CN108430580B - 诱导饱腹感的方法 - Google Patents

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Abstract

公开了一种用于诱导人体对象的饱腹感的方法，所述方法通过施用或供给一种包含少于约15g的总蛋白和约1.0g至约3.5g的总亮氨酸的食品产品来提供饱腹感诱导效应。所述亮氨酸由所述总蛋白和含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。

Description

诱导饱腹感的方法
技术领域
本发明涉及一种使用食品产品增加饱腹感的方法。更具体地，本文所述的方法通过增加相对于空腹水平的血液中亮氨酸水平来增加饱腹感。
背景技术
哺乳动物的食物消耗由消化系统、中枢神经系统、内分泌系统和末梢体之间复杂的相互作用所控制。一般来说，大脑感知来自口、胃肠道、胰腺和脂肪组织的反映身体营养状态的信号，并使用无数途径来预测和调节食物摄取和能量消耗。因此哺乳动物的进食行为受到促成消费者偏好和满意的各种感官因素的支配。基于至今为止的研究，单次进食时的大蛋白质剂量(>25g)被认为对于达到所期望的饱腹感效应的“蛋白质膳食阈值”是必需的(临床营养和代谢护理的最新观点，2014年1月；17(1)：5–11，通过引用并入本文)。然而，在开发消费产品时，在单次进食中提供大蛋白质剂量面临感官上的挑战。如此高含量的蛋白质也不具有成本效益。因此，提出可依赖于蛋白质水平较低的食物的用于诱导饱腹感的方法是有利的，所述蛋白质水平较低的食物造成较少的配方挑战并且具有改善的感官特性。
发明内容
本公开提供一种用于诱导人体对象的饱腹感的方法，所述方法通过向对象提供一种能够用于向消费者输送亮氨酸的食品产品，使得血液中亮氨酸水平增加至高于空腹时的血液中亮氨酸水平，增加消费者的饱腹感，同时解决可口性挑战并减少诱导饱腹感所必需的蛋白质含量。
以下是本公开的概要，旨在提供对于本文所描述的产品和方法的一些方面的基本理解。这并非详尽的概述，也并非意图确定关键或重要元素或者描述本说明书的范围。其仅仅是为了以简要的形式提供一些构思作为以下更详细的描述的前序。
本发明涉及一种通过增加相对于空腹水平的血液中亮氨酸水平来增加饱腹感的方法，所述方法包括向消费者提供一种包含蛋白质和亮氨酸的食品产品，在每份量的所述食品产品中，所述蛋白质存在的量为少于约15g的总蛋白，所述亮氨酸存在的量为约1.0g至约3.5g的总亮氨酸，所述亮氨酸由所述总蛋白和含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在多个实施例中，所述诱导饱腹感的食品或饮料产品包含约1.5g至约3.0g的总亮氨酸。在多个实施例中，所述诱导饱腹感的食品或饮料产品包含约2.0g至约3.0g的总亮氨酸。在多个实施例中，所述诱导饱腹感的食品或饮料产品包含约2.0g至约2.5g的总亮氨酸。在上述任一实施例中，所述诱导饱腹感的食品产品包含约8g至约14g的总蛋白。在上述任一实施例中，所述方法还包括提供所述食品产品作为膳食制度的一部分。
在上述任一实施例中，所述提供给消费者的诱导饱腹感的食品产品是谷物产品、格兰诺拉燕麦产品、营养棒、强化水、果汁、水果思慕雪、奶昔、乳品饮料、能量饮料、小袋包装产品、小杯液体、焙烤产品或酸奶。
在上述任一实施例中，所述诱导饱腹感的食品或饮料产品在食用后诱导需要治疗的消费者、对象或患者的饱腹感。
在上述任一实施例中，通过向消费者提供本文所公开的食品产品，血液中亮氨酸的浓度与血液中亮氨酸的空腹水平相比增加2倍或更多倍，优选地，增加3.5倍或更多倍。所述空腹水平是指禁食约12小时的预设时间后的消费者或对象的血液中的亮氨酸水平。即，所述空腹水平为在约12小时未摄取食物之后的血液中亮氨酸浓度。
附图说明
据信为本发明特有的新颖性特征在所附权利要求中列出。然而，当结合附图阅读时，参考对于说明性实施例的以下详细描述，将最好地理解本发明本身及其优选的应用方式、进一步的目的和优点，其中：
图1A示出所添加的亮氨酸含量不同的蛋白质-营养棒对于40个女性在240分钟内所感受到的饱胀度响应的作用的线形图；
图1B使用浓度-时间曲线下面积增量(iAUC)分析示出图1A的所感受到的饱胀度响应的柱形图；
图2A示出所添加的亮氨酸含量不同的蛋白质-营养棒对于40个女性在240分钟内的饥饿感响应的作用的线形图；
图2B使用iAUC分析示出图2A的饥饿感响应的柱形图；
图3A示出所添加的亮氨酸含量不同的蛋白质-营养棒对于40个女性在240分钟内的预期食物消耗响应的作用的线形图；
图3B使用iAUC分析示出图3A的预期食物消耗的柱形图；
图4A示出所添加的亮氨酸含量不同的蛋白质-营养棒对于40个女性在240分钟内的进食欲望响应的作用的线形图；
图4B使用iAUC分析示出图4A的进食欲望响应的柱形图；
图5示出在进食后的240分钟时间内，每30分钟的血浆亮氨酸响应的线形图；
图6示出餐后血浆PYY浓度和图1A中的所感受到的饱胀度响应的关系；
图7示出在摄入添加有0g LP、2g LP和3g LP的蛋白质-营养棒后，餐后血浆PYY浓度和亮氨酸浓度的关系；
图8示出所添加的亮氨酸含量不同的蛋白质-营养棒对于40个女性在240分钟内的PYY响应的作用的线形图；
图9使用iAUC分析示出图8的PYY值的柱形图。
在以下书面形式的详细说明和附图中，其他方面、实施例和特征将是明显的。
具体实施方式
现在参考附图描述本发明的实施例。除非另外说明，本文所用的术语将被解释为具有其在本公开中的应用的含义和/或具有其在任何相关技术领域中的技术和工业应用的含义。除非另外明确地说明，术语“包括”、“包含”、“含有”及其变型是指“包括但不限于”。当以原始形式和修改形式用于所附权利要求中时，术语“包含”意味着是包括性的或开放式的，并不排除任何附加的、未列举出的元素、方法、步骤或材料。术语“由···组成”排除与该短语一起说明的元素、步骤或材料之外的任何元素、步骤或材料。应当理解，术语“约”在本公开和所附权利要求中用于说明诸如在测量和测试等方面、产品制备方面等的普通的不准确性和可变性。
不受理论的束缚，本发明人认为，血浆亮氨酸、饱腹感和肌肉合成之间存在关联。如本领域技术人员所认识到的，蛋白质在人体中的关键作用之一是刺激骨骼肌合成，从而支持合成代谢。体内的激素相关和调节性蛋白质对于整体细胞完整性还具有其他关键作用。这些蛋白质与饱腹感信号传递和肌肉合成相对非常不相关，并被归类为“必需的”。例如，蛋白质能量营养不良(PEM)是营养不良人群中经常出现的一种现象，在其发展过程中，PEM的第一阶段是肌肉萎缩，且最终阶段是激素功能丧失并伴随着皮肤脆性增加(即，“细胞完整性丧失”)。在营养较良好的人群中，蛋白质首先应用于肌肉合成/再生(肌肉生长和分解，一直处于平衡)或作为储存成脂肪和日常消耗的能量使用。例如，如果个体在用餐时进食约25g蛋白质，从而为基础肌肉合成提供刚好足够的蛋白质，饱腹感信号将被发送至大脑以阻止个体继续进食。
对于刺激骨骼肌合成，血浆亮氨酸似乎存在必要的阈值，以使其他氨基酸包括在肌肉蛋白质中。因而，本发明人在理论上认为，相似的机制可以用于饱腹感益处。例如，在一定阈值含量的亮氨酸被消耗用于基础肌肉合成后，亮氨酸信号将被发送至大脑以阻止进食。从而，通过集中输送达到阈值水平的亮氨酸，可能需要较低的绝对含量的蛋白质来诱导饱腹感。
本发明人已经仔细地分析了与蛋白质结合的亮氨酸浓度，以提出一种方法，其中可以使用更可口的食品产品以提供在食用后提供饱腹感的益处。适用于本发明的所述方法的产品可以有利地具有低含量的蛋白质，从而提供用于最大化味道或风味的选择。
本文所用的术语饱腹感是进食后或用餐期间的饱腹感。本领域技术人员将理解该术语的范围。例如，饱腹感可以被定义为在进食结束后，对进一步摄取食物的抑制，并且可以通过密度(即，在随后进食事件中所消耗的食物的量)和强度(即，抑制饥饿感的时长)来评估(参见布伦德尔JE：建立饥饿感、食欲和饱腹感之间的等式关系(特纳M，编辑)营养和生活方式；应用科学出版社，伦敦，1979；21-42，通过引用并入本文)。
本文所用的“食品产品”可以是固体或液体形式(例如，饮料)。它可以包含固体部分和液体部分两者。在其中一个实施例中，所述食品产品为谷物产品、格兰诺拉燕麦产品、类格兰诺拉燕麦产品、营养棒、强化水、果汁、水果思慕雪、奶昔、乳品饮料、能量饮料、小袋包装产品、小杯液体、焙烤产品或酸奶。本文所用的“小杯液体”是指体积为约4盎司的液体产品配方。在其中一个实施例中，所述食品产品为饮料。所述饮料包括例如汁饮料(例如，包含一种或多种果汁和/或一种或多种蔬菜汁的饮料)、水合饮料、冷冻饮料、低卡路里饮料等。在其中一个实施例中，所述食品产品可以是零食产品或棒，例如，冷压零食棒。应当理解的是，根据本公开的零食食品产品可以具有多种不同的具体配方或组份中的任一种，只要总蛋白和总亮氨酸处于本文所公开的范围内。
应理解的是，其他成份可以任选地包括在该食品产品中，以赋予产品所期望的质量，例如质地或风味。可选的其他成份的示例包括附加调味剂、碳水化合物、脂肪、维生素、矿物质、甜味剂、糖、防腐剂、食品级酸、食品级碱、色素、盐、水果片、纤维、乳制品、抗氧化剂、掩味剂、果汁或其他水果产品、促味剂、增香剂、质地改性剂等，但不限于此。受益于本公开时，本领域的技术人员可以得知附加的或可替代的适合的成份。
本发明人确定，游离形式的亮氨酸或既不形成肽序列的一部分又不通过物理或化学手段与肽或蛋白质复合的亮氨酸，与饮料或棒不太相容。例如，游离形式的亮氨酸不易于包括在流体或液体混合物中，并且因此，当制备食品产品时，难以加工。然而，提供克级水平的亮氨酸的蛋白质的必需水平，例如，先前报道的用于诱导饱腹感的那些蛋白质水平，通常为至少约20g，优选地，至少约25g。高水平的蛋白质和/或氨基酸，尤其是某些氨基酸与可口性的降低有关。
本发明人研究了彼得森先前在US2011/0233469A1中描述的产品(在本文中称之为“皮特森”)在本发明的方法中用于诱导饱腹感的应用。将蛋白质和/或肽与亮氨酸氨基酸通过微粉化、混合、水合和共干燥的组合结合而制得彼得森的产品。所得到的产品形成了亮氨酸和与亮氨酸共处理的蛋白质和/或肽的复合物。该共处理形成与含有游离形式的亮氨酸的产品不同的产品。因此，诸如彼得森所描述的产品在本文中被称为“复合的”亮氨酸产品，根据彼得森的方法将肽和亮氨酸结合形成的产品可以被称为“亮氨酸结合肽”或“含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物”。诸如这些亮氨酸结合肽的产品提供更加可溶的形式，通过其可以传输亮氨酸，对于生产用于本发明的方法中的食品产品是非常有效的。根据彼得森所公开的方法制得的亮氨酸结合肽是可在市场上购得的
Figure BDA0001717927200000071
亮氨酸(哥兰比亚营养品公司，美国威斯康星州门罗)。
因为本发明人已经确定，与蛋白质和/或肽复合的亮氨酸(更优选地，为肽/亮氨酸产品的形式，例如，
Figure BDA0001717927200000072
亮氨酸)对于制备用于诱导饱腹感的低蛋白产品提供优异的结果(与文献中通常报道的用于产生饱腹感的高蛋白产品相比)，所以没有必要将亮氨酸作为游离形式的氨基酸单独加入在本发明的所述方法中使用的食品产品中。即，如果所述亮氨酸与所述蛋白质物理上相关联，而不是作为亮氨酸和蛋白质(“蛋白质”在广泛意义上被认为包括肽)的混合物提供，将降低产生所期望的饱腹感效应所需的蛋白质的量。此外，由亮氨酸和肽形成的复合物所提供的蛋白质含量的降低、以及改善的溶解性和感官特性还使得配方问题减少和可口性增加。
亮氨酸结合肽产品(
Figure BDA0001717927200000073
亮氨酸，哥兰比亚营养品公司)的氨基酸组成示于下表1中。如表1所示，所述产品被配制成提供至少约40％的亮氨酸。
表1.
Figure BDA0001717927200000074
亮氨酸的氨基酸组成(mg/g蛋白质)
色氨酸 11.14 丙氨酸 27.31
胱氨酸 15.07 缬氨酸 30.37
蛋氨酸 10.81 异亮氨酸 33.64
天冬氨酸 67.29 亮氨酸 476.35
苏氨酸 42.71 酪氨酸 15.73
丝氨酸 26.32 苯丙氨酸 15.40
谷氨酸/谷氨酰胺 108.25 赖氨酸 55.38
脯氨酸 34.95 组氨酸 8.96
甘氨酸 8.96 精氨酸 11.36
在其中一个实施例中，在为了在本发明的所述方法中被食用的产品中使用的亮氨酸肽组合物来自于乳清蛋白分离物(WPI)，其包含大致比例分别为55％、20％和20％的β-乳球蛋白、α-乳清蛋白和糖巨肽(GMP)。该乳清蛋白分离物可以被处理以提供约10％至约17％的水解程度，从而得到经处理以形成亮氨酸结合肽的肽。
本文所用的“总亮氨酸”是指该食品产品中所有的亮氨酸的总数。在其中一个实施例中，用于本发明的所述方法中的食品产品每份量可以包含高达约3.2g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含高达约3.0g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含高达约2.8g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含高达约2.0g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约1.2g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约1.5g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约2.0g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约2.2g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约2.5g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品包含约1.5g至约3.0g、或约2.2g至约2.8g的总亮氨酸。应当理解，总亮氨酸是指单份量中的亮氨酸的总量。
在其中一个实施例中，单份量为40g至80g的干重或177mL至354mL(或6液体盎司至12液体盎司)的液体。在另一个实施例中，单份量可以在约50g至约75g的干重范围内。在另一个实施例中，单份量可以在约40g至约50g的干重范围内。在另一个实施例中，单份量可以在约70g至约80g的干重范围内。在另一个实施例中，单份量可以是在高达约4盎司至约12盎司(约118mL至约354mL)范围内的液体。在另一个实施例中，单份量可以是在高达约8盎司(约237mL至240mL)范围内的液体。在其中一个实施例中，单份量是约50g干重或约177mL至约237mL(约6液体盎司至约8液体盎司)的液体。
在其中一个实施例中，用于本发明的所述方法中的食品产品每份量包含蛋白质和亮氨酸，所述蛋白质存在的量为高达约14.5g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含蛋白质和亮氨酸，所述蛋白质存在的量为高达约14.0g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含蛋白质和亮氨酸，所述蛋白质存在的量为高达约13.5g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约5g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少约8g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含至少10g的总蛋白。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含约8g至约14g的总蛋白，例如，约10g的总蛋白。本文所用的本文所述的食品产品中的“总蛋白”是指该食品产品中任何的和所有的蛋白质源的总数，具体地，指该食品产品中来源于含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物的蛋白质和该食品产品中的一种或多种蛋白质源的总数。适用于所述食品产品的蛋白质源包括，例如，乳制品、大豆、乳清、酪蛋白、或多种分离成份(例如，分离物、浓缩物、水解物等)；包括但不限于，乳清蛋白分离物、豆蛋白分离物、脱脂干乳等。
在其中一个实施例中，所述食品产品每份量包含高达约14.0g的总蛋白和约1.5g至约3.0g的总亮氨酸。在其中一个实施例中，所述食品产品每份量为约50g干重或约177mL至约237mL(6液体盎司至8液体盎司)，并且包含约10g的总蛋白和约2.5g的总亮氨酸。
所述总亮氨酸仅由总蛋白和含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物的组合提供。即，该食品产品中含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物和蛋白质源的组合构成该食品产品的总亮氨酸含量。在其中一个实施例中，至少约25％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，至少约35％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，至少约50％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，高达约90％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，高达约80％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，高达约75％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，约25％至约90％、约35％至约90％、或者约35％至约80％的总亮氨酸由含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。
本文所用的“消费者”包括需要治疗(即，由所公开的方法提供饱腹感益处)的对象或患者。一般地，需要治疗的消费者或患者进食一种包含蛋白质和亮氨酸的食品产品，在每40g至80g干重或177mL至354mL液体的该食品产品中，所述蛋白质存在的量为少于约15g的总蛋白，所述亮氨酸存在的量为约1.0g至约3.5g的总亮氨酸，所述亮氨酸由总蛋白和含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在一些实施例中，所述食品产品包含约2.0g至约3.0g的总亮氨酸。在一些实施例中，所述食品产品包含约2.0g至约2.5g的总亮氨酸。
在进食后，据信，该食品产品中的亮氨酸被消化，并进入消费者或患者的血液中。这进而增加饱腹感。因此，基于血液中亮氨酸浓度充分增加至高于空腹时的血液中亮氨酸水平的作用，饱腹感由本说明书中的食品产品诱导。然而，通过使用包含亮氨酸/蛋白质和/或亮氨酸/肽产品的产品，例如，产品，作为一种提供亮氨酸和蛋白质和/或肽的可溶性复合物的成份，本发明人已经发现，可以降低为实现饱腹感诱导效应所述产品中必须含有的蛋白质的含量。先前的报道已经表明蛋白质诱导的饱腹感通过其25％至81％的能量来自一般蛋白质或具体蛋白质的单次膳食而产生(维德霍斯特，M.等人；蛋白质诱导的饱腹感：不同蛋白质的作用和机制；生理与行为；2008年5月23日；94(2)：300-7)。然而，本发明人已经发现，通过使用亮氨酸和蛋白质(可能为肽的形式)的复合物，蛋白质的含量可以降低，同时实现相同的饱腹感效应(并且改善所述产品对于消费者的感官特性)。因此，本发明的其中一个实施例是一种食品产品的应用，通过增加相对于空腹水平的血液中亮氨酸水平而增加饱腹感，所述食品产品包含蛋白质和亮氨酸，在每份量的该食品产品中，所述蛋白质存在的量为少于约15g的总蛋白，所述亮氨酸存在的量为约1.0g至约3.5g的总亮氨酸，所述亮氨酸由所述总蛋白和含有结合亮氨酸的亮氨酸肽组合物提供。在其中一个实施例中，所述方法还可以包括所述食品产品作为正进行的膳食制度，例如，减肥制度的一部分的应用。在其中一个实施例中，所述消费者可以是(例如，通过赋予饱胀度)其某些医学症状将被改善的个人。
在本发明的所述方法中，据信，通过食用本文所公开的食品产品，将对象的血液中亮氨酸浓度与空腹的亮氨酸水平相比，增加至少约2倍、至少约3倍、或至少约3.5倍，以诱导饱腹感。即，对象的血浆亮氨酸浓度可以增加至空腹状态的水平的2倍多，从而引起饱腹感响应。本文所用的对于“血液中亮氨酸浓度”的引用包括“血浆亮氨酸浓度”。
示例
结合健康女性的血浆中亮氨酸和肽YY(PYY)浓度，评价食用添加有本文所描述的亮氨酸肽(LP)的蛋白质营养棒对于餐后食欲和饱腹感响应的急性效应。PYY是一种在胃肠道内发现的肽，已知其有助于减少食欲。
采用随机双盲交叉设计，40名女性(28±7.5岁；体质指数(BMI)：23.5±2.4kg/m2)在三次单独访问中食用以下等热量(180kcal)的餐前负荷：对照棒[9g蛋白质；0g亮氨酸肽(LP)]或治疗棒(分别是9g和11g的蛋白质；来自LP的2g或3g的亮氨酸)。餐前和餐后食欲(饥饿感、进食欲望和预期食物消耗)和饱腹感(饱胀度)问卷和血浆亮氨酸浓度每30分钟评估一次，评估240分钟。餐前和餐后的血浆PYY浓度每小时评估一次，评估240分钟。下文所讨论的结果表明，在较低蛋白质含量的蛋白质营养棒(2g LP)中亮氨酸含量的增加可以潜在地通过刺激PYY来增加健康成人的饱胀度的等级。
材料与方法
由研究参与者食用的营养棒在爱达荷州双子瀑布的哥兰比亚营养学协作中心试验设施中制得。简而言之，使用工业规模的霍巴特混合器批量处理用于三个治疗组中的每一个的6kg的蛋白质面团。首先，将
Figure BDA0001717927200000121
亮氨酸粉末与其他蛋白质粉末和水溶性膳食纤维粉末干混(粉末混合物“A”)。将粉末香精、麦芽糖糊精、乳矿物(
Figure BDA0001717927200000122
D7，乳矿物共混物)和人工甜味剂(三氯蔗糖)另行干混，形成粉末混合物“B”。添加液体组分(液体香精、玉米糖浆、山梨醇、纤维糖浆、溶化的可可脂、芥花籽油、甘油、大豆卵磷脂和麦芽糖醇)，并使用中速搅拌机充分混合以实现均一性。加入粉末混合物“B”，低速搅拌30秒。然后将粉末混合物“A”加入到混合碗中，缓慢混合1至2分钟，直到形成均匀的面团。加入水果片，刮擦碗表面以确保所有成份的混合。面团被制成合适的单份量大小的棒，并涂覆有溶化的经调和的涂层。一旦涂层被定型，棒被单独包装到迈拉箔袋中并密封，然后储存在环境条件下。表2列出了对照产品、变体A和变体B的棒成份的含量。表2列出的含量是针对两个单份量而言的。
表2试验棒的组成
表2
年龄在18岁至50岁之间、BMI在20kg/m2至29.99kg/m2之间的48名参与者接受了医学筛查，并根据以下入选标准进行选择：健康状况良好；不使用药物治疗(避孕药或激素替代治疗除外)；对研究产品的任何组分没有过敏、敏感性或强烈厌恶的历史；在过去30天内没有使用研究性药物产品；在过去3个月内体重稳定(在4kg的范围内)；没有专业诊断的进食障碍史(例如，神经性厌食症、神经性贪食症、暴饮暴食)或极端饮食习惯(例如，素食、阿特金斯饮食、拒绝主要食物种类等)；三因素饮食问卷的限制因素的得分＜14(斯塔卡，A.J.和S.梅西卡，用于测量饮食限制性、去抑制与饥饿感的三因素饮食问卷；身心研究杂志，1985.29(1)：p.71-1983，通过引用并入本文)；在第一次访问的2个月内，不使用非处方减肥药和草药疗法和节食方案；无临床上重大肾脏或胃肠道疾病或糖尿病(葡萄糖＞126mg/dL，手指针刺)历史，或不存在临床上重大肾脏或胃肠道疾病或糖尿病(葡萄糖＞126mg/dL，手指针刺)；在研究期间没有怀孕或没有计划怀孕，或没有处于哺乳期。这项研究是按照药品临床试验管理规范进行的，并得到了西方国际审查委员会(美国华盛顿皮阿拉普)的批准。关于对参与者特征的概要，参见表3。
表3研究参与者(n＝40)的特征
Figure BDA0001717927200000141
1均值±SE
研究对象的基线特征由均值+标准误差(SE)表示，而可口性分数、血浆亮氨酸浓度、所有的食欲和饱腹感分数以及PYY响应由最小均方值(LSM)+标准误差(SE)表示。通过F检验评价治疗顺序之间的研究对象的基线特征的差异，而使用以治疗作为固定效应且以对象作为随机效应的混合模型分析可口性分数的差异。因变量是食欲和饱腹感、血浆亮氨酸和血浆PYY响应的分量表。为得到研究结果，测定峰值响应(Cmax)、谷底或最小响应(Cmin)、达到Cmax的表观时间(Tmax)，和/或240分钟的浓度-时间曲线下的面积增量(iAUC)。iAUC是通过对根据基线差异调整的覆盖240分钟的整个评估窗口的面积进行线性梯形积分获得的。
研究产品(见下表4)为50g至52g的蛋白质营养棒，其功能成份为
Figure BDA0001717927200000151
亮氨酸(
Figure BDA0001717927200000152
营养品公司，威斯康星州门罗)。棒配方的目的是设计一种产品，其输送含量增加的来自肽载体的亮氨酸，同时保持完整乳蛋白的亮氨酸是恒定的。来自肽载体的亮氨酸在对照棒(0g LP)中为0g，在治疗棒中为2g和3g(分别为2g LP和3g LP)。需要改变蛋白质源以保持对照棒中低的亮氨酸含量，同时对于所有的3个棒，输送恒定水平的来自完整蛋白的亮氨酸。因为低于15g的各种不同蛋白质源(乳清、大豆和鸡蛋)在提供总蛋白为5g至15g时不影响饱腹感等级，所以棒之间的蛋白质源的差异不可能是干扰因子。经测定，所输送的总亮氨酸的水平与大约20g至30g的乳清蛋白分离物相对应(唐，J.E.等人；摄入乳清水解物、酪蛋白、或大豆分离蛋白：对年轻男性在休息时和在抗阻运动后的混合肌肉蛋白质合成的作用；应用生理学；(1985)，2009.107(3)：P.987-92，通过引用并入本文)。此外，所述棒的卡路里和脂肪含量相匹配，且所述棒的总碳水化合物、膳食纤维、糖含量和总蛋白是类似的。虽然，最低蛋白质水平与最高蛋白质水平之间(分别为0g LP和3g LP治疗)存在4g的总蛋白质含量的数值差异，但这代表可能不会被对象检测到的无关紧要的代谢差异。
表4营养蛋白质棒的营养成分
Figure BDA0001717927200000161
1值是LSM±SE，n＝40。不同治疗组的可口性的abcLSM是不同的，由固定效应重复测量方差分析(ANOVA)(p<0.05)进行评估。
本试验纳入具有一次筛选访问和三次实验访问的随机、双盲、交叉设计。在实验访问期间，参与者在隔夜空腹12小时后于上午9点到达诊所。向他们随机提供对照(0g LP)或治疗(2g LP或3g LP)蛋白质营养棒，并在10分钟内吃完各自的棒。餐前和餐后的食欲和饱腹感、以及血浆亮氨酸浓度每30分钟评估一次，评估240分钟。餐前和餐后的血浆PYY浓度每小时评估一次，评估240分钟。所有测试日均发生在月经周期的卵泡期。还鼓励参与者保持正常的饮食和锻炼行为，以及在每个测试日前24小时戒酒。在访问的前一天下午2点之后完成食物记录来评估依从性。
书面问卷评估在食欲的4个分量上所感觉到的感受(饥饿感、进食欲望、和预期食物消耗)和饱腹感(饱胀度)(布伦德尔，J.E.等人，在实验室测量食物摄取、饥饿感、饱腹感和满足感；饮食行为和体重相关问题的评估方法手册：测量、理论和研究；D.B.埃里森和M.L.巴斯金(编辑)；2009，圣纽伯里公园，加利福尼亚州；p.283-325，通过引用并入本文)，在每次访问中，在食用研究产品之后的5分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、150分钟、180分钟、210分钟和240分钟完成书面问卷。此外，在访问日结束时，使用问卷评估研究产品的可口性(“对食物的满意程度”)。可口性是消费者或对象对所摄取的食物的风味或可接受性的响应。两份调查问卷均包含视觉模拟量表，视觉模拟量表引入针对每个响应的固定有从“完全不”到“非常”的100mm水平线评级量表。视觉模拟量表(VAS)经常通过使用在各个端部固定有通常用于描述极限的词汇的线来评估对象的食欲感觉。对象然后在线上在与他们的感觉相对应的点处直至那些极限处作出标记。然后使用线的左端至标记点的距离来量化测量结果。
在第2次至第4次访问的早晨，将导管插入前臂静脉进行血液采样，并在当天的剩余时间通过盐水滴注保持其通畅。将样品一式两份地收集在K2-EDTA真空采血管中。将血浆在4℃下以2000rpm离心20分钟进行分离。离心后，将血浆转移至带有标签的聚丙烯管中。将一式两份的样品在-80℃下冷冻，用于以后的分析。
这些血浆样品中的支链氨基酸亮氨酸和异亮氨酸浓度通过氯甲酸丙酯/丙醇衍生化，再由气相色谱-四级杆质谱法(GC-MS)(7890A GC，7000三重四级杆MS)(安捷伦科技有限公司)在单离子监测模式下分析进行量化(德特默，K.等人，采用使用氯甲酸丙酯衍生化的GC–MS和iTRAQ–LC–MS/MS分析生理样品中的氨基酸，氨基酸分析：方法和方案，分子生物学的方法，M.A.阿尔特曼和P.亨齐克，编辑；2012，施普林格科学+商业媒体：新泽西斯考克斯，通过引用并入本文)。从衍生化至萃取直至将所制得的样品引入GC-MS系统的所有样品制备步骤使用哈美顿StarTM(哈美顿，英国)自动进行。
使用
Figure BDA0001717927200000172
EZ：faast kitTM(非罗门有限公司)将20μL的血浆样品自动改性使其衍生化。衍生化的样品随后用异辛烷萃取，并将2.5μL的上清液注入使用氦气作为载气的GC-MS系统。然后，采用快速温度梯度程序，通过ZB-AAA，10m x 0.25μm氨基酸分析GC柱(非罗门有限公司)，总共运行9分钟来使样品分离(德特默，K.等人，采用使用氯甲酸丙酯衍生化的GC–MS和iTRAQ–LC–MS/MS分析生理样品中的氨基酸，氨基酸分析：方法和方案，分子生物学的方法，M.A.阿尔特曼和P.亨齐克，编辑；2012，施普林格科学+商业媒体：新泽西斯考克斯，通过引用并入本文)。分别在亮氨酸的2.90分钟保留时间和异亮氨酸的2.99分钟保留时间时，监测与亮氨酸和异亮氨酸相对应的m/z 172的离子和与同位素标记的亮氨酸和异亮氨酸(内标物)相对应的m/z 178的离子。使用两组8个点校准曲线，基于亮氨酸和异亮氨酸和与其相应的同位素标记的内标物的峰面积积分比，计算亮氨酸和异亮氨酸的浓度。通过测试样品与NIST血浆标准物(SRM 1950)和质控样品的系统抵消平衡监控分析的准确度。经验证，所述方法对于亮氨酸和异亮氨酸的线性校准范围30μM至750μM，定量限为2.4μM。
在包括-5分钟、60分钟、120分钟、180分钟和240分钟的时间点的子集处，分析之前冷冻的血浆样品的PYY。使用夹心ELISA分析(EZHPYYT66K；密理博，美国密苏里州圣查尔斯)，SpectraMax M3多功能微孔板检测仪(美谷分子仪器有限公司，美国加利福尼亚森尼韦尔)，以及SoftmaxPro5.4.1微孔板数据采集和分析软件(美谷分子仪器有限公司；美国加利福尼亚森尼韦尔)测量血浆中总PYY。虽然测定了每个对象的所有样品，但其中1个对象具有低于检测极限并且未包括在分析中的PYY浓度。此外，测定方案表明，应当使用相同的试剂处理对象的样品。然而，在分析完成之后，我们发现，其中15个对象的样品进行了多次测定。基于方案，移除这些对象，并纳入n＝24的样品量。
基线血浆亮氨酸浓度(p≥0.4615)和食欲和饱腹感响应在所有4个分量表中无统计学上的差异。在治疗组之间，可口性响应之间不存在统计学上的显著性差异，然而与0gLP和2g LP的研究产品相比较，3g LP存在显著性趋势(分别为p＝0.0491和p＝0.0395)。
对结果进行总结：相对于进食0g LP棒，进食2g LP棒的餐后饱胀度iAUC显著更大(14.2％；p＝0.04)；然而未观察到3g LP和0g LP之间的显著性差异。治疗组的餐后饥饿感iAUC之间不存在显著性差异。与0g LP相比较，血浆亮氨酸的Cmax存在剂量依赖性增加(对于2g LP和3g LP，分别为167％和260％；p<0.0001)。与2g LP相比较，3g LP的血浆亮氨酸Tmax平均晚9.5分钟(p<0.0001)。这在2g LP和3g LP之间具有显著性差异。结果表明，在蛋白质含量降低的蛋白质营养棒中亮氨酸利用度的增加可以增加人体的饱腹感；然而未检测到亮氨酸的剂量反应。
图1A和图2A分别示出了在餐后240分钟时间内每30分钟完成的所感受到的饱胀度和饥饿感响应，而图1B和图2B中的柱形图示出其相应图的iAUC分析。所有图的数值均以LSM+SE表示。在图中，abc表示经混合效应ANOVA(p<0.05)评估的不同治疗组的iAUC的LSM。参考图1A和图1B，与0g LP(p＝0.0359)相比较，2g LP的餐后240分钟所感受到的饱胀度iAUC响应存在显著性增加(14.2％)，而3g LP的并非如此(10.7％；p＝0.11)。虽然3g LP的饱胀度iAUC与0g LP或2g LP的不具有显著性差异，但其Cmax比0g LP的大12.2％(p＝0.0077)。因此，3g LP的最大饱胀度显著较大。2g LP的Cmax未达到显著性。
图2B中的柱形图的iAUC分析证明，治疗组的餐后饥饿感之间不具有显著性差异。所有的三个治疗在进食后大约30分钟时具有谷底(Cmin)饥饿感，饥饿感在其余的评估时间点处稳定增加。
图3A和图4A的线形图分别示出在餐后240分钟内每30分钟完成的所感受到的预期食物消耗和进食欲望响应，而图4A和图4B的柱形图示出其相应图的iAUC分析。如图3A和图3B所示，相对于0g LP，2g LP的餐后240分钟的预期食物消耗iAUC显著降低(7.6％；p＝0.0179)，而相对于0g LP，3g LP并非如此(4.5％；p＝0.16)。所有的三个治疗在进食后大约30分钟时具有谷底(Cmin)预期食物消耗，在其余的评估时间点处，预期食物消耗稳定增加。
在图4B的柱形图中，iAUC分析证明，在治疗组之间未检测到进食欲望的显著性差异；然而，2g LP和0g LP的iAUC之间存在差异趋势(6.5％；p＝0.07)。所有的三个治疗在进食后大约30分钟具有谷底(Cmin)分数，该分数在其余的评估时间点处稳定增加。
图5示出在餐后240分钟时间内每30分钟的血浆亮氨酸响应。如图5所示，随着来自肽的亮氨酸的含量增加，餐后血浆亮氨酸水平显著增加(时间-治疗相互作用，p<0.001)。2gLP和3g LP的Cmax显著高于0g LP的Cmax(2g LP的高167％，3g LP的高260％；p<0.0001)，3gLP的Cmax比2g LP的Cmax高34.9％(p<0.0001)。3g LP的Tmax平均比2g LP的Tmax晚9.5分钟(p<0.0001)。此外，2g LP和3g LP的iAUC显著高于0g LP的iAUC(p<0.0001)，3g LP的iAUC显著大于2g LP的iAUC(p<0.0001)。药代动力学参数Cmax、Tmax和iAUC示出于表5中。
表5添加有亮氨酸的营养蛋白质棒对于女性在240分钟内的药代动力学参数的剂量响应效应
值为LSM±SE，n＝40。不同治疗组的Cmax、Tmax和iAUC的abcLSM是不同的，由混合效应重复测量ANOVA(p<0.05)评估。
虽然对于PYY iAUC，未检测到治疗的主要作用，(图9)探索性成对比较表明与0gLP治疗相对比，2g LP治疗具有较大的PYY iAUC的趋势(P＝0.064)。如图6和图7所示，皮尔森相关分析表明餐后血浆PYY浓度、所感受到的饱胀度响应和亮氨酸浓度之间的正相关性。
以上数据表明仅提供2g LP剂量(相对于3g)对于选择饱腹感等级产生显著的影响。应当注意，3g LP的数据仅作为比较例提供，3g LP包含3.77g的总亮氨酸。重要的是，血浆亮氨酸动力学对于调节人体饱腹感的作用是未知的。如果亮氨酸起作用，可能是驱动饱腹感响应的峰值血浆响应、达到峰值响应的时间，和/或总iAUC。值得注意的是，3g LP剂量的Tmax平均比2g LP剂量的Tmax晚9.5分钟。本发明人推测，从生物学角度来看，3g LP剂量可能已经达到饱和点。
该数据证明血浆亮氨酸的剂量依赖性增加，其中2g的亮氨酸肽剂量(2205μM*4h)有效地超出了之前所报道的包含40g完整乳清蛋白的产品的血浆亮氨酸响应(见表5)。一项早前的考察乳清蛋白对肌肉蛋白质合成的作用的研究报道，包含2.3g亮氨酸的乳清蛋白饮料的生物利用度(AUC)(667μM*4h)比2g亮氨酸肽剂量的(2205μM*4h)低约3.3倍，如上表5所示。类似地，在相同组进行的另一项早前的研究中，考察了20g和40g乳清蛋白饮料对肌原纤维蛋白质合成的作用，据其报道，包含4g亮氨酸的40g剂量中的亮氨酸的生物利用度(Cmax)(320μM)比2g亮氨酸肽剂量的(422μM)低约1.3倍。
普遍认为，与常规蛋白质膳食相比，食用高蛋白膳食使得PYY和所感受的饱腹感增加。在常量营养物中，膳食蛋白引起PYY的最大释放。已经表明，氨基酸的氨基基团、羧酸基团和环结构促进位于回肠和结肠中的L细胞的PYY释放。膳食亮氨酸是否可以驱动这种饱腹感激素的蛋白介导释放是未知的。本研究证明，与0g LP相比较，对于2g LP的响应，PYY浓度增加最多。这表明，较高浓度的亮氨酸(与蛋白质无关)可以特别有效地促进L细胞分泌PYY。请注意，PYY浓度还分别直接对应于2g LP和3g LP的饱胀度等级，使得最高亮氨酸剂量并未引起最高的PYY响应。
血浆亮氨酸的剂量响应未体现在饱腹感响应的连续变化上。以上数据表明了血浆亮氨酸的剂量依赖性增加，然而仅提供2g LP(非3g LP)对所感受到的饱腹感产生显著的影响。2g LP剂量的峰值血浆亮氨酸浓度超过先前报道的使用20g和40g完整乳清蛋白分离物的血浆浓度。
虽然通过参考特定实施例具体地示出和描述了本发明，但本领域技术人员应理解，在形式和细节方面可以做出多种改变，而不脱离本发明的精神和范围。本发明人期望普通技术人员适当地使用这些变型，并且本发明人预期可以以不同于本文具体描述的方式来实践本发明。因此，如适用的法律允许，本发明包括在此附有的权利要求书中列举出的主题的所有改进和等同物。此外，除非本文另外指出或者明显地与上下文矛盾，否则上文描述的元素在其所有可能的变型中的任何组合都被本发明包括在内。例如，在本文中使用的“和/或”是指具体公开了两个特定的特征或部件中的每一个具有另一个或者不具有另一个的具体公开。例如，“A和/或B”是指(i)A、(ii)B、以及(iii)A和B中的每一个的具体公开，正如在此处将每一个单独列出一样。此外，当数值被描述为“最多”或“至少”时，可以理解的是，这些数值中的任何数值可以独立地结合以得到一个范围。

Claims (19)

1.一种方法，包括向消费者提供一种食品产品，该食品产品包含，每份量为40g至80g干重或者每份量为177mL至354mL液体，蛋白质和亮氨酸，所述蛋白质存在的量为少于13.5g的总蛋白，所述亮氨酸存在的量为1.0g至3.5g的总亮氨酸，所述总亮氨酸仅由所述总蛋白和亮氨酸结合肽组合物的组合提供，所述总蛋白包括该食品产品中来源于所述亮氨酸结合肽的蛋白质和该食品产品中的一种或多种蛋白质源，所述食品产品诱导所述消费者的饱腹感，所述方法用于非治疗目的。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述向消费者提供食品产品的步骤形成膳食制度的一部分。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述总亮氨酸存在的量为至少2.0g。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白质存在的量为8g以上的总蛋白。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，高达90％的所述总亮氨酸由所述亮氨酸结合肽组合物提供。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品选自由谷物产品、强化水、果汁、水果思慕雪、奶昔、乳品饮料、能量饮料、小杯液体、焙烤产品、酸奶及其组合组成的组中。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，至少35％的所述总亮氨酸由所述亮氨酸结合肽提供。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，至少50％的所述总亮氨酸由所述亮氨酸结合肽提供。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，35％至80％的所述总亮氨酸由所述亮氨酸结合肽提供。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品包含至少10g的总蛋白。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品包含10g的总蛋白。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品包含至少2.5g的总亮氨酸。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品包含180kcal。
14.根据权利要求1所述的方法，其中，单份量在50g至75g的干重范围内。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，单份量在40g至50g的干重范围内。
16.根据权利要求1所述的方法，其中，单份量在70g至80g的干重范围内。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品包含至少2.2g的总亮氨酸。
18.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品是格兰诺拉燕麦产品。
19.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食品产品是营养棒。
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