CN108424913A - 甜瓜u6基因及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种甜瓜U6基因及其应用，本发明首次从甜瓜中克隆了U6基因全长序列，该基因与拟南芥、水稻、番茄中的U6基因高度同源，且在甜瓜根、茎、叶、花、果实、种子等不同组织中组成性表达，可初步确定为用于miRNA相对定量分析的内参基因。经试验证实甜瓜U6基因及其引物用于甜瓜miRNA的相对定量表达分析，具有准确性及稳定性的特点，为甜瓜基因定量表达分析提供新的选择。

Description

甜瓜U6基因及其应用
技术领域
本发明属于植物分子生物学技术领域，涉及到甜瓜U6基因及其应用。
背景技术
甜瓜(Cucumis melo L.)是一种世界广泛栽培的葫芦科作物，具有重要的经济价值。在对甜瓜基因表达定量分析时，为了克服非生物变异的影响，确保结果的准确性，选择表达稳定的基因作为内参进行数据的标准化最为关键。故，对甜瓜中能在不同组织中稳定表达的内参基因的开发，依然是本领域所面临的问题。
MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类非常重要的非蛋白编码小RNA，其长度一般为21-24个核苷酸，主要通过对靶标mRNA剪切或抑制其翻译过程在转录后水平调控基因表达。从2002年植物中miRNAs被发现以来，miRNAs的挖掘、表达和功能研究一直是一个研究热点。目前植物中已经发现数百种miRNAs，在植物组织器官的生长发育调控，逆境应答及激素信号调节等方面发挥重要作用。
研究miRNA的功能，首先应该对其时空表达特异性进行分析。目前用于miRNA表达分析的方法主要有高通量测序、基因芯片和实时荧光定量法。由于高通量测序和基因芯片法成本很高，不适于少量miRNA的表达分析。而基于SYBR Green染料的荧光定量PCR有着操作相对简单，成本较低，灵敏度高的优势，逐渐成为miRNA时空表达特异性分析的常用方法。而在相对定量中，内参基因的选择尤为重要。由于miRNA序列长度的特殊性，限制了传统的内参基因如β-actin等的应用。因此，有必要开发新的用于miRNA定量表达研究的内参基因。
U基因编码一种细胞核小RNA(small nuclear RNA,snRNA)，其长度一般为100-215个核苷酸，由于其编码的snRNA序列富含U，故命名为U基因。植物中主要包含7个U基因，命名为U1-U7，除U6由RNA聚合酶III催化转录以外，其他snRNA均由聚合酶II催化转录而来。由于U6编码的snRNA在不同组织中高表达，含量比较丰富，且表达稳定不受环境影响而变化，逐渐成为研究miRNA表达的内参基因。
但是目前在甜瓜中U6基因序列尚未报道，也没有相关引物的开发与应用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，在甜瓜中克隆到U6基因全长序列，并初步确定该基因是用于miRNA相对定量分析的内参基因。
本发明采用的技术方案如下：本发明甜瓜U6基因，其snRNA的核心序列为：
GTCCCTTCGGGGACATCCGATAAAATTGGAACGATACAGAGAAGATTAGCATGGCCCCTGCGCAAGGATGACACGCACAAATCGAGAAATGGTCCAAATTTTTTTTT(SEQ ID NO.1)。
基于甜瓜U6snRNA核心序列进行引物设计，获得的实时荧光定量PCR引物序列如下：
FP:GACATCCGATAAAATTGGAAC(SEQ ID NO.2)
RP:TTTGTGCGTGTCATCCTTGCGC(SEQ ID NO.3)
本发明人通过对甜瓜根、茎、叶、花、果实中的U6基因进行扩增发现该引物熔解曲线均出现单峰，特异性较好，且没有引物二聚体出现。同时，扩增曲线表明甜瓜不同组织中U6基因的CT值均在20左右，稳定性较好。
因此，进一步，本发明提供所述甜瓜U6作为内参基因在甜瓜miRNA的相对定量表达分析中的应用。
所述应用包括采用基于甜瓜U6snRNA核心序列设计的引物进行实时荧光定量PCR；所述引物为实时荧光定量PCR引物，其序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
由于miRNA定量表达分析过程需要特殊的茎环引物法进行反转录，传统的内参基因如β-actin等不适用于miRNA定量表达分析。因此选择合适的内参基因对于miRNA定量分析结果的可靠性尤为重要。本发明的目的是提供一种用于甜瓜miRNA定量表达分析所需的内参基因及其合适的引物。甜瓜U6基因属于一种非编码的小RNA，在目前公布的甜瓜基因组及NCBI网站中均没有该基因的序列信息。本发明首次克隆得到了甜瓜U6基因，并设计了用于荧光定量PCR检测的引物。实验证明，该基因及其引物可稳定用于甜瓜miRNA的荧光定量表达分析。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明首次从甜瓜中克隆了一种U6基因全长序列，该基因与拟南芥、水稻、番茄中的U6基因高度同源，且在甜瓜根、茎、叶、花、果实、种子等不同组织中组成性表达，可初步确定为用于miRNA相对定量分析的内参基因。
2、本发明人基于U6基因设计引物，并采用荧光定量PCR法检测甜瓜miR156、miR172在不同组织中的相对表达量，检测结果与高通量测序结果保持一致，验证了甜瓜U6基因及其引物用于甜瓜miRNA的相对定量表达分析的准确性及稳定性。
附图说明
图1为甜瓜U6a、U6b、U6c前体序列比对结果。
图2为甜瓜U6a、U6b、U6c基因PCR电泳结果。
图3为甜瓜U6基因引物熔解曲线。
图4为甜瓜U6基因扩增曲线。
图5为荧光定量PCR检测甜瓜miR156和miR172组织表达。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。本发明中如无特殊说明，所采用的方法均为本领域的常规方法，如《分子克隆实验指南》记载的方法。本发明中所用试剂，如无特殊说明，均为本领域常规试剂，可以从商业途径获得。本发明所用仪器、设备等，如如无特殊说明，均为本领域常规仪器、设备。
实施例一、甜瓜U6基因的克隆
1、甜瓜U6前体基因鉴定
为了鉴定甜瓜中存在的U6基因，我们首先从NCBI数据库下载了拟南芥U6前体基因核苷酸序列，并用该序列和甜瓜基因组序列进行Blast分析，结果从甜瓜基因组鉴定到3条U6前体基因序列，分别命名为U6a、U6b、U6c。甜瓜U6a、U6b、U6c前体序列比对结果如图1所示。同时，基于3条前体基因序列设计引物进行PCR扩增和凝胶电泳分析，PCR电泳验证结果如图2所示。
2、甜瓜U6snRNA核心序列的获得
根据U6a、U6b、U6c前体基因序列比对结果确定甜瓜U6snRNA的核心序列为：
GTCCCTTCGGGGACATCCGATAAAATTGGAACGATACAGAGAAGATTAGCATGGCCCCTGCGCAAGGATGACACGCACAAATCGAGAAATGGTCCAAATTTTTTTTT(SEQ ID NO.1)
实施例二、甜瓜U6基因的q RT-PCR检测
1.基于甜瓜U6snRNA核心序列进行引物设计，引物序列如下：
FP:GACATCCGATAAAATTGGAAC(SEQ ID NO.2)
RP:TTTGTGCGTGTCATCCTTGCGC(SEQ ID NO.3)
2.甜瓜U6snRNA反转录及PCR扩增
(1)反转录引物采用以上基于甜瓜U6snRNA序列设计的反向引物(SEQ ID NO.3)，反转录体系及程序为：
65℃放置5min，冰上放置2min，然后加入以下预混液。
16℃30min，42℃30min，85℃5min。
(2)将反转录产物稀释100倍进行PCR检测，Quantitative RT-PCR反应体系为：
该Forward Primer即基于甜瓜U6snRNA序列设计的正向引物(SEQ ID NO.2)；Universal R Primer引物序列为：TATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTAT(SEQ ID NO.8)。
采用两步法进行Quantitative RT-PCR，反应条件：初始变性温度95℃，变性时间3min；变性温度94℃变性时间15s，延伸温度60℃，延伸时间30s；40个循环。
(3)结果分析：通过对甜瓜根、茎、叶、花、果实中的U6基因进行扩增发现该引物熔解曲线均出现单峰，特异性较好，且没有引物二聚体出现(图3)。同时，扩增曲线表明甜瓜不同组织中U6基因的CT值均在20左右，稳定性较好(图4)。
3.以甜瓜U6snRNA为内参基因进行miR156和miR172表达分析
(1)反转录引物序列为：
MiR156-RTP：
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGTGCTCA(SEQ ID NO.4)；
MiR172-RTP：
GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACATGCAGC(SEQ ID NO.5)；
U6-RTP：
TTTGTGCGTGTCATCCTTGCGC(SEQ ID NO.3)。
(2)荧光定量PCR引物序列
MiR156-F：
CGGTGACAGAAGAGAGTGAGCAC(SEQ ID NO.6)；
MiR172-F：
CGGAGAATCTTGATGATGCTGC(SEQ ID NO.7)；
Universal R：
TATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTAT(SEQ ID NO.8)。
(3)结果分析
为了进一步验证甜瓜U6内参基因及其引物的可靠性，我们对甜瓜miR156和miR172的组织表达特异性进行了分析。荧光定量检测结果与高通量测序定量结果表达趋势完全一致，表明该U6基因及其引物可稳定用于甜瓜miRNA表达分析(表1和图5)。
表1.miR156和miR172在甜瓜不同组织中RPM值
根 茎 叶 花 果实
miR156 91.1591 430.1058 1001.3933 501.2084 27.1219
miR172 54.9025 690.9363 601.2084 429.1385 31.1786
综上，本发明提供了一种甜瓜内参基因——U6基因，并提供了利用该基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物，所设计的实时荧光定量PCR引物用于甜瓜miRNA表达分析，具有稳定性和可靠性的优点。此外，所设计的实时荧光定量PCR引物特异性强，从而能够大大的提高了采用实时荧光定量检测甜瓜miRNA表达的检测效率，并提高了检测结果的可信度。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所
<120> 甜瓜U6基因及其应用
<130>
<160> 8
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 107
<212> DNA
<213> Cucumis melo L.
<400> 1
gtcccttcgg ggacatccga taaaattgga acgatacaga gaagattagc atggcccctg 60
cgcaaggatg acacgcacaa atcgagaaat ggtccaaatt ttttttt 107
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gacatccgat aaaattggaa c 21
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tttgtgcgtg tcatccttgc gc 22
<210> 4
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacgtgctc a 51
<210> 5
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacatgcag c 51
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cggtgacaga agagagtgag cac 23
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cggagaatct tgatgatgct gc 22
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
tatccagtgc agggtccgag gtat 24

Claims (5)

1.甜瓜U6基因，其snRNA的核心序列如SEQ ID NO.1所示。
2.甜瓜U6基因作为内参基因在甜瓜miRNA的相对定量表达分析中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征是，所述应用包括采用根据权利要求1所述甜瓜U6snRNA的核心序列设计的引物进行实时荧光定量PCR。
4.如权利要求3所述的应用，其特征是，所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
5.如权利要求4所述的应用，其特征是，所述实时荧光定量PCR程序为：初始变性温度95℃，变性时间3min；变性温度94℃变性时间15s，延伸温度60℃，延伸时间30s；40个循环。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114703188A (zh) * 2022-03-31 2022-07-05 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.6及其克隆与应用
CN114703187A (zh) * 2022-03-31 2022-07-05 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.7及其克隆与应用
CN114774414A (zh) * 2022-03-31 2022-07-22 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.5及其克隆与应用
CN114790456A (zh) * 2021-01-24 2022-07-26 东北林业大学 野菊u6基因及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105543220A (zh) * 2016-02-16 2016-05-04 安徽农业大学 茶树snRNA U6基因及其应用
CN107227340A (zh) * 2017-04-26 2017-10-03 武汉市农业科学技术研究院作物科学研究所 用于甜瓜果实基因pcr表达分析的内参基因及该内参基因的稳定性验证方法
CN107567499A (zh) * 2015-03-27 2018-01-09 纳幕尔杜邦公司 大豆u6核小rna基因启动子及其在植物小rna基因的组成型表达中的用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107567499A (zh) * 2015-03-27 2018-01-09 纳幕尔杜邦公司 大豆u6核小rna基因启动子及其在植物小rna基因的组成型表达中的用途
CN105543220A (zh) * 2016-02-16 2016-05-04 安徽农业大学 茶树snRNA U6基因及其应用
CN107227340A (zh) * 2017-04-26 2017-10-03 武汉市农业科学技术研究院作物科学研究所 用于甜瓜果实基因pcr表达分析的内参基因及该内参基因的稳定性验证方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHI-YU DUAN ET AL.: "Selection of reference genes for miRNA qRT-PCR under abiotic stress in grapevine", 《SCI. REP.》 *
虞夏清: "甜瓜属异源多倍化引起叶色黄化的光适应性评价和microRNAs分析", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114790456A (zh) * 2021-01-24 2022-07-26 东北林业大学 野菊u6基因及其应用
CN114703188A (zh) * 2022-03-31 2022-07-05 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.6及其克隆与应用
CN114703187A (zh) * 2022-03-31 2022-07-05 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.7及其克隆与应用
CN114774414A (zh) * 2022-03-31 2022-07-22 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.5及其克隆与应用
CN114774414B (zh) * 2022-03-31 2023-05-23 东北林业大学 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.5及其克隆与应用

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