CN108434011A - 一种洗手液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种通过提高具有碱性的表面活性剂的量来提升洗手液pH进而对手足口病毒有抑制作用的洗手液及其制备方法和应用。该洗手液以重量百分比计，包括以下组分：水溶性基质：0.5％～3％；碱性表面活性剂：5％～50％；甘油：1％～4％；丙二醇：1％～3％；香精：0.1％～1％；以及余量的去离子水本发明制作的洗手液对手足口病病毒有显著的抑制作用，并且符合洗手液对酸碱性的要求，制作简单，效果明显。

Description

一种洗手液及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种洗手液，更具体地，涉及一种洗手液及其制备方法和应用。

背景技术

人手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒感染引起的急性传染病，在我国以肠道病毒71型(EV 71)最为常见。手足口病分布于全球，且近年来发病率呈上升趋势，可散发或流行发病，发病季节多在夏季，五岁以下儿童发病率最高，年长儿及成人也可被传染。起病时出现发热症状，口腔粘膜出现散在疱疹，手足和臀部出现斑丘疹、疱疹，疱疹周围可有炎性红晕，疱内液体较少。并伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。少数病例，特别是EV71感染患儿，可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、神经源、性肺水肿、循环障碍等，病情凶险，可致死亡或留有后遗症。

我国是手足口病的高发区域，患者基数较大，严重影响儿童的身体健康。现今市场上有众多消毒抑菌类洗手液，但是并没有专门针对手足口病的洗手类产品。鉴于引起手足口病的主要致病原因在于手足口病毒(主要为EV71以及柯萨奇A16(CoA16))这一特点，发现促使手足口病毒体外崩解从而失去入侵宿主能力的条件和方法成为研究防治手足病产品的研究热点。

发明内容

针对现有技术中针对手足口病的洗手类产品匮乏的缺陷，根据本发明的一个方面，提供了一种洗手液，以重量百分比计，包括以下组分：水溶性基质：0.5％～3％；碱性表面活性剂：5％～50％；甘油：1％～4％；丙二醇：1％～3％；香精：0.1％～1％；以及余量的去离子水。

在上述洗手液中，所述水溶性基质为纤维素衍生物。

在上述洗手液中，所述纤维素衍生物选自羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素或羟丙基甲基纤维素中的一种或多种。

在上述洗手液中，所述碱性表面活性剂包括烷基糖苷(APG1200)、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、椰油酸单乙醇酰胺(CMEA)、椰油酸二乙醇酰胺(6501)、脂肪酸钾皂(SFP)或十二烷基硫酸钠(SDS)中的一种或多种。

在上述洗手液中，所述洗手液的pH介于7～10之间。

根据本发明的另一方面，还提供了所述洗手液在灭活EV71病毒中的应用。

根据本发明的又一方面，还提供了一种洗手液的制备方法，包括：将所述水溶性基质加入去离子水中，加热并搅拌至充分溶胀；加入所述碱性表面活性剂；以及加入所述甘油、丙二醇和香精，充分混匀以制备得到所述洗手液。

本发明提供的洗手液有较好的外观，不同味道的香型，符合洗手液感官要求，特别是比较符合儿童的感官要求。

本发明提供的洗手液pH在7～10之间，符合相关洗手液的标准，中性至微碱性能够更好地抗病毒。在洗手液配方中，通过提高表面活性剂的量来提高洗手液的碱性，从而达到灭活手足口病毒的效果。本发明所述液体洗手液进行抑制手足口病致病病毒的有效性检测，发现此产品能够有效地灭活EV71病毒。

通过本研究团队多年从事EV71以及CoA16病毒分子机理研究，发现手足口病毒的生长环境受到pH条件影响较为明显。在中性以及偏酸性条件下，病毒可以正常生长，而遇到偏碱性条件，病毒则会出现生长受限，病毒衣壳崩解从而导致病毒死亡。针对手足口类病毒的这一特点，本发明的产品将能弥补专业产品缺失的现状，而且本发明中洗手液的制作方法简单，效果明显，能够广泛用于日常生活中。

本发明的技术优势如下：

本发明的产品中所用表面活性剂为偏碱性的表面活性剂，其为本发明的有效成分，通过提高碱性表面活性剂的含量而提高洗手液的pH，进而达到灭活手足口病毒的效果。

本发明中选择的碱性表面活性剂是新一代温和、绿色、环保型表面活性剂，起泡能力强，泡沫细腻、丰富、稳定，润湿性好，去污力强，对人体皮肤温和，绿色、无毒、无刺激，生物降解迅速彻底。

本发明的产品中特别添加适量甘油、丙二醇，具有显著的保湿效果，能减少由于频繁洗手引起的皮肤干裂感，保持皮肤水分。

本发明的产品特异性针对手足口病，在洗手产品市场上并没有专门用于抗手足口病的相关产品，本发明具有创新性，实用性，且制作简单，能够极大地为人们的健康特别是儿童人群提供保障。

本发明的产品特别适合儿童使用，也非常适合学校、幼儿园、医院等场所使用。

附图说明

图1示出了根据本发明的实施例制备的洗手液对EV71病毒的灭活作用。

具体实施方式

以下结合具体的实施案例对本发明进行具体阐述，但本发明的保护范围不仅限于此。

实施例1：洗手液的制备

制备方法：

取1g羧甲基纤维素钠加入65ml去离子水中，加热并搅拌至充分溶胀，边搅拌边加入30ml表面活性剂APG1200，然后加入3ml甘油、2ml丙二醇、0.1ml香精，充分混匀。

由本实施例液体洗手液的制备方法可知本实施例的液体洗手液的组成如下：

水溶性基质(羧甲基纤维素钠)：1％，表面活性剂APG1200：30％，甘油：3％，丙二醇：2％，香精：0.1％。

洗手液pH值测定结果为9。

实施例2：洗手液抑制手足口病致病病毒的有效性检测方法及结果：

1.RD细胞的培养

将在液氮中冻存的RD细胞(清华大学生命科学院实验室惠赠)37℃水浴锅中解冻后，加入到盛有20ml培养基的培养瓶中，培养基成分为DMEM(Dulbecco's modified eaglemedium)+10％胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)+1％青霉素和链霉素(Penicillin-Streptomycin,PS)，37℃，5％CO₂培养。

2.EV71病毒的扩增

待细胞生长至满度为90％时，加入EV71病毒(清华大学生命科学院实验室惠赠,EV71病毒的种属、获取方法、实验方法和保存方法同公开日为2015年7月1日的专利CN104744433A一致)200μL，37℃，5％CO₂培养。24h后细胞发生病变，待细胞完全病变后收集上清，4000rpm离心10min，将上清分装后冻存于-80℃。

3.EV71病毒滴度测定

用终点稀释法(endpoint dilution assays，EPDAs)测定病毒滴度，RD细胞按3×105个/ml接种于96孔板中，37℃，5％CO₂培养24h后，将第二列6个孔的培养基吸走，加入110μL冻存的病毒，从第二列取11μl病毒加入到第三列，混匀后从第三列取11μl再加到第三列，依次稀释至第十列，第十一列为细胞对照，72h后观察(利用细胞间的奥林巴斯显微镜观察96孔板中细胞的病变效应)致细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)并记录。，如果孔内细胞病变25％则记为+，病变50％记为++，病变75％记为+++，病变100％记为++++。利用软件Reed&Muench Calculator计算病毒的半数组织培养感染剂量(Tissue culture infectivedose,TCID50)。

4.终点稀释法病毒感染滴度的计算

以半数细胞感染剂量(TCID50)表示。TCID50的对数值计算公式如下。TCID50对数值＝病变率高于50％组稀释度的对数值+距离比例(“病变率高于50％组”是指病变率超过50％的最低组，下简称“高于50％组”；“病变率低于50％组”是指病变率低于50％的最高组，下简称“低于50％组”)。

具体计算方法如下：

1)计算细胞病变率。先计数培养板上不同稀释度样本细胞病变发生与未发生的孔数，然后分别计算“细胞无病变(-)”和“细胞病变(+)”的累积总计值。计算“细胞无病变(-)”累积值时，由稀释度低样本组向稀释度高样本组累积；“细胞病变(+)”累积值则相反，由稀释度高样本组向稀释度低样本组累积。各稀释度样本组“细胞病变(+)”累积总计值，除以该稀释度样本组“细胞无病变(-)”与“细胞病变(+)”累积总计值之和即为其病变比，由之可得病变率(％)。

2)计算距离比例，距离比例可按下式计算：

5.实施例1制备的洗手液灭活EV71病毒的实验方法

①1％琼脂糖凝胶的制备

称取1.2g琼脂糖M，溶于120mL 1*TAE缓冲液中，121℃高温灭菌20min，在生物安全柜中向两个六孔板的每个孔中加入2mL的琼脂糖凝胶，冷却至常温凝固。

②分组

分为本发明产品组、商业洗手液组(美国进口普瑞来)、阴性对照组

③洗手液对EV71病毒灭活实验步骤

A.在每孔中加入100μL洗手液(实验组或对照组)或者灭菌ddH2O，用一次性涂布棒涂抹均匀，在生物安全柜中风干2小时；

B.加入病毒滴度为3×10⁹TCID50/mL的病毒50μL，涂抹均匀；

C.2小时后，每孔中加入500μL细胞培养液洗脱病毒，800rpm离心3min，取上清，用终点稀释法测病毒滴度。

⑤终点稀释法测定病毒滴度

方法同上。

6.实验结果

第四天，观察结果，如图1，结果显示，实施例1制备的洗手液能出效地(有效灭活的标准是有效灭活的标准是细胞病变效应即CPE为90％以上)灭活EV71病毒。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种洗手液，其特征在于，以重量百分比计，包括以下组分：

水溶性基质：0.5％～3％；

碱性表面活性剂：5％～50％；

甘油：1％～4％；

丙二醇：1％～3％；

香精：0.1％～1％；以及

余量的去离子水。

2.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述水溶性基质为纤维素衍生物。

3.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述纤维素衍生物选自羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素或羟丙基甲基纤维素中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述碱性表面活性剂包括烷基糖苷(APG1200)、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、椰油酸单乙醇酰胺(CMEA)、椰油酸二乙醇酰胺(6501)、脂肪酸钾皂(SFP)或十二烷基硫酸钠(SDS)中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述洗手液的pH介于7～10之间。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的洗手液，其中，所述洗手液用于灭活EV71病毒。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的洗手液的制备方法，其特征在于，包括：

将所述水溶性基质加入去离子水中，加热并搅拌至充分溶胀；

加入所述碱性表面活性剂；以及

然后加入所述甘油、丙二醇和香精，充分混匀以制备得到所述洗手液。