CN108451959B - 没食子酰葡萄糖苷类衍生物的应用及用于治疗高尿酸血症的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物或痛风药物中的应用及用于治疗高尿酸血症或痛风的药物组合物。本发明提供了没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症或痛风药物中的应用，以及一种用于治疗高尿酸血症或痛风的药物组合物，该没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐对黄嘌呤氧化酶具有显著的抑制作用，并且能够显著的降低血清中的尿酸水平。
Description
本申请是申请日为2015年6月10日，申请号为2015103139398，发明创造名称为没食子酰葡萄糖苷类衍生物的应用及用于治疗高尿酸血症的药物组合物的分案申请。
技术领域
本发明涉及没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的应用及用于治疗高尿酸血症的药物组合物。
背景技术
痛风是嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄障碍所致血尿酸增高的一组代谢性疾病。临床主要表现为高尿酸血症、痛风性急性关节炎反复发作、痛风性慢性关节炎和痛风石、痛风性肾病以及肾尿酸结石等。目前我国痛风患者超过了7500万人，而且正以每年0.97％的速度增加。痛风已成为继糖尿病后的第二大代谢类疾病，并严重危害着人们的生命和健康。
目前，对血中尿酸的控制是通过两种途径实现的：一是抑制尿酸的生成，黄嘌呤氧化酶是次黄嘌呤转化为黄嘌呤和黄嘌呤转化为尿酸所必需的酶，治疗痛风的一条有效途径是抑制黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)活性，从而抑制尿酸的形成。抑制尿酸生成的药物如别嘌呤醇，非布索坦。二是促进尿酸的排泄，促进尿酸排泄的药物如丙磺舒、苯溴马龙等。但上述药物毒副作用大，例如别嘌呤醇可引发变态反应(发生率10-15％)、超敏综合症(27.5％斑丘疹患者死亡)、骨髓抑制等严重毒副作用，非布索坦易引发肝功能异常及导致心血管系统不良反应；丙磺舒、苯溴马隆具有胃肠道反应、肾绞痛及激发痛风急性发作等副作用，在一定程度上限制了这些药物的临床应用。因此，寻找新型的高效低毒的抗痛风和高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点。
没食子酰葡萄糖化合物是广泛存在于植物中的一类多酚鞣酸类单体化合物，具有多种生物学与药理学活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤等[李惠晨,胡伟,丁井永.五没食子酰基葡萄糖抗肿瘤的作用研究进展[J].现代肿瘤医学,2014,(9).1672-4992.]。有学者[刘又豪,赵力超,卢嘉欣,等.桉叶提取物抑制黄嘌呤氧化酶活性成分的分离纯化及其动力学研究[J].广东农业科学,2014,41(14).100-105.]研究了桉叶中提取得到的五没食子酰葡萄糖的黄嘌呤氧化酶活性抑制效果，IC50为31.75μg/mL，具有一定的抑制效果，但是抑制效果并不显著，并且该研究没有进一步的动物实验数据。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物或痛风药物中的应用及一种用于治疗高尿酸血症或痛风的药物组合物，本发明系统研究了没食子酰葡萄糖苷类衍生物的降尿酸活性效果，并进行动物体内实验，发现该系列化合物中有些化合物的降尿酸活性优于五没食子酰葡萄糖。
为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：
本发明具体涉及没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物或痛风药物中的应用，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物的结构通式为：
其中，R1～R5独立的选自H或者没食子酰基。
优选地，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物为选自化合物(1)至化合物(9)中的任意一种或多种，其中，
化合物(1)的结构式为：(3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(2)的结构式为：(1,4-二-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(3)的结构式为：(1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(4)的结构式为：(1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(5)的结构式为：(1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(6)的结构式为：
(1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(7)的结构式为：(6-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(8)的结构式为：(3,6-二-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖)；
化合物(9)的结构式为：(3,4,6-三-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖)。
进一步优选地，所述的化合物(1)、化合物(2)、化合物(3)均提取自毛诃子。
进一步优选地，所述的化合物(4)、化合物(5)、化合物(6)均提取自白蔹。
进一步优选地，所述的化合物(7)、化合物(8)、化合物(9)的制备方法为：通过将三苄基没食子酰氯和1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖在吡啶的存在下，在50～70℃下反应10～12h，然后在四氢呋喃溶液、氢气和Pd-C的存在下，进行催化还原反应6～8h，反应结束后，经上柱洗脱分别获得6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖、3,6-二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖和3,4,6-三-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖，所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖、3,6-二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖和3,4,6-三-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖分别加入盐酸溶液中，在80～100℃下反应40～60min，冷却、浓缩、干燥后经上柱洗脱分别获得所述的化合物(7)、化合物(8)、化合物(9)，其中，所述的三苄基没食子酰氯和所述的1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖的摩尔比为2～4:1。
进一步优选地，所述的化合物(7)、化合物(8)、化合物(9)的制备方法的具体步骤为：于氯仿溶液中依次加入所述的三苄基没食子酰氯、所述的1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖以及所述的吡啶，在50～70℃下反应10～12h，反应结束后，冷却过滤，滤液浓缩后经水洗、真空干燥得灰白色固体粉末，将所述的灰白色固体粉末溶入所述的四氢呋喃溶液中，通入所述的氢气，加入所述的Pd-C进行催化还原反应，反应结束后，过滤，用四氢呋喃冲洗所述的Pd-C，合并滤液与冲洗液，20～40℃下旋转蒸发干燥得蓝灰色粉末，将所述的蓝灰色粉末溶于丙酮溶液后，采用Sephadex LH-20柱和体积比为8～10:1的乙醇-水体系为洗脱液进行上柱洗脱，分别得到所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖、3,6-二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖和3,4,6-三-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖，分别将所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖、3,6-二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖和3,4,6-三-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖溶于浓度为0.5～1.5mol/L的盐酸溶液中，在80～100℃下反应40～60min，冷却后，于30～40℃旋转蒸发浓缩后再冷冻干燥，冷冻干燥后用Sephadex LH-20柱和体积比为8～10:1的乙醇-水体系为洗脱液进行上柱洗脱，分别获得所述的化合物(7)、化合物(8)、化合物(9)。
进一步优选地，所述的三苄基没食子酰氯的合成方法为：在70～90℃下，向反应器中加入二甲亚砜、无水碳酸钾和没食子酸，然后在N2的保护下，升温至140℃～145℃，按600～700mL/h的速度向所述的反应器中滴加苄基氯，反应5～7h，反应结束后，经冷却、稀释、过滤、干燥得灰色固体，将所述的灰色固体溶于氢氧化钾、体积比为3～5:1的甲醇-水溶液中，经搅拌清洗、过滤、干燥、重结晶得三苄基没食子酰苄酯，然后向所述的三苄基没食子酰苄酯中滴加质量浓度为15～25％的氢氧化钠溶液，所述的氢氧化钠溶液的滴加速度为150～250mL/h，反应50～70min后，冷却，然后调节pH＝2～4，然后经过滤、干燥、重结晶得三苄基没食子酸，然后将所述的三苄基没食子酸溶于氯化亚砜中，回流反应，反应完毕后，经旋转蒸发浓缩、真空干燥、重结晶得所述的三苄基没食子酰氯。
进一步优选地，所述的1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖的合成方法为：以碘为催化剂，在丙酮中加入无水D-葡萄糖，升温至55～57℃，反应1～3h后，冷却，加入质量浓度为1～3％的硫代硫酸钠溶液，然后用氯仿萃取多次，合并萃取液，再用水洗涤萃取液后，采用无水硫酸钠干燥、减压蒸发掉氯仿后经重结晶得1，2:5，6-二-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖，将所述的1，2:5，6-二-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖和氯化铁硅胶试剂混合，然后加入氯仿，TLC监测反应，反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，所得固体用60～90℃石油醚重结晶，得到所述的1,2-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖。
一种用于治疗高尿酸血症或痛风的药物组合物，所述的药物组合物包含没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物的结构通式为：
其中，R1～R5独立的选自H或者没食子酰基。
优选地，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐的质量占所述的药物组合物总质量的12％以上。
进一步优选地，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐的质量占所述的药物组合物总质量的12～18％。
优选地，所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物为选自化合物(1)至化合物(9)中的任意一种或多种，其中，
化合物(1)的结构式为：
化合物(2)的结构式为：
化合物(3)的结构式为：
化合物(4)的结构式为：
化合物(5)的结构式为：
化合物(6)的结构式为：
化合物(7)的结构式为：
化合物(8)的结构式为：
化合物(9)的结构式为：
优选地，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、口服液剂、散剂、滴丸剂、颗粒剂或注射剂。
进一步优选地，所述的药物组合物为片剂时，按重量百分比计，所述的药物组合物的原料配方为：
优选地，所述的药物组合物为胶囊剂，所述的胶囊剂是通过将占所述的药物组合物质量的12～13％的所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐、占所述的药物组合物质量的25～35％的微晶纤维素、占所述的药物组合物质量的0.01～0.03％的抗氧剂、占所述的药物组合物质量的0.5～1.5％的硬脂酸镁混合均匀后，装入胶囊获得。
由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优势：
本发明提供了没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症或痛风药物中的应用，以及一种用于治疗高尿酸血症或痛风的药物组合物，该没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐对黄嘌呤氧化酶具有显著的抑制作用，并且能够显著的降低血清中的尿酸水平。
附图说明
附图1为化合物(7)-(9)的合成路线图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
五没食子酰葡萄糖为质量含量≥98％(HPLC)的市售产品。
毛诃子、白蔹药材采购自亳州药材市场。
其他化学试剂均市购获得。
实施例1：本发明化合物(1)-(3)的提取与表征
取毛诃子药材10kg，粉碎，用水保持微沸的状态下提取两次，每次提取40min。将提取液真空浓缩至3L，浓缩液用正丁醇萃取，将萃取液减压浓缩干燥，正丁醇萃取部位用Diaion HP-20大孔吸附树脂进行柱层析分离，用水、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇为洗脱液进行洗脱。取水及30％乙醇洗脱的洗脱液用反相C18硅胶进行柱层析分离，用5％-35％的乙醇为洗脱液进行洗脱，即可分别得到本发明化合物1，2和3，用HPLC-ESI-MS及NMR检测表征数据如下：
化合物(1)：3-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C13H16O10M-H-:331.21
1H-NMR(acetone-d6,300MHz)δ:3.54-4.51(5H,H-2,4,5,6,6’),4.74(1/3H,d,Hb-1),5.21(2/3H,t,Ha-3),5.30(2/3H,d,Ha-1),5.50(1/3H,t,Hb-3),7.25(2H,s,galloyl)；
13C-NMR(acetone-d6,75MHz)δ:63.7,64.3,70.8,71.9,73.2,73.8,74.0,74.7,76.0,93.4,96.6,110.2,121.3,138.6,145.8,166.9,163,153,77。
化合物(2)：1,4-二-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C20H20O14M-H-:482.1
1H-NMR(CD3OD,400MHz)δ:7.14,7.10(each2H,s,H-2',6'and H-2",6"),5.75(1H,d,H-1),5.04(1H,t,H-4),3.79(1H,t,H-3),3.73(1H,m,H-5),3.65(1H,dd,Ha-6),3.61(1H,dd,H-2),3.54(1H,dd,Hb-6)；
13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:167.6,166.9,146.5,140.4,140.1,121.0,120.5,110.5,110.3,95.8,77.0,76.0,74.3,72.0,62.0。
化合物(3)：1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C27H24O18M-H-:635.3
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:7.15,7.10,7.07(each 2H,s,H-2',6'；H-2",6"；andH-2"',6"'),5.79(1H,d,H-1),5.23(1H,t,H-4),4.44(1H,dd,Ha-6),4.22(1H,dd,Hb-6),4.07(1H,m,H-5),3.84(1H,t,H-3),3.65(1H,dd,H-2)；
13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:166.7,166.1,165.6,145.2,145.2,145.1,139.2,138.8,138.6,119.8,119.6,119.1,109.2,109.0,108.9,94.5,74.7,73.1,72.9,70.5,62.3。
实施例2：本发明化合物(4)-(6)的提取与表征
取白蔹干叶药材5kg，粉碎，用60％乙醇60℃超声提取两次，每次提取40min。将提取液真空浓缩至2L，浓缩液分别用乙醚，乙酸乙酯及正丁醇萃取，将萃取液减压浓缩干燥，乙酸乙酯萃取部位用Diaion HP-20大孔吸附树脂进行柱层析分离，用水、30％乙醇、70％乙醇、95％乙醇为洗脱液进行洗脱。取30％及70％乙醇洗脱部位用反相C18硅胶进行柱层析分离，用20-70％的乙醇为洗脱液进行洗脱，即可分别得到本发明化合物(4)，(5)和(6)，用HPLC-ESI-MS及NMR检测表征数据如下：
化合物(4)：1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C27H24O18M-H-:635.1
1H-NMR(acetone-d6,400MHz)δ:5.94(1H,d,H-1),5.26(1H,dd,H-2),4.01(1H,t,H-3),3.69(1H,t,H-4),3.95(1H,m,H-5),4.63(1H,dd,Ha-6),4.42(1H,dd,Hb-6)；
13C-NMR(acetone-d6,100MHz)δ:120.0,120.7,121.0,109.7,109.9,110.0,145.9,146.0,138.7,139.0,139.5,165.5,166.7,167.0,93.5,73.8,75.0,70.9,75.8,64.0。
化合物(5)：1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C34H28O22M-H-:787.2
1H-NMR(acetone-d6,400MHz)δ:6.15(1H,d,H-1),5.46(1H,dd,H-2),5.69(1H,t,H-3),4.08(1H,t,H-4),4.16(1H,ddd,H-5),4.66(1H,ddd,Ha-6),4.52(1H,dd,Hb-6)；
13C-NMR(acetone-d6,100MHz)δ:119.7,120.1,121.0,121.5,109.6,109.9,110.2,145.7,146.0,138.8,139.2,139.8,165.1,166.5,166.8,167.0,93.4,71.7,75.8,69.3,76.2,63.9。
化合物(6)：1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖C34H28O22M-H-:787.1
1H-NMR(acetone-d6,400MHz)δ:6.13(1H,d,H-1),5.48(1H,dd,H-2),4.42(1H,t,H-3),5.45(1H,t,H-4),4.35(1H,ddd,H-5),4.59(1H,dd,Ha-6),4.29(1H,dd,Hb-6)；
13C-NMR(acetone-d6,100MHz)δ:119.5,120.4,121.1,119.8,110.2,145.8,146.0,138.8,139.8,139.2,165.0,166.0,166.2,166.5,93.2,73.8,73.3,71.5,74.2,63.0。
实施例3：本发明化合物(7)-(9)的合成与表征
本发明化合物(7)-(9)采用如图1所示的合成路线合成。
具体操作如下:
一：1,2-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖的合成
以碘(11g)为催化剂，在2000ml丙酮中加入无水D-葡萄糖40.0g，搅拌，升温至56±1℃，持续反应2h后，冷却，于反应液中加入2％(w/w)硫代硫酸钠溶液2000ml，反应液由黄色变为无色，分别用1000ml氯仿萃取3次，合并萃取液，再用水洗涤萃取液，无水硫酸钠干燥，减压蒸发掉氯仿得粗品，于苯:石油醚(1:1，V/V)中重结晶得无色针状晶体1，2:5，6-二-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖41g，产率72％。取1，2:5，6-二-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖25g和氯化铁硅胶试剂2g混合，加入400mL氯仿中，室温搅拌1h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，所得固体用60-90℃石油醚重结晶，得到1,2-O-异丙叉-D-呋喃葡萄糖18.4g，得率84％
二：三苄基没食子酰氯的合成
在80℃，搅拌下，往三颈瓶中先后加入二甲亚砜(1000ml)、无水碳酸钾(800g)和没食子酸(200g，已干燥到恒重)，加料完毕后溶液呈淡红色。N2保护，快速升温至140℃-145℃，于1.5h内滴加完1000ml苄基氯，持续反应6h。反应结束后，自然冷却，倾入2000ml冷水中稀释，过滤，干燥得灰色固体500g。溶于4000ml氢氧化钾(50.0g)、甲醇-水(4:1，V/V)溶液中，搅拌清洗3h，过滤，干燥，重结晶(60℃-90℃石油醚中)得无色针状晶体三苄基没食子酰苄酯370.1g，产率58％。取150g三苄基没食子酰苄酯，于1h内滴加完20％(g/g)氢氧化钠溶液200ml，水浴上持续反应1h，冷却，加水稀释后用稀盐酸中和至溶液pH＝3，此时溶液中出现大量淡黄色沉淀，过滤，干燥，重结晶(苯:石油醚＝1:1，V/V)得白色针状晶体三苄基没食子酸(8b，R＝OH)112.2g，产率90.1％，将该酸溶于500ml氯化亚砜中，溶液呈淡红色，回流持续反应，反应完毕溶液颜色加深，旋转蒸发浓缩，真空干燥，重结晶((苯:石油醚＝1:1，V/V))得无色针状晶体三苄基没食子酰氯104.1g，产率95％。
三：化合物(7)-(9)的合成
于600ml氯仿溶液中先后加入68g(150mmol)三苄基没食子酰氯，11g(50mmol)，1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖以及吡啶60ml，在60℃持续反应11h，在此过程中逐步有吡啶-盐酸絮状沉淀物析出。冷却过滤，滤液浓缩后经水洗、真空干燥得灰白色固体粉末，将粉末溶入500ml四氢呋喃溶液中，通入氢气，加入3.0g Pd-C(10％)进行催化还原反应。常温下7h后氢吸收停止，过滤，用少许四氢呋喃冲洗Pd-C，合并滤液与冲洗液，30℃下旋转蒸发干燥得蓝灰色粉末26g。将该粉末溶于少量丙酮溶液后上柱(Sephadex LH-20)，乙醇-水体系(9∶1，V/V)为洗脱液，分别得到6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖，3,6-二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖和3,4,6-三-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉)-D-呋喃葡萄糖。分别将这三种化合物溶于200mL浓度为1mol/L的盐酸溶液中，升温至90℃，持续反应50min。冷却，于35℃旋转蒸发浓缩后再冷冻干燥，所获样品用Sephadex LH-20柱色谱分离纯化(乙醇-水体系(9∶1，V/V)为洗脱液)，可得化合物(7)-(9)。用HPLC–ESI-MS及NMR检测表征数据如下：
化合物(7)：6-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖C13H16O10M-H-:331.1
1H-NMR(CD3COCD3-D2O,400MHz)δ:3.12-4.41(4H,H-2,3,4,5),4.50-4.63(2H,m,H-6,6’),4.86(2/5H,d,Hb-1),5.20(3/5H,d,Ha-1),7.13(2H,s,galloyl)；
13C-NMR(CD3COCD3-D2O,100MHz)δ:64.5,70.2,70.9,71.1,73.0,74.1,74.5,75.5,77.0,93.2,96.9,109.7,121.0,138.7,145.6,167.1。
化合物(8)：3,6-二-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖C20H20O14M-H-:483.2
1H-NMR(CD3COCD3-D2O,400MHz)δ:3.45(2/5H,dd,Hb-2),3.61(3/5H,dd,Ha-2),3.63-4.28(2H,m,H-4,5),4.4-4.73(2H,m,H-6,6’),4.77(2/5H,d,Hb-1),5.22(3/5H,d,Ha-1),5.25-5.34(1H,m,H-3),7.15-7.16(4H,m,galloyl)；
13C-NMR(CD3COCD3-D2O,100MHz)δ:63.9,70.7,71.0,72.9,73.3,74.0,75.8,93.0,96.3,110.0,110.2,121.3,121.5,138.2,138.5,145.8,166.6,166.9。
化合物(9)：3,4,6-三-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖C27H24O18M-H-:635.2
1H-NMR(CD3COCD3-D2O,400MHz)δ:3.57(2/5H,dd,Hb-2),3.69(3/5H,dd,Ha-2),4.39-4.76(3H,m,H-5,6,6’),4.84(2/5H,d,Hb-1),5.43(3/5H,d,Ha-1),5.48-5.60(1H,m,H-4),5.62(2/5H,t,Hb-3),5.75(3/5H,dd,Ha-3),7.05-7.21(6H,galloyl)；
13C-NMR(CD3COCD3-D2O,100MHz)δ:63.1,71.5,72.4,72.6,73.3,73.6,75.0,75.4,76.0,93.1,95.5,110.1,110.3,120.7,121.5,121.9,138.2,138.6,138.8,145.9,165.5,165.9,166.6。
实施例4：本发明所述药物组合物片剂
【处方】
称取处方量的化合物3、淀粉和L-HPC，混合，过60目筛三次，混合均匀；加入10％的淀粉浆适量制软材，制粒，干燥，整粒后，加入微粉硅胶、硬脂酸镁混合均匀，压片，包薄膜衣，即得。
实施例5：本发明所述药物组合物胶囊剂
【处方】
称取处方量的化合物7和上述辅料，过60目筛三次，混合均匀，装入胶囊即得。
实验例
实验例1：没食子酰葡萄糖苷衍生物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用
为评价受试组合物对黄嘌呤氧化酶的影响，以100％非布司他为阳性对照组，以化合物(1)-(9)以及五没食子酰葡萄糖为样品组进行考察，具体方法如下：
磷酸盐缓冲溶液：称取19.48g的K2HPO4·3H2O和1.99g的KH2PO4溶于500mL蒸馏水中，配成浓度为0.2mmol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.5)；
黄嘌呤底物溶液：称取黄嘌呤15.2mg，溶解于250mL蒸馏水中，配成浓度为0.4mmol/L的黄嘌呤底物溶液；
黄嘌呤氧化酶溶液：取黄嘌呤氧化酶5U，用上述磷酸盐缓冲溶液稀释至160mL，配成浓度为80U/L的黄嘌呤氧化酶溶液，4℃保存；
样品和阳性对照溶液：精密称取样品组、非布司他(作为阳性对照)，分别用二甲亚砜溶解、蒸馏水稀释，配成浓度为0.01μmol/L-2μmol/L的不同浓度的溶液进行测试(其中二甲亚砜的最终浓度小于1％)。
抑制作用测试：
样品组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、样品溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，涡旋震荡5秒后置于25℃水浴锅中反应5分钟，反应完毕后加入1.5mL无水乙醇，涡旋震荡5秒终止反应。反应液经3500rpm离心5分钟，吸取200μL到1.5mL离心管中，用生化分析仪分别检测每个样品的UA值，每个样品平行操作三次取平均值。
空白对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、磷酸盐缓冲溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测空白对照组的UA值，平行操作三次取平均值。
阳性对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、阳性对照溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测阳性对照组的UA值，平行操作三次取平均值。
测试结果
根据黄嘌呤氧化酶抑制率＝[(空白对照组UA值－样品组UA值)/空白对照组UA值]*100，计算抑制率；酶促反应中的药物浓度C＝C0*0.1/3.1(C0为样品溶液浓度)；将药物浓度与抑制率进行回归，得回归方程；根据回归方程计算抑制率为50％时的C值，即半数抑制浓度IC50，结果如表1所示：
表1为化合物(1)-(9)对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用的实验结果(IC50，μmol/L)。
表1
| 受试化合物 | IC50 |
| 化合物(1) | 0.236 |
| 化合物(2) | 0.058 |
| 化合物(3) | 0.077 |
| 化合物(4) | 0.063 |
| 化合物(5) | 0.295 |
| 化合物(6) | 0.309 |
| 化合物(7) | 0.072 |
| 化合物(8) | 0.059 |
| 化合物(9) | 0.122 |
| 五没食子酰葡萄糖 | 0.345 |
| 阳性对照(非布司他) | 0.060 |
由表1结果可知，本发明没食子酰葡萄糖苷衍生物均具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制作用，效果优于五没食子酰葡萄糖，其中化合物(2)，(3)，(4)，(7)，(8)抑制活性较好，且化合物(2)，(4)，(7)，(8)活性很高，与阳性对照非布司他的黄嘌呤氧化酶抑制作用相当。
实验例2：没食子酰葡萄糖苷衍生物对降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平的影响
本实验例通过动物实验验证组合物对高尿酸血症小鼠的影响，以100％非布司他为阳性对照组，以化合物(2)，(3)，(4)，(7)，(8)及五没食子酰葡萄糖作为样品组来考察。健康雄性KM小鼠100只，体重为15-18g，由上海灵畅生物科技有限公司提供；按每笼5只进行分笼处理后，在公司的屏障系统内适应性饲养4天，从100只小鼠中选取体重集中的90只小鼠按体重随机平均分为9组，每组10只，分别为空白对照组，高尿酸血症模型组，阳性对照组，受试样品组。
高尿酸血症的造模
适应期过后随即对小鼠进行灌胃给药，每天上午灌胃1次，其中受试化合物，用纯水进行混悬，按照10.0mg/kg进行灌胃；阳性对照非布司他用纯水进行混悬，按照2.0mg/kg进行灌胃；空白对照组和高尿酸血症模型组均用纯水灌胃进行对照，连续灌胃7天。
在第7天上午灌胃0.5小时后对小鼠进行腹腔注射造模，其中空白对照组腹腔注射0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液；高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试样品组注射氧嗪酸钾(OA)，用CMC-Na溶液进行溶解，注射量均为300mg/kg体重。
腹腔注射1.5小时后摘除小鼠的眼球进行采血，采血容量不低于0.5mL，血样采集后于室温放置约1小时，待血液完全凝固后于3500rpm/4℃条件下离心10分钟，取血清在同等条件下复离5分钟，而后取0.2mL血清使用生化分析仪检测UA值。
用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和SD，经单因素方差分析后比较各实验组的组间差异，与空白对照组相比，高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组小鼠的血清尿酸水平显著提高，有显著性差异，表明造模成功。
结果如表2所示，表2为没食子酰葡萄糖衍生物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响的实验结果(μmol/L)。
表2
注：###表示和空白对照组相比P<0.001；*表示和模型组相比P<0.05；**表示和模型组相比P<0.01；***表示和模型组相比P<0.001。
从表2结果看出，受试化合物与高尿酸血症模型组相比，均具有显著性差异，说明化合物(2)，(3)，(4)，(7)，(8)均具有一定的降尿酸效果，效果优于五没食子酰葡萄糖，且其中化合物(3)和(4)效果较强，在该剂量条件下，降尿酸效果与阳性药非布司他相当。
以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物或痛风药物中的应用，其特征在于：所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物为化合物（7）和/或化合物（8），其中，
化合物（7）的结构式为：
；
化合物（8）的结构式为：
。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的化合物（7）、化合物（8）的制备方法为：通过将三苄基没食子酰氯和1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖在吡啶的存在下，在50~70℃下反应10~12h，然后在四氢呋喃溶液、氢气和Pd-C的存在下，进行催化还原反应6~8h，反应结束后，经上柱洗脱分别获得6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖、3,6- 二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖，所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖、3,6- 二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖分别加入盐酸溶液中，在80~100℃下反应40~60min，冷却、浓缩、干燥后经上柱洗脱分别获得所述的化合物（7）、化合物（8），其中，所述的三苄基没食子酰氯和所述的1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖的摩尔比为2~4:1。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的化合物（7）、化合物（8）的制备方法的具体步骤为：于氯仿溶液中依次加入所述的三苄基没食子酰氯、所述的 1,2-O-异丙叉-α-D-呋喃葡萄糖以及所述的吡啶，在50~70℃下反应10~12h，反应结束后，冷却过滤，滤液浓缩后经水洗、真空干燥得灰白色固体粉末，将所述的灰白色固体粉末溶入所述的四氢呋喃溶液中，通入所述的氢气，加入所述的Pd-C进行催化还原反应，反应结束后，过滤，用四氢呋喃冲洗所述的Pd-C，合并滤液与冲洗液，20~40℃下旋转蒸发干燥得蓝灰色粉末，将所述的蓝灰色粉末溶于丙酮溶液后，采用Sephadex LH-20柱和体积比为8~10:1的乙醇-水体系为洗脱液进行上柱洗脱，分别得到所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖、3,6- 二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖，分别将所述的6-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖、3,6- 二-O-没食子酰-(1,2-O-异丙叉) -D-呋喃葡萄糖溶于浓度为0.5~1.5mol/L的盐酸溶液中，在80~100℃下反应40~60min，冷却后，于30~40℃旋转蒸发浓缩后再冷冻干燥，冷冻干燥后用Sephadex LH-20柱和体积比为8~10:1的乙醇-水体系为洗脱液进行上柱洗脱，分别获得所述的化合物（7）、化合物（8）。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐的质量占所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物的总质量的12%以上。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物为片剂、胶囊剂、口服液剂、散剂、滴丸剂、颗粒剂或注射剂。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：当所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物为片剂时，按重量百分比计，所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物的原料配方为：
所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐 13~18%；
淀粉 15~18%；
羟丙基纤维素 2~4%；
微粉硅胶 2~2.5%；
硬脂酸镁 0.5~1%；
质量浓度为8~12%的淀粉浆 10~20%；
乳糖 30~57.5%。
7.根据权利要求1所述的的应用，其特征在于：当所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物为胶囊剂时，所述的胶囊剂是通过将占所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物质量的12~13%的所述的没食子酰葡萄糖苷类衍生物及其药学上可接受的盐、占所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物质量的25~35%的微晶纤维素、占所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物质量的0.01~0.03%的抗氧剂、占所述的治疗高尿酸血症药物或痛风药物质量的0.5~1.5%的硬脂酸镁混合均匀后，装入胶囊获得。
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