CN108414758A - 用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法及其应用 - Google Patents

用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了用于检测肿瘤标志物miRNA‑141的SERS生物传感器的制备方法及其应用,特点是包括以下步骤:(1)将Fe3O4@Au磁性纳米颗粒与捕获探针结合得到捕获单元溶液;(2)将空心金纳米球与引发探针结合制备即得信号单元溶液;(3)将捕获单元、miRNA‑141和信号单元反应结合,磁选分离得到SERS生物传感器,其应用为利用拉曼光谱仪测定SERS信号,测定一系列不同浓度的miRNA‑141对应的SERS信号强度,建立miRNA‑141浓度与SERS信号强度之间的定量关系;根据该定量关系即可测定未知样品中miRNA‑141浓度,优点是灵敏度高、特异性强、组装过程简单以及检测速度快。

Description

用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方 法及其应用
技术领域
本发明涉及检测肿瘤标志物miRNA-141的检测方法,尤其是涉及用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法及其应用。
背景技术
癌症,也称恶性肿瘤,本质上是一种多基因疾病,是由细胞生长增殖机制失常引起的疾病,严重危害人类健康。联合国世界卫生组织下属的国际癌症研究机构预计到2030年将会有1320万人死于癌症,确诊病例将达到2140万人。虽然癌症死亡率高但并非不可治愈,研究表明:癌症早期是治愈癌症的最佳时期,因此实现对肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗,可以有效地预防和治疗癌症。肿瘤标志物的发现使得早期诊断成为可能。肿瘤标志物是在肿瘤的发生和增殖过程中产生、反映肿瘤存在和生长的物质,大量研究表明,不同种类的肿瘤疾病会导致不同种类微小核糖核酸MicroRNA(miRNA)含量的变化。因此,作为一类具有高特异性的肿瘤标志物,miRNA检测对肿瘤疾病的早期诊疗具有重要科学意义和应用前景。
表面增强拉曼散射光谱(SERS)是一种重要的光谱检测技术,在生物检测方面体现出了相当大的优势。一方面,粗糙的金属表面作为SERS基底,能够使SERS信号强度大大增加,增强幅度能够达到106~1014,因此SERS可对微量或者痕量目标物进行超灵敏检测;另一方面,与其他方法的标记物相比,SERS标记物具有更简单、更广泛、更尖锐的“指纹”信号和良好的重复性。目前,大量新型纳米材料如空心纳米球、纳米颗粒、纳米线等,也被用作为SERS基底以增强信号强度,其中,空心金纳米球、银纳米颗粒因制备方法简单、具有良好的生物相容性、信号增强能力大等优点,尤为受到关注。
生物传感器是以酶、蛋白质、核酸、细胞等生物物质作为敏感元件与待测样品进行接触,并将目标物浓度、物质的量等性质转变为电信号、光信号等可视信号的系统,DNA生物传感器是其中一种,其以DNA为敏感元件,待测定的核酸序列与敏感元件杂交形成双链DNA结构将反应过程的变化转化为能记录的信号,进而推测出待测定的核酸序列的量,近年来,聚合酶链式反应(PCR)、杂交链式反应(HCR)等技术在DNA生物传感器构建方面有不少应用。目前,国内外还没有公开关于用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法的相关研究报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、特异性强、组装过程简单以及检测速度快的用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法及其应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
(1)捕获单元制备
a. 制备Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将0.7~1.0 g FeCl3·6H2O和0.2~0.5 g FeCl2·4H2O溶于50~100 mL水,通氮除氧,搅拌混合均匀,升温到80~100 ℃,缓慢滴加20~25wt%氨水,调节pH=9~10,继续加热搅拌1~2 h后,停止加热,在氮气保护下,搅拌回流,冷却至室温,水清洗至中性,乙醇定容至50 mL,即得Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将40~50 mL Fe3O4磁性纳米颗粒溶液超声0.5~1 h,加入0.2~0.3 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES),搅拌4~5 h,加入1~2 mL0.1~0.5 mol/L硝酸溶液,继续搅拌3~4 h,水清洗至中性,乙醇定容至100 mL,即得氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
c. 制备Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液:将5~10 mL氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液和10~20 mL 1wt% HAuCl4溶液在60~100 kHz的超声频率下混合,搅拌1 h后,缓慢加入30~50mL 20~30 mmol/L柠檬酸三钠溶液,超声2~3 h,水清洗至中性,乙醇定容至20 mL,即得Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液;
d. 制备捕获单元溶液:取50~100 µL Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液超声5~10 min,加入20~50 µL 1~5 µmol/L捕获探针(CP)溶液,用DNA固定液定容至200 µL,混合均匀,37℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h,利用Au-S键合作用,捕获探针(CP)自组装在Fe3O4@Au磁性纳米颗粒的表面,清洗;滴加10~20 µL 10~20 mmol/L巯基己醇(MCH)溶液封闭非特异性吸附位点,清洗;用缓冲液定容至100 µL,即得捕获单元溶液;
(2)信号单元制备
a. 制备金纳米颗粒(GNPs)溶液:取10~20 µL四羟甲基氯化磷(THPC)加入到50~60mL 6~7 mmol/L NaOH溶液中,搅拌5 min,加入1.8~2.0 mL 1wt% HAuCl4溶液,溶液颜色由亮黄色变为紫黑色再变为酒红色,继续搅拌30 min,置于4 ℃冰箱密封避光保存,陈化2周,即得金纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化SiO2纳米颗粒溶液:取2~3 mL正硅酸乙酯(TEOS)加入到40~60 mL乙醇中,再加入3~4 mL水、3~4 mL 10~20 wt%氨水和40~50 mL乙醇,混合均匀,室温下反应20 h,水清洗,乙醇定容至50 mL,得到SiO2纳米颗粒溶液;取10 mL SiO2纳米颗粒溶液,加入100~120 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES),混合均匀,80 ℃下烘箱中反应2 h,冷却之后,超声0.5 h,离心清洗,用水定容至10 mL,得到氨基化SiO2纳米颗粒溶液;
c. 制备二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液:取100~120 µL氨基化SiO2纳米颗粒溶液,加入到50~60 mL金纳米颗粒溶液中,搅拌2 h,清洗,水定容至20 mL,即得二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液;
d. 制备空心金纳米球(HGNs)溶液:称取10~15 mg K2CO3溶于40~50 mL水中,搅拌5min后,逐滴加入0.8~1.0 mL 1wt% HAuCl4溶液,继续搅拌,溶液由黄色逐渐变为无色,得到K2CO3-HAuCl4生长液;取40~50 mL K2CO3-HAuCl4生长液,加入0.5~1.0 mL二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液,搅拌5 min,加入0.3~0.5 mL 0.1 mol/L H2O2溶液,继续搅拌30 min,溶液由粉红变紫色再变蓝色最后深红色,离心清洗,水定容至20 mL,得到金纳米壳溶液;取5~6 mL金纳米壳溶液,加入2~3 µL 0.02 mol/L氢氟酸(HF),缓慢搅拌,离心清洗,水定容至20 mL,得到空心金纳米球(HGNs)溶液;
e. 制备信号单元溶液:取300~400 µL空心金纳米球(HGNs)溶液,超声10 min,加入5~10 µL 5~10 µmol/L引发探针(TP)溶液,用DNA固定液定容至500 µL,混合均匀,37 ℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h后,加入发卡DNA 1(H1)和发卡DNA 2(H2),37 ℃下孵育2~3 h,进行HCR扩增,离心清洗,缓冲液定容500 µL,得到HGNs/HCR溶液;取400~500 µL的HGNs/HCR溶液,加入5~10 µL 5~10 mmol/L AgNO3溶液,反应20 min,Ag+吸附到HGNs表面和DNA双链中,加入10~20 µL 10~20 mmol/L氢醌溶液,反应30 min,吸附的Ag+被还原为银纳米颗粒,缓冲液清洗,定容至500 µL,得到AgNPs@HGNs/HCR溶液;取400~500 µL的AgNPs@HGNs/HCR溶液,加入5~10 µL 0.5~1.0 mmol/L罗丹明6G(R6G)溶液,孵育2~3 h,缓冲液清洗,即得信号单元溶液;
(3)SERS生物传感器制备
取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2h后;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次,得到用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器。
所述的捕获探针的核苷酸序列为:5’-SH-GAA AGC CCA TCT TTA CCA GAC AGTGTT AGG TTT GGC TTT C-3’所述的引发探针的核苷酸序列为: 5’-SH- CGG CGA TAA CAAGAA AGC CAA ACC-3’;所述的发卡DNA 1的核苷酸序列为: 5’- TAA CAA GAA AGC CAA ACCGAG ATG GGT TTG GCT TTC TTG TTA TCG CCG -3’;所述的发卡DNA 2的核苷酸序列为:5’-CAT CTC GGT TTG GCT TTC TTG TTA CGG CGA TAA CAA GAA AGC CAA ACC-3’;所述的miRNA-141的核苷酸序列为:5’-UAA CAC UGU CUG GUA AAG AUG G-3’。
所述的DNA固定液的配方如下:10 mmol/L Tris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,10 mmol/L三(2-羧乙基)膦(TCEP)和0.1 mol/L NaCl,pH为7.6~8.0;所述的缓冲液配方如下:10mmol/L Tris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,0.3 mol/L NaCl和1 mmol/L MgCl2,pH为7.6~8.0;
一种利用上述SERS生物传感器检测肿瘤标志物miRNA-141的方法,包括以下步骤:
(1)取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2 h;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次得到权利要求1-3所述的用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器,利用拉曼光谱仪测定SERS信号;
(2)测定一系列不同浓度的miRNA-141对应的SERS信号强度,建立miRNA-141浓度与SERS信号强度之间的定量关系;根据该定量关系即可测定未知样品中miRNA-141浓度。
发明原理如下:本发明利用碱基互补配对原则,制备捕获单元和信号单元,构建了一种检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器。
捕获单元,由捕获探针(CP)通过Au-S键结合于Fe3O4@Au磁性纳米颗粒表面而成,具有以下功能:(1)捕获探针(CP)是发卡结构,可以特异性捕获miRNA-141而打开发卡结构,其末端可以和信号单元杂交;(2)Fe3O4@Au生物相容性好,有利于大量捕获探针被固定在其表面;(3)Fe3O4@Au具有磁性,可以通过磁力,迅速实现清洗、分离,极大程度简化操作。
信号单元,通过如下步骤制备而成:引发探针(TP)通过Au-S键结合于空心金纳米球表面,在H1和H2存在下,TP原位触发杂交链式反应(HCR),形成双链DNA超夹心结构。加入AgNO3溶液,经氢醌还原后,空心金纳米球表面和双链DNA超夹心结构中形成银纳米颗粒,银纳米颗粒表面吸附拉曼信号分子R6G,可产生SERS信号。该信号单元具有以下功能:(1)一个miRNA-141分子,对应于一个信号单元,而一个信号单元对应于大量双链DNA超夹心结构,实现一级放大;空心金纳米球和每一个双链DNA超夹心结构,对应于其上的大量银纳米颗粒,实现二级放大;每一个银纳米颗粒,对应于其上的大量拉曼信号分子R6G;因此,银纳米颗粒本身对SERS信号有较大增强作用,再通过上述三级放大,SERS信号极大程度地增强;(2)HCR扩增后H2末端与捕获探针(CP)末端互补,通过杂交,可以与捕获单元连接在一起形成复合物。
检测机理:miRNA-141存在时,捕获单元上的捕获探针(CP)可以特异性识别并捕获miRNA-141,其发卡结构被打开;该发卡结构末端与信号单元中HCR扩增后H2末端互补而杂交,捕获单元与信号单元相连接形成复合物;通过磁性快速分离;拉曼光谱仪检测复合物的拉曼信号,通过上述三级放大作用,miRNA-141的检测限低至0.03 fmol/L。
与现有技术相比,本发明的优点在于:
(1)灵敏度高。SERS方法本身具有高灵敏度,本发明通过上述三级放大作用,SERS信号极大程度地增强,检测灵敏度超高,miRNA-141的检测限低至0.03 fmol/L。
(2)特异性强。本发明是基于核酸分子之间碱基互补配对原则而构建的生物传感器,干扰物质不是特定捕获探针(CP)的目标物,因此待测液中的干扰物质并不能与CP结合,CP的发卡结构不能被打开,无法和信号单元中的H2杂交,也就不能产生SERS信号,故对本检测体系无干扰。
(3)传感器组装过程简单,检测过程迅速。捕获单元设计为磁性结构,可以通过磁力,迅速实现清洗、分离,极大程度简化传感器组装过程。除DNA孵育杂交时间外,检测几乎及时完成。
(4)此方法具有普适性,只需适当改变CP、TP、H1、H2序列,即可实现对不同种miRNA-141的检测。
综上所述,本发明制备了一种高灵敏检测miRNA-141的SERS生物传感器,联用空心金纳米球和HCR技术,在空心金纳米球表面进行HCR扩增,随后将大量银纳米颗粒同时固载到空心金纳米球表面和DNA双链中,实现SERS信号的三级放大,构建出高灵敏度SERS生物传感器,具有灵敏度高、特异性强、简单、快速、易于操作等优点,可以实现对超低浓度miRNA-141的检测,具有良好的应用前景。
附图说明
图1为基于SERS生物传感器高灵敏检测miRNA-141的检测原理图;
图2为不同浓度miRNA-141的SERS信号(y)—浓度(x)的关系图;
图3为不同浓度miRNA-141的SERS信号(y)—浓度(x)对数线性图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
具体实施例一
实施例1
一种用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法,包括以下步骤:
(1)捕获单元制备
a. 制备Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将0.8 g FeCl3·6H2O和0.4 g FeCl2·4H2O溶于70mL水,通氮除氧,搅拌混合均匀,升温到90 ℃,缓慢滴加20~25wt%氨水,调节pH=9~10,继续加热搅拌1~2 h后,停止加热,在氮气保护下,搅拌回流,冷却至室温,水清洗至中性,乙醇定容至50 mL,即得Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将45 mL Fe3O4磁性纳米颗粒溶液超声0.7 h,加入0.25 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES),搅拌4~5 h,加入1.5 mL 0.3 mol/L硝酸溶液,继续搅拌3~4 h,水清洗至中性,乙醇定容至100 mL,即得氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
c. 制备Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液:将7 mL氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液和15 mL1wt% HAuCl4溶液在8 kHz的超声频率下混合,搅拌1 h后,缓慢加入40mL 25 mmol/L柠檬酸三钠溶液,超声2~3 h,水清洗至中性,乙醇定容至20 mL,即得Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液;
d. 制备捕获单元溶液:取80 µL Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液超声8 min,加入35 µL 3µmol/L捕获探针(CP)溶液,用DNA固定液定容至200 µL,混合均匀,37 ℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h,利用Au-S键合作用,捕获探针(CP)自组装在Fe3O4@Au磁性纳米颗粒的表面,清洗;滴加15 µL 15 mmol/L巯基己醇(MCH)溶液封闭非特异性吸附位点,清洗;用缓冲液定容至100 µL,即得捕获单元溶液;
(2)信号单元制备
a. 制备金纳米颗粒(GNPs)溶液:取15 µL四羟甲基氯化磷(THPC)加入到55 mL 6.5mmol/L NaOH溶液中,搅拌5 min,加入1.9 mL 1wt% HAuCl4溶液,溶液颜色由亮黄色变为紫黑色再变为酒红色,继续搅拌30 min,置于4 ℃冰箱密封避光保存,陈化2周,即得金纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化SiO2纳米颗粒溶液:取2.5 mL正硅酸乙酯(TEOS)加入到50 mL乙醇中,再加入3.5 mL水、3.5 mL 15 wt%氨水和45 mL乙醇,混合均匀,室温下反应20 h,水清洗,乙醇定容至50 mL,得到SiO2纳米颗粒溶液;取10 mL SiO2纳米颗粒溶液,加入110 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES),混合均匀,80 ℃下烘箱中反应2 h,冷却之后,超声0.5 h,离心清洗,用水定容至10 mL,得到氨基化SiO2纳米颗粒溶液;
c. 制备二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液:取1100 µL氨基化SiO2纳米颗粒溶液,加入到55 mL金纳米颗粒溶液中,搅拌2 h,清洗,水定容至20 mL,即得二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液;
d. 制备空心金纳米球(HGNs)溶液:称取12 mg K2CO3溶于45 mL水中,搅拌5 min后,逐滴加入0.9 mL 1wt% HAuCl4溶液,继续搅拌,溶液由黄色逐渐变为无色,得到K2CO3-HAuCl4生长液;取45 mL K2CO3-HAuCl4生长液,加入0.8 mL二氧化硅/金纳米复合颗粒(SiO2@GNPs)溶液,搅拌5 min,加入0.4 mL 0.1 mol/L H2O2溶液,继续搅拌30 min,溶液由粉红变紫色再变蓝色最后深红色,离心清洗,水定容至20 mL,得到金纳米壳溶液;取5.5 mL金纳米壳溶液,加入2.5 µL 0.02 mol/L氢氟酸(HF),缓慢搅拌,离心清洗,水定容至20 mL,得到空心金纳米球(HGNs)溶液;
e. 制备信号单元溶液:取350 µL空心金纳米球(HGNs)溶液,超声10 min,加入8 µL 8µmol/L引发探针(TP)溶液,用DNA固定液定容至500 µL,混合均匀,37 ℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h后,加入发卡DNA 1(H1)和发卡DNA 2(H2),37 ℃下孵育2~3 h,进行HCR扩增,离心清洗,缓冲液定容500 µL,得到HGNs/HCR溶液;取450 µL的HGNs/HCR溶液,加入8 µL 8mmol/L AgNO3溶液,反应20 min,Ag+吸附到HGNs表面和DNA双链中,加入15 µL 15 mmol/L氢醌溶液,反应30 min,吸附的Ag+被还原为银纳米颗粒,缓冲液清洗,定容至500 µL,得到AgNPs@HGNs/HCR溶液;取400~500 µL的AgNPs@HGNs/HCR溶液,加入8 µL 0.8 mmol/L罗丹明6G(R6G)溶液,孵育2~3 h,缓冲液清洗,即得信号单元溶液;
(3)SERS生物传感器制备
取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2h后;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次,得到用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器。
上述核苷酸序列为:捕获探针(CP):5’-SH-GAA AGC CCA TCT TTA CCA GAC AGTGTT AGG TTT GGC TTT C-3’;引发探针(TP): 5’-SH- CGG CGA TAA CAA GAA AGC CAAACC-3’;发卡DNA 1(H1): 5’- TAA CAA GAA AGC CAA ACC GAG ATG GGT TTG GCT TTC TTGTTA TCG CCG -3’;发卡DNA 2(H2): 5’-CAT CTC GGT TTG GCT TTC TTG TTA CGG CGA TAACAA GAA AGC CAA ACC-3’;miRNA-141: 5’-UAA CAC UGU CUG GUA AAG AUG G-3’。
上述DNA固定液的配方如下:10 mmol/L Tris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,10 mmol/L三(2-羧乙基)膦(TCEP)和0.1 mol/L NaCl,pH为7.6~8.0;缓冲液的配方如下: 10 mmol/LTris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,0.3 mol/L NaCl和1 mmol/L MgCl2,pH为7.6~8.0。
实施例2
同上述实施例1,其区别在于:
(1)捕获单元制备
a. 制备Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将0.7 g FeCl3·6H2O和0.2 g FeCl2·4H2O溶于50mL水;
b. 制备氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将40 mL Fe3O4磁性纳米颗粒溶液超声0.5 h,加入0.2 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,搅拌4 h,加入1 mL 0.5 mol/L硝酸溶液,继续搅拌3~4 h;
c. 制备Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液:将5 mL氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液和10 mL1wt% HAuCl4溶液在60 kHz的超声频率下混合,搅拌1 h后,缓慢加入30 mL 30 mmol/L柠檬酸三钠溶液,超声2 h;
d. 制备捕获单元溶液:取50 µL Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液超声5 min,加入20 µL 5µmol/L捕获探针溶液;
滴加10 µL 20 mmol/L巯基己醇(MCH)溶液封闭非特异性吸附位点;
(2)信号单元制备
a. 制备金纳米颗粒溶液:取10 µL四羟甲基氯化磷(THPC)加入到50 mL 7 mmol/LNaOH溶液中,搅拌5 min,加入1.8 mL 1wt% HAuCl4溶液;
b. 制备氨基化SiO2纳米颗粒溶液:取2 mL正硅酸乙酯(TEOS)加入到40 mL乙醇中,再加入3 mL水、3 mL 20 wt%氨水和40 mL乙醇,混合均匀;取10 mL SiO2纳米颗粒溶液,加入100 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷;
c. 制备二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液:取100 µL氨基化SiO2纳米颗粒溶液,加入到50 mL金纳米颗粒溶液中;
d. 制备空心金纳米球溶液:称取10 mg K2CO3溶于40 mL水中,搅拌5 min后,逐滴加入0.8 mL 1wt% HAuCl4溶液;
取40 mL K2CO3-HAuCl4生长液,加入0.5 mL二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液,搅拌5min,加入0.3 mL 0.1 mol/L H2O2溶液;
取5 mL金纳米壳溶液,加入2 µL 0.02 mol/L氢氟酸;
e. 制备信号单元溶液:
取300 µL空心金纳米球(HGNs)溶液,超声10 min,加入5 µL 10 µmol/L引发探针溶液;
取400 µL的HGNs/HCR溶液,加入5 µL 10 mmol/L AgNO3溶液;
取400 µL的AgNPs@HGNs/HCR溶液,加入5 µL 1.0 mmol/L罗丹明6G(R6G)溶液。
实施例3
同上述实施例1,其区别在于:
(1)捕获单元制备
a. 制备Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将1.0 g FeCl3·6H2O和0.5 g FeCl2·4H2O溶于100mL水;
b. 制备氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将50 mL Fe3O4磁性纳米颗粒溶液超声1 h,加入0.3 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,搅拌5 h,加入2 mL 0.1 mol/L硝酸溶液,继续搅拌3~4h;
c. 制备Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液:将10 mL氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液和20 mL1wt% HAuCl4溶液在100 kHz的超声频率下混合,搅拌1 h后,缓慢加入50 mL 20 mmol/L柠檬酸三钠溶液,超声2~3 h;
d. 制备捕获单元溶液:取100 µL Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液超声10 min,加入50 µL1 µmol/L捕获探针溶液;
滴加20 µL 10 mmol/L巯基己醇(MCH)溶液封闭非特异性吸附位点;
(2)信号单元制备
a. 制备金纳米颗粒溶液:取20 µL四羟甲基氯化磷(THPC)加入到60 mL 6mmol/L NaOH溶液中,搅拌5 min,加入2.0 mL 1wt% HAuCl4溶液;
b. 制备氨基化SiO2纳米颗粒溶液:取3 mL正硅酸乙酯(TEOS)加入到60 mL乙醇中,再加入4 mL水、4 mL 10 wt%氨水和50 mL乙醇,混合均匀;取10 mL SiO2纳米颗粒溶液,加入120 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷;
c. 制备二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液:取120 µL氨基化SiO2纳米颗粒溶液,加入到60 mL金纳米颗粒溶液中;
d. 制备空心金纳米球溶液:称取15 mg K2CO3溶于50 mL水中,搅拌5 min后,逐滴加入1.0 mL 1wt% HAuCl4溶液;
取50 mL K2CO3-HAuCl4生长液,加入1.0 mL二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液,搅拌5min,加入0.5 mL 0.1 mol/L H2O2溶液;
取6 mL金纳米壳溶液,加入3 µL 0.02 mol/L氢氟酸;
e. 制备信号单元溶液:
取400 µL空心金纳米球(HGNs)溶液,超声10 min,加入10 µL 5 µmol/L引发探针溶液;
取500 µL的HGNs/HCR溶液,加入10 µL 5 mmol/L AgNO3溶液;
取500 µL的AgNPs@HGNs/HCR溶液,加入10 µL 0.5 mmol/L罗丹明6G溶液。
具体实施例二
利用上述具体实施例一制备得到的SERS生物传感器检测肿瘤标志物miRNA-141的方法,由图1所示,包括以下步骤:
(1)取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2 h;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次,利用拉曼光谱仪测定SERS信号;
(2)测定一系列不同浓度的miRNA-141对应的SERS信号强度,建立miRNA-141浓度与SERS信号强度之间的定量关系;根据该定量关系即可测定未知样品中miRNA-141浓度。
由图2和图3表明,该传感器的线性范围为0.1 fmol/L~1.0 pmol/L,线性关系为y=8436.6+3283.9*logx,R=0.994,线性良好,可以用于未知样品检测。
具体实施例三
为了考察该方法的准确性与实际应用价值,采用加标回收法,在血清中加入不同浓度的miRNA-141。使用本发明具体实施例二的方法检测结果可知,相对标准偏差(RSD)小于7.4%,回收率为91.5~108.5%,结果令人满意。表明本发明对于血清中miRNA-141的检测结果准确可靠。
表1 人体血清中miRNA-141的检测结果(n=5)
以上结果说明,本发明构建了一种检测miRNA-141的SERS生物传感器,实验过程中只需将捕获单元和信号单元依次加入到待测样品中反应,反应结束后通过磁分离可以马上进行检测,灵敏度高,检测限低,特异性好,操作简单,检测结果准确可靠。通过改变本SERS生物传感器中的CP、TP、H1、H2序列,即可实现不同种miRNA的高灵敏度、高特异性检测。
当然,上述说明并非对本发明的限制,本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内,做出的变化、改型、添加或替换,也应属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)捕获单元制备
a. 制备Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将0.7~1.0 g FeCl3·6H2O和0.2~0.5 g FeCl2·4H2O溶于50~100 mL水,通氮除氧,搅拌混合均匀,升温到80~100 ℃,缓慢滴加20~25wt%氨水,调节pH=9~10,继续加热搅拌1~2 h后,停止加热,在氮气保护下,搅拌回流,冷却至室温,水清洗至中性,乙醇定容至50 mL,即得Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液:将40~50 mL Fe3O4磁性纳米颗粒溶液超声0.5~1 h,加入0.2~0.3 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,搅拌4~5 h,加入1~2 mL 0.1~0.5mol/L硝酸溶液,继续搅拌3~4 h,水清洗至中性,乙醇定容至100 mL,即得氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液;
c. 制备Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液:将5~10 mL氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒溶液和10~20 mL 1wt% HAuCl4溶液在60~100 kHz的超声频率下混合,搅拌1 h后,缓慢加入30~50mL 20~30 mmol/L柠檬酸三钠溶液,超声2~3 h,水清洗至中性,乙醇定容至20 mL,即得Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液;
d. 制备捕获单元溶液:取50~100 µL Fe3O4@Au磁性纳米颗粒溶液超声5~10 min,加入20~50 µL 1~5 µmol/L捕获探针溶液,用DNA固定液定容至200 µL,混合均匀,37 ℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h,利用Au-S键合作用,捕获探针自组装在Fe3O4@Au磁性纳米颗粒的表面,清洗;滴加10~20 µL 10~20 mmol/L巯基己醇溶液封闭非特异性吸附位点,清洗;用缓冲液定容至100 µL,即得捕获单元溶液;
(2)信号单元制备
a. 制备金纳米颗粒溶液:取10~20 µL四羟甲基氯化磷加入到50~60 mL 6~7 mmol/L NaOH溶液中,搅拌5 min,加入1.8~2.0 mL 1wt% HAuCl4溶液,溶液颜色由亮黄色变为紫黑色再变为酒红色,继续搅拌30 min,置于4 ℃冰箱密封避光保存,陈化2周,即得金纳米颗粒溶液;
b. 制备氨基化SiO2纳米颗粒溶液:取2~3 mL正硅酸乙酯加入到40~60 mL乙醇中,再加入3~4 mL水、3~4 mL 10~20 wt%氨水和40~50 mL乙醇,混合均匀,室温下反应20 h,水清洗,乙醇定容至50 mL,得到SiO2纳米颗粒溶液;取10 mL SiO2纳米颗粒溶液,加入100~120 µL 3-氨丙基三乙氧基硅烷,混合均匀,80 ℃下烘箱中反应2 h,冷却之后,超声0.5 h,离心清洗,用水定容至10 mL,得到氨基化SiO2纳米颗粒溶液;
c. 制备二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液:取100~120 µL氨基化SiO2纳米颗粒溶液,加入到50~60 mL金纳米颗粒溶液中,搅拌2 h,清洗,水定容至20 mL,即得二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液;
d. 制备空心金纳米球溶液:称取10~15 mg K2CO3溶于40~50 mL水中,搅拌5 min后,逐滴加入0.8~1.0 mL 1wt% HAuCl4溶液,继续搅拌,溶液由黄色逐渐变为无色,得到K2CO3-HAuCl4生长液;取40~50 mL K2CO3-HAuCl4生长液,加入0.5~1.0 mL二氧化硅/金纳米复合颗粒溶液,搅拌5 min,加入0.3~0.5 mL 0.1 mol/L H2O2溶液,继续搅拌30 min,溶液由粉红变紫色再变蓝色最后深红色,离心清洗,水定容至20 mL,得到金纳米壳溶液;取5~6 mL金纳米壳溶液,加入2~3 µL 0.02 mol/L氢氟酸,缓慢搅拌,离心清洗,水定容至20 mL,得到空心金纳米球溶液;
e. 制备信号单元溶液:取300~400 µL空心金纳米球溶液,超声10 min,加入5~10 µL5~10 µmol/L引发探针溶液,用DNA固定液定容至500 µL,混合均匀,37 ℃下震荡3~4 h,暗处放置24 h后,加入发卡DNA 1和发卡DNA 2,37 ℃下孵育2~3 h,进行HCR扩增,离心清洗,缓冲液定容500 µL,得到HGNs/HCR溶液;取400~500 µL的HGNs/HCR溶液,加入5~10 µL5~10 mmol/L AgNO3溶液,反应20 min,Ag+吸附到HGNs表面和DNA双链中,加入10~20 µL10~20 mmol/L氢醌溶液,反应30 min,吸附的Ag+被还原为银纳米颗粒,缓冲液清洗,定容至500 µL,得到AgNPs@HGNs/HCR溶液;取400~500 µL的AgNPs@HGNs/HCR溶液,加入5~10 µL 0.5~1.0 mmol/L罗丹明6G溶液,孵育2~3 h,缓冲液清洗,即得信号单元溶液;
(3)SERS生物传感器制备
取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2h后;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次,得到用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器。
2.根据权利要求1所述的用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法,其特征在于所述的捕获探针的核苷酸序列为:5’-GAA AGC CCA TCT TTA CCA GAC AGTGTT AGG TTT GGC TTT C-3’;所述的引发探针的核苷酸序列为: 5’-SH- CGG CGA TAA CAAGAA AGC CAA ACC-3’;所述的发卡DNA 1的核苷酸序列为: 5’- TAA CAA GAA AGC CAA ACCGAG ATG GGT TTG GCT TTC TTG TTA TCG CCG -3’;所述的发卡DNA 2的核苷酸序列为:5’-CAT CTC GGT TTG GCT TTC TTG TTA CGG CGA TAA CAA GAA AGC CAA ACC-3’;所述的miRNA-141的核苷酸序列为:5’-UAA CAC UGU CUG GUA AAG AUG G-3’。
3.根据权利要求1所述的用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器的制备方法,其特征在于所述的DNA固定液的配方如下:10 mmol/L Tris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,10mmol/L三(2-羧乙基)膦和0.1 mol/L NaCl,pH为7.6~8.0;所述的缓冲液的配方如下:10mmol/L Tris-HCl,1.0 mmol/L EDTA,0.3 mol/L NaCl和1 mmol/L MgCl2,pH为7.6~8.0。
4.一种利用权利要求1-3所述的SERS生物传感器检测肿瘤标志物miRNA-141的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)取5~10 µL捕获单元溶液,加入5~10 µL一定浓度的miRNA-141溶液,在37℃下孵育2 h;加入5~10 µL信号单元溶液,并在37 ℃下孵育2 h;清洗,并用磁铁进行分离,反复三次得到权利要求1-3所述的用于检测肿瘤标志物miRNA-141的SERS生物传感器,利用拉曼光谱仪测定SERS信号;
(2)测定一系列不同浓度的miRNA-141对应的SERS信号强度,建立miRNA-141浓度与SERS信号强度之间的定量关系;根据该定量关系即可测定未知样品中miRNA-141浓度。
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Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107478641A (zh) * 2017-03-22 2017-12-15 南京邮电大学 液相表面增强拉曼光谱传感器、其制备方法及其用于核酸检测的用途
CN109946285A (zh) * 2019-04-02 2019-06-28 扬州大学 用于检测肺癌标志物miR-196a的金银纳米线SERS传感器的制备方法及传感器
CN110044866A (zh) * 2019-04-03 2019-07-23 杭州电子科技大学 一种横向纳米腔阵列结构sers基底及其制备方法
CN110514829A (zh) * 2019-07-30 2019-11-29 华东理工大学 一种基于信号级联双重放大系统以高灵敏且快速检测食源性致病菌的方法
CN110736731A (zh) * 2019-10-31 2020-01-31 福建师范大学 一种基于sers光谱技术的白血病融合基因检测方法
CN111424071A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用
CN111781186A (zh) * 2020-06-12 2020-10-16 南京邮电大学 用于肿瘤蛋白和核酸标志物一体化检测的sers传感器及其制备方法
CN111830255A (zh) * 2020-07-24 2020-10-27 河北科技大学 一种诺氟沙星的检测方法
CN113075191A (zh) * 2021-03-17 2021-07-06 南通大学 一种基于拉曼光谱法的miRNA的高灵敏度检测方法
CN113621688A (zh) * 2021-08-16 2021-11-09 安徽工业大学 SERS生物传感器及其在制备用于检测心梗miRNA的检测体系中的应用
CN113667720A (zh) * 2021-08-17 2021-11-19 复旦大学 一种检测miRNA-182的生物传感器及其制备方法和应用
CN114602439A (zh) * 2021-07-01 2022-06-10 中国科学院上海硅酸盐研究所 一种ACE2修饰的磁珠及制备方法和在SARS-CoV-2病毒检测中的应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102721680A (zh) * 2012-06-18 2012-10-10 复旦大学 一种高灵敏检测t-DNA的SERS液相芯片方法
CN103940989A (zh) * 2014-04-25 2014-07-23 山东大学 基于杂交链反应和单分子计数的免疫传感器及其应用
US20140349287A1 (en) * 2013-05-22 2014-11-27 University Of Notre Dame Du Lac Method and Apparatus for a Nanopipette Biosensor
CN104360064A (zh) * 2014-10-24 2015-02-18 东南大学 一种单分散性空心金纳米球及其制备方法和应用
CN105274195A (zh) * 2014-12-11 2016-01-27 临沂大学 一种检测癌症标志物微小核糖核酸的试剂盒
CN105647788A (zh) * 2016-01-31 2016-06-08 南京邮电大学 用于核酸检测的sers传感器及其制备和多元检测方法
CN106568936A (zh) * 2016-10-12 2017-04-19 宁波大学 基于多功能化二硫化钼的miRNA‑21电化学发光免疫传感器的制备方法及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102721680A (zh) * 2012-06-18 2012-10-10 复旦大学 一种高灵敏检测t-DNA的SERS液相芯片方法
US20140349287A1 (en) * 2013-05-22 2014-11-27 University Of Notre Dame Du Lac Method and Apparatus for a Nanopipette Biosensor
CN103940989A (zh) * 2014-04-25 2014-07-23 山东大学 基于杂交链反应和单分子计数的免疫传感器及其应用
CN104360064A (zh) * 2014-10-24 2015-02-18 东南大学 一种单分散性空心金纳米球及其制备方法和应用
CN105274195A (zh) * 2014-12-11 2016-01-27 临沂大学 一种检测癌症标志物微小核糖核酸的试剂盒
CN105647788A (zh) * 2016-01-31 2016-06-08 南京邮电大学 用于核酸检测的sers传感器及其制备和多元检测方法
CN106568936A (zh) * 2016-10-12 2017-04-19 宁波大学 基于多功能化二硫化钼的miRNA‑21电化学发光免疫传感器的制备方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIAOXIAO LI ET AL.: "Sensitive SERS detection of miRNA via enzyme-free DNA machine signal amplification", 《CHEM. COMMUN.》 *
YAN-HONG YUAN ET AL.: "Simultaneously electrochemical detection of microRNAs based on multifunctional magnetic nanoparticles probe coupling with hybridization chain reaction", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107478641B (zh) * 2017-03-22 2020-07-07 南京邮电大学 液相表面增强拉曼光谱传感器、其制备方法及其用于核酸检测的用途
CN107478641A (zh) * 2017-03-22 2017-12-15 南京邮电大学 液相表面增强拉曼光谱传感器、其制备方法及其用于核酸检测的用途
CN109946285A (zh) * 2019-04-02 2019-06-28 扬州大学 用于检测肺癌标志物miR-196a的金银纳米线SERS传感器的制备方法及传感器
CN109946285B (zh) * 2019-04-02 2021-07-16 扬州大学 用于检测肺癌标志物miR-196a的金银纳米线SERS传感器的制备方法及传感器
CN110044866A (zh) * 2019-04-03 2019-07-23 杭州电子科技大学 一种横向纳米腔阵列结构sers基底及其制备方法
CN110514829A (zh) * 2019-07-30 2019-11-29 华东理工大学 一种基于信号级联双重放大系统以高灵敏且快速检测食源性致病菌的方法
CN110736731B (zh) * 2019-10-31 2022-03-18 福建师范大学 一种基于sers光谱技术的白血病融合基因检测方法
CN110736731A (zh) * 2019-10-31 2020-01-31 福建师范大学 一种基于sers光谱技术的白血病融合基因检测方法
CN111424071A (zh) * 2020-04-09 2020-07-17 济南大学 一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用
CN111424071B (zh) * 2020-04-09 2022-09-23 济南大学 一种检测miRNA-141的生物传感器及其制备方法与应用
CN111781186A (zh) * 2020-06-12 2020-10-16 南京邮电大学 用于肿瘤蛋白和核酸标志物一体化检测的sers传感器及其制备方法
CN111830255A (zh) * 2020-07-24 2020-10-27 河北科技大学 一种诺氟沙星的检测方法
CN113075191A (zh) * 2021-03-17 2021-07-06 南通大学 一种基于拉曼光谱法的miRNA的高灵敏度检测方法
CN114602439A (zh) * 2021-07-01 2022-06-10 中国科学院上海硅酸盐研究所 一种ACE2修饰的磁珠及制备方法和在SARS-CoV-2病毒检测中的应用
CN114602439B (zh) * 2021-07-01 2023-10-13 中国科学院上海硅酸盐研究所 一种ACE2修饰的磁珠及制备方法和在SARS-CoV-2病毒检测中的应用
CN113621688A (zh) * 2021-08-16 2021-11-09 安徽工业大学 SERS生物传感器及其在制备用于检测心梗miRNA的检测体系中的应用
CN113621688B (zh) * 2021-08-16 2024-01-19 安徽工业大学 SERS生物传感器及其在制备用于检测心梗miRNA的检测体系中的应用
CN113667720A (zh) * 2021-08-17 2021-11-19 复旦大学 一种检测miRNA-182的生物传感器及其制备方法和应用
CN113667720B (zh) * 2021-08-17 2024-01-16 复旦大学 一种检测miRNA-182的生物传感器及其制备方法和应用

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Application publication date: 20180817

Assignee: Ningbo Science and Technology Innovation Association

Assignor: Ningbo University

Contract record no.: X2023980033633

Denomination of invention: Preparation method and application of SERS biosensor for detecting tumor marker miRNA-141

Granted publication date: 20200619

License type: Common License

Record date: 20230317

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