷、睾内酯；抗肾上腺素(anti-adrenals)，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如亚叶酸（frolinic acid）；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷（aldophosphamide glycoside）；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶（eniluracil）；安吖啶；阿莫司汀（bestrabucil）；必桑郡；依达曲沙（edatraxate）；defofamine；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸（elformithine）；醋酸羟哔咔唑；埃博霉素（epothilone）；环氧甘醚；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登木素生物碱，如美登素和美坦西醇；丙米腙；米托蒽醌；蒙匹胺醇（mopidamol）；二胺硝吖啶；喷司他丁；苯来美特；吡柔比星；洛索蒽醌（losoxantrone）；鬼臼酸；2-乙酰肼（2-ethylhydrazide）；甲基苄肼；丙亚胺；根霉素；西索菲兰；螺锗；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2''-三氯三乙胺；单端孢菌毒素（尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素（anguidine））；乌来糖；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴去羟卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷（“Ara-C”）；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类（taxoids），例如紫杉醇和多西他赛（doxetaxel）；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷（VP-16）；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春烯碱；能减瘤；替尼泊苷；依达曲沙；柔红霉素；氨蝶呤；卡培他滨；伊本膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸（DMFO）；类视黄醇（retinoids）如视黄酸；卡培他滨；和上述任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。还包括用于调节或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂（SERM），包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛西芬、4-羟基他莫昔芬、曲奥昔芬、那落西芬（keoxifene）、LY117018、奥那斯酮和托瑞米芬（Fareston）；抑制酶芳化酶的芳化酶抑制剂，其调节肾上腺中的雌激素生产，例如，4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮、依西美坦、福美坦、法倔唑、伏罗唑、来曲唑和阿那曲唑；和抗雄激素，如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、利普安和性瑞林；和上述任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

在一些实施方案中，本文提供的包含OX-40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗中的另外的治疗剂可以是，例如，抗-CTLA4抗体、抗-PD-1抗体、抗-PD-L1抗体、抗-TIM3抗体、抗-LAG3抗体、抗-TIGIT抗体、抗-HVEM抗体、抗-BTLA抗体、抗-CD40抗体、抗-CD47抗体、抗-CSF1R或CSF1抗体、抗-MARCO抗体、CCR2抑制剂、基于细胞因子的疗法[例如，IL-2（或IL-2变体）、IL-7（和IL-7变体）、IL-15（和IL-15变体）、IL-12（和IL-12变体）、IFNγ（或IFNγ变体）、IFNα（或IFNα变体）IL-8或抗IL-8抗体]、抗-CXCR4抗体、抗VEGFR1或VEGFR2抗体、TNFα（或TNFα变体）、抗TNFR1或TNFR2抗体、激酶抑制剂、ALK抑制剂、MEK抑制剂、IDO抑制剂、GLS1抑制剂、抗-CD3双特异性抗体、CART细胞或T细胞疗法靶向的治疗例如PTK7-ADC、抗肿瘤抗体[例如，抗-CD19抗体、抗-CD20抗体或抗-Her2抗体]、溶瘤病毒或肿瘤疫苗。

根据标准药学实践，本发明的联合治疗中的每种治疗剂可以单独或在药物（在本文中也称为药物组合物）中施用，所述药物包含治疗剂和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。

本发明的联合治疗中的每种治疗剂可以同时施用（例如，在相同的药物中或在相同的时间）、并行施用（即，在以任何顺序一个紧接一个地施用的单独的药物中）或以任何顺序序贯施用。当联合治疗中的治疗剂处于不同剂型（一种试剂是片剂或胶囊而另一种试剂是无菌液体）和/或以不同的给药方案施用时，例如，至少每天施用的化学治疗剂，和较不频繁施用的生物治疗剂，例如每周一次、每两周一次或每三周一次，序贯施用特别有用。

剂量单位可以表示为例如mg（即mg/受试者）、mg/kg（即mg/kg体重）或mg/m² 。mg/m²剂量单位指每平方米体表面积以毫克计的量。

在一些情况下，OX40激动剂和4-1BB激动剂组合或共同配制于单一剂型中。

虽然可以在整个治疗或预防时间段期间维持OX40激动剂和4-1BB激动剂的同时施用，但是也可以通过在组合治疗后随后单独施用一种化合物来实现抗癌活性（例如，在组合治疗后不含4-1BB激动剂的OX40激动剂，或可选择地，不含OX40激动剂的4-1BB激动剂）。

在一些实施方案中，在施用OX40激动剂之前施用4-1BB激动剂，而在其他实施方案中，在施用OX40激动剂之后施用4-1BB激动剂。

在一些实施方案中，联合治疗中的至少一种治疗剂使用与当所述试剂用作治疗相同癌症的单一治疗时所一般采用的相同的剂量方案（剂量、频率和治疗持续时间）施用。在其他实施方案中，患者在联合治疗中接受的治疗剂中的至少一种的总量低于当将该试剂用作单一治疗时的总量，例如较小剂量、较低频率剂次和/或较短治疗持续时间。

本发明的联合治疗可以在外科手术之前或之后使用来去除肿瘤，并且可以在放射疗法之前、期间或之后使用。

在一些实施方案中，将本发明的联合治疗施用于之前未用生物治疗剂或化学治疗剂治疗的患者，即首次用于治疗的（treatment-naïve）患者。在其他实施方案中，将联合治疗施用于在用生物治疗剂或化学治疗剂的在前治疗后未能实现持续应答的患者，即经历了治疗的患者。

本发明的联合治疗一般用于治疗肿瘤，该肿瘤足够大以通过触诊或通过本领域众所周知的成像技术发现，例如MRI、超声或CAT扫描。在一些实施方案中，本发明的联合治疗用于治疗尺寸为至少约200 mm³、300 mm³、400 mm³、500 mm³、750 mm³或高达1000 mm³的晚期肿瘤。

在一个实施方案中，使剂量方案针以对于任何治疗常规的方式适合于特定患者的状况、反应和相关治疗，并且可能需要响应于条件的变化和/或根据其他临床条件进行调整。

在一些实施方案中，为本发明的联合治疗选择剂量方案（在本文中也称为施用方案）取决于若干因素，包括实体的血清或组织周转率、症状水平、实体的免疫原性以及被治疗个体中靶细胞、组织或器官的可接近性。优选地，剂量方案使与可接受的副作用水平一致的递送给患者的每种治疗剂的量最大化。因此，组合中每种生物治疗剂和化学治疗剂的剂量和给药频率部分取决于特定治疗剂、所治疗的癌症的严重程度和患者特征。选择抗体、细胞因子和小分子的适当剂量的指导是可以获得的。参见，例如，Wawrzynczak (1996)Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK；Kresina (ed.)(1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, NewYork, NY；Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY；Baert等人 (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608；Milgrom等人 (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973；Slamon等人 (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792；Beniaminovitz等人 (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619；Ghosh等人 (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32；Lipsky等人(2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602；Physicians' Desk Reference 2003(Physicians' Desk Reference, 57th Ed)；Medical Economics Company；ISBN:1563634457；第57版（2002年11月）。临床医生可以确定合适的剂量方案，例如，使用本领域已知或怀疑影响治疗或预测影响治疗的参数或因素，并且将取决于例如患者的临床史（例如，先前的治疗）、待治疗的癌症的类型和病期以及在联合治疗中对一种或多种治疗剂的反应的生物标记物。

本发明的联合治疗中的生物治疗剂可以通过连续输注施用，或者以例如每天、每隔一天、每周三次、或每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次、每两月一次等的间隔按剂施用。每周总剂量可以是，例如，至少0.05 μg/ kg、0.2 μg/ kg、0.5 μg/ kg、1 μg/kg、10 μg/ kg、100 μg/ kg、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、50mg/kg体重或更多。参见，例如，Yang等人 (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434；Herold等人(2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698；Liu等人 (1999) J.Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456；Portielji等人 (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144。可以向受试者提供本文提供的治疗剂的剂量，例如，在按质量基础上（例如mg/kg）或在按固定剂量基础上（例如mg /受试者）。

在联合治疗中采用抗人OX40 mAb作为OX40激动剂的一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以0.01、0.1、0.3、1、1.5、2、3、5、6、8、10、15、20、25、50、75或100 mg/kg的剂量施用抗人OX40 mAb。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约0.01 mg/kg至约25mg/kg的剂量施用抗人OX40 mAb。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者的固定剂量施用OX40激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约1至500 mg/受试者的固定剂量施用OX40激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约6至600 mg/受试者的固定剂量施用OX40激动剂。

在联合治疗中使用抗人OX40 mAb作为OX40激动剂的其他实施方案中，给药方案将包括以约0.005 mg/kg至约10 mg/kg、约0.01 mg/kg至约25 mg/kg、约0.1 mg/kg至约50mg/kg或约1 mg/kg至约100 mg/kg的剂量施用抗人OX40 mAb，患者内剂量逐步上升（escalation）。在其他逐步上升的给药实施方案中，剂次之间的间隔将逐渐缩短，例如，第一和第二剂之间约30天（±2天），第二和第三剂之间约14天（±2天）。在某些实施方案中，对于第二剂之后的剂次，给药间隔为约14天（±2天）。

在某些实施方案中，受试者将施用包含本文所述的任何OX40激动剂的药物的静脉内（IV）输注。在实施方案中，OX40激动剂在约30、60或90分钟的时间段内通过IV输注作为液体药物施用。在实施方案中，OX40激动剂作为液体药物施用，其在于pH 5.5与赋形剂在组氨酸缓冲液中混合的水溶液中包含1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150或200 mg/mLOX40激动剂。在实施方案中，OX40激动剂在具有20 mm血清塞和20 mm铝塑组合盖（aluminumflip-off seals）的标称填充体积为10 mL的无菌10 mL 1型透明玻璃小瓶中提供。

在某些实施方案中，联合治疗中的OX40激动剂以选自下述的剂量静脉内施用：0.01 mg/kg Q2W（Q2W=每2周一剂）、0.1 mg/kg Q2W、0.3 mg/kg Q2W、1 mg/kg Q2W、1.5 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、0.01 mg/kg Q3W（Q3W=每3周一剂）、0.1 mg/kg Q3W、0.3 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q3W、1.5 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W、0.01 mg/kg Q4W（Q4W=每4周一剂）、0.1 mg/kgQ4W、0.3 mg/kg Q4W、1 mg/kg Q4W、1.5 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kg Q4W、5 mg/kgQ4W和10 mg/kg Q4W。

在某些实施方案中，联合治疗中的OX40激动剂包含抗-OX40单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO：7和SEQ IDNO：8中所示的氨基酸序列，以选自下述的剂量静脉内施用：0.01 mg/kg Q2W、0.1 mg/kgQ2W、0.3 mg/kg Q2W、1 mg/kg Q2W、1.5 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kgQ2W、10 mg/kg Q2W、0.01 mg/kg Q3W、0.1 mg/kg Q3W、0.3 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q3W、1.5mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W、0.01 mg/kg Q4W、0.1mg/kg Q4W、0.3 mg/kg Q4W、1 mg/kg Q4W、1.5 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kg Q4W、5mg/kg Q4W和10 mg/kg Q4W。

在某些实施方案中，联合治疗中的OX40激动剂包含抗-OX40单克隆抗体，其包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列，以选自下述的剂量静脉内施用：0.01 mg/kg Q2W、0.1 mg/kg Q2W、0.3 mg/kg Q2W、1 mg/kgQ2W、1.5 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、0.01 mg/kgQ3W（Q3W=每3周一剂）、0.1 mg/kg Q3W、0.3 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q3W、1.5 mg/kg Q3W、2mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W、0.01 mg/kg Q4W（Q4W=每4周一剂）、0.1 mg/kg Q4W、0.3 mg/kg Q4W、1 mg/kg Q4W、1.5 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kgQ4W、5 mg/kg Q4W和10 mg/kg Q4W。

在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以0.01、0.1、0.5、1、2、3、5、6、8、10、15、20、25、50、75或100 mg/kg的剂量施用4-1BB激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约0.01 mg/kg至约25 mg/kg的剂量施用4-1BB激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者的固定剂量施用4-1BB激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约1至500 mg/受试者的固定剂量施用4-1BB激动剂。在一些实施方案中，给药方案将包括在整个治疗过程期间以约7天（±2天）或约14天（±2天）或约21天（±2天）或约30天（±2天）的间隔以约6至600 mg/受试者的固定剂量施用4-1BB激动剂。

在其他实施方案中，给药方案将包括以约0.005 mg/kg至约10 mg/kg、约0.01 mg/kg至约25 mg/kg、约0.1 mg/kg至约50 mg/kg或约1 mg/kg至约100 mg/kg的剂量施用4-1BB激动剂，患者内剂量逐步上升。在其他逐步上升的给药实施方案中，剂次之间的间隔将逐渐缩短，例如，第一和第二剂之间约30天（±2天），第二和第三剂之间约14天（±2天）。在某些实施方案中，对于第二剂之后的剂次，给药间隔为约14天（±2天）。

在本发明的另一个实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂以选自下述的剂量在液体药物中施用：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、1mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kg Q4W、5 mg/kg Q4W和10 mg/kg Q4W。

在本发明的另一个实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包含抗-4-1BB单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ IDNO：17和SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列，且以选自下述的剂量在液体药物中施用：1mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kgQ4W、5 mg/kg Q4W和10 mg/kg Q4W。

在本发明的另一个实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包含抗-4-1BB单克隆抗体，其包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列，且以选自下述的剂量在液体药物中施用：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg/kg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kgQ3W、10 mg/kg Q3W、1 mg/kg Q4W、2 mg/kg Q4W、3 mg/kg Q4W、5 mg/kg Q4W和10 mg/kgQ4W。

在本发明的另一个实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包含抗-4-1BB单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ IDNO：17和SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列，并且以选自下述的剂量在液体药物中施用：在Q2W、Q3W或Q4W的频率下1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者。

在本发明的另一个实施方案中，联合治疗中的4-1BB激动剂包含抗-4-1BB单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ IDNO：19和SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列，并且以选自下述的剂量在液体药物中施用：在Q2W、Q3W或Q4W的频率下1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者。

在一些实施方案中，4-1BB激动剂作为液体药物施用，并且所选的药物剂量通过IV输注在约30、60或90分钟的时间段内施用。

特定OX40激动剂与特定4-1BB激动剂组合的最佳剂量可通过这些试剂中的一种或两者的剂量逐步上升来鉴定。

在一个实施方案中，本文提供的联合治疗可以包括向受试者施用选自在Q2W、Q3W或Q4W的频率下0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3mg/kg、5 mg/kg或10 mg/kg的剂量的OX40激动剂，和在Q2W、Q3W或Q4W的频率下1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者的固定剂量的4-1BB激动剂。

在一个实施方案中，本文提供的联合治疗可以包括向受试者施用选自在Q2W（每2周一剂）的频率下0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3mg/kg、5 mg/kg或10 mg/kg的剂量的OX40激动剂，和在Q4W（每4周一剂）的频率下1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900或1000 mg/受试者的固定剂量的4-1BB激动剂。

在实施方案中，在本文提供的联合治疗中，在受试者接受一定剂量的OX40激动剂和4-1BB激动剂两者的日子里，OX40激动剂和4-1BB激动剂以隔开至少5、10、15、30或60分钟且不超过360分钟的时间间隔施用于受试者。

在一个实施方案中，OX40激动剂以0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg或10 mg/kg Q2W的起始剂量施用，且4-1BB激动剂以1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100 mg/受试者的起始固定剂量Q4W施用。

在一个实施方案中，OX40激动剂以2 mg/kg Q2W的起始剂量施用，且4-1BB激动剂以0.3 mg/kg、0.6 mg/kg、1.2 mg/kg、2.4 mg/kg或5 mg/kg的起始剂量Q4W施用。

在另一个实施方案中，OX40激动剂以2 mg/kg Q3W的起始剂量施用，且4-1BB激动剂以0.3 mg/kg、0.6 mg/kg、1.2 mg/kg、2.4 mg/kg或5 mg/kg的起始剂量Q3W施用。

在另一个实施方案中，4-1BB激动剂以0.6 mg/kg Q4W的起始剂量施用，且OX40激动剂以10 mg/kg Q2W的起始剂量施用，并且如果起始剂量组合不被患者耐受，则将OX40激动剂的剂量减少至2 mg/kg Q2W和/或将4-1BB激动剂的剂量减少至0.3 mg/kg Q4W。

在一个实施方案中，剂量方案是选自2 mg/kg Q2W和10 mg/kg Q2W的剂量的OX40激动剂和选自1.2 mg/kg Q4W、2.4 mg/kg Q4W和5.0 mg/kg Q4W的剂量的4-1BB激动剂的任何组合。

在实施方案中，表4中提供了OX40激动剂和4-1BB激动剂的组合的示例性剂量方案：

表4. 示例性的OX40和4-1BB剂量方案

在一些实施方案中，低于上述范围的下限的剂量水平可能是大大足够的，而在其他情况下，可以采用更大的剂量，如本领域技术人员所确定的。

在一些实施方案中，治疗周期从组合治疗的第一天开始并持续3周或4周。在药物共同施用的治疗周期的任何一天，在实施方案中，在完成4-1BB激动剂的输注后30分钟开始OX40激动剂输注。或者，在完成4-1BB激动剂输注后，通过IV输注施用OX40激动剂。在实施方案中，OX40激动剂和4-1BB激动剂可以通过同时IV输注施用。

在一些实施方案中，本文提供的联合治疗在患者达到完全消退之后施用至少12周（三个4周周期或四个3周周期），更优选至少24周，且甚至更优选至少2至4周。

在一些实施方案中，选择用本发明的联合治疗治疗的患者已被诊断患有晚期实体恶性肿瘤。在实施方案中，患者尚未接受针对晚期肿瘤的先前全身治疗。

本发明还提供了一种药物，其包含如上所述的OX40激动剂和药学上可接受的赋形剂。当OX40激动剂是生物治疗剂，例如mAb时，可以使用常规细胞培养和回收/纯化技术在CHO细胞中生产激动剂。

在一些实施方案中，包含抗-OX40抗体作为OX40激动剂的药物可以作为液体制剂提供，或者通过在使用前用无菌注射用水重构冻干粉末来制备。在一些实施方案中，在玻璃小瓶中提供包含OX40激动剂的药物，所述玻璃小瓶含有约100 mg的OX40激动剂。

本发明还提供了一种药物，其包含4-1BB激动剂抗体和药学上可接受的赋形剂。可以如例如美国专利号8,337,850或US20130078240中所述制备4-1BB激动剂抗体。

在一些实施方案中，可以以10 mg/mL的浓度配制4-1BB激动剂抗体以允许静脉内（IV）。商业制剂可含有L-组氨酸缓冲液，和α,α-海藻糖二水合物、乙二胺四乙酸二钠二水合物和聚山梨醇酯80，pH 5.5。

本文所述的OX40和4-1BB药物可以作为试剂盒提供，其包括第一容器和第二容器以及包装插页。第一容器含有至少一剂包含OX40激动剂的药物，第二容器含有至少一剂包含4-1BB激动剂的药物，和包装插页或标签，其包含使用药物治疗患者的癌症的说明书。第一和第二容器可以由相同或不同的形状（例如，小瓶、注射器和瓶）和/或材料（例如，塑料或玻璃）组成。该试剂盒可以进一步包含可用于施用药物的其他材料，例如稀释剂、过滤器、IV袋和线、针和注射器。在试剂盒的一些实施方案中，OX40激动剂是抗-OX40抗体。在试剂盒的一些实施方案中，4-1BB激动剂是抗-4-1BB抗体。

在本文提供的试剂盒的一些实施方案中，试剂盒的容器在相同容器中含有OX40激动剂和4-1BB激动剂两者。在本文提供的试剂盒的一些实施方案中，OX40激动剂和4-1BB激动剂在分开的容器中提供。

在所有场合引入作为参考的是美国临时专利申请号62/286,616（2016年1月25日提交）的内容。

根据本文包含的教导，本发明的这些和其他方面，包括下面列出的示例性具体实施方案，将是显而易见的。

III. 一般方法

描述了分子生物学中的标准方法Sambrook、Fritsch和Maniatis（1982和1989年第2版，2001年第3版）Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Sambrook和Russell (2001) Molecular Cloning, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)。标准方法也出现在Ausbel等人 (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY中，其描述了细菌细胞中的克隆和DNA诱变（第1卷）、在哺乳动物细胞和酵母中的克隆（第2卷）、糖缀合物和蛋白质表达（第3卷）以及生物信息学（第4卷）。

描述了蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀法、层析、电泳、离心和结晶（Coligan等人 (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons,Inc., New York）。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的生产、蛋白质的糖基化（参见，例如，Coligan等人 (2000) Current Protocols in ProteinScience, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York；Ausubel等人 (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St.Louis, MO; pp. 45-89；Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory,Piscataway, N.J., pp. 384-391)。描述了多克隆和单克隆抗体的生产、纯化和片段化（Coligan等人 (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley andSons, Inc., New York；Harlow和Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Harlow和Lane，见前）。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可用的（参见，例如，Coligan等人 (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York）。

可以制备单克隆抗体、多克隆抗体和人源化抗体（参见，例如，Sheperd和Dean(eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY；Kontermann和Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, NewYork；Harlow和Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243；Carpenter等人 (2000) J. Immunol. 165:6205；He等人 (1998) J. Immunol. 160:1029；Tang等人 (1999) J. Biol.Chem. 274:27371-27378；Baca等人 (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684；Chothia等人 (1989) Nature 342:877-883；Foote和Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499；美国专利No. 6,329,511）。

人源化的替代方案是使用展示在噬菌体上的人抗体文库或转基因小鼠中的人抗体文库（Vaughan等人 (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314；Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839；Mendez等人 (1997) Nature Genetics 15:146-156；Hoogenboom和Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377；Barbas等人 (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,New York；Kay等人 (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA；de Bruin等人 (1999) Nature Biotechnol.17:397-399）。

抗原的纯化不是产生抗体所必需的。可以用携带目标抗原的细胞免疫动物。然后可以从免疫的动物中分离脾细胞，并且脾细胞可以与骨髓瘤细胞系融合以生产杂交瘤（参见，例如，Meyaard等人 (1997)Immunity 7:283-290；Wright等人 (2000) Immunity13:233-242；Preston等人, 见前; Kaithamana等人 (1999) J. Immunol. 163:5157-5164）。

抗体可以缀合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇（PEG）。抗体可用于治疗、诊断、试剂盒或其他目的，并且包括偶联于例如染料、放射性同位素、酶或金属例如胶体金的抗体（参见，例如，Le Doussal等人 (1991) J. Immunol. 146:169-175；Gibellini等人(1998) J. Immunol. 160:3891-3898；Hsing和Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811；Everts等人 (2002) J. Immunol. 168:883-889）。

流式细胞术的方法是可获得的，包括荧光激活细胞分类术（FACS）（参见，例如，Owens等人 (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice,John Wiley and Sons, Hoboken, NJ；Givan (2001) Flow Cytometry, 第2版; Wiley-Liss, Hoboken, NJ；Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley andSons, Hoboken, NJ）。适合于修饰核酸包括核酸引物和探针、多肽和抗体以用作例如诊断试剂的荧光试剂是可获得的（Molecular Probesy (2003) Catalogue, MolecularProbes, Inc., Eugene, OR；Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO）。

描述了免疫系统的标准组织学方法（参见，例如，Muller-Harmelink (ed.)(1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York,NY；Hiatt等人 (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, andWilkins, Phila, PA；Louis等人 (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY）。

用于确定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库是可获得的（参见，例如，GenBank, Vector NTI® Suite(Informax, Inc, Bethesda, MD)；GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., SanDiego, CA)；DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada)；Menne等人 (2000)Bioinformatics 16: 741-742；Menne等人 (2000) Bioinformatics Applications Note16:741-742；Wren等人 (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181；vonHeijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21；von Heijne (1986) Nucleic Acids Res.14:4683-4690）。

IV. 实施例

实施例1. 抗-OX40（OX86 mIgG1）和抗4-1-BB单克隆抗体在CT26结肠癌小鼠模型中的组合活性

在鼠CT26结肠癌同系肿瘤模型中体内评价抗-OX40抗体mIgG1和抗-4-1BB mIgG1抗体的潜在组合效应。

对于该研究，从亲本克隆OX86产生在小鼠IgG1构架中的激动剂抗小鼠OX40抗体（在小鼠可结晶片段γ受体[FcγR]结合方面人IgG2的小鼠等同物）。在该研究中使用的抗-4-1BB抗体是小鼠IgG1激动剂抗小鼠4-1BB抗体。

将CT26肿瘤细胞（0.1×10⁶）皮下接种于雌性Balb/C小鼠中。在肿瘤细胞接种后第10天，平均肿瘤大小达到67 mm³，并将小鼠随机分成治疗组（10只小鼠/组）。在肿瘤细胞接种后第10、13和16天用0.1 mg/kg抗-4-1BB抗体、0.03 mg/kg抗-OX40抗体、0.1 mg/kg抗-4-1BB抗体和0.03 mg/kg抗-OX40抗体的组合或同种型对照抗体腹膜内治疗雌性Balb/c小鼠。测量肿瘤生长抑制直至第28天。在整个研究期间，每周两次以盲法（blinded fashion）进行肿瘤测量。通过标准化治疗组和同种型对照组之间的差异来计算第28天的肿瘤生长抑制。结果总结在图1中。[X-轴是肿瘤接种后的天数；Y-轴是肿瘤体积，mm³；向下箭标表示抗体治疗天数；且符号表示抗体治疗（正方形：抗-4-1BB单一治疗；三角形：抗-OX40单一治疗；倒三角形：组合抗-4-1BB和抗-OX40治疗；圆形：同种型对照）]。抗-4-1BB抗体单一治疗和抗-OX40单一治疗在第28天分别导致63.3％和35.3％的肿瘤生长抑制。与同种型对照治疗的动物相比，组合治疗在肿瘤接种后第28天导致96.4％的抑制（图1，表5）。通过双因素方差（two-way ANOVA）分析，组合显著优于任何一种单独的单一抗体治疗，p值至少<0.05。该研究一直进行到第41天。虽然同种型对照治疗的组中的所有动物均发展了肿瘤，但抗-OX40单一治疗组和抗-4-1BB单一治疗组分别有10只动物中的1只和10只动物中的7只在肿瘤接种后第41天无肿瘤。在组合组中，在第41天，10只动物中有9只无肿瘤（表5）。此外，抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体的组合在该模型中良好耐受，这是因为体重没有降低并且没有注意到明显的毒性。

这些数据证明用抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体的组合治疗导致比单独用任一抗体治疗更大的肿瘤生长抑制。

表5. 组合治疗OX86 mIgG1和抗-4-1 BB后CT26鼠结肠癌同系模型的肿瘤生长抑制

N=数目；SEM=平均值的标准误；*=与对照组相比的统计学显著性，p <0.05；

**** = p <0.0001；†=与抗-4-1BB相比的统计学显著性，p <0.05。

实施例2. 抗-OX40（OX86 mIgG1）和抗-4-1-BB单克隆抗体在B16-F10黑素瘤小鼠模型中的组合活性

还在B16-F10黑素瘤同系模型中研究了实施例1中描述的替代激动剂抗-OX40和抗-4-1BB抗体的组合，该模型是在肿瘤中具有较少T-细胞浸润的免疫原性较低的模型。用B16-F10细胞接种C57BL/6小鼠，且然后在肿瘤细胞接种后第11、14、17和21天用同种型对照抗体、5 mg/kg抗-OX40抗体和1 mg/kg抗4-1BB抗体的组合或每种单一试剂治疗它们。结果显示，抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体的组合在该侵袭性模型中不抑制已确立的肿瘤的生长，与公开的数据一致（Gray等人，Eur J Immunol. 38(9): 2499-511 , 2008）。

在单独的实验中，将B16-F10（0.3×10⁶）细胞注射到C57Bl6小鼠中。在肿瘤细胞接种后第11、14、18天，用同种型对照抗体、3 mg/kg抗-OX40抗体和1 mg/kg抗-4-1BB抗体的组合或每种单一试剂治疗它们（每组4只小鼠）。在第19天收获肿瘤和脾以研究肿瘤和脾中T-细胞表型的变化。将细胞解离并用CD4、CD8、CD45、Ki67抗体和生存力染料染色。通过流式细胞术获取数据，并通过单因素方差（one-way ANOVA）分析统计学。进行与同种型对照组相对比的统计学分析。在肿瘤中，虽然抗-OX40单一治疗的治疗略微增加CD4 T-细胞浸润，但抗-OX40和抗4-1BB抗体的组合将CD4 T-细胞百分比从同种型对照治疗的动物中的8.07±1.15％显著增加到19.78±3.70％（p<0.05）。类似地，CD8肿瘤浸润从同种型对照组中的8.62±1.18％增加至组合治疗的27.55±1.78％（p<0.01）。在脾中，尽管总CD4和CD8 T-细胞百分比没有显著变化，但细胞增殖显著增加，与同种型对照组中的27.53±2.31％相比，组合组中表达增殖标记物Ki67的CD4 T细胞为63.98±6.36％（p<0.0001）。此外，脾中的增殖CD8 T细胞从同种型对照组中的28.30±1.49％增加至组合组中的67.10±5.23％（p <0.0001）（表6）。

这些数据证明，与单独使用任一抗体的治疗相比，用抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体的组合治疗导致更大的T-细胞增殖和肿瘤浸润。

表6. 抗-OX40和抗-4-1BB共刺激增加鼠B16-F10黑素瘤模型中的T-细胞增殖和肿瘤浸润

*=与同种型对照抗体相比的统计学显著性。*=p<0.05，**，p<0.01，****=p<0.0001；CD=分化抗原簇（Cluster of differentiation）；Ki67 =Kiel 67蛋白

实施例3. 用OX40激动剂和4-1BB激动剂的组合治疗

这个实施例说明了用于评价抗-OX40抗体与抗-4-1BB抗体组合在具有选择的晚期或实体转移性实体瘤的患者中的安全性、功效、抗肿瘤活性、药物代谢动力学、药物动力学和生物标记物调节中的一种或多种的临床试验研究。

该研究的一个目的是评估具有选择的晚期或转移性实体瘤的患者中在逐渐增加的剂量水平的抗-OX40抗体与抗-4-1BB抗体组合时的安全性和耐受性，并估计组合的MTD（最大耐受剂量）。联合治疗剂量逐步上升阶段将招收约53名患者。在对目前可用的疗法没有反应或对其没有标准疗法的患有NSCLC、HNSCC、黑素瘤、膀胱癌、胃癌或子宫颈癌的成年患者中抗-OX40抗体（0.1、0.3、1.0和3 mg/kg）的序贯剂量水平与20 mg或100 mg抗-4-1BB抗体组合。起始剂量水平将为0.1 mg/kg抗-OX40抗体和20 mg抗-4-1BB抗体，相隔不早于30分钟给予。

抗-4-1BB抗体将在每隔一个周期（每28天）的第1天作为静脉内（IV）输注在60分钟（+/-5分钟）内施用。抗-4-1BB抗体将使用固定剂量静脉内施用。抗-OX40抗体将在每个14-天周期的第1天在门诊病人基础上作为静脉内（IV）输注在60分钟（+/-5分钟）内施用。

抗-OX40抗体将静脉内施用，在每个周期对于体重进行调整。在抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体在同一天施用的周期中，抗-OX40抗体将在没有输注反应的情况下抗-4-1BB抗体输注完成后且在抗-4-1BB抗体后和抗-OX40抗体前药物代谢动力学血液抽取后但不早于30分钟施用。

将周期定义为从第1天剂量的抗-OX40抗体到下一个第1天剂量的时间。如果没有治疗延迟，则周期将为14天。每位患者可接受抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体，直至疾病进展、不可接受的毒性、撤回同意或研究终止。

任选地，抗-OX40抗体的起始剂量将为0.01 mg/kg，与20 mg抗-4-1BB抗体组合。

对于剂量逐步上升，最初的2至4名患者可以最初招收到每个剂量水平组合中。起始剂量组合水平将为0.1 mg/kg抗-OX40抗体与20 mg抗-4-1BB抗体组合。如果未观察到DLTs，则下一剂量组合水平将为0.3 mg/kg抗-OX40抗体与20 mg抗-4-1BB抗体组合。如果未观察到毒性，则抗-OX40抗体和/或抗-4-1BB抗体的剂量将继续增加至0.3 mg/kg抗-OX40抗体与100 mg抗-4-1BB抗体组合、1 mg/kg抗-OX40抗体与100 mg抗-4-1BB抗体组合和3 mg/kg抗-OX40抗体与100 mg抗-4-1BB抗体组合的组合水平。如果在起始剂量组合水平观察到毒性，则将评价0.1 mg/kg抗-OX40抗体与10 mg抗-4-1BB抗体的组合。在最初剂量之后，如果在评价后推荐剂量逐步下降（de-escalation），则可以研究先前剂量组合和当前剂量组合之间的中间剂量水平。使用观察到的数据，将鉴定出抗-OX40抗体和抗-4-1BB抗体的一种或多种剂量组合水平，其毒性率最接近但不超过25％的预定靶比率。如果认为起始剂量不可耐受，则下一剂量组合水平将为0.1 mg/kg抗-OX40抗体与10 mg抗-4-1BB抗体组合。还可以提供0.01 mg/kg抗-OX40抗体与10 mg抗-4-1BB抗体或0.01 mg/kg抗-OX40抗体与20 mg抗-4-1BB抗体组合的剂量水平。

当在28天或2个周期（抗-OX40抗体）的DLT观察期后认为剂量组合水平是安全的时，则将发生逐步上升至下一剂量组合水平。所有剂量组合水平将采用交错开始；也就是说，将对任何剂量组合水平的第一个患者给药，并且在可对随后的患者给药之前观察48小时。如果在这48小时时间段期间没有出现安全顾虑，则第二名患者将被招收入相同的剂量组合水平。

在认为剂量组合水平安全后，可以完成任何给定剂量组合水平的外周药物动力学评估，并且已经发生逐步上升至下一剂量组合水平。当外周监控显示前2-4名患者的免疫调制时，剂量水平将扩大至约10名患者，从而允许更好地表征药物动力学效应并减少由于小样本大小而导致的变异性。为了允许更好地表征药物动力学效应，这些额外的患者将进行强制性的治疗前（pre-treatment）和治疗时（on treatment）活组织检查。如果在任何剂量组合水平中都没有观察到前2-4名患者的外周药物动力学效应，则剂量组合水平将不被扩大。

联合治疗剂量扩大阶段将进一步将该组合的安全性和抗肿瘤活性评价为2个分支：分支1将招收从未用抗-PD-L1或抗-PD-1 mAb治疗的HNSCC患者；分支2将招收NSCLC患者，其1）先前接受过先前抗-PD-L1或抗-PD-1 mAb作为最近的治疗，和2）作为对最近的PD-L1/PD-1疗法的最佳总体反应没有进展性疾病，和3）随后进展，或不耐受这种疗法。这部分研究最初将在每个分支中招收多达20名患者，并且所有患者将进行强制性的治疗前和治疗时的肿瘤活组织检查。将根据来自联合治疗的最初数据选择剂量组合水平内的抗-OX40抗体的剂量水平和抗-4-1BB抗体的剂量水平，并且其可以包括例如上文描述的任何组合剂量水平。

上述研究可能产生与抗-OX40抗体与抗-4-1BB抗体组合的组合治疗在具有选择的晚期或实体转移性实体瘤的患者中的安全性、功效、抗肿瘤活性、药物代谢动力学、药物动力学和生物标记物调节中的一种或多种相关的数据。

本文引用的所有参考文献均引入作为参考，其程度如同每个个别的出版物、数据库条目（例如，Genbank序列或GenelD条目）、专利申请或专利被具体和个别地指出引入作为参考一样。根据37 C.F.R. §1.57（b）（1），申请人的引入作为参考的声明意图涉及涉及每个个别的出版物、数据库条目（例如 Genbank序列或GenelD条目）、专利申请或专利，其每一个都明确地依照37 C.F.R. §1.57（b）（2）确定，即使这种引用没有与专用的引入作为参考的声明紧密相邻。在说明书中包括专用的引入作为参考的声明（如果有的话）并不以任何方式削弱引入作为参考的这一一般声明。本文参考文献的引用并不意图承认该参考文献是相关的现有技术，也不构成对这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。

序列表

<110> PFIZER INC.

LONG, HUA

THALL, ARON DAVID

<120> 用于治疗癌症的OX40激动剂和4-1BB激动剂单克隆抗体的组合

<130> PC72275

<160> 31

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

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<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

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<213> 智人（Homo sapiens）

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<211> 9

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1 5

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<210> 8

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<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 8

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<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 9

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Gly

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<213> 智人（Homo sapiens）

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 18

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<213> 智人（Homo sapiens）

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<213> 智人（Homo sapiens）

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<400> 21

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130 135 140

Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro

145 150 155 160

Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala

165 170 175

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180 185 190

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 22

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 23

<211> 17

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 23

Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 24

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 24

Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 25

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 26

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 26

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 27

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 27

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

1 5

<210> 28

<211> 124

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 28

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 106

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 29

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 30

<211> 450

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 30

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu

130 135 140

Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn

195 200 205

Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg

210 215 220

Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 31

<211> 213

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 31

Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

Claims

1.一种治疗个体癌症的方法，包括向所述个体施用包含OX40激动剂和4-1BB激动剂的联合治疗。

2.权利要求1的方法，其中所述OX40激动剂是特异性结合OX40的单克隆抗体，并且包含：

重链可变区（VH），所述重链可变区（VH）包含包含SEQ ID NO 7中所示的氨基酸序列的VH的VH互补性决定区一（CDR1）、VH CDR2和VH CDR3；和

轻链可变区（VL），所述轻链可变区（VL）包含包含SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。

3.权利要求1或2的方法，其中所述4-1BB激动剂是特异性结合4-1BB的单克隆抗体，并且包含：

VH，所述VH包含包含SEQ ID NO：17中所示的氨基酸序列的VH的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3；和

VL，所述VL包含包含SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列的VL的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3。

4.权利要求1-3中任一项的方法，

其中所述OX40单克隆抗体包含包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列的VH CDR1、包含SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的VH CDR2、包含SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列的VHCDR3、包含SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列的VL CDR1、包含SEQ ID NO：5中所示的氨基酸序列的VL CDR2和包含SEQ ID NO：6中所示的氨基酸序列的VL CDR3；且

其中所述4-1BB单克隆抗体包含包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的VH CDR1、包含SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列的VH CDR2、包含SEQ ID NO：13中所示的氨基酸序列的VH CDR3、包含SEQ ID NO：14中所示的氨基酸序列的VL CDR1、包含SEQ ID NO：15中所示的氨基酸序列的VL CDR2和包含SEQ ID NO：16中所示的氨基酸序列的VL CDR3。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中，所述OX40激动剂和所述4-1BB激动剂分开、同时或序贯使用。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述OX40激动剂在与所述4-1BB激动剂分开的时间施用。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中每两周施用所述OX40激动剂，并且每四周施用所述4-1BB激动剂。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述OX40激动剂每两周以选自0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg、0.3 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg和10 mg/kg的剂量施用，且所述4-1BB激动剂每四周以选自1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200和500 mg的固定剂量/受试者施用。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述癌症是实体瘤。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述癌症是黑素瘤、头/颈鳞状细胞癌（HNSCC）、肝细胞癌、肾细胞癌（RCC）、膀胱癌、子宫颈癌、胃癌或非小细胞肺癌（NSCLC）。

13.包含OX40激动剂的药物，用于与4-1BB激动剂组合用于治疗个体中的癌症。

14.权利要求13的药物，

其中所述OX40激动剂是特异性结合OX40的单克隆抗体，并且包含：

15.权利要求13或14的药物，

其中所述4-1BB激动剂是特异性结合4-1BB的单克隆抗体，并且包含：

16.权利要求13-15中任一项的药物，

17.权利要求13-16中任一项的药物，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

18.权利要求13-17中任一项的药物，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

19.包含4-1BB激动剂的药物，用于与OX40激动剂组合用于治疗个体中的癌症。

20.权利要求19的药物，

21.权利要求19或20的药物，

22.权利要求19-21中任一项的药物，

23.权利要求19-22中任一项的药物，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

24.权利要求19-23中任一项的药物，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

25.包含第一容器、第二容器和包装插页的试剂盒，其中所述第一容器包含至少一剂包含OX40激动剂的药物，所述第二容器包含至少一剂包含4-1BB激动剂的药物，并且所述包装插页包含使用所述药物治疗个体癌症的说明书。

26.权利要求25的试剂盒，

27.权利要求25或26的试剂盒，

28.权利要求25-27中任一项的试剂盒，

29.权利要求25-28中任一项的试剂盒，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

30.权利要求25-29中任一项的试剂盒，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

31.包含用于治疗癌症的OX40激动剂的组合物，其中所述OX40激动剂用于与4-1BB激动剂组合分开、序贯或同时使用。

32.权利要求31的组合物，

33.权利要求31或32的组合物，

34.权利要求31-33中任一项的组合物，

35.权利要求31-34中任一项的组合物，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

36.权利要求31-35中任一项的组合物，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

37.包含用于治疗癌症的4-1BB激动剂的组合物，其中所述4-1BB激动剂用于与OX40激动剂组合分开、序贯或同时使用。

38.权利要求37的组合物，

39.权利要求37或38的组合物，

40.权利要求37-39中任一项的组合物，

41.权利要求37-40中任一项的组合物，其中所述OX40单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：9中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列。

42.权利要求37-41中任一项的组合物，其中所述4-1BB单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO：20中所示的氨基酸序列。

43.权利要求1-42中任一项的方法、用于使用的药物、组合物或试剂盒，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、胃癌、透明细胞肾癌、子宫颈癌、头/颈鳞状细胞癌（HNSCC）、肺鳞状细胞癌、恶性黑素瘤、非小细胞肺癌（NSCLC）、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌（RCC）、肝细胞癌、小细胞肺癌（SCLC）、三阴性乳腺癌、非何杰金淋巴瘤（NHL）、弥漫性大B-细胞淋巴瘤（DLBCL）、EBV-阳性DLBCL、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病（ALL）、急性髓细胞样白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、慢性髓细胞样白血病（CML）、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤（MCL）、小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、何杰金淋巴瘤（HL）、多发性骨髓瘤（MM）、髓样细胞白血病-1蛋白（Mcl-1）或骨髓异常增生综合征（MDS）。

44.权利要求1至43中任一项的方法、用于使用的药物、组合物或试剂盒，其中所述OX40激动剂是特异性结合OX40的单克隆抗体，且包含包含SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列的重链可变区（VH）和包含SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列的轻链可变区（VL），且其中所述4-1BB激动剂是特异性结合4-1BB的单克隆抗体，且包含包含SEQ ID NO：17中所示的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列的VL。