CN108367058A - 与加快的体液亲和力相关的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种疫苗，所述疫苗包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。还公开了治疗或者预防疾病的方法，所述方法包括给受试者施用疫苗，其中所述疫苗包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。

Description

与加快的体液亲和力相关的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本专利申请要求于2015年11月10日提交的美国临时申请No.62/253,370的权益，其全文以引用方式并入本文。
背景技术
疫苗能够启动产生抗体的体液免疫应答。疫苗还可通过细胞免疫应答激活淋巴细胞，诸如细胞毒性T细胞，该细胞免疫应答有助于宿主抵抗致病生物体的入侵或者预防疾病的发生(Cavallo F等人，“Vaccination for treatment and prevention of cancer inanimal models”，Adv Immunol，2006年，第90卷：第175-213页，综述)。尽管疫苗具有激活受试者的免疫系统的效果，但在临床应用中，通常发现疫苗不能在某些群体(诸如老人和儿童)中表现出期望的效果，所述某些群体的免疫系统太弱，因此需要添加适量的疫苗佐剂。此外，添加疫苗佐剂还具有促进免疫系统更有效地识别抗原的效果，这可有助于降低疫苗剂量或者疫苗频率。因此，添加疫苗佐剂不仅能降低疫苗的成本，还可以提高疫苗的免疫效率。
根据佐剂的功能，佐剂可分为两组。属于第一组的佐剂用于吸收抗原并且协助抗原被细胞吞噬，诸如铝盐和M59乳化剂等。(O'Hagan D T、Wack A、Podda A，Clin PharmacolTher，2007年12月；第82卷第6期：第740-4；4页，Clapp T、Siebert P、Chen D、Jones BraunL，J Pharm Sci.2011年2月；第100卷第2期：第388-401页)。属于第二组的佐剂是免疫调节因子，诸如CFA-分歧杆菌等。(Hoft D F、Blazevic A、Abate G、Hanekom W A、Kaplan G、Soler J H、Weichold F、Geiter L、Sadoff J C、Horwitz M A，J Infect Dis.2008年11月15日；第198卷第10期：第1491-501页)。加快体液免疫(包括亲和力成熟)的新疫苗佐剂在本领域中是有用的。发明内容
本发明公开了一种疫苗，该疫苗包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中该抗原并非衍生自衣原体属物种。
本文还公开了治疗或预防疾病的方法。这些方法包括向受试者施用抗原，其中该抗原并非衍生自衣原体属物种；和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，从而预防受试者的疾病或感染。
还公开了试剂盒，该试剂盒包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段。
在附图和下面的描述中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。根据下面的描述和附图以及权利要求，本发明的其他特征、目标和优点将显而易见。
附图说明
图1示出了衣原体属在诱导抗原-特异性体液免疫期间表现出强佐剂活性。每两周向小鼠单独施用OVA或者施用OVA+灭活沙眼衣原体L2原体(EBs)，总共3次剂量。每次剂量后2周获得血清。
图2示出了衣原体属极大地増加抗原-特异性抗体的亲和力。
图3示出了仅接种一次疫苗后，衣原体属显著増大白喉毒素(DT)-特异性抗体水平。小鼠被单独施用DT或者施用DT+灭活沙眼衣原体L2EBs 2周后，获得血清。
图4示出了具有衣原体属佐剂的DT疫苗接种增大了对后续致命的DT挑战的保护。
具体实施方式
定义
本文所用的冠词“一个”和“一种”是指一个或者多于一个(即，至少一个)的冠词语法对象。以举例的方式，“元素”是指一种元素或者多于一种元素。
当涉及可测量的值，诸如数量、持续时间等时，本文所用的“约”旨在涵盖距指定值的±20％或±10％，更优选地±5％，甚至更优选地1％以及还更优选地±0.1％的变化，因为此类变量适合于执行所公开的方法。
术语“抗原组合物”是指包含刺激免疫系统并且引发宿主或受试者中的免疫应答的物质的组合物。
术语“引发免疫应答”是指响应于刺激(诸如抗原)，免疫细胞在体内的刺激。免疫应答由细胞免疫应答(例如，T细胞和巨噬细胞刺激)和体液免疫应答(例如，B细胞和互补刺激以及抗体产生)两者组成。可使用本领域熟知的方法测量免疫应答，该方法包括但不限于抗体免疫测定法、増殖测定法等。
如本文所用的术语“疫苗”是指包含如本文所述的重组病毒的组合物，其对在受试者体内建立对病毒的免疫力是有用的。预期该疫苗包含药学上可接受的载体和/或佐剂。预期疫苗是预防性或者治疗性的。
“预防性”治疗是为了降低发展成病理风险的目的，对不表现出疾病迹象或者仅表现出早期迹象的受试者进行的治疗。本文所公开的疫苗可以作为预防性治疗给予以降低发展成病理的可能性或者最小化病理的严重性(如果发展成病理)。
“治疗性”治疗是为了减少或者消除那些迹象或症状，对表现出病理的迹象或症状的受试者进行的治疗。迹象或症状可能是生化的、细胞的、组织学、功能的、主观的或者客观的。
术语“灭活”在本文用于描述微生物体，诸如衣原体属物种(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠嗜衣原体)，这在本领域中也被称为“杀死的”或者“死亡”微生物体。灭活细菌是无传染性质的完整细菌，并且由“活”细菌产生，而不管该细菌是否先前以任何方式减毒。
多肽的“片段”是指比全长多肽或者蛋白表达产物小的多肽的任何部分。片段在一个方面是全长多肽的缺失类似物，其中一个或多个氨基酸残基已从全长多肽的氨基末端和/或羧基末端移除。因此，“片段”是下文所述的缺失类似物的子集。
如本文所用的术语“抗体”是指能够明确结合到抗原上的特异性表位的免疫球蛋白分子。抗体可以是衍生自天然来源或者来自重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫活性部分。抗体可由本文所述的疫苗产生，并且可存在于多种形式中，包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、细胞内抗体(“胞内抗体”)、Fv、Fab和F(ab)2、以及单链抗体(scFv)、重链抗体、诸如骆驼抗体、合成抗体、嵌合抗体和人源化抗体(Harlow等人，1999年，“Using Antibodies”：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,NY；Harlow等人，1989年，“Antibodies”：A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor,N.Y；Houston等人，1988年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第85卷：第5879-5883页；Bird等人，1988年，Science第242卷：第423-426页)。
当在生物体、组织、细胞或者其组分的情况中使用时，术语“异常”是指在至少一种可观察或者可检测特性(例如，年龄、治疗、一天中的时间等)中与显示“正常”(预期)相应特性的那些生物体、组织、细胞或者其组分不同的那些生物体、组织、细胞或其组分。对于一种细胞或者组织类型而言正常或预期的特性对于不同的细胞或组织类型可能是异常的。
如本文所用，“减轻”疾病是指降低疾病或者病症的至少一个迹象或症状的频率或者严重性。
如本文所用，“有效量”是指提供治疗或者预防益处的量。
如本文所用，“免疫测定法”是指使用能够明确结合到靶分子以检测和定量靶分子的抗体的任何结合测定法。
如本文所用，“指导材料”包括出版物、录音、图表或者任何其他表达介质，其可用于传达试剂盒中用于实践本文所述方法的化合物、组合物、方法、平台或者系统的有用性。本发明的试剂盒的指导材料可例如附连到包含本发明所确定的化合物、组合物、平台或者递送系统的容器，或者与包含本发明所确定的化合物、组合物、方法组件、平台或者系统的容器一起装运。另外，指导材料可与容器分开装运，目的在于指导材料和化合物由接受者协同使用。
如本文所用，术语“肽”、“多肽”和“蛋白”可互换使用，并且是指由与肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白或者肽必须包含至少两个氨基酸，并且对可以包含蛋白或者肽的序列的氨基酸的最大数目没有限制。多肽包括任何肽或者蛋白，其包含两个或更多个通过肽键彼此接合的氨基酸。如本文所用，术语是指短链(其在本领域中也通常被称为例如肽、寡肽和低聚物)和长链(其在本领域中一般被称为蛋白，其有许多类型)两者。“多肽”包括例如生物活性片段、基本同源多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽变体、修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等等。所述多肽包括天然肽、重组肽、合成肽、或者它们的组合。
“疾病”是动物的健康状态，其中动物不能维持稳态，并且其中如果疾病没有改善，则动物的健康继续恶化。相比之下，动物中的“病症”是一种健康状态，在该状态下，动物能够维持稳态，但在这种状态下，动物的健康状态不如没有病症时有利。如果不进行治疗，病症不一定会导致动物的健康状态进一步下降。
术语“受试者”是指作为给药或者治疗目标的任意个体。受试者可以是脊椎动物，例如哺乳动物。因此，受试者可以是人类患者或兽医患者。术语“患者”是指接受临床医生(例如，内科医生或者兽医)治疗的受试者。
如本文所用，术语“治疗”或者“治疗方案”是指为了缓解或改变病症或疾病状态而采取的那些行为，例如旨在使用药物、手术、饮食和/或其他方法减少或消除疾病或病症的至少一种迹象或症状的治疗过程。治疗方案可包括处方剂量的一种或多种药物或者手术。治疗大多数情况下将是有益的，并且减少或消除病症或者疾病状态的至少一种迹象或症状，但在一些情况下，治疗的效果将具有非期望的效果或者副作用。治疗效果也将受到受试者生理状态的影响，例如年龄、性别、遗传性、体重、其他疾病状况等。
术语“治疗有效量”是指研究者、兽医、医学博士或其它临床医生们正在探索的将引发组织、系统或者受试者的生物学或者医学应答的目标化合物的量。术语“治疗有效量”包括当施用时足以防止或者在一定程度缓解所治疗的病症或疾病的一种或多种迹象或症状的发展的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、疾病及其严重性和待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。
如本文所用的术语“治疗”疾病是指降低受试者经历的疾病或病症的至少一种迹象或者症状的频率或者严重性。
除非明确指出，如本文所用的术语“细胞”还指个体细胞、细胞系、原代培养物或者衍生自此类细胞的培养物。“培养物”是指包含相同或者不同类型的分离细胞的组合物。细胞系是一种具体类型的细胞的培养物，其可无限期地复制，从而使细胞系“永生”。细胞培养物可以是在诸如琼脂的培养基上生长的细胞群。一种原代细胞培养物是来自细胞的培养物，或者直接取自活生物体的培养物，该培养物不是永生的。
术语“生物样品”是指组织(例如，组织活检)、器官、细胞(包括保持在培养物中的细胞)、细胞裂解物(或者裂解物组分)、衍生自细胞或者细胞物质(例如，多肽或者核酸)的生物分子或者来自受试者的体液。体液的非限制性示例包括血液、尿液、血浆、血清、泪液、淋巴液、胆汁、脑脊液、间质液、水状液或玻璃状液、初乳、痰液、羊水、唾液、肛门或阴道流体、宫颈分泌物、汗液、精液、漏出液、渗出液和滑液。
以单数形式或者复数形式使用的术语“肿瘤细胞”或“癌细胞”是指已经经历恶性转化的细胞，该恶性转化对宿主生物体造成病理性伤害。原代癌细胞(即，从恶性转化部位附近获得的细胞)可易于通过成熟的技术(具体地组织学检验)与非癌细胞区分。如本文所用，癌细胞的定义不仅包括原代癌细胞，而且包括衍生自癌细胞原种的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。本文所用的术语“肿瘤相关抗原”或者“TAA”是指通过肿瘤细胞以比通过相同组织类型的非肿瘤细胞更高的频率或者密度表达的分子或者复合物。肿瘤相关抗原可以是通常不由宿主表达的抗原；它们可以发生突变、截短、错折叠或者通常由宿主表达的分子的其他异常表现；它们可以与除以异常高水平表达外的通常表达的分子相同。或者它们可以在异常的情况或者环境中表达。肿瘤相关抗原可以是例如蛋白或蛋白片段、复合糖类、神经节苷、半抗原、核酸或者这些或其他生物分子的任何组合。对具体的肿瘤相关抗原的存在或特性的了解对于本发明的实践是不必要的。
术语“B细胞”是指B淋巴细胞。B细胞前体存在于产生未成熟B细胞的骨髓中。B细胞发育通过几个阶段进行，每个阶段代表抗体基因座处的基因组内容的变化。在基因组重链可变区中，存在三个区段(V、D和J)，它们在称为VDJ重排的过程中随机重组，以在每个B细胞的免疫球蛋白中产生独特的可变区。类似的重排发生于轻链可变区(除了仅涉及V和J两个区段的轻链可变区)。在完成重排后，B细胞到达骨髓中的IgM+未成熟阶段。这些未成熟的B细胞在其表面上呈现膜结合的IgM，即BCR，并且迁移到脾脏，在这里它们被称为过渡B细胞。这些细胞中的一些细胞分化成成熟的B淋巴细胞。在其表面上表达BCR的成熟B细胞在血液和淋巴系统中循环，从而起到免疫监视的作用。它们不产生可溶性抗体，直到它们完全活化为止。每个B细胞具有与一个具体抗原结合的独特受体蛋白。一旦B细胞遇到其抗原并且接收来自T辅助细胞的附加信号，则其可进一步分化成表达和分泌可溶性抗体或记忆B细胞的浆B细胞。
术语“B细胞”还可指在其表面上呈现完全重排的任何B淋巴细胞，即成熟的B细胞受体(BCR)。例如，B细胞可以是未成熟的或者成熟的B细胞，并且优选地为初始B细胞，即尚未暴露于在该B细胞表面上的由BCR明确识别的抗原的B细胞。B细胞可以是记忆B细胞，优选地为IgG+记忆B细胞。术语“B细胞”还可指B细胞的混合物。B细胞的混合物可以指混合物中的B细胞具有不同的抗原特异性，即产生识别各种抗原的抗体或者完全重排的BCRs。单个B细胞的抗体或者BCRs通常是相同的，对于抗原-特异性也是如此。
术语“B细胞分泌抗体”优选地是指浆B细胞。术语“在其表面上携带BCR的B细胞”优选地是指在其质膜处表达BCR(优选地完全重排的BCR)的B细胞。在此情况下，“BCR”优选地不意指单个BCR，但优选地意指具有相同抗原-特异性的多个BCRs。
术语“部分”是指组分。部分优选地意指整体的至少20％，至少30％，优选地至少40％，优选地至少50％，更优选地至少60％，更优选地至少70％，甚至更优选地至少80％，并且最优选地至少90％。术语“主要部分”优选地指整体的至少50％，更优选地至少60％，更优选地至少70％，甚至更优选地至少80％，甚至更优选地至少90％，甚至更优选地至少95％，并且最优选地至少99％。
术语“克隆扩増”是指其中特异性实体倍增的过程。在本发明的情况中，术语优选地在免疫应答的情况中使用，其中淋巴细胞(优选地B淋巴细胞)由抗原刺激、增殖，并且识别该抗原的特异性淋巴细胞的数量被扩增。优选地，克隆扩増导致淋巴细胞分化，优选地分化成产生和分泌抗体的淋巴细胞。分泌抗体的B淋巴细胞为例如浆B细胞。
如本文所用，术语“増强的免疫应答”是指提高生发中心生成特异性类型的抗体(例如高亲和力，广泛中和抗体)，和/或以较高速率产生抗体的能力。
如本文所用，术语“同时”治疗使用是指通过相同途径并且同时或者基本上同时地施用至少两种活性成分。
如本文所用，术语“单独”治疗使用是指通过不同途径同时或者基本上同时地施用至少两种活性成分。
如本文所用，术语“顺序”治疗使用是指通过相同或者不同的给药途径在不同时间施用至少两种活性成分。更具体而言，顺序使用是指在完成一种活性成分的整个给药之后开始另一种或者其他活性成分的给药。因此，可以在施用一种活性成分几分钟、几小时或者几天之后施用另一种活性成分或者多种成分。在此情况下，不存在同时治疗。
术语“抗原”是指包含针对其要生成免疫应答的表位的试剂。术语“抗原”具体包括蛋白、肽、多糖、脂质、核酸、特别是RNA和DNA，以及核苷酸。术语“抗原”还包括作为次要物质的衍生抗原，其仅通过转化(例如，在分子中间通过用身体蛋白完成)变成抗原性和敏化；和缀合抗原，其通过人工掺入原子团(例如异氰酸酯，重氮盐)显示出新的构成特异性。在一个优选的实施方案中，抗原是肿瘤抗原，即可衍生自细胞质、细胞表面和细胞核的癌细胞的组分，具体是细胞内地或者作为肿瘤细胞上的表面抗原(优选地大量地)产生的那些抗原。示例是癌胚抗原、α1-胎蛋白、异铁蛋白和胎儿磺基糖蛋白、α2-H-铁蛋白和γ-胎蛋白以及各种病毒肿瘤抗原。在另一个实施方案中，抗原是病毒抗原，诸如病毒核糖核蛋白或者包膜蛋白。具体而言，其抗原或者肽应可以通过B细胞受体或者免疫球蛋白分子(诸如抗体)来识别。优选地，如果由B细胞受体识别的抗原能够在合适的共刺激信号存在的情况下诱导，表达明确识别抗原的BCR的B细胞的克隆扩增并且将此类B细胞分化成分泌B细胞的抗体。抗原可存在于重复组织中，即，抗原包含多于一种，优选地至少2种，至少3种，至少4种，至多6种、10种、12种或者更多种试剂或者表位，针对该表位要产生免疫应答或者要产生抗体。此类重复抗原优选地能够与多于一种相同特异性的抗体结合。换言之，此类重复抗原包含多于一个表位，优选地相同的表位，因此能够“交联”针对该表位的抗体。多于一种试剂或者表位可共价或者非共价连接，其中共价连接可以通过任何化学分组(诸如通过肽键)。抗原可以是融合分子，该融合分子包含重复的抗原肽或者包含具有共同表位的不同抗原肽。在一个优选的实施方案中，该抗原肽通过肽接头连接。
范围：在整个本公开中，本发明的各个方面能够以范围形式存在。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简短起见，并且不应被解释为对本发明范围的不灵活的限制。因此，范围的描述应认为已特别公开了所有可能的子范围以及该范围内的个别数值。例如，诸如从1至6的范围的描述应认为已特别公开了子范围，诸如从1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及该范围内的个别数值，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围宽度如何，这都适用。
根据本文所教导的方法，受试者被施用有效量的试剂。术语有效量和有效剂量可互换使用。术语有效量被定义为产生期望的生理应答所需的任何量。施用试剂的有效量和时间表可根据经验决定，并且做此类决定是在本领域技术人员的能力范围之内。施用的剂量范围足够大，以产生期望的效果，其中疾病或病症的一个或多个症状受到影响(例如，减少或延迟)。该剂量不应大到引起显著不良副作用，诸如不需要的交叉反应、过敏反应等。一般而言，剂量将随年龄、状况、性别、疾病类型、疾病或病症的程度、给药途径、或者其他药物是否被包括在方案中而变化，并且可由本领域技术人员决定。在有任何禁忌的情况下，剂量可由个别医师进行调节。剂量可以变化，并且可以每天一次或者多次剂量给药一天或者几天。可以在文献中找到对给定类别的药物产品的合适剂量的指导。
如本文所用，术语治疗(treatment)、治疗(treat)或者治疗(treating)是指降低疾病或病症或者疾病或病症的状况的作用的方法。因此，在所公开的方法中，治疗可指降低已确立的疾病或病症或者疾病或病症的状况的严重性的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或者100％。例如，与对照相比，如果受试者的疾病的一种或多种症状降低10％，则认为治疗疾病的方法是治疗。因此，与天然或者对照水平相比，降低可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％，或者是介于10％和100％之间的任意百分比。应当理解，治疗不一定是指疾病、状况、或者疾病或状况的症状的治愈或完全消融。
如本文所用，术语疾病或病症的预防(prevent)、预防(preventing)和预防(prevention)是指在受试者开始显示疾病或病症的一种或多种症状时发生的行为，例如治疗剂的施用，所述行为抑制或者延缓疾病或病症的一种或多种症状的发作或加重。如本文所用，与对照水平相比，对减少、降低或者抑制的参考包括10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或者更大的变化。此类术语可包括但不一定包括完全消除。
疫苗，方法，和试剂盒
已经发现同时体内施用同源抗原和衣原体属驱动了强大抗原特异性的体液免疫的开发并且加快了更高亲和力的抗原-特异性抗体的开发。例如，本文公开了HIV-1-特异性中和抗体的形成。
已知慢性沙眼衣原体感染在生殖器粘膜中诱导生发中心样结构，但对此发现的机理解释未定义。然而，最近发现衣原体属物种在体外(人类、非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、和小鼠)和体内(小鼠)诱导多克隆B细胞活化和増殖，并且促进非-衣原体-特异性-多克隆抗体的产生。
此现象可用于通过共同施用抗原和衣原体属来提高对同源抗原的体液免疫应答。例如，每2周向小鼠施用卵清蛋白(OVA)和灭活沙眼衣原体血清变型L2原体(EB)一个月(即，总共3次治疗)。在该研究中，与单独接受OVA的小鼠相比，这些小鼠显示出显著更高的OVA-特异性IgM和IgG血清抗体水平(图1)，并且OVA-特异性抗体亲和力在同时使用OVA和衣原体EB治疗的小鼠中显著更高(图2)。后一结果表明，EB的使用加快了OVA特异性抗体的亲和力成熟过程。与这些结果相似，施用单剂量白喉毒素(DT)和衣原体属EB的小鼠产生显著更高的DT-特异性IgG抗体的血清水平(图3)。此外，与单独使用DT治疗的小鼠相比，这些小鼠对致命的DT挑战的敏感性降低(图4)。
本发明公开了一种疫苗，该疫苗包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。本文所公开的疫苗，其包含抗原和衣原体属物种(或者蛋白、肽、糖类、或者它们的片段)两者，可以増加特异性体液活性。这意味着特异性体液活性可以增加10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，或者可增加2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或者更多倍，当与对照相比时，在对照中抗原以不含衣原体属物种的蛋白、肽、糖类或者片段的疫苗形式施用于受试者。
该抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者全灭活衣原体属或者它们的片段，可被化学缀合至抗原以用作佐剂。或者，该抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者全灭活衣原体属或者它们的片段，可以简单地组合而不需要缀合。也可以使用纳米颗粒，其中纳米颗粒涂覆有衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者整个灭活的衣原体属。衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者整个灭活的衣原体属物种，可以在通过纳米颗粒给药之前与抗原缀合或者仅与抗原组合(未化学结合)。
通过规定“抗原并非衍生自衣原体属物种”是指该抗原不是从衣原体属物种获得的蛋白、肽、糖类、核酸、或者它们任一个的片段。换言之，抗原衍生自衣原体属之外的来源(诸如另一种感染剂)，或者衍生自肿瘤。例如，抗原可与衣原体属的蛋白或核酸共用小于90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或者10％的同源性。
衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类(或者它们的片段)可以是能够引发期望的免疫应答的任何功能片段。在本文公开的疫苗和方法中使用的衣原体属物种(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠嗜衣原体)可为活的、灭活的，或者可为来自衣原体属物种(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠嗜衣原体)的蛋白、糖类或者片段。衣原体属物种可为已知物种的变体，并且仍然保留赋予本文所公开的效果的功能。例如，可使用整个细菌(活细菌不感染白细胞，并且不能在含有抗生素的培养基中存活)。或者，可以使用灭活的全细菌(X射线或者γ射线照射)或者由整个细菌产生的裂解物。在另一个实施方案中，可使用特异性蛋白、糖类或者它们的片段。例如，可使用沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)或者其片段。在另一个示例中，可使用灭活沙眼衣原体原体(EB)或者网状体(RB)。本领域的技术人员可容易地决定衣原体属物种的哪些蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段可用于赋予期望的效果。
可使用来自任何疾病、病症或者状况的任何抗原。示例性抗原包括但不限于细菌，病毒，寄生虫，过敏原，自身抗原和肿瘤相关抗原。如果使用基于DNA的疫苗，则抗原通常将由所施用的DNA构建体的序列编码。另外，如果抗原作为缀合物施用，则抗原通常将是包含在所施用的缀合物中的蛋白。具体而言，抗原可包括蛋白抗原、肽、整个灭活生物体等。
单一抗原可与本文所公开的疫苗和方法一起使用，或者多个抗原可一起使用。示例包括在相同疫苗中使用的2种、3种、4种或者更多种抗原，这些抗原或者同时施用，或者在彼此的特定时间范围内施用。
在一个方面中，抗原选自或来源自由下列组成的组：轮状病毒、口蹄疫病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、C型流感病毒、H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3、H1 0N7、人副流感2型、单纯疱疹病毒、EB病毒、兔热病、大天花(天花)、病毒性出血性发热、鼠疫杆菌(鼠疫)、水痘病毒、猪疱疹病毒1、李斯特菌、巨细胞病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、犬瘟热病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎、猫白血病病毒、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、拉沙热病毒、多瘤病毒、犬细小病毒、乳头瘤病毒、蜱传脑炎病毒、牛瘟病毒、人鼻病毒物种、肠道病毒物种、门戈病毒、副粘病毒、禽传染性支气管炎病毒、人T-细胞白血病淋巴瘤病毒1、人免疫缺陷病毒-1、人免疫缺陷病毒-2、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、帕罗病毒B19、腺病毒、风疹病毒、黄热病毒、登革热病毒、牛呼吸道合胞体病毒、冠状病毒、百日咳博德特氏菌、支气管炎博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌、流产布鲁氏菌、马尔他布鲁氏菌、猪布鲁氏杆菌、绵羊布鲁氏杆菌、布鲁氏菌属物种、大肠杆菌、沙门氏菌属物种、伤寒沙门氏菌、链球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、假单胞菌、结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌、牛分枝杆菌(卡介苗)、麻风分枝杆菌、肺炎球菌、葡萄球菌、肠杆菌属物种、Rochalimaia通体、溶血性巴氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、梅毒螺旋体、嗜血杆菌物种、牛生殖道支原体、肺炎支原体、支原体物种、布氏疏螺旋体、嗜肺军团菌、肉毒杆菌、白喉棒状杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、立氏立克次体、立克次氏体伤寒杆菌、普氏立克次氏体、恰菲埃利希氏体、无形体吞噬细胞、恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、血吸虫、锥虫、利什曼原虫物种，丝状线虫、毛滴虫病、肉孢子虫病、牛带绦虫、猪带绦虫、利什曼原虫、弓形虫、旋毛虫、球虫、柔嫩艾美球虫、新型隐球菌、白色念珠菌、烟曲霉、球孢子菌病、淋病奈瑟氏球菌、疟疾环子孢子蛋白、疟疾裂殖子蛋白、锥虫表面抗原蛋白、百日咳、甲病毒、腺病毒、白喉类毒素、破伤风类毒素、脑膜炎球菌外膜蛋白、链球菌M蛋白、流感血凝素、癌症抗原、肿瘤抗原、毒素、外毒素、神经毒素、细胞因子、细胞因子受体、单核因子、单核因子受体、植物花粉、动物皮屑、和尘螨。其他抗原包括与自身免疫状况、炎性状况、过敏、哮喘和移植排斥相关的抗原。
具体而言，本文公开了一种用于施用HIV-1包膜糖蛋白(Env)和衣原体属的疫苗策略，其促进HIV-特异性抗体的加快亲和力成熟和具有HIV-特异性中和活性的抗体的开发两者。
已经作出了很大努力来开发Env，其具有引发具有广泛HIV-1中和活性的有效抗体应答必需的免疫原性特性。然而，由于对病毒刺突上的保守Ab决定簇的构象和聚糖屏蔽，HIV-1是高度中和抗性的病毒。因此，引发广泛中和抗体(其与Env上的更易访问的表位区域结合较差)非常具有挑战性，并且需要选择性靶向特异性子决定簇和使用増强和/或加快亲和力成熟的强力佐剂。如上文所指出的，衣原体属具有很强的能力以用作増加亲和力成熟的佐剂。
在发现针对人类免疫缺陷病毒(HIV)的疫苗超过三十年后，其开发仍然未达成目标。由于病毒快速突变并且通过使用可变环、重糖基化、低聚和构象掩蔽而“隐藏”其包膜糖蛋白的保守表位，因此疫苗的开发一直难以捉摸并且变得困难。
包膜病毒，诸如HIV，通过两步处理进入细胞。第一步涉及病毒表面蛋白与宿主细胞质膜上的受体的结合。在受体结合后，介于病毒包膜的脂质双层和宿主细胞膜之间发生膜融合反应。嵌入在病毒包膜脂质双层中的病毒蛋白催化受体结合和膜融合反应。
在HIV中，包膜(Env)糖蛋白执行病毒进入的功能。Env被合成为聚蛋白前体分子，其通过宿主蛋白酶进行蛋白水解以生成成熟的Env糖蛋白复合物的表面(gpl20)和跨膜亚基(gp41)。未处理的Env前体被称为gpl60(反映其表观分子量)，其被进一步处理以形成gp41亚基和gpl20亚基。
HIV感染的初始步骤涉及将gpl20结合到细胞表面分子CD4，所述细胞表面分子CD4用作HIV-I和HIV-2的主要受体。一般在gpl20与CD4的先前接触之后，通过gpl20与G蛋白偶联共受体(CCR5或者CXCR4趋化因子受体)的相互作用启动膜融合过程。Gp41参与融合过程。gp41在膜融合中的确切作用未完全理解。在一个理论中，gp41首先通过其氨基-末端疏水域(称为融合肽)与靶细胞膜接触，然后进行构象变化以使病毒和细胞脂质双层接近，从而允许它们的外部小叶合并，从而形成半融合中间体。接下来，称为融合孔的水性连接必须在合并的膜的内部小叶上打开，并且扩大以留下通向核衣壳的开放通道。
寻求确定一种有效的HIV疫苗的一个重要目标是寻找能够引发广泛交叉反应性的HIV中和抗体(bcrn Abs)(相当于广泛中和抗体(bn Abs))的疫苗免疫原。此类抗体很少在感染HIV的人中引发，并且仅有几种此类单克隆bcrn Abs是已知的，其包括IgG bl2(Burton等人，1994；Roben等人，1994年)，IgG 2a12(Trkola等人，1996年；Sanders等人，2002年；Scanlan等人，2002年)，ml 4(Zhang等人，2004年)，ml 8(Zhang等人，2003年)，447-52D(Gorny等人，1992年)，IgG 2F5(Muster等人，1993年)，IgG 4E10(Stiegler等人，2001年；Zwick等人，2001年)，IgG m46(Choudhry等人，2007年)，IgG m48(Zhang等人，2006年)，FabX5(Moulard等人，2002年)和Fab Z13(Zwick等人，2001年)，以上每一个均以引用方式全文并入本文。
然而，即使已经确定了bcrn Abs，但使用疫苗在具有HIV感染风险的患者中诱导这些抗体尚未实现，因为这些ABs需要显著的体细胞超突变和亲和力成熟。目前可用的佐剂尚未能够产生这些效果到所需的水平。这仍然是开发预防性HIV疫苗的主要障碍之一。本发明公开了一种用于施用HIV-1包膜糖蛋白(Env)和衣原体属的疫苗策略，其促进HIV-特异性抗体的加快亲和力成熟和具有HIV-特异性中和活性的抗体的开发两者，并且有可能克服预防性HIV疫苗开发的主要障碍之一。
在一个实施方案中，该抗原可包含与肿瘤相关的抗原。可治疗的肿瘤的示例包括以下各者：胰腺肿瘤，诸如胰腺导管腺癌；肺肿瘤，诸如小细胞腺癌和大细胞腺癌、鳞状细胞癌和支气管肺泡癌；结肠肿瘤，诸如上皮腺癌和它们的转移；和肝肿瘤，诸如肝癌和胆管癌。还包括乳腺肿瘤，诸如导管腺癌和小叶腺癌；妇科肿瘤，诸如子宫颈鳞状和腺癌，以及子宫和卵巢上皮腺癌；前列腺肿瘤，诸如前列腺腺癌；膀胱肿瘤，诸如过渡性鳞状细胞癌；RES系统的肿瘤，诸如结节性或弥漫性B或T细胞淋巴瘤、浆细胞瘤和急性或慢性白血病；皮肤肿瘤，诸如恶性黒色素瘤；以及软组织肿瘤，诸如软组织肉瘤和平滑肌肉瘤。所特别关注的是脑部肿瘤，诸如星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤，和原发性神经外胚层肿瘤。包括在此类中的是神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤和神经胶质肉瘤。
具体而言，以下抗原与下列癌症类型相关联，并且可用于本文所公开的疫苗和方法中：
表1：癌和相关抗原
个体的免疫状态可为以下任何一种：相对于存在于所述组合物中的某些肿瘤相关抗原，个体可能是无免疫的，在此情况下，可以给予组合物以引发或促进抗肿瘤应答的成熟。个体目前可能不表达抗肿瘤免疫，但可具有免疫记忆，具体是与包含在疫苗中的肿瘤相关抗原相关的T细胞记忆，在此情况下可给予组合物以刺激记忆应答。个体还可以对包含在疫苗中的肿瘤相关抗原具有主动免疫(体液免疫或者细胞免疫，或者两者)，在此情况下，可给予组合物以保持、加强或者成熟应答，或者补充免疫系统的其他分支。受试者应该至少部分地具有免疫活性，以便疫苗能够诱导内源性T细胞应答。
本文公开了一种试剂盒，该试剂盒包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。该试剂盒还可包含疫苗所需的其他组分，如本文所公开的。
本文还公开了治疗或预防疾病的方法。这些方法包括向受试者施用抗原，其中该抗原并非衍生自衣原体属物种；和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，从而预防受试者的疾病或感染。可以同时给予抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，诸如在相同的注射中。或者，可单独给予抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段。本领域的技术人员将会知道可用于施用疫苗的各种方法。
正在治疗的受试者可具有多种疾病或病症。可使用本文所公开的方法治疗可使用免疫系统的体液臂治疗的任何疾病或病症。例如，可使用这些方法治疗感染病和癌症。
本文公开了用于免疫以引发针对抗原的免疫应答的策略。例如，疫苗可用于治疗或者预防HIV。在一个实施方案中，公开了一种具有表达肿瘤-特异性抗原的癌症类型的受试者。这可导致患者的治疗结果改善，例如通过表达肿瘤-特异性抗原的癌细胞或实体肿瘤的生长的减缓或者减少，或者通过癌细胞总数或者总肿瘤负荷的减少来验证。在相关实施方案中，患者已被诊断为患有与具体抗原(例如，病毒抗原)的表达相关的病毒、细菌、真菌或者其他类型的感染。该疫苗可导致患者的治疗结果改善，如通过患者体内致病感染剂生长的减缓和/或通过通常与具体感染病相关的可检测症状的减少或消除来验证。
当制备用于施用的疫苗时，其可与药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂组合以形成药物制剂或者单位剂型。此类制剂中的总活性成分按该制剂的重量计包括0.1％至99.9％。“药学上可接受的”物质是与制剂的其它成分相兼容并且对其接受者无害的载体、稀释剂、赋形剂和/或盐。用于施用的活性成分可作为粉末或者作为颗粒存在；作为溶液、悬浮液或者乳液存在。
表达载体、转导的细胞、多核苷酸和多肽(活性成分)可以通过使活性成分在生物体内与试剂的作用部位接触的任何方法来配制和施用以治疗各种疾病状态。它们可以通过可与药物结合使用的任何常规方法施用，作为单独的治疗活性成分或者以治疗活性成分的组合施用。它们可以单独施用，但通常与根据所选择的施用途径和标准药物实践选择的药物载体一起施用。
一般来讲，水、合适的油、盐水、水性右旋糖(葡萄糖)和相关的糖溶液和二醇(诸如丙二醇或者聚乙二醇)是用于肠胃外溶液的合适载体。用于肠胃外施用的溶液包含活性成分，合适的稳定剂，并且如果需要，还包含缓冲剂物质。单独或者组合使用的抗氧化剂(诸如硫酸氢钠、亚硫酸钠或者抗坏血酸)是合适的稳定剂。还使用柠檬酸以及其盐和乙二胺四乙酸(EDTA)钠。此外，肠胃外溶液可包含防腐剂，诸如苯扎氯铵、甲基-或丙基-对羟基苯甲酸酯和氯丁醇。Remington's pharmaceutical Sciences中描述了合适的药物载体，该书为本领域的标准参考文献。
另外，可采用标准制药方法来控制作用的持续时间。这些是本领域熟知的，并且包括控制释放制剂，并且可包括合适的大分子，例如聚合物、聚酯、聚氨基酸、聚乙烯、吡咯烷酮、乙烯醋酸乙烯酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素或者硫酸鱼精蛋白。可调节大分子的浓度以及结合方法以便控制释放。另外，所述试剂可掺入到聚合物材料的颗粒中，该聚合物物质诸如聚酯、聚氨基酸、水凝胶、聚(乳酸)或者乙烯醋酸乙烯酯共聚物。除了被掺入外，这些试剂还可用于捕集微胶囊中的化合物。
包含本文所公开的治疗剂的药物制剂可以使用熟知并且易于获得的成分通过本领域已知的过程制备。治疗剂也可以配制成适于肠胃外施用的溶液，例如通过肌内、皮下或者静脉内途径施用的溶液。治疗剂的药物制剂还可采取水性或者无水溶液或者分散体的形式，或者作为替代，采用乳液或者悬浮液的形式。
给定的剂量是实现所期望的治疗应答的“有效”量，无论是刺激免疫应答，还是治疗如本公开别处所定义的感染病或者癌症。当组合使用以实现所期望的效果时的多重剂量均落在有效量的定义范围内。剂量可以每天给予多次，或者每天给予一次，或者每隔一天给予一次，或者每隔三天给予一次等。可给予额外的剂量(诸如每月或者每周)，直至达到期望的效果。此后，具体地当免疫或者临床益处出现减退时，可根据需要给予额外的加强或者维持剂量。
疫苗的各种组分以“有效的组合”存在，这意味着疫苗的每种组分都有足够的量有效。只要疫苗整体上有效，就可以使用任何数量的成分。这也将取决于用于制备疫苗的方法。
药物组合物可以在产生免疫应答或者治疗或预防感染的其他疗法之后、之前、代替或者与其组合地给予。例如，受试者还可获得抗病毒药物。在使用此类方式的情况下，它们优选地以不干扰本文公开的组合物的免疫原性的方式或时间使用。受试者还可被施用另一种疫苗或者其他组合物以刺激免疫应答。
本文公开了组合疗法，其包括将本文所述的疫苗组合与旨在提供抗肿瘤或者抗病原体免疫应答的另一种策略组合的施用。在一种组合疗法中，受试者被给予本文所公开的疫苗以及本领域技术人员已知的抗病毒疗法。在一种组合疗法中，受试者在远离肿瘤的部位进行治疗之前、期间或之后，被给予刺激的异体淋巴细胞的肿瘤内植入物。在另一种组合疗法中，受试者在治疗之前、期间或之后使用替代的疫苗组合物在远离肿瘤的部位处理。在整个治疗过程中采用多种不同的组合物或者给药模式时，选择每个治疗元素的顺序和时间以优化免疫刺激或者抗肿瘤效果。
已经描述了本发明的多个实施方案。然而应当理解，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可以作出各种修改。因此，其他实施方案在以下权利要求的范围内。
实施例
实施例1：沙眼衣原体加快OVA-特异性抗体的亲和力成熟
每2周施用小鼠卵清蛋白(OVA)和灭活沙眼衣原体原体(EB)一个月(即，总共3次治疗)。在该研究中，与单独接受OVA的小鼠相比，这些小鼠显示出显著更高的OVA-特异性IgM和IgG血清抗体水平(图1)，并且OVA-特异性抗体亲和力在同时使用OVA和衣原体EB治疗的小鼠中显著更高(图2)。后一结果表明，EB的使用加快了OVA-特异性抗体的亲和力成熟过程。与这些结果相似，施用单剂量白喉毒素(DT)和衣原体属EB的小鼠产生显著更高的DT-特异性IgG抗体的血清水平(图3)。此外，与单独使用DT治疗的小鼠相比，这些小鼠对致命的DT挑战的敏感性降低(图4)。
实施例2：沙眼衣原体可增加Env-特异性抗体应答
可使用小鼠作为初始实验平台进行体内研究。通过ELISA和B细胞ELISPOT测量来决定抗原-特异性应答的大小，从而决定衣原体属是否可以增加C57BL/6小鼠中Env的免疫原性。然后通过使用离液型ELISA协议来定义Env-特异性抗体应答的亲和力。随后，单个Env-特异性记忆B细胞和生发中心B细胞从免疫C57BL/6小鼠识别并且分离出来以决定衣原体属是否能够増大体细胞超突变的程度。使用高度标准化的Env假病毒测定法和TZM-bl靶细胞，衣原体属也被评估为增加引发的Env-特异性抗体中和HIV-1的能力的佐剂。最后，当与其他类型的佐剂诸如矿物盐(例如明矾)、油乳剂(例如MF59)和颗粒(例如AbISCO-100)同时使用时，衣原体属充当B细胞佐剂以增加Env-特异性抗体的水平和亲和力的能力也可以被评估。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语的含义与所公开的发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中引述的出版物及其中引述的材料明确地以引用方式并入。
本领域的技术人员将认识到或能够使用不超过常规实验来探知本文所述发明的具体实施方案的许多等同物。此类等同物旨在由以下权利要求书涵盖。

Claims (38)

1.一种疫苗，所述疫苗包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。
2.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述衣原体属物种包含沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、鼠嗜衣原体或者肺炎衣原体。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗，其中所述衣原体属物种是灭活的。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的疫苗，其中衣原体属物种的所述蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，包含衣原体属的主要外膜(MOMP)蛋白。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的疫苗，其中所述疫苗包含不止一种抗原。
6.根据权利要求5所述的疫苗，其中所述疫苗包含两种以上抗原。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的疫苗，其中所述抗原包含感染剂。
8.根据权利要求7所述的疫苗，其中所述感染剂为病毒。
9.根据权利要求8所述的疫苗，其中所述病毒感染剂为HIV。
10.根据权利要求1至6中任一项所述的疫苗，其中所述抗原包含与肿瘤相关的抗原。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的疫苗，其中与单独的所述抗原相比，所述疫苗増加了特异性体液免疫。
12.一种试剂盒，所述试剂盒包含抗原和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种。
13.一种预防受试者的疾病或感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用抗原，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种；和衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段，从而预防受试者的疾病或感染。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述衣原体属物种包含沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、鼠嗜衣原体或者肺炎衣原体。
15.根据权利要求13至14中任一项所述的方法，其中所述衣原体属物种是灭活的。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述衣原体属物种蛋白包含主要外膜(MOMP)蛋白。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中所述抗原为病毒。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗原衍生自HIV。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述抗原为env蛋白、肽、或者它们的片段。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的方法，其中所述抗原与肿瘤相关。
21.根据权利要求13至20中任一项所述的方法，其中所述受试者为哺乳动物。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述哺乳动物为人类。
23.根据权利要求13至22中任一项所述的方法，其中所述抗原和衣原体属物种的所述蛋白、肽或糖类，或者它们的片段会同时给予。
24.根据权利要求13至22中任一项所述的方法，其中所述抗原在衣原体属物种的所述蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段之前被给予。
25.根据权利要求13至22中任一项所述的方法，其中所述抗原在衣原体属物种的蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段之后被给予。
26.一种治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用抗原，其中所述抗原并非衍生自衣原体属物种；和衍生自衣原体属物种的蛋白、肽、或者片段，从而治疗所述受试者。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述衣原体属物种包含沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体或者鼠嗜衣原体。
28.根据权利要求26至27中任一项所述的方法，其中所述衣原体属物种是灭活的。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中所述衣原体属物种蛋白包含主要外膜(MOMP)蛋白。
30.根据权利要求26至29中任一项所述的方法，其中所述抗原为病毒。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗原衍生自HIV。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述抗原为env蛋白、肽、或者它们的片段。
33.根据权利要求26至32中任一项所述的方法，其中所述抗原与肿瘤相关。
34.根据权利要求26至33中任一项所述的方法，其中所述受试者为哺乳动物。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述哺乳动物为人类。
36.根据权利要求26至35中任一项所述的方法，其中所述抗原和衣原体属物种的所述蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段会同时给予。
37.根据权利要求26至35中任一项所述的方法，其中所述抗原在衣原体属物种的所述蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段之前被给予。
38.根据权利要求26至35中任一项所述的方法，其中所述抗原在衣原体属物种的所述蛋白、肽、或糖类，或者它们的片段之后被给予。
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