CN108456518A - 一种强烈红色荧光的稀土纳米粒子及其制备方法和在细胞成像中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种强烈红色荧光的稀土纳米粒子及其制备方法和在细胞荧光成像中的应用。这种稀土纳米粒子由稀土铕离子、铽离子和碳量子点组成,粒径小于5纳米,发射铕离子的特征荧光。由于利用碳量子点和铽离子的双重能量转移效应,这种稀土纳米粒子无需使用有机配体也能在水溶液中强烈发光,克服了常规含有有机配体的荧光成像材料需要复杂有机合成和水溶性差需要有机溶剂助溶的缺点。该稀土纳米粒子细胞毒性低,具有良好的生物相容性和安全性,能应用于细胞荧光成像。
Description
技术领域
本发明涉及一种稀土纳米粒子材料,具体涉及一种强烈红色荧光的稀土纳米粒子及其制备方法和在细胞成像上的应用,属于发光材料领域。
背景技术
荧光成像技术被广泛应用在生物学、医学诊断学等领域。信号传导分子在细胞内的浓度变化和位置的迁移、药物的转运规律以及作用机制、功能核酸与目标物之间的相互作用等都可通过荧光成像技术进行观察和研究。荧光成像技术的发展对人类健康安全具有重要的意义。
已报道的荧光成像方法有:中国专利公布号CN107200709A,2017年,唐本忠,胡蓉蓉,臧启光,赵祖金,秦安军,一类具有聚集诱导发光性质的荧光化合物及其在细胞荧光成像领域中的应用,公开了一类在溶液状态下几乎不发光或发射弱荧光,但在固态及聚集状态下可获得强荧光发射具有聚集诱导发光性质的荧光化合物。中国专利公布号CN106479495A,2017年,张乐,周天元,陈浩,李正,杨浩,唐定远,沈德元,成像用双波段发光Nd:Y2O3纳米荧光粉体及其制备方法,公开了双波段发光的Nd:Y2O3纳米荧光粉体在808nm波长激发下输出678nm~798nm波段的上转换荧光以及887nm~1066nm波段的下转换荧光。中国专利公布号CN106986818A,2017年,田阳,李婉莹,P-Zn荧光探针、制备方法及在生物成像中的应用,公开了P-Zn荧光探针及其在体内和体外通过双光子荧光成像和荧光寿命成像检测Zn2+中的应用。张改清,薛玫,霍方俊,阴彩霞,颜叙秀,金硕报道了一种荧光素衍生物——硫代异氰酸苯酯荧光素作为检测Hg2+的探针以及在细胞的荧光成像上的应用(高等学校化学学报,2013,09,2090-2096);孙祥鸣,宋月鹏,高东升,李江涛,陈义祥,李永,许令峰,郭晶,谭钺,康田田报道了SiC量子点荧光材料在出芽短梗霉菌活体细胞上的荧光成像(农业工程学报,2012,24,260-264);Yonghe Tang等报道了一种双光子荧光探针并在活体组织中进行成像(Angew.Chem.Int.Edit.,2016,55,3356-3359);Yi Wang等报道了比色比率荧光探针在活细胞中检测SO2衍生物(Chem.Commun.,2015,10236-10239)。
报道的这些稀土荧光材料,稀土离子的发光大多需要有机配体增强,有机配体的制备需要复杂的有机合成反应;这些稀土荧光材料由于含有有机配体,许多难溶于水,应用时需要使用有机溶剂助溶;这些稀土荧光材料大多尺寸大,难以进入到细胞内部用于细胞成像。因此,发展发光强、水溶性好、小尺寸能应用于细胞成像的稀土发光纳米粒子很有必要。
发明内容
发明目的:本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种高发光强度、水溶性的、能用于细胞成像的稀土发光纳米粒子。
本发明要解决的第二个技术问题是提供这种稀土发光纳米粒子的制备方法。
本发明要解决的第三个技术问题是提供这种稀土发光纳米粒子在细胞中成像的应用。
为了解决上述第一个技术问题,本发明采用的技术方案为:以稀土铕离子作为发光离子,使用广谱性光吸收的碳量子点作为铕离子发光的增强配体,为进一步增强铕离子的发光,使用稀土铽离子通过能量转移作用进一步敏化铕离子的发光,获得碳量子点和铽离子双荧光增强的强烈红色发光的稀土发光纳米粒子。这种强烈红色发光的稀土发光纳米粒子是由稀土铕离子(Eu3+)、铽离子(Tb3+)和碳点组成,铕离子和铽离子共掺杂碳点形成的、粒径为2~5纳米的球形纳米粒子,所述的稀土纳米粒子无需使用常规的有机荧光增强配体就能发射强烈的铕离子的特征荧光。
所述稀土纳米粒子是通过铕离子和铽离子共掺杂碳点形成的球形纳米粒子,所述稀土纳米粒子是由铕离子、铽离子和碳点组成,所述球形纳米粒子的粒径为2-5nm。
为了解决上述第二个技术问题,本发明提供了一种强烈红色荧光的稀土纳米粒子的制备方法,以聚乙二醇400为碳源,通过一锅反应生产稀土纳米粒子,具体步骤为:
步骤1,在三颈烧瓶中分别加入聚乙二醇400、硝酸铕固体和硝酸铽固体,构成聚乙二醇400:铕离子:铽离子的摩尔比为55:1-2:1-2.5的混合物;
步骤2,在氩气保护气氛下,混合物加热至100℃后持续搅拌反应30分钟或以上直至固体粉末在溶剂中形成乳状液,6分钟内逐步升温到196℃后停止加热,反应液搅拌下冷却至室温;
步骤3,反应液离心分离,生成的黄色沉淀依次用丙酮和纯水通过离心分离方法洗涤两次,最后在60℃干燥后备用。
为了解决上述第三个技术问题,本发明将强烈红色荧光的稀土纳米粒子在细胞荧光成像中进行应用。以MCF-7细胞为例,具体的应用为:用所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子加入到含有MCF-7细胞(乳腺癌细胞)的培养液中,共培养后,将细胞离心清洗,在荧光显微镜下或激光共聚焦显微镜下观察MCF-7细胞内部呈现红色荧光。
有益效果:相比于现有技术,本发明具备以下优点:1)本发明的稀土纳米粒子使用广谱性光吸收的碳量子点作为铕离子发光的增强配体,避免了常规有机分子增强配体的复杂化学合成,制备方法简单、成本低;2)由于碳量子点和铽离子通过能量转移效应双增强铕离子的发光,本发明的稀土纳米粒子发光强,由于碳点的包埋作用,在水溶液中不易被淬灭,具有非常强的荧光;3)本发明的稀土纳米粒子不使用有机增强配体,具有良好的亲水性、无需使用有机溶剂助溶;4)本发明的稀土纳米粒子粒径不足5nm,具有细胞不识别的小尺寸,无需通过主动运输可直接进入细胞内部;5)本发明的稀土纳米粒子细胞毒性低,具有良好的生物相容性和生物安全性。
附图说明
图1、稀土纳米粒子C:EuTb的透射电镜图;
图2、(1)、(2)、(3)分别为水、1640培养液、含稀土纳米粒子C:EuTb的1640培养液在紫外灯下的荧光图;
图3、稀土纳米粒子C:EuTb的细胞成像图。对照组MCF-7细胞不含稀土纳米粒子C:EuTb,实验组MCF-7细胞含有稀土纳米粒子C:EuTb,图像为荧光视场、明视场以及荧光视场和明视场叠加的视场;
图4、MCF-7细胞与稀土纳米粒子C:EuTb共培养后的存活率柱形图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例,对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1稀土纳米粒子C:EuTb的制备
在三颈烧瓶中分别加入5mL聚乙二醇400液体、0.25mmol硝酸铕固体和0.25mmol硝酸铽固体,构成铕离子:铽离子的摩尔比为55:1:1的混合物。在氩气保护气氛下,将混合物加热至100℃后持续搅拌反应30分钟形成乳状液,6分钟内逐步升温到196℃后停止加热,反应液搅拌下冷却至室温。反应液离心分离,生成的黄色沉淀依次用丙酮和纯水通过离心分离方法洗涤两次,最后在60℃干燥后备用。
图1是制备的稀土纳米粒子C:EuTb的透射电镜图,C:EuTb为直径3~5纳米的球形纳米粒子。C:EuTb的荧光光谱显示C:EuTb主要发射波长在692纳米、617纳米和651纳米,为铕离子的特征荧光。红外光谱显示C:EuTb含有羧基官能图,铕离子和铽离子通过羧基与碳点结合。
实施例2稀土纳米粒子C:EuTb的制备
在三颈烧瓶中分别加入5mL聚乙二醇400液体、0.25mmol硝酸铕固体和0.375mmol硝酸铽固体,构成铕离子:铽离子的摩尔比为55:1:1.5的混合物。在氩气保护气氛下,将混合物加热至100℃后持续搅拌反应40分钟形成乳状液,6分钟内逐步升温到196℃后停止加热,反应液搅拌下冷却至室温。反应液离心分离,生成的黄色沉淀依次用丙酮和纯水通过离心分离方法洗涤两次,最后在60℃干燥后备用。
本实施例制备得到的稀土纳米粒子C:EuTb电镜图和实施例1相似,该C:EuTb为直径为2~4纳米的球形纳米粒子。
实施例3稀土纳米粒子C:EuTb的制备
在三颈烧瓶中分别加入5mL聚乙二醇400液体、0.5mmol硝酸铕固体和0.625mmol硝酸铽固体,构成铕离子:铽离子的摩尔比为55:2:2.5的混合物。在氩气保护气氛下,将混合物加热至100℃后持续搅拌反应50分钟形成乳状液,6分钟内逐步升温到196℃后停止加热,反应液搅拌下冷却至室温。反应液离心分离,生成的黄色沉淀依次用丙酮和纯水通过离心分离方法洗涤两次,最后在60℃干燥后备用。
本实施例制备得到的稀土纳米粒子C:EuTb电镜图和实施例1相似,该C:EuTb为直径为3~5纳米的球形纳米粒子。
实施例4稀土纳米粒子C:EuTb在MCF-7细胞中的荧光成像
将10万个左右的乳腺癌细胞MCF-7与500μL实施例1制备的稀土纳米粒子C:EuTb(100μg·mL-1)置于含有1640细胞培养液的观察皿中共培养,每隔一小时向体系中加入500μL稀土纳米粒子C:EuTb(100μg·mL-1),直至其体系中的累积质量为300μg。样品用磷酸盐缓冲溶液(PBS,0.01M)溶液清洗三次后重新置于500μL的PBS溶液中,可通过荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜观察荧光成像结果。
图2是纯水、1640培养液、含稀土纳米粒子C:EuTb的1640培养液在紫外灯下的荧光颜色对比图。图2显示纯水和1640培养液在紫外灯下均无荧光,含稀土纳米粒子C:EuTb的1640培养液则呈现强烈的红色荧光。图3是对照组和实验组的荧光视场、明视场以及荧光视场和明视场叠加的显微镜视场对比图,图3显示稀土纳米粒子C:EuTb集中分布在MCF-7细胞内部,呈现明显的红色荧光。
为评估稀土纳米粒子C:EuTb的生物安全性,将MCF-7细胞与稀土纳米粒子C:EuTb在含有1640细胞培养液的观察皿中共培养,测定细胞存活率。图4是共培养后的细胞存活率柱形图,图4显示当C:EuTb累积浓度在0~78μg·mL-1时,MCF-7细胞的存活率达到100%,当C:EuTb累积浓度在78~625μg·mL-1时MCF-7细胞的存活率达到95~98%,当稀土纳米粒子C:EuTb累积浓度达到1250μg·mL-1时,MCF-7细胞的存活率依然可以达到90%,稀土纳米粒子C:EuTb具有很好的生物安全性。
同样,实施例2和实施例3制备的稀土纳米粒子C:EuTb应用于细胞成像时具有与图3相似的结果,细胞内部呈现明显的红色荧光。实施例2和实施例3制备的稀土纳米粒子C:EuTb与MCF-7细胞共培养,MCF-7细胞的存活率也与实施例1的结果图4相似,即制备的稀土纳米粒子C:EuTb累积浓度达到1250μg·mL-1,MCF-7细胞的存活率达到90%,实施例2和实施例3制备的稀土纳米粒子C:EuTb具有很好的生物安全性。
因此,稀土纳米粒子C:EuTb具有很好的生物安全性以及明显的成像效果,说明稀土纳米粒子C:EuTb能满足细胞的成像应用。
上述实施例是为了说明本发明所作的举例,而不是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动,这些引伸出的变化或变动也处于本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种强烈红色荧光的稀土纳米粒子,其特征在于,所述稀土纳米粒子是通过铕离子和铽离子共掺杂碳点形成的球形纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子,其特征在于,所述稀土纳米粒子是由铕离子、铽离子和碳点组成。
3.根据权利要求1所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子,其特征在于,所述球形纳米粒子的粒径为2-5nm。
4.一种权利要求1~3任一项所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述纳米粒子以聚乙二醇400为碳源,通过一锅反应生成稀土纳米粒子,具体步骤为:
1)在三颈烧瓶中分别加入聚乙二醇400、硝酸铕和硝酸铽,组成聚乙二醇400:铕离子:铽离子的摩尔比为55:1-2:1-2.5的混合物;
2)在氩气保护气氛下,混合物加热至100℃后持续搅拌反应30分钟或以上直至固体粉末在溶剂中形成乳状液,6 分钟内逐步升温到196℃后停止加热,反应液搅拌下冷却至室温;
3)反应液离心分离,生成的黄色沉淀依次用丙酮和纯水通过离心分离方法洗涤两次,最后在60 ℃干燥后备用。
5.一种权利要求1~3任一项所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子在细胞荧光成像中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,将所述的强烈红色荧光的稀土纳米粒子加入到含有细胞的培养液中,共培养后,将细胞离心清洗,在荧光显微镜下或激光共聚焦显微镜下观察细胞内部呈现红色荧光。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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