CN108409859A - 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法 - Google Patents

针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108409859A
CN108409859A CN201810191770.7A CN201810191770A CN108409859A CN 108409859 A CN108409859 A CN 108409859A CN 201810191770 A CN201810191770 A CN 201810191770A CN 108409859 A CN108409859 A CN 108409859A
Authority
CN
China
Prior art keywords
monoclonal antibody
sumo
human amelogenin
amelogenin
ham
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810191770.7A
Other languages
English (en)
Inventor
程岚
束蓉
单玉飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Original Assignee
Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine filed Critical Ninth Peoples Hospital Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority to CN201810191770.7A priority Critical patent/CN108409859A/zh
Publication of CN108409859A publication Critical patent/CN108409859A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了一种针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：人工合成全长人釉原蛋白基因hAm，构建含有hAm的重组原核表达质粒pET28a‑SUMO‑hAm，将重组质粒转化表达菌株E.coli.BL21，诱导表达融合蛋白His‑SUMO‑rhAm，通过镍柱亲和层析纯化融合蛋白后酶切去除标签得到rhAm。用纯化后rhAm免疫动物6周龄小鼠，筛选出阳性小鼠取脾细胞进行细胞融合，建立杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的筛选及克隆化，最后鉴定单克隆抗体并建立杂交瘤细胞系H10G1。本发明首次从合成人釉原蛋白的编码序列，通过原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达的融合蛋白，人工合成的重组人釉原蛋白可以通过镍柱亲和层析纯化，将蛋白免疫小鼠后成功筛选出能生产单克隆抗体的骨髓瘤细胞株，稳定的获得大量单克隆抗体。

Description

针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法
技术领域
本发明涉及医学领域，尤其涉及针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法。
背景技术
釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)是牙齿发育到钟状期，内釉上皮细胞分化来的成釉细胞合成并分泌的细胞外基质蛋白。釉原蛋白(Amelogenin，Am)是EMPs中最主要的成分，占90％以上，由成釉细胞中Am基因指导合成的一组分子量为5～27kD的蛋白和多肽。70年代提出EMPs参与牙根发育、牙周组织形成，并能诱导无细胞牙骨质形成，目前EMPs是唯一经临床验证能诱导实现完全牙周组织再生的生物活性蛋白，Am则是其中的主要活性成分。目前广泛应用于牙周再生的基础研究和临床应用的EMPs均为提取的猪釉基质蛋白，其主要的成分是分子量为20kD、13kD、11kD的Am。
由于提取EMPs的来源受限，只能是动物牙胚的发育期牙釉质，因此商品化的一直未在国内上市。迄今为止我国尚无用于牙周再生的临床药物，用于基础及临床研究的蛋白制品依赖进口或由各实验室自行提取，缺乏统一标准。
Am是由成釉细胞中Am基因指导表达的一组蛋白和多肽。人有两个Am基因，一个定位于X染色体p22.1－p22.3区域，另一个在Y染色体q11处。逆转录PCR证实主要的转录本来自于X染色体，Y染色体上的釉原蛋白基因仅占总转录本的10％。人的Am基因至少包括7个外显子，存在至少有9种选择剪切的方式，最常见的全长人Am是由X染色体上Am基因指导翻译的175个氨基酸残基组成的Mr1.96×104蛋白，是本研究表达合成的重组蛋白。
目前市售的针对Am的抗体均为多克隆抗体，未见针对明确区段的单克隆抗体。作为细胞外基质蛋白的Am，从分泌后即开始经历一系列细胞外酶解，因而在牙齿发育的不同阶段不同部位，Am的各组分不尽相同，这给研究和定位带来许多困难。
目前唯一的EMPs市售商品——的有效成分是从猪牙胚组织中提取的Am的衍生物。其完全依赖进口，售价昂贵，用于基础研究和临床治疗所需成本较高。
提取的猪来源的EMPs是几种Am的混合成分，受提取效率及组分比例的差异对蛋白功能影响较大；其次提取的猪EMPs是异源性蛋白，可能存在免疫原性的问题。
目前针对Am的抗体均为多克隆抗体，尚未见有人工合成的单一组分的人全Am，也缺乏针对特定区段的单克隆抗体。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法。证实单一组分的人全长Am可以诱导完全的牙周组织再生。重组蛋白的有效成分单一，解决了提取效率及组分稳定性影响蛋白功能的问题；用人的基因表达产物代替猪牙胚提取物，解决了异种动物源蛋白的安全性问题，克服了提取猪EMPs的缺陷，为基于Am的临床药物开发打下基础，填补目前我国牙周生物制药领域亟需解决的空白。
本发明提供了一种针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：通过Genebank获得全长人釉原蛋白的cDNA编码序列，筛选该序列中不存在而在质粒pET28a(+)中存在克隆位点的内切酶将目的基因克隆入载体；
步骤二：合成所述的全长人釉原蛋白基因，合成的全长人釉原蛋白基因上下游分别携带BamHI和XhoI酶切位点，通过双酶切将所述的全长人釉原蛋白基因插入改造后的载体质粒pET28a-SUMO；
步骤三：将所述的质粒pET28a-SUMO-hAm送测序鉴定，将经鉴定的质粒pET28a-SUMO-hAm转化表达菌株E.coli.BL21感受态细胞，得到克隆表达菌株；
步骤四：将所述的克隆表达菌株接种到含有卡那霉素的液体LB培养基中，活化过夜，按20％接种37℃培养2h，OD600值达0.6时，诱导，将细菌沉淀，冰上重悬，加入溶菌酶超声破菌，离心，取上清；
步骤五：将所述的上清用滤器过滤后上镍柱，反复洗涤镍柱去除未结合的杂蛋白，加入蛋白酶，22℃消化过夜，收集蛋白rhAM；
步骤六：将所述的rhAm分三次免疫6周龄BALB/C小鼠，取已免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞株进行细胞融合，对细胞上清中抗体进行ELISA检测筛选阳性杂交瘤细胞，利用有限稀释法将阳性杂交瘤细胞克隆化，同时对所产生的单克隆抗体进行特征分析及纯度鉴定，获得稳定的杂交瘤细胞株H10G1；
步骤七：将杂交瘤细胞株H10G1再接种到小鼠腹腔内，得到的腹水采用proteinA/G亲和柱纯化后测定效价，得到所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体。
较佳地，步骤四中，所述的卡那霉素浓度为50μg/ml。
较佳地，诱导剂采用IPTG。
较佳地，冰上重悬采用10倍体积的TBS。
较佳地，蛋白酶为SUMO蛋白酶。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)根据研究目的的需要，首次从合成人釉原蛋白的编码序列，通过原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达的融合蛋白，人工合成的重组人釉原蛋白可以通过镍柱亲和层析纯化，将蛋白免疫小鼠后成功筛选出能生产单克隆抗体的骨髓瘤细胞株，能够稳定的获得大量单克隆抗体。
(2)该发明所得的克隆表达菌株可长期保存，并随时大量复制，能够较为方便快捷的合成重组人釉原蛋白，为将来釉原蛋白的商品化提供了可能。
(3)该发明所得的骨髓瘤细胞株可长期保存、大量复制，能够稳定生产大量针对人釉原蛋白的单克隆抗体，可以用于将来抗体的商品化生产。
附图说明：
图1为本发明实施例中质粒pET28a-SUMO图谱；
图2为本发明实施例中rhAm纯化后SDA-PAGE电泳图；
图3.为rhAm纯化后Werstern Blot鉴定图。
图4为细胞株H10G1来源抗体WB检测图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步地说明，以更好地理解本发明。
I、重组原核表达质粒PET28a-SUMO-hAm的构建
hAm基因的碱基序列(Gen-Bank Accession No.M86932)如下，其中1～68位包含有5’帽结构、5’非翻译区及启动子等结构，69～117位编码信号肽，117～644位为cDNA序列，编码由175个氨基酸残基构成的人X染色体的全长Am，645～793位为3’非翻译区，不包括PolyA尾。
根据hAm的cDNA序列，结合原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点和阅读框图谱，上下游分别选用BamHI、XhoI内切酶，将目的基因插入载体质粒。由上海旭冠生物科技发展有限公司根据编码序列进行全基因合成，经测序验证无误的基因片段命名为hAm。PCR扩增带有酶切位点的hAm片段。引物序列如下：Am-BamHI：5’-actggatccatgcctctaccacctcatcctg-3’；Am-XhoI：5’-tacctcgagttaatccacttcctcccgcttg-3’。PCR产物通过小量胶回收试剂盒纯化目的基因hAm。
原核表达载体质粒pET28a-SUMO由质粒pET28a(+)改建而来，即在原质粒N端的His-tag后插入SUMO片段，并将其命名为pET28a-SUMO。普通质粒小提试剂盒抽提质粒备用。质粒图谱如图1所示。
用内切酶BamHI和XhoI对目的片段hAm及载体质粒pET28a-SUMO进行双酶切，回收的双酶切产物用T4DNA ligase在14℃(12℃～16℃)连接过夜。连接产物转化E.coli Top10感受态细胞，挑选单克隆菌落通过PCR初步筛选后，送上海英骏生物技术有限公司进行测序检验，用DNA star软件对插入片段与标准序列进行比对，验证起始密码及终止密码。
结果：
对经PCR、双酶切初步筛选的重组质粒进行测序鉴定，证实重组质粒编码的hAm基因序列与文献报道(Gen-Bank Accession No.M86932)一致，片段两端连接位点、起始密码及终止密码均准确无误。由其指导翻译的蛋白质的氨基酸序列与预期完全一致，第一个甲硫氨酸前面的泛素特异性蛋白酶(ulp蛋白酶)的酶切位点准确无误。
II、重组人釉原蛋白的表达、纯化和鉴定
将经鉴定的重组质粒pET28a-SUMO-hAm和载体质粒pET28a-SUMO分别转化表达菌株E.coli BL21(DE3)感受态细胞，得到重组表达菌株和空白对照菌株。随机挑取5个单克隆和1个空白菌株接种到含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，加入IPTG诱导培养，表达产物用10％～15％的SDS-PAGE胶进行电泳检测。
根据电泳结果选取1个表达菌株接种活化后加入IPTG诱导培养，离心收菌体，加入溶菌酶于冰上超声破菌，上清用0.45μm滤器过滤，通过镍柱亲和层析纯化重组蛋白，加入SUMO蛋白酶，22℃消化过夜，收集蛋白rhAm，采用SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定纯化产物。rhAm纯化后SDA-PAGE电泳图如图2所示，M：低分子量蛋白标准；1：融合蛋白His-SUMO-rhAm；2,3：目标蛋白rhAm。rhAm纯化后Werstern Blot鉴定如图3所示，1,2：山羊抗人Am C-19多克隆抗体；3,4：兔抗人Am FL-191多克隆抗体.。
结果：
本研究所用的载体质粒带有小泛素相关修饰分子(small ubiquitin-relatedmodifier，SUMO)序列，可表达20kD的SUMO蛋白。SDS-PAGE电泳显示，空白对照菌株诱导后在约20KD处多出一明显的新生蛋白带，与SUMO蛋白基本一致。重组菌株诱导后的样品在Mr45,000处可见一明显的新生蛋白带，其电泳分子量与预期基本吻合。全长hAm的理论分子量是20kD，但在各文献电泳分析中均为25kD，因此本研究中诱导表达产物分子量约为45kD。
BL21/pET28a-SUMO-hAm表达产物经Ni-NTA琼脂糖胶纯化后，得到约45kD的纯化产物，经酶切去除His-SUMO标签后，在电泳图上显示为单一条带，说明目标蛋白得到较高程度的纯化，纯化产物分子量为25kD的单一条带。
纯化产物经Westen-blot验证可与特异性抗人釉原蛋白多克隆抗体发生亲和反应，证实其为hAm。C-19抗体是针对hAm的C末端的抗体，结果表明表达纯化产物为完整的全长hAm。
III、单克隆抗体及杂交瘤细胞系的建立及鉴定
选择6周龄雌性BALB/C小鼠，分三次将纯化的rhAm注射入小鼠腹腔进行免疫，第45天ELISA检测小鼠血清。取已免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞株进行细胞融合，对细胞上清中抗体进行ELISA检测筛选阳性杂交瘤细胞，利用有限稀释法将阳性杂交瘤细胞克隆化，同时对所产生的单克隆抗体进行特征分析及纯度鉴定，获得稳定的杂交瘤细胞株H10G1。将杂交瘤细胞株H10G1再接种到小鼠腹腔内，得到的腹水采用protein A/G亲和柱纯化后测定效价，分装后冻干保存。通过Western Blot确定抗体针对的区段。细胞株H10G1来源抗体WB检测如图4所示。
(1)使用改造后的PET28系列质粒，使所表达的融合蛋白带有签到序列SUMO。SUMO蛋白是类泛素蛋白家族的重要成员之一，为大多数真核细胞生存所必需，正是利用SUMO融合系统能提高目的蛋白的表达量并大大增加其可溶性的优势，达到在非变性条件下纯化rhAm175的目的。(2)SUMO蛋白酶具有很高的活性和特异性，可以将His-SUMO标签切除后通过亲和层析去除。与其他蛋白酶切割的原理不同，SUMO蛋白酶识别的是空间结构而不是一级结构，以避免对靶蛋白的非特异性切割。(3)利用纯化后的rhAm免疫小鼠，获得的稳定生产单克隆抗体的细胞株，避免多克隆抗体获取时需免疫大量动物后纯化。
(2)根据研究目的的需要，首次从合成人釉原蛋白的编码序列，通过原核表达质粒在大肠杆菌中成功表达的融合蛋白，人工合成的重组人釉原蛋白可以通过镍柱亲和层析纯化，将蛋白免疫小鼠后成功筛选出能生产单克隆抗体的骨髓瘤细胞株，能够稳定的获得大量单克隆抗体。
(3)该发明所得的克隆表达菌株可长期保存，并随时大量复制，能够较为方便快捷的合成重组人釉原蛋白，为将来釉原蛋白的商品化提供了可能。
(4)该发明所得的骨髓瘤细胞株可长期保存、大量复制，能够稳定生产大量针对人釉原蛋白的单克隆抗体，可以用于将来抗体的商品化生产。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (5)

1.一种针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：通过Genebank获得全长人釉原蛋白的cDNA编码序列，筛选该序列中不存在而在质粒pET28a(+)中存在克隆位点的内切酶将目的基因克隆入载体；
步骤二：合成所述的全长人釉原蛋白基因，合成的全长人釉原蛋白基因上下游分别携带BamHI和XhoI酶切位点，通过双酶切将所述的全长人釉原蛋白基因插入改造后的载体质粒pET28a-SUMO；
步骤三：将所述的质粒pET28a-SUMO-hAm送测序鉴定，将经鉴定的质粒pET28a-SUMO-hAm转化表达菌株E.coli.BL21感受态细胞，得到克隆表达菌株；
步骤四：将所述的克隆表达菌株接种到含有卡那霉素的液体LB培养基中，活化过夜，按20％接种37℃培养2h，OD600值达0.6时，诱导，将细菌沉淀，冰上重悬，加入溶菌酶超声破菌，离心，取上清；
步骤五：将所述的上清用滤器过滤后上镍柱，反复洗涤镍柱去除未结合的杂蛋白，加入蛋白酶，22℃消化过夜，收集蛋白rhAM；
步骤六：将所述的rhAm分三次免疫6周龄BALB/C小鼠，取已免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞株进行细胞融合，对细胞上清中抗体进行ELISA检测筛选阳性杂交瘤细胞，利用有限稀释法将阳性杂交瘤细胞克隆化，同时对所产生的单克隆抗体进行特征分析及纯度鉴定，获得稳定的杂交瘤细胞株H10G1；
步骤七：将杂交瘤细胞株H10G1再接种到小鼠腹腔内，得到的腹水采用proteinA/G亲和柱纯化后测定效价，得到所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤四中，所述的卡那霉素浓度为50μg/ml。
3.根据权利要求1所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤四中，诱导剂采用IPTG。
4.根据权利要求1所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤四中，冰上重悬采用10倍体积的TBS。
5.根据权利要求1所述的针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤五中，蛋白酶为SUMO蛋白酶。
CN201810191770.7A 2018-03-08 2018-03-08 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法 Pending CN108409859A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810191770.7A CN108409859A (zh) 2018-03-08 2018-03-08 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810191770.7A CN108409859A (zh) 2018-03-08 2018-03-08 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108409859A true CN108409859A (zh) 2018-08-17

Family

ID=63130564

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810191770.7A Pending CN108409859A (zh) 2018-03-08 2018-03-08 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108409859A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101125890A (zh) * 2007-08-11 2008-02-20 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛朊蛋白PrP27-30的单克隆抗体及其应用
CN101260155A (zh) * 2008-03-28 2008-09-10 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛成熟朊蛋白的单克隆抗体mab-mPrP-N59及其应用
CN101402684A (zh) * 2008-11-14 2009-04-08 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛成熟叠朊蛋白的单克隆抗体mab-bomDpl-9及其应用
CN101565463A (zh) * 2008-04-22 2009-10-28 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种重组人釉原蛋白及其制备方法
CN102659937A (zh) * 2012-03-16 2012-09-12 杭州贤至生物科技有限公司 一种重组蛋白质及其单克隆抗体的制备方法和应用
CN106831984A (zh) * 2017-02-14 2017-06-13 中国人民解放军第二军医大学 一种抗bex2单克隆抗体的制备和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101125890A (zh) * 2007-08-11 2008-02-20 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛朊蛋白PrP27-30的单克隆抗体及其应用
CN101260155A (zh) * 2008-03-28 2008-09-10 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛成熟朊蛋白的单克隆抗体mab-mPrP-N59及其应用
CN101565463A (zh) * 2008-04-22 2009-10-28 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种重组人釉原蛋白及其制备方法
CN101402684A (zh) * 2008-11-14 2009-04-08 中国农业科学院兰州兽医研究所 抗牛成熟叠朊蛋白的单克隆抗体mab-bomDpl-9及其应用
CN102659937A (zh) * 2012-03-16 2012-09-12 杭州贤至生物科技有限公司 一种重组蛋白质及其单克隆抗体的制备方法和应用
CN106831984A (zh) * 2017-02-14 2017-06-13 中国人民解放军第二军医大学 一种抗bex2单克隆抗体的制备和应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D. DEUTSCH等: "PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST ENAMELIN AND AGAINST AMELOGENIN PROTEINS OF DEVELOPING ENAMEL MATRIX", 《ADV DENT RES》 *
GENBANK: "《GenBank: M86932.1》", 31 October 1994 *
J. CATALANO-SHERMAN 等: "Production of a Monoclonal Antibody Against Human Amelogenin", 《CALCIF TISSUE INT》 *
冯美卿主编: "《生物技术制药》", 31 January 2016, 中国医药科技出版社 *
程岚等: "抗人釉原蛋白单克隆抗体的制备及鉴定", 《口腔生物医学》 *
董志伟，王琰主编: "《抗体工程 第2版》", 30 June 2002, 北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0131363B1 (en) Polypeptide and protein products, and processes for their production and use
JP2665359B2 (ja) 免疫親和性による精製方法
Moks et al. Large–Scale Affinity Purification of Human Insulin–Like Growth Factor I from Culture Medium of Escherichia Coli
EP0305500B1 (en) Process for the purification of recombinant polypeptides
US7105638B1 (en) Product and process for the production, isolation, and purification of recombinant polypeptide
CN111349617B (zh) 一种分泌抗Tau或pTau-181/231/396单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用
CN112209995B (zh) 一种SARS-CoV-2表面蛋白受体结合区制备方法
CN109863164B (zh) 辣根过氧化物酶-igg融合蛋白的制备
CN113480665B (zh) 一种用于猪流行性腹泻病毒的融合蛋白以及重组蛋白疫苗
CN104610443B (zh) 一种高稳定性重组降钙素原、制备方法及用途
CN1216065A (zh) 重组蛋白的运出系统
US5411732A (en) Preparation of fused proteins, antibodies and processes therefore
CN108409859A (zh) 针对人釉原蛋白肽的单克隆抗体的制备方法
CN108300725B (zh) 可溶性单链抗体超抗原融合基因及蛋白和其制备与应用
CN106929512A (zh) St2抗原的制备及其专用编码dna分子
GB2140810A (en) Polypeptide and protein products, and process for their production
CN111888797B (zh) 一种利用亲和免疫介质纯化蛋黄抗体的方法
CN110540601B (zh) 重组PLB-hEGF融合蛋白及其应用
CN114933642B (zh) Art v 1重组蛋白及其应用
CN104945488B (zh) 一种具有免疫球蛋白结合能力的多肽
CN108982875A (zh) 硒蛋白p胶体金检测卡的制备与应用
CN108285903B (zh) 一种特异性刺激抗原的制备方法
CN117362401A (zh) 一种牛病毒性腹泻病毒n蛋白及其作为自我切割蛋白的应用
CN105866435B (zh) 烟曲霉Asp f 3的线性抗原表位最小基序肽Asp f 3123-127及其扩展短肽
CN116813767A (zh) 一种fgf21蛋白多克隆抗体制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180817