CN108450169B - 一种提高山茶花嫁接成活率的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物嫁接繁殖技术领域，公开了一种提高山茶花嫁接成活率的方法，其包括如下步骤：步骤1）配置生物刺激剂，步骤2）砧木处理，步骤3）接穗处理，步骤4）嫁接，步骤5）后处理。本发明采用普通油茶作为砧木，对名贵的云南红茶进行嫁接，采用高效生物刺激剂，提高了云南红茶的成活率，穗条生长量以及侧芽抽稍数量也明显提高。

Description

一种提高山茶花嫁接成活率的方法

技术领域

本发明属于植物嫁接繁殖技术领域，具体涉及一种提高山茶花嫁接成活率的方法。

背景技术

嫁接指将植物优良品种的芽和枝条转接到另一个植株体的茎和根上，并使之愈合形成新的独立植株的技术，是园艺作物育苗和生产过程中广泛应用的一种技术。嫁接成活的生物学原理是砧穗削面的表面，由死细胞的残留物形成一层褐色的隔膜，之后因愈伤组织的作用，使伤口周围的细胞分裂，形成层细胞活跃，冲破隔膜形成愈伤组织，愈伤组织细胞进一步分化，向内形成新的木质部，向外形成新的韧皮部，将砧穗各自的木质部导管和韧皮部筛管沟通起来，使输导组织联通。随着外部新的栓皮细胞形成与两者栓皮细胞相连，最终愈合成为一新植株。

山茶是我国传统名花，因其植株形姿优美，叶为浓绿而光泽，花形艳丽缤纷，而受到世界园艺界的珍视。近年来国内的山茶品种不断推陈出新，多季茶花新品种的出现标志着我国的山茶育种达到了国际的领先水平。然而山茶种质花大色艳而备受人们喜爱资源开发利用进程缓慢，种质资源产品化少，主要受制于繁殖技术的约束。嫁接是山茶无性繁殖的常用方法，传统的茶花嫁接大多采用生长激素浸泡。生长激素是一种外源性的非营养性化学物质，其通常可在植物体内传导至作用部位，以较低的浓度就能促进或抑制植物生命过程中的某些环节，使之向符合人类需要的意愿发展。嫁接中使用的植物激素，例如细胞分裂素、激动素以及各种长激素等。嫁接之前，一般会将砧穗浸泡于植物生长刺激剂中，用于能够提高愈伤组织活力，促进愈伤组织生长，促进接芽萌动，提高接穗的叶绿素含量，增强光合作用，加速生长等功能。

中国专利“201710737138，提高山茶花成活率的嫁接方法”采用吲哚丁酸、萘乙酸以及维C混合而成的药剂能帮助砧木和接穗的伤口组织尽快愈合，从而提高接穗成活率，嫁接成活率达到93.6%以上，然而不同的山茶花品种嫁接方式以及成活率相差很大，该方法没有公开具体类型，申请人通过实验发现，利用上述方法红山茶可达到90%左右的成活率，但是对于部分云南山茶花，成活率仅为50-80%之间，童子面等较难嫁接存活的品种，成活率不足50%；针对嫁接后的植物伤口愈合速度缓慢且嫁接苗的成活率较低的缺陷，中国发明专利“2017104980905，一种提高茶花嫁接成活率的方法”使用固态琼脂涂覆于嫁接处形成琼脂层，可以促进保湿和营养吸收，但是增加了细菌感染的风险。

发明内容

针对现有技术提出的技术问题，本发明提供了一种提高山茶花嫁接成活率的方法，该方法通过使用新型植物刺激剂，能够提高嫁接成活率，穗条生长量以及侧芽抽稍数量也明显提高。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种提高山茶花嫁接成活率的方法，其包括如下步骤：步骤1）配置生物刺激剂，步骤2）砧木处理，步骤3）接穗处理，步骤4）嫁接，步骤5）后处理。

进一步地，

所述方法包括如下步骤：

步骤1）配置生物刺激剂：将厚孢镰刀菌种子液和枝状枝孢菌种子液依次接入到MS培养基中，接种量分别为3-5%和4-7%，然后加入50-100mg/L的6-BA、40-70mg/L的NAA以及30-50mg/L的DA-6,在温度为28-30℃的条件下，100rpm搅拌3-6小时，即得；

步骤2）砧木处理：选择5年以上普通油茶作砧木，采用当年萌发的新枝条，含水量充足，进行修剪，去除病虫害；选择生长健壮的主枝3-4个，锯断砧木，然后进行消毒处理，隔天后进行嫁接，嫁接时间选择5月底；

步骤3）接穗处理：剪取云南山茶树冠中上部外围、发育健壮、腋芽饱满、无病害的当年生新稍作为接穗，接穗上保留1-2片叶，然后浸入到步骤1）的生物刺激剂中，浸入时间为10-100min；

步骤4）嫁接：取出接穗，采用切接法进行嫁接；

步骤5）后处理：塑料绳捆绑接口，然后套上保鲜袋密封保湿，再利用废纸包扎即可。

优选地，

所述厚孢镰刀菌种子液的制备方法包括如下步骤：

将厚孢镰刀菌划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到种子培养基上培养，30℃培养24h，得到厚孢镰刀菌种子液，待用。

优选地，

所述种子培养基的配方为：葡萄糖10g/L、酵母膏6g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.01g/L、硫酸亚铁0.01g/L。

优选地，

所述枝状枝孢菌种子液的制备方法包括如下步骤：将枝状枝孢菌接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基上培养，30℃培养24h，得到枝状枝孢菌种子液，待用。

优选地，

所述厚孢镰刀菌为ATCC76222；所述枝状枝孢菌为 ATCC34010。

优选地，

所述浸入时间为30-60min。

与现有技术相比，本发明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下几个方面：

本发明采用普通油茶作为砧木，对名贵的云南红茶进行嫁接，利用高效生物刺激剂浸泡，提高了云南红茶的成活率，穗条生长量以及侧芽抽稍数量也明显提高，嫁接成活以后生长快，嫁接繁殖出的多品种、花形花色多样、花期长的茶花大树。实生的云南山茶一般需要8年生以上才能开花，但嫁接植株2-3年就开花，这不但丰富了种质基因资源, 大大提高了它的适应性和生长，还缩短了育种周期，提早开花，获得了显著的经济效益和社会效益。

本发明采用生物刺激剂对接穗进行浸泡处理，能够显著提高愈伤组织活力，促进愈伤组织生长，促进接芽萌动，提高接穗的成活率；微生物和植物激素具备协同效果，能够提高接穗成活率，穗条生长量以及侧芽抽稍数量均明显提高。

本发明生物刺激剂通过选择特定的微生物，其与植物组织形成共生，能够建立良好的生态平衡，产生促进植物生长的物质，如赤霉素、植物生长素、细胞激动素等，还可以提高植物吸收营养元素，同时能够和病原菌竞争营养与空间，从而能够促进植物的生长。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

实施例1

一种提高山茶花嫁接成活率的方法，其包括如下步骤：

配置生物刺激剂：将厚孢镰刀菌划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到种子培养基上培养，30℃培养24h，得到厚孢镰刀菌种子液，待用；所述种子培养基的配方为：葡萄糖10g/L、酵母膏6g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.01g/L、硫酸亚铁0.01g/L；

将枝状枝孢菌接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基上培养，30℃培养24h，得到枝状枝孢菌种子液，待用；

将厚孢镰刀菌种子液和枝状枝孢菌种子液依次接入到MS培养基中，接种量分别为3%和5%，然后加入50mg/L的6-BA、70mg/L的NAA以及50mg/L的DA-6,在温度为28℃的条件下，100rpm搅拌3小时，即得。

所述厚孢镰刀菌为ATCC76222；所述枝状枝孢菌为 ATCC34010。

砧木处理：选择5年以上普通油茶作砧木，采用当年萌发的新枝条，含水量充足，进行修剪，去除病虫害和施肥；选择生长健壮的主枝3-4个，在离地面100cm左右锯断砧木，然后进行消毒处理，隔天后进行嫁接，嫁接时间选择5月底；

接穗处理：剪取云南山茶“品红”树冠中上部外围、发育健壮、腋芽饱满、无病害的当年生新稍作为接穗，接穗上保留1-2片叶，然后浸入到生物刺激剂中30min；

嫁接：取出接穗，采用切接法进行嫁接，每株嫁接砧分布为3-4个，每枝砧木接4个接穗，

后处理：塑料绳捆绑接口，然后套上保鲜袋密封保湿，再利用废纸包扎即可。30天左右，嫁接处愈合抽稍，新稍由红变绿，代表嫁接成功，10月下旬计算穗条生长量以及侧芽抽稍数量。

实施例2

一种提高山茶花嫁接成活率的方法，其包括如下步骤：

配置生物刺激剂：将厚孢镰刀菌划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到种子培养基上培养，30℃培养24h，得到厚孢镰刀菌种子液，待用；所述种子培养基的配方为：葡萄糖10g/L、酵母膏6g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.01g/L、硫酸亚铁0.01g/L；

将枝状枝孢菌接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基上培养，30℃培养24h，得到枝状枝孢菌种子液，待用；

将厚孢镰刀菌种子液和枝状枝孢菌种子液依次接入到MS培养基中，接种量分别为4%和7%，然后加入100mg/L的6-BA、60mg/L的NAA以及40mg/L的DA-6,在温度为30℃的条件下，100rpm搅拌6小时，即得。

所述厚孢镰刀菌为ATCC76222；所述枝状枝孢菌为 ATCC34010。

砧木处理：选择5年以上普通油茶作砧木，采用当年萌发的新枝条，含水量充足，进行修剪，去除病虫害和施肥；选择生长健壮的主枝3-4个，在离地面100cm左右锯断砧木，然后进行消毒处理，隔天后进行嫁接，嫁接时间选择5月底；

接穗处理：剪取云南山茶“凤山茶”树冠中上部外围、发育健壮、腋芽饱满、无病害的当年生新稍作为接穗，接穗上保留1-2片叶，然后浸入到生物刺激剂中40min；

嫁接：取出接穗，采用切接法进行嫁接，每株嫁接砧分布为3-4个，每枝砧木接4个接穗，

后处理：塑料绳捆绑接口，然后套上保鲜袋密封保湿，再利用废纸包扎即可。30天左右，嫁接处愈合抽稍，新稍由红变绿，代表嫁接成功，10月下旬计算穗条生长量以及侧芽抽稍数量。选择10株进行统计，其中，嫁接成功率为97.8%，穗条生长量为4.8cm，侧芽抽稍个数为2.2。

实施例3

以实施例1为例，检测了生物刺激剂对嫁接的影响：

采用多因子试验，选择不同的组别进行测试，具体分类见表1：

表1

因素	组1（实施例1）	组2	组3	组4	组5
						厚孢镰刀菌种子液	＋	－	＋	＋	－
枝状枝孢菌种子液	＋	＋	－	＋	－
						6-BA+ NAA+DA-6	＋	＋	＋	－	＋

根据表1共设置五个组，分为五块试验田，其余处理方式同实施例1。从每块试验田中随机抽取10株作为测试对象，计算平均指标。各组别接穗成活率、穗条生长量以及侧芽抽稍数量统计结果见表2：

表2

组别	接穗成活率%	穗条生长量cm	侧芽抽稍数量（个数）
				组1	98.4	5.3	2.7
组2	87.2	5.2	2.3
				组3	85.4	4.9	2.4
组4	61.5	4.7	2.0
				组5	77.6	5.0	2.3

结论：表2对生物刺激剂中微生物和植物激素的作用进行了验证，由上表2可以看出，组1采用两种微生物和多种植物激素的组合刺激剂，接穗成活率最高，较组5（仅采用植物激素）提高了20.8％，较组2和组3（采用单一的微生物和植物激素组合）分别提高了11.2%、13%；仅采用两种微生物的组4成活率最低，其次是仅采用植物激素的组5；通过观察另外两个重要指标（穗条生长量和侧芽抽稍数量），得到了同样的趋势，即，组1的穗条生长量以及侧芽抽稍数量均高于其他组别，与近采用植物生长激素对照组5相比，穗条生长量提高了0.3cm，侧芽抽稍数量提高了0.4，与仅采用微生物的组4相比，穗条生长量提高了0.6cm，侧芽抽稍数量提高了0.7。通过上述结果可知，在常用的植物激素中添加特定的微生物可以提高接穗成活率，提升穗条生长量以及侧芽抽稍数量；本发明选择的两种微生物与植物组织能够形成共生，建立良好的生态平衡，产生促进植物生长的物质，如赤霉素、植物生长素、细胞激动素等等，还可以提高植物吸收P、N 等营养元素，同时能够和病原菌竞争营养与空间，从而能够促进植物的生长。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，或在实施案例之外的树种实施本方法，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改，改进或范围的扩大，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种提高山茶花嫁接成活率的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1）配置生物刺激剂：将厚孢镰刀菌种子液和枝状枝孢菌种子液依次接种到MS培养基中，接种量分别为3-5%和4-7%，然后加入50-100mg/L的6-BA、40-70mg/L的NAA以及30-50mg/L的DA-6，在温度为28-30℃的条件下，100rpm搅拌3-6小时，即得；

步骤2）砧木处理：选择5年以上普通油茶作砧木，采用当年萌发的新枝条，含水量充足，进行修剪，去除病虫害；选择生长健壮的主枝3-4个，锯断砧木，然后进行消毒处理，隔天后进行嫁接，嫁接时间选择5月底；

步骤3）接穗处理：剪取云南山茶树冠中上部外围、发育健壮、腋芽饱满、无病害的当年生新稍作为接穗，接穗上保留1-2片叶，然后浸入到步骤1）的生物刺激剂中，浸入时间为10-100min；

步骤4）嫁接：取出接穗，采用切接法进行嫁接；

步骤5）后处理：塑料绳捆绑接口，然后套上保鲜袋密封保湿，再利用废纸包扎即可。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述厚孢镰刀菌种子液的制备方法包括如下步骤：

将厚孢镰刀菌划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到种子培养基上培养，30℃培养24h，得到厚孢镰刀菌种子液，待用。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为：葡萄糖10g/L、酵母膏6g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.01g/L、硫酸亚铁0.01g/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述枝状枝孢菌种子液的制备方法包括如下步骤：将枝状枝孢菌接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基上培养，30℃培养24h，得到枝状枝孢菌种子液，待用。

5.根据权利要求2-4任其一所述的方法，其特征在于，所述厚孢镰刀菌为ATCC76222；所述枝状枝孢菌为 ATCC34010。

6.根据权利要求2-4任其一所述的方法，其特征在于，所述浸入时间为30-60min。