CN108349958B - 用ezh2抑制剂治疗mrto/sccoht的方法 - Google Patents

Abstract

本披露提供一种在有需要的受试者中治疗恶性横纹肌样瘤的方法，该方法包括向该受试者给予治疗有效量的zeste增强子同源物2(EZH2)抑制剂。在此方法的某些实施例中，该恶性横纹肌样瘤是卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)，并且该EZH2抑制剂是tazemetostat(也称为Tazemetostat)。

Description

用EZH2抑制剂治疗MRTO/SCCOHT的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年9月25日提交的美国临时申请号62/233,146和2015年11月6日提交的美国临时申请号62/252,188的优先权权益，将其各自的内容通过引用以其全文结合在此。

技术领域

本披露涉及小分子疗法、癌症、和治疗罕见癌症类型的方法领域。

背景技术

对于有效治疗由导致EZH2依赖性肿瘤发生的SWI/SNF染色质重塑复合物亚基的遗传改变或功能损失所引起的某些癌症，存在长期仍未满足的需要。

发明内容

本披露为INI1阴性和SMARCA4阴性肿瘤(诸如恶性横纹肌样瘤(MRT)和上皮样肉瘤)提供了有效治疗。INI1和SMARCA4是对抗EZH2活性的转化/蔗糖非发酵性(SWItch/Sucrose NonFermentable)(SWI/SNF)染色质重塑复合物的关键蛋白质。这两者之一的遗传改变或功能损失可能导致某些癌症背景中的EZH2依赖性肿瘤发生，从而使这些肿瘤对EZH2抑制敏感。在某些实施例中，MRT可以是INI1阴性、INI1缺陷型、SMARCA4阴性、SMARCA4缺陷型、SMARCA2阴性、SMARCA2缺陷型，或者在SWI/SNF复合物的一个或多个其他组分上包含突变。

在本披露的某些实施例中，MRT是卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)，也称为卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)。本披露提供一种在有需要的受试者中治疗SCCOHT的方法，该方法包括向该受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂(例如，tazemetostat(EPZ-6438))。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)被配制为口服片剂。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)的治疗有效量是约800mg/kg。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)，每天给药两次。

在本披露的某些实施例中，MRT是上皮样肉瘤。本披露提供一种在有需要的受试者中治疗上皮样肉瘤的方法，该方法包括向该受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂(例如，tazemetostat(EPZ-6438))。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)被配制为口服片剂。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)的治疗有效量是约800mg/kg。在一些实施例中，EZH2抑制剂(例如，tazemetostat)，每天给药两次。

根据本披露的方法，EZH2抑制剂抑制组蛋白3的赖氨酸27(H3K27)的三甲基化。在某些实施例中，本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

(tazemetostat，EPZ-6438)、或其药学上可接受的盐。

本披露的EZH2抑制剂可口服给予。在某些实施例中，EZH2抑制剂可被配制为口服片剂。

本披露用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法包括向该受试者给予治疗有效量的EZH2抑制剂。在某些实施例中，EZH2抑制剂的治疗有效量是10mg/kg/天与1600mg/kg/天之间(包括端值在内)的剂量。因此，在这些方法的某些实施例中，EZH2抑制剂以10mg/kg/天与1600mg/kg/天之间(包括端值在内)的剂量给予。在某些实施例中，EZH2抑制剂的治疗有效量是约100、200、400、800、或1600mg的剂量。因此，在这些方法的某些实施例中，EZH2抑制剂以约100、200、400、800、或1600mg的剂量给予。在某些实施例中，EZH2抑制剂的治疗有效量是约800mg的剂量。因此，在这些方法的某些实施例中，EZH2抑制剂以约800mg的剂量给予。在某些实施例中，治疗有效量的EZH2抑制剂可每天两次(BID)向受试者给予。

用于治疗癌症的本披露的方法包括治疗恶性横纹肌样瘤(MRT)。在优选的实施例中，本披露的方法用于治疗患有卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)的受试者。MRTO也可称为卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)。在某些实施例中，MRTO或SCCOHT和/或受试者被表征为SMARCA4阴性、SMARCA4缺陷型、SMARCA2阴性、SMARCA2缺陷型、或者在SWI/SNF复合物的一个或多个其他组分中具有突变或缺陷。在某些实施例中，MRTO或SCCOHT和/或受试者被表征为SMARCA4阴性。在某些实施例中，MRTO或SCCOHT和/或受试者被表征为SMARCA4阴性或SMARCA4缺陷型；和SMARCA2阴性或SMARCA2缺陷型。如本文所用，SMARCA4阴性和/或SMARCA4缺陷型细胞可在SMARCA4基因、相应的SMARCA4转录物(或其cDNA拷贝)、或SMARCA4蛋白质中含有突变，该突变阻止SMARCA4基因的转录、SMARCA4转录物的翻译、和/或降低/抑制SMARCA4蛋白质的活性。如本文所用，SMARCA4阴性细胞可在SMARCA4基因、相应的SMARCA4转录物(或其cDNA拷贝)、或SMARCA4蛋白质中含有突变，该突变阻止SMARCA4基因的转录、SMARCA4转录物的翻译、和/或降低/抑制SMARCA4蛋白质的活性。

用于治疗癌症的本披露的方法包括治疗恶性横纹肌样瘤(MRT)。在相同的优选实施例中，本披露的方法用于治疗患有上皮样肉瘤的受试者。在某些实施例中，上皮样肉瘤被表征为SMARCA4阴性、SMARCA4缺陷型、SMARCA2阴性、SMARCA2缺陷型、或者在SWI/SNF复合物的一个或多个其他组分中具有突变或缺陷。在某些实施例中，上皮样肉瘤和/或受试者被表征为SMARCA4阴性。在某些实施例中，上皮样肉瘤和/或受试者被表征为SMARCA4阴性或SMARCA4缺陷型；和SMARCA2阴性或SMARCA2缺陷型。

本披露的方法可用于治疗为SMARCA4阴性或具有一个或多个可以是SMARCA4阴性的细胞的受试者。可通过荧光和非荧光免疫组织化学(IHC)方法(包括本领域普通技术人员熟知的方法)评估SMARCA4表达和/或SMARCA4功能。在某个实施例中，该方法包括：(a)从受试者获得生物样品；(b)将该生物样品或其部分与特异性结合SMARCA4的抗体接触；并且(c)检测与SMARCA4结合的该抗体的量。可替代地或另外地，SMARCA4表达和/或SMARCA4功能可通过包括以下的方法来评估：(a)从受试者获得生物样品；(B)对编码来自该生物样品或其部分的SMARCA4蛋白质的至少一个DNA序列进行测序；并且(c)确定编码SMARCA4蛋白质的该至少一个DNA序列是否含有影响SMARCA4蛋白质表达和/或功能的突变。SMARCA4表达或SMARCA4的功能可通过任选地使用来自受试者的相同生物样品，检测与SMARCA4结合的抗体的量和通过测序至少一种编码SMARCA4蛋白质的DNA序列来评估。

本披露的受试者可以是女性。本披露的受试者可小于40、30或20岁。在某些实施例中，本披露的受试者可在20与30岁之间，包括端值在内。

如本文所用，术语“治疗”可包括预防和/或抑制癌细胞的增殖，该癌细胞包括但不限于MRTO/SCCOHT细胞。

附图说明

图1是EZH2介导的H3K27me3甲基化的示意性描绘，H3K27me3是抑制基因转录的表观遗传修饰。

图2是PRC2与调节多能性的SWI-SNF依赖性染色质重塑的拮抗作用的示意性描绘。

图3是当祖细胞变得分化时EZH2的正常下调的示意性描绘。

图4A是肿瘤细胞中INI1(SMARCB2)介导的对EZH2致癌依赖性的示意性描绘。

图4B是示出EZH2敲除逆转由INI1损失诱导的肿瘤发生的图。示例性INI1缺陷型肿瘤包括但不限于恶性横纹肌样瘤和上皮肉瘤。

图5A是描绘MRTO/SCCOHT中的INI1表达的免疫组织化学程序的照片。

图5B是描绘MRTO/SCCOHT中的SMARCA4表达损失的免疫组织化学程序的照片。

图6A是在用EPIZ-6438(Tazemetostat)以1600mg的剂量每日两次治疗8周后，在基线(左)处具有SMARCA4阴性MRTO/SCCOHT的27岁女性的一系列x射线胶片。

图6B是图6A中所治疗受试者的治疗过程的示意性描绘。

图7A是婴儿中恶性横纹肌样瘤(MRT)的x射线胶片。MRT是儿科的，然而成人病例已有报道。MRT经常发生在肾脏、CNS和软组织中。重要的是，MRT经常耐化疗，从而导致存活率小于25％的预后不良。

图7B是描绘在诊断INI1阴性横纹肌样瘤后随时间(月数)变化的活着的受试者比例的图。

图7C是描绘在诊断INI1阴性横纹肌样瘤后随时间(月数)变化的活着的受试者百分比的图。

图8A是tazemetostat的化学结构图。

图8B是描绘tazemetostat对EZH2的相对选择性的一对示意图。

图8C是证明在INI1阴性MRT(G401)的异种移植模型中tazemetostat治疗的抗肿瘤活性的图。

图9是一系列IHC照片，这些照片描绘了在给予tazemetostat之前和之后肿瘤组织中的EZH2靶抑制。

图10是描绘实体瘤患者的最佳响应的图。

图11是一系列照片，这些照片描绘了在经历用800mg BID剂量的tazemetostat治疗的55岁男性中，INI1阴性恶性横纹肌样瘤的完全缓解(CR)。

图12是一系列照片，这些照片描绘了在经历用800mg BID剂量的tazemetostat治疗的44岁男性中，INI1阴性上皮样肉瘤的部分缓解(PR)。

图13A是化合物D的化学结构图。

图13B是描绘化合物D在SMARCA4和ARID1A卵巢细胞系中的长期2D增殖测定结果的一对图。示出第14天的IC₅₀值。SMARCA4阴性细胞系显示出用EZH2抑制剂化合物D的抗增殖作用，ARID1A突变的卵巢细胞系不显示。

图13C是显示用化合物D在SMARCA4-和SMARCA2-阴性卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)细胞系Bin-67中进行14天增殖研究的结果的图。示出从0.01-10μM范围内的8种不同处理条件的生长曲线。第14天的IC₅₀值是10nM。

图13D是蛋白质印迹，证明了在第14天化合物D处理的Bin-67细胞中H3K27me3水平的降低。在所有浓度化合物D的第14天，H3K27me3水平完全降低。

图13E是一系列图，这些图说明了用化合物D处理的ARID1A突变的卵巢细胞系的3D生长效应。在14天后没有观察到化合物D的作用。使用Scivax纳米培养技术进行3D测定，由此微型图案化的支架模拟ECM。

图14是卵巢细胞系组中SMARCA2和SMARCA4损失表征的蛋白质印迹分析。在30个卵巢细胞系中评估SMARCA2、SMARCB1和SMARCA4的蛋白质水平。基于SMARCA2和SMARCA4表达的双重损失识别两个误诊的SCCOHT细胞系(TOV112D、COV434)。突变取自CCLE和COSMIC数据库。

图15是SCCOHT中核心SWI/SNF蛋白质的免疫组织化学分析，示出了SCCOHT中SMARCA4/BRG1和SMARCA2/BRM的双重损失。内皮细胞和淋巴细胞是两种蛋白质的内部阳性对照。箭头表示表达SMARCA2的罕见肿瘤细胞。SMARCB1/INI1蛋白质表达充当肿瘤细胞免疫反应性的阳性对照(参见例如Karnezis等人J Pathol[病理学]2016；238:389-400。

图16是示出来自几乎100个细胞系(包括四个卵巢细胞系)的CRISPR合并筛选数据的图。纵坐标表示表征敲除对EZH2的敏感性的RSA(冗余siRNA活性)评分。基于SMARCA2和SMARCA4的双重损失，COV434被识别为SCCOHT来源，并且是唯一对EZH2敲除敏感的卵巢细胞系。

图17A是说明用tazemetostat处理的卵巢细胞系的长期增殖测定结果的图。

图17B是示出用tazemetostat处理后，SMARCA2缺陷型和SMARCA4缺陷型细胞系中细胞生长的剂量依赖性抑制的图。

图18A是说明在用tazemetostat治疗18天后体内SCCOHT异种移植模型(Bin-76)中的肿瘤生长抑制和末期肿瘤体积的图。

图18B是说明用tazemetostat治疗18天后Bin-67异种移植肿瘤中H3K27me3的减少的图。

图19A是说明在用tazemetostat治疗28天后体内SCCOHT异种移植模型(COV434)中的肿瘤生长抑制和末期肿瘤体积的图。

图19B是说明用tazemetostat治疗28天后COV434异种移植肿瘤中H3K27me3的减少的图。

图20A是说明在用tazemetostat治疗14天后体内SCCOHT异种移植模型(TOV112D)中的肿瘤生长抑制和末期肿瘤体积的图。

图20B是说明用tazemetostat治疗14天后TOV112D异种移植肿瘤中H3K27me3的减少的图。

具体实施方式

INI1阴性和SMARCA4阴性肿瘤，诸如恶性横纹肌样瘤(MRT)和上皮样肉瘤是严重的和使人虚弱的癌症。全球主要市场每年大约有1400名患者发展出这些肿瘤，这些肿瘤还没有确定的护理标准。INI1和SMARCA4是对抗EZH2活性的SWI/SNF复合物的关键蛋白质。这两者之一的遗传改变或功能损失可能导致某些癌症背景中的EZH2依赖性肿瘤发生，从而使这些肿瘤对EZH2抑制敏感。

示例性癌症包括卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)，也称为卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)。

一种在对其需要的受试者中治疗MRTO(SCCOHT)的优选方法包括向该受试者给予治疗有效量的tazemetostat(EPZ-6438)，其中该tazemetostat被配制为口服片剂，其中该治疗有效量是约800mg/kg，并且其中tazemetostat每天给药两次。

本披露的EZH2抑制剂对于治疗由SWI/SNF染色质重塑复合物的组分的丰度和/或功能降低引起的癌症是有效的，包括例如，SMARCA4的丰度和/或功能降低。可能成为致癌标记或驱动因子的SWI/SNF复合物的其他组分是ARID1A、ARID2、ARID1B、SMARCB1、SMARCC1、SMARCA2、或SMARCD1。从高层次看，SWI/SNF染色质重塑复合物使用ATP作为用于打开染色质以提供基因转录通路的能量来源。多蛋白PRC2(多梳(polycomb)抑制复合物2)的活性抑制染色质的打开，并且因此抑制基因转录。SWI/SNF染色质重塑复合物和多蛋白PRC2也彼此直接相互作用。然而，当SWI/SNF染色质重塑复合物的功能被破坏时，多蛋白PRC2的活性占优势，从而维持染色质为闭合构象。EZH2是PRC2的催化提交。EZH2中的功能获得性突变进一步加剧SWI/SNF染色质重塑复合物被破坏的细胞中的PRC2优势。当SWI/SNF染色质重塑复合物的功能被破坏时，细胞可能变得对EZH2驱动的肿瘤发生敏感。PRC2是唯一能够使组蛋白H3(PRC2的唯一重要底物)中第27位的赖氨酸(K)(H3K27)甲基化的人蛋白甲基转移酶。PRC2催化H3K37的单、二、和三甲基化(分别为H3K27me1、H3K27me2、和H3K27me3)。H3K27me3是抑制基因转录的表观遗传标记。H3K27的高度三甲基化在广泛范围的人类癌症(包括但不限于MRT和MRTO/SCCOHT)中是致瘤性的。

根据本披露的方法，可使用“正常”细胞作为比较癌细胞的一种或多种特征(包括SMARCA4的表达和/或功能)的基础。如本文所用，“正常细胞”是不能被分类为“细胞增生性病症”的一部分的细胞。一个正常细胞缺乏可导致不希望的病状或疾病发展的非常规生长或异常生长或两者。优选地，正常细胞表达与癌细胞相当量的EZH2。优选地，正常细胞含有SMARCA4基因的野生型序列、表达没有突变的SMARCA4转录物、并且表达SMARCA4蛋白质而没有保留所有功能为正常活性水平的突变。

如本文所用，“接触细胞”是指一种状态，其中化合物或其他物质组合物直接接触细胞，或足够接近以在细胞内诱导期望的生物效果。

如本文所用，“治疗(treating或treat)”描述了出于对抗疾病、病症或障碍的目的来管理和护理受试者，并且包括给予本披露的EZH2抑制剂、或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物，以缓解癌症的症状或并发症，或消除癌症。

如本文所用，术语“减轻”是指用来描述一个过程，其中癌症的体征或症状的严重性降低。重要的是，体征或症状可以减轻而不被消除。在一个优选的实施例中，给予本披露的药物组合物导致体征或症状的消除，然而，不需要消除。有效剂量预期降低体征或症状的严重性。例如，可能发生在多个位置的病症诸如癌症的体征或症状得以减轻的条件是该癌症的严重性在多个位置中的至少一个内下降了。

如本文所用，术语“严重性”是指描述癌症从癌前期或良性的状态转变成恶性状态的潜力。可替代地或另外地，严重性是指例如根据TNM分期系统(由国际抗癌联盟(UICC)和美国癌症组合委员会(AJCC)接受)或者由其他技术领域公认的方法描述的癌症阶段。癌症阶段指的是基于因素诸如原发肿瘤的位置、肿瘤大小、肿瘤数和受累的淋巴结(癌症扩散到淋巴结)癌症的程度或严重性。可替代地或另外地，严重性是指由本领域公认的方法(参见，美国国家癌症研究所)描述的肿瘤分级。肿瘤等级是按照癌细胞在显微镜下的外观和肿瘤生长和扩散的可能速度，用于癌细胞分类的系统。当判断肿瘤等级的时候，包括细胞的结构和生长方式的很多因素被考虑。用于确定肿瘤等级的具体因素因每个类型癌症的不同而不同。严重性还描述了一种组织学分级，也称为分化，其是指有多少肿瘤细胞类似于同一组织类型的正常细胞(参见，美国国家癌症研究所)。此外，严重性描述了一种核级，其是指肿瘤细胞中的核的大小和形状以及正在分裂的肿瘤细胞的百分比(参见，美国国家癌症研究所)。

本披露的另一个方面，严重性描述了肿瘤已分泌生长因子、降低细胞外基质、成为血管、失去粘附到并列组织或转移的程度。此外，严重性描述了原发肿瘤已经转移的位置的数量。最后，严重性包括治疗不同类型和位置的肿瘤的难度。例如，不能手术的肿瘤、那些更多的接近多个身体系统(血液学和免疫学肿瘤)的那些癌症、和最抵抗传统治疗的那些被认为是最严重的。在这些情况下，延长受试者的预期寿命和/或减轻疼痛，减少癌细胞的比例或者限制细胞于一个系统，以及改善癌症阶段/肿瘤分级/组织学分级/核级被认为是减轻癌症的体征或症状。

如本文所用，术语“症状”被定义为疾病、病、损伤或某些在体内不正常的指示。症状被经历该症状的个人感觉到或注意到，但可能不容易被其他人注意。其他人被定义为非医护人员。

如本文所用，术语“体征”也被定义为某些在体内不正常的指示。但体征被定义为可以由医生、护士和其他卫生保健专业人士可以看出的事物。

癌症是一组可以导致几乎所有的体征或症状的疾病。症状和体征将取决于癌症在哪里、癌症的尺寸、它对附近器官或结构有多大的影响。如果癌症传播(发生转移)，那么症状可出现在身体的不同部位。

随着癌症的生长，它开始推动附近的器官、血管、和神经。这种压力造成了癌症的一些体征和症状。癌症可能在其直到生长得相当大才引起一些症状的地方形成。卵巢癌被认为是沉默的杀手，因为该癌症不产生足够严重的体征或症状以引起医疗干预，直到肿瘤变大或转移。

癌症还可能引起诸如发烧、疲劳、或体重减轻的症状。这可能是因为癌细胞耗尽人体的大部分能量供应或释放改变人体新陈代谢的物质。或者癌症可能导致免疫系统以产生这些症状的方式反应。虽然以上列出的体征和症状是癌症中较常见的体征和症状，但还有许多其他体征和症状较少见并且未在此列出。然而，所有本领域公认的癌症体征和症状均是由本披露预期并且涵盖的。

治疗癌症可导致肿瘤大小的减小。肿瘤大小的减小也可被称为“肿瘤消退”。优选地，在根据本披露方法的治疗后，肿瘤大小相对于治疗前的肿瘤大小减小5％或更多；更优选地，肿瘤大小减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小多于75％或更多。肿瘤大小可通过任何可重复测量方式来测量。肿瘤的大小可以测量为肿瘤的直径。

治疗癌症可导致肿瘤体积的减小。优选地，在根据本披露方法的治疗后，肿瘤体积相对于治疗前的肿瘤大小减小5％或更多；更优选地，肿瘤体积减小10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减小多于75％或更多。肿瘤体积可通过任何可重复测量方式来测量。

治疗癌症可导致肿瘤数量的减少。优选地，在治疗后，肿瘤数相对于治疗前的数量减小5％或更多；更优选地，肿瘤数减少10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减少多于75％。肿瘤数可通过任何可重复测量方式来测量。肿瘤数可以通过计数肉眼或在指定的放大率下可见的肿瘤来测量。优选地，指定的放大率是2x、3x、4x、5x、10x、或50x。

治疗癌症可导致原生肿瘤位点遥远的其他组织或器官的转移病灶数量的减少。优选地，在根据本披露方法的治疗后，转移病灶的数量相对于治疗前的数量减小5％或更多；更优选地，转移病灶数量减少10％或更多；更优选地，减小20％或更多；更优选地，减小30％或更多；更优选地，减小40％或更多；甚至更优选地，减小50％或更多；并且最优选地，减少多于75％。转移病灶数量可通过任何可重复测量方式来测量。转移病灶数量可通过计数肉眼或在指定的放大率下可见的肿瘤来测量。优选地，指定的放大率是2x、3x、4x、5x、10x、或50x。

本披露的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物的有效量是对正常细胞没有显著的细胞毒性。例如，如果给予治疗有效量的本披露EZH2抑制剂未诱导正常细胞大于10％的细胞死亡，那么治疗有效量的本披露EZH2抑制剂对正常细胞没有显著的细胞毒性。如果给予治疗有效量的化合物未诱导正常细胞大于10％的细胞死亡，那么治疗有效量的本披露EZH2抑制剂不会显著地影响正常细胞的活力。

使细胞与本披露EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物接触可以选择性抑制癌细胞中的EZH2活性。向有需要的受试者给予本披露EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物可以选择性抑制癌细胞中的EZH2活性。

恶性横纹肌样瘤

恶性横纹肌样瘤(MRT)是一种罕见的儿童肿瘤，该肿瘤发生于软组织中，最常见于肾脏以及大脑中开始。某些恶性横纹肌样瘤的标志是SMARCB1(也称为INI1)的功能损失。INI1是SWI/SNF调控复合物的关键组分，该复合物是与EZH2相反作用的染色质重塑剂。INI1阴性肿瘤改变了SWI/SNF功能，从而导致异常和致癌EZH2活性。这种活性可以被EZH2的小分子抑制剂(诸如tazemetostat)靶向。INI1阴性肿瘤通常具有侵袭性，并且目前的治疗很难见效。例如，目前对MRT(一种充分研究的INI1阴性肿瘤)的治疗包括手术、化学疗法和放射疗法，这些疗法与有限的疗效和显著的治疗相关的发病率有关。主要市场(包括美国、欧盟和日本)中的INI1阴性肿瘤和滑膜肉瘤患者的年发病率为大约2,400个。SMARCB1/INI1的功能损失还发生在另一种罕见的侵袭性儿童肿瘤，中枢神经系统的非典型畸胎样横纹肌样瘤(AT/RT)中。

卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)(卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT))

MRTO/SCCOHT是一种影响儿童和年轻女性(平均诊断年龄为23岁)的非常罕见的侵袭性癌症。超过65％的患者在诊断后2年内死于疾病。像MRT一样，这些肿瘤的特征在于SWI/SNF复合物亚基SMARCA4的遗传损失。SMARCA4阴性的卵巢癌细胞对EZH2抑制选择性敏感，具有类似于MRT细胞中观察到的IC50值。例如，目前对于SCCOHT的治疗包括减小肿瘤手术和基于铂的化学疗法，并且表现出高复发率。鉴别诊断很广泛，并且包括三种卵巢癌亚型：颗粒细胞(性索间质)肿瘤、无性细胞瘤、和高级浆液性肿瘤。

标准苏木精和伊红(H&E)染色显示SCCOHT为横纹肌样，具有片状排列的小而紧密堆积的单形性、高增殖性、和低分化的细胞，而IHC表明SCCOHT的特征在于SMARCA4基因的失活导致蛋白质损失和SMARCA2蛋白质的非突变沉默。(参见例如，Karnezis等人,J.Pathol.[病理学]2016；238:389–400,Jelinic等人Nat Genet[自然遗传学]2014,Witkowski等人,Nat.Genet.[自然遗传学]2014；46:424-426,Ramos等人Nat.Genet.[自然遗传学]2014；46:427-429,Kupryjanczyk等人Pol.J.Pathol.[波兰病理学杂志]2013；64:238-246，将其各自的内容通过引用以其全文结合在此。)。本披露的一些方面提供，表现出SMARCA4损失(例如，作为突变的结果)和SMARCA2损失(例如，作为蛋白质损失的结果)的肿瘤细胞和肿瘤对EZH2抑制敏感并且因此可以有效地用EZH2抑制剂治疗。

上皮样肉瘤

上皮样肉瘤是一种罕见的软组织肉瘤，占所有软组织肉瘤的小于1％。它在1970年首次被明确表征。在上皮样肉瘤中发现的最常见的基因突变是INI-1的损失(约80％-90％)。已报道了两种上皮样肉瘤的变体：远端上皮样肉瘤与更好的预后有关，并且影响上肢和下肢远端(手指、手、前臂、或足)，而近端上皮样肉瘤与更差的预后有关，并且影响近端肢体(上臂、大腿)、和躯干。上皮样肉瘤发生于所有年龄组，但在青壮年中最常见(诊断的中值年龄为27岁)。在初始治疗后上皮样肉瘤伴有高复发率，并且当转移性上皮样肉瘤被诊断时，中值存活期小于2年。局部复发和转移发生在约30％-50％的患者中，其中典型地转移到淋巴结、肺、骨、和脑。上皮样肉瘤的治疗包括作为治疗的优选方法的手术切除。对于不能手术的肿瘤或术后复发，常规化学疗法和放射疗法单独或联合使用的成功率相对较低。约50％的肿瘤学家认为上皮样肉瘤对化学疗法不敏感。

EZH2抑制剂

本披露的EZH2抑制剂包括例如tazemetostat(EPZ-6438)：

或其药学上可接受的盐。

Tazemetostat还描述于美国专利号8,410,088、8,765,732、和9,090,562中(其各自的内容以其全文结合在此)。

如本文所述，Tazemetostat或其药学上可接受的盐有效地靶向WT和突变体EZH2两者。与其他组蛋白甲基转移酶相比，Tazemetostat是口服生物可利用性的并且对EZH2具有高选择性(即，通过Ki计算的>20,000倍选择性)。重要的是，Tazemetostat具有靶向甲基标记抑制作用，该抑制作用导致在体外杀死基因定义的癌细胞。动物模型在抑制靶甲基标记后也显示了持续的体内功效。本文所述的临床试验结果还证明了Tazemetostat的安全性和有效性。

在一个实施例中，以每天大约100mg至大约3200mg，诸如约100mg BID至约1600mgBID(例如，100mg BID、200mg BID、400mg BID、800mg BID、或1600mg BID)的剂量向该受试者给予Tazemetostat或其药学上可接受的盐，用于治疗NHL。在一个实施例中，该剂量是800mg BID。

本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：

或其立体异构体或其药学上可接受的盐和溶剂化物。

本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：化合物E

或其药学上可接受的盐。

本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：具有下式的GSK-126

或其立体异构体或其药学上可接受的盐或溶剂化物。本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：化合物F

或其立体异构体或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：化合物Ga-Gc中的任一个

或其立体异构体、药学上可接受的盐或溶剂合物。

本披露的EZH2抑制剂可包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：CPI-1205或GSK343。

另外的适合的EZH2抑制剂对于本领域技术人员来说将是显而易见的。在本文提供的策略、治疗形式、方法、组合、和组合物的一些实施例中，EZH2抑制剂是US 8,536,179(描述了GSK-126等化合物并且对应于WO 2011/140324)中所述的EZH2抑制剂，将其各自的内容通过引用以其全文结合在此。

在本文提供的策略、治疗形式、方法、组合、和组合物的一些实施例中，EZH2抑制剂是公布为WO 2014/124418的PCT/US2014/015706、公布为WO 2013/120104的PCT/US2013/025639以及公布为2015/0368229的US 14/839,273中所述的EZH2抑制剂，将其各自的内容通过引用以其全文结合在此。

在一个实施例中，本文披露的化合物是化合物自身，即游离碱或“裸”分子。在另一个实施例中，该化合物是其盐，例如，裸分子的单-HCl盐或三-HCl盐、单-HBr盐或三-HBr盐。

含有氮的本文披露的化合物可以通过用氧化剂(例如，3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢)处理而转化成N-氧化物，以得到适用于本文披露的任何方法的其他化合物。因此，当化合价和结构允许时，所有示出和要求保护的含氮化合物被认为包括如所示的化合物及其N-氧化物衍生物(可以被指定为N→O或N⁺-O^-)。此外，在其他情况下，本文披露的化合物中的氮可以转化成N-羟基或N-烷氧基化合物。例如，可以通过由诸如m-CPBA的氧化剂将母体胺氧化来制备N-羟基化合物。当化合价和结构允许时，所有示出和要求保护的含氮化合物还被认为覆盖如所示的化合物及其N-羟基(即，N-OH)和N-烷氧基(即，N-OR，其中R是经取代或经未取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、3-14元碳环或3-14元杂环)衍生物。

“异构现象”意指具有相同分子式但其原子的键合顺序或其原子的空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。并非彼此的镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，并且是彼此的不可重叠的镜像的立体异构体称为“对映异构体”或有时称为光学异构体。含有等量的具有相反手性的单独对映异构形式的混合物称为“外消旋混合物”。

键合到四个不相同取代基的碳原子称为“手性中心”。

“手性异构体”意指具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可作为单独非对映异构体或作为非对映异构体的混合物存在，称为“非对映异构混合物”。在存在一个手性中心时，立体异构体可通过该手性中心的绝对构型(R或S)来表征。绝对构型是指附接到手性中心的取代基的空间排列。考虑中的附接至手性中心上的取代基按照Cahn、Ingold和Prelog的序列规则排序。(Cahn等人，Angew.Chem.Inter.Edit.[应用化学]1966,5,385；勘误表511；Cahn等人，Angew.Chem.[应用化学]1966,78,413；Cahn和Ingold，J.Chem.Soc.[化学学会会刊]1951(伦敦)，612；Cahn等人，Experientia[实验]1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.[化学教育杂志]1964,41,116)。

“几何异构体”意指因围绕双键或环烷基接头(例如，1,3-环丁基)的旋转受阻而存在的非对映异构体。这些构型的名称是通过前缀顺式和反式或Z和E来区分，这些前缀指示根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格规则，基团位于分子中双键的同侧或对侧。

应理解，本文披露的化合物可描述为不同手性异构体或几何异构体。还应理解的是，在化合物具有手性异构体或几何异构体形式时，所有异构体形式均旨在被包括于本披露的范围内，并且化合物的命名不排除任何异构体形式。

此外，本披露中讨论的结构和其他化合物包括其所有阻转异构体。“阻转异构体”是其中两个异构体的原子空间排列不同的立体异构体类型。阻转异构体将其存在归因于由于大基团围绕中心键旋转受阻而引起的旋转受限。此类阻转异构体通常作为混合物存在，然而，由于最近在色谱技术方面的进展，已经可在所选情况下分离两种阻转异构体的混合物。

“互变异构体”是平衡地存在并且易于从一种异构体形式转化成另一种形式的两种或更多种结构异构体之一。这种转化导致氢原子的形式迁移，伴随着相邻共轭双键的转换。互变异构体在溶液中作为互变异构体组的混合物存在。在可能进行互变异构化的溶液中，互变异构体将达到化学平衡。互变异构体的确切比率取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH。可通过互变异构作用相互转化的互变异构体的概念被称为互变异构现象。

在可能的多种类型的互变异构现象中，通常观察到两种。在酮-烯醇互变异构现象中，电子和氢原子发生同时转移。环-链互变异构现象由于糖链分子中的醛基(-CHO)与同一分子中的一个羟基(-OH)反应使其形成如葡萄糖所展现的环状(环形状)形式而发生。

常见互变异构对为：杂环中(例如，在核碱基中，诸如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶)的酮-烯醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、酰胺-亚胺酸互变异构现象、亚胺-烯胺和烯胺-烯胺。如下文所示的，酮-烯醇平衡的实例在吡啶-2(1H)-酮与相应的吡啶-2-醇之间。

应理解的是，本文披露的化合物可被描绘为不同互变异构体。还应当理解的是，在化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式都旨在被包括于本披露的范围内，并且化合物的命名不排除任何互变异构体形式。

本文披露的化合物包括化合物自身，以及其盐和溶剂化物(如果适用的话)。例如，盐可在阴离子与芳基-或杂芳基-取代的苯化合物上的带正电基团(例如，氨基)之间形成。适宜阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、延胡索酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根和乙酸根(例如，三氟乙酸根)。术语“药学上可接受的阴离子”是指适于形成药学上可接受的盐的阴离子。同样，盐也可在阳离子与芳基-或杂芳基-取代的苯化合物上的带负电基团(例如，羧酸根)之间形成。适合的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子、以及铵阳离子(诸如四甲基铵离子)。芳基-或杂芳基-取代的苯化合物还包括那些含有季氮原子的盐。在盐形式中，应理解的是，化合物与盐的阳离子或阴离子的比率可以为1:1，或不同于1:1的任何比率，例如3:1、2:1、1:2、或1:3。

另外，本文披露的化合物(例如，化合物的盐)可以水合或非水合(无水)形式或作为与其他溶剂分子的溶剂化物而存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。

“溶剂化物”意指含有化学计量量或非化学计量量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物倾向于以结晶固态捕获固定摩尔比率的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果溶剂是水，那么所形成的溶剂化物是水合物；并且如果溶剂是醇，那么所形成的溶剂化物是醇合物。水合物是通过一个或多个水分子与该物质的一个分子组合形成，其中水保留其作为H₂O的分子状态。

如本文所用，术语“类似物”是指在结构上与另一化合物类似、但在组成上稍微不同的化合物(如由不同元素的原子置换一个原子或在特定官能团存在下、或由另一官能团置换一个官能团)。因此，类似物是与参考化合物在功能和外观上，但不在结构或来源上类似或相当的化合物。

如本文所定义，术语“衍生物”是指具有共同的核心结构，并且被如本文所述的不同基团取代的化合物。例如，由化学式(I)表示的所有化合物均是芳基或杂芳基取代的苯化合物，并且具有化学式(I)作为共同核心。

术语“生物电子等排体”是指通过原子或原子团由大概相似的另一原子或原子团交换所得的化合物。生物电子等排置换的目标是产生具有与母体化合物相似的生物学特性的新化合物。生物电子等排置换可基于物理化学或拓扑学。羧酸生物电子等排体的实例包括但不限于酰基磺酰亚胺、四唑、磺酸酯和膦酸酯。参见例如，Patani和LaVoie,Chem.Rev.[化学评论]96,3147-3176,1996。

本披露旨在包括本披露化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括那些原子数相同但质量数不同的原子。借助一般实例且不受限制的，氢同位素包括氚和氘，并且碳同位素包括C-13和C-14。

药物制剂

本披露还提供了药物组合物，这些药物组合物包含与至少一种药学上可接受的赋形剂或载体组合的至少一种本文所述的EZH2抑制剂。

“药物组合物”是呈适用于给予受试者的形式的含有本披露EZH2抑制剂的配制品。在一个实施例中，药物组合物呈整块或呈单位剂型。单位剂型是多种形式中的任一种，包括例如胶囊、IV袋、片剂、气溶胶吸入器上的单泵或小瓶。单位剂量组合物中的活性成分(例如，所披露的化合物或其盐、水合物、溶剂合物或异构体的配制品)的量是有效量，并且根据所涉及的具体治疗而变化。本领域的技术人员应认识到，有时有必要依据患者的年龄和病况对剂量进行常规改变。剂量还将取决于给药途径。考虑了多种途径，包括经口、经肺、经直肠、肠胃外、经皮、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、吸入、经颊、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。用于局部或经皮给予本披露的化合物的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂以及吸入剂。在一个实施例中，在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载体以及需要的任何防腐剂、缓冲剂、或推进剂混合。

如本文所用，短语“药学上可接受”是指在正确医学判断的范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。

“药学上可接受的赋形剂”意指用于制备药物组合物的赋形剂，它们通常是安全的、无毒性的和没有生物学上或其他方面不期望的，并且包括兽医使用以及人类药物使用可接受的赋形剂。如本披露所使用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种这种赋形剂。

本披露的药物组合物被配制成与其预期的给予途径相容。给药途径的实例包括(例如)肠胃外、静脉内、皮内、皮下、口腔(例如，吸入)、经皮(局部)、和经粘膜给药。用于肠胃外、真皮内或皮下给予的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，诸如苄基醇或对羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，及用于调节张力的试剂，诸如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱诸如盐酸或氢氧化钠调节pH。肠胃外制剂可以被封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

本披露的化合物或药物组合物可以当前用于化学治疗性治疗的多种熟知方法给予受试者。例如，对于治疗癌症，本披露的化合物可以直接被注射进肿瘤，注射进血流或体腔或口服或使用贴剂应用于皮肤。所选剂量应足以构造有效治疗，但未高至可引起不可接受的副作用。疾病病状状态(例如，癌症、癌前病变等)和患者的健康状况在治疗期间和治疗后的合理期限内应优选地被密切监测。

如本文所用，“治疗有效量”是指对治疗、改善、或预防所识别疾病或病状有效的或表现出可检测的治疗或抑制效果的EZH2抑制剂、组合物、或其药物组合物的量。该效果可以通过本领域已知的任何测定方法来检测。用于受试者的精确有效量将取决于受试者的体重、身材、和健康状况；病状的性质和程度；以及选择用于给予的治疗剂或治疗剂的组合。给定情况的治疗有效量可以通过临床医师的技术和判断范围内的常规实验来确定。在优选的方面，有待治疗的疾病或病症是癌症，包括但不限于恶性横纹肌样瘤(MRT)、卵巢的MRT(MRTO)和卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)。

对于本披露的任何EZH2抑制剂，最初治疗有效量可以在细胞培养分析(例如肿瘤细胞的细胞培养分析)中或者在动物模型(通常大鼠、小鼠、兔、狗、或猪)中估算。动物模型还可以用于确定给药的适当浓度范围和途径。然后这类信息可以用于确定对于在人中给药的适用剂量和途径。治疗/预防功效和毒性可通过标准药剂程序在细胞培养物或实验性动物中来确定，例如，ED₅₀(在50％群体中治疗有效的剂量)和LD₅₀(对50％的群体具杀伤性的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率是治疗指数，并且可以表达为比率LD₅₀/ED₅₀。呈现大的治疗指数的药物组合物是优选的。该剂量可以根据所采用的剂型、患者的敏感性、和给药途径在此范围内变化。

调整剂量和给药以提供一种或多种活性药剂的足够水平或维持期望的效果。可考虑的因素包括疾病状况的严重性、受试者的一般健康状况、受试者的年龄、体重以及性别、饮食、给药时间和频率、一种或多种药剂组合、响应灵敏度、以及对疗法的耐受/响应。长效药物组合物依据特定配制品的半衰期和清除率可以每3至4天、每周、或每两周一次给药。

含有本披露的EZH2抑制剂的药物组合物可以公知的方式制备，例如通过常规混合、溶解、制粒、制糖衣、磨粉、乳化、胶囊化、包埋、或冻干工艺的手段。药物组合物可以常规方式使用一种或多种促进将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂的药学上可接受的载体(包括赋形剂和/或助剂)来配制。当然，适当的配制品取决于所选的给药途径。

适合于可注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内给药，适合的载体包括生理盐水、抑菌水、克列莫佛(Cremophor)EL^TM(BASF，新泽西州派西派尼市(Parsippany，NJ))或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，该组合物必须是无菌的并且必须具有达到容易注射的程度的流动性。它在制备和存储的条件下必须是稳定的并且必须抗微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用而保存。该载体可以是包含以下物质的溶剂或分散介质：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，以及其适合的混合物。恰当的流动性可例如通过使用诸如卵磷脂的包衣来维持，在分散液的情况下通过维持所需粒径来维持，以及通过使用表面活性剂来维持。防止微生物的作用可以通过不同的抗细菌以及抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂(例如糖)、多元醇(诸如甘露醇、山梨糖醇)、和氯化钠。可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。

按照需要，可以通过将活性化合物以需要的量加入具有以上列举的组分中的一种或多种组合的适当溶剂中，随后进行无菌过滤来制备无菌注射液。通常，通过将活性化合物加入无菌载体中来制备分散液，该无菌载体包含基础分散介质以及来自以上列举的其他所需成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分的粉末以及来自其先前经无菌过滤溶液的任何其他所需成分。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。它们可以被封装在明胶胶囊中或被压成片剂。出于口服治疗性给药的目的，可以将活性化合物随赋形剂一起加入并且以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。可以使用用以口腔清洗的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中的化合物经口服、漱、咳出或咽下。可以包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有以下成分中的任一者或具有类似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻酸、普拉莫胶(Primogel)或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或氢化植物油；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂。

对于通过吸入给药，化合物从加压容器或分配器(其中包含合适的推进剂，例如气体(诸如二氧化碳))、或喷雾器以气溶胶喷雾形式递送。

系统给药也可以通过经粘膜或经皮的方式。对于经粘膜或经皮肤给药，在该配制品中使用适合有待渗透的障碍的渗透剂。这样的渗透剂通常是本技术领域所熟知的，并且对于经粘膜给药包括，例如洗涤剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。对于经皮给药，如本领域中公知的，将活性化合物配制成软膏剂、油膏剂、凝胶剂、或乳膏。

可以将这些活性化合物(即本披露的EZH2抑制剂)与将保护这些化合物免于从体内快速消除的药学上可接受的载体一起制备，诸如控制释放配制品，包括植入物和微囊化的递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类、以及聚乳酸。用于制备此类配制品的方法对本领域的普通技术人员而言应是清楚的。材料也可以从Alza公司和Nova制药公司购买得到，脂质体悬浮液(包括靶向受感染细胞的具有针对病毒抗原的单克隆抗体的脂质体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域的普通技术人员已知的方法制备，如例如描述在美国专利号4,522,811中的。

特别有利的是以单位剂型配制口服或肠胃外组合物以便给药和剂量统一。如本文所用的单位剂型是指适合作为用于待治疗受试者的单一剂量的物理离散单位；每一单位含有经计算以产生所需治疗效应的预定量的活性化合物与所需药物载体的结合。对于本披露的单位剂型的规格被指示为并且直接取决于活性化合物的独特特征和有待实现的特定治疗效果。

在治疗性应用中，在影响所选剂量的因素中，根据本披露使用的药物组合物的剂量依据药剂、接受患者的年龄、体重和临床病状以及给予治疗的临床医师或执业医师的经验和判断而变化。通常，剂量应足以导致肿瘤生长的减慢，并且优选是消退，并且还优选是使肿瘤完全消退。药学试剂的有效量是提供如由临床医师或其他有资格的观察者注意到的客观上可识别的改进的量。例如，患者肿瘤的消退可以参考肿瘤的直径来测量。肿瘤直径减小指示消退。治疗停止后肿瘤复发失败也表示消退。如本文所用，术语“剂量有效的方式”是指活性化合物在受试者或细胞中产生期望的生物效应的量。

药物组合物可以同给药说明书一起被包括在容器、包装、或分配器中。

本披露的化合物能进一步形成盐。所有这些形式也被考虑在要求保护的披露的范围内。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指本披露的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱的盐来修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基的矿物盐或有机酸盐，诸如胺，酸性残基(如羧酸等)的碱盐或有机盐。药学上可接受的盐包括常规的无毒盐或例如由无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的季铵盐。例如，这样的常规无毒盐包括但不限于来源于无机酸和有机酸的那些，这些无机酸和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、重碳酸、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺酸、1,2-乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙二醇阿散酸、己基间苯二酚酸(hexylresorcinic)、水巴米克酸(hydrabamic)、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸(subacetic)、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、甲苯磺酸，以及常见的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。

药学上可接受的盐的其他实例包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘糠酸等。本披露还涵盖在以下发生时形成的盐：母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铵离子)替代；或与有机碱(诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等)配位。

应该理解的是，对药学上可接受的盐的所有提及都包括同一种盐的如本文定义的溶剂加成形式(溶剂合物)或晶形(多晶型物)。

本披露的EZH2抑制剂还可以被制备为酯，例如，药学上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸官能团可以转化成其相应的酯，例如甲酯、乙酯或其他酯。另外，化合物中的醇基可以转化成其相应的酯，例如乙酸酯、丙酸酯或其他酯。

本披露的EZH2抑制剂还可以被制备为前药，例如，药学上可接受的前药。术语“前药(pro-drug)”和“前药(prodrug)”在本文中可互换使用，并且是指在体内释放活性母体药物的任何化合物。由于已知前药可增强药物的许多所需品质(例如，溶解度、生物利用度、制造等)，因此可以将本披露的化合物以前药形式递送。因此，本披露旨在涵盖本披露要求保护的化合物的前药、递送其的方法和含有其的组合物。“前药”旨在包括任何共价键合的载体，当向受试者给予此类前药时这些载体在体内释放本披露的活性母体药物。通过以在常规操纵或体内使修饰裂解为母体化合物的方式修饰存在于化合物中的官能团来制备本披露中的前药。前药包括本公披露的化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团与可在体内裂解以分别形成游离羟基、游离氨基、游离巯基、游离羧基或游离羰基基团的任何基团键合。

前药的实例包括但不限于本披露化合物中的羟基官能团的酯(例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)和氨基甲酸酯(例如N,N-二甲基氨基羰基)、羧基官能团的酯(例如，乙酯、吗啉代乙醇酯)、N-酰基衍生物(例如，N-乙酰基)N-曼尼希碱、氨基官能团的席夫碱和烯胺酮、酮和醛官能团的肟、缩醛、缩酮和烯醇酯等，参见Bundegaard,H.,Design of Prodrugs[前药的设计],第1-92页,Elesevier,纽约-牛津大学(1985)。

EZH2抑制剂、或其药学上可接受的盐、酯或前药是经口、经鼻、经皮、经肺、以吸入方式、经颊、舌下、腹膜内、皮下、肌内、静脉内、经直肠、胸膜内、鞘内和肠胃外给予的。在一个实施例中，化合物是口服给予的。本领域的技术人员应认识到某些给药途径的优点。

利用这些化合物的剂量方案是根据多种因素来选择的，包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学病状；待治疗病状的严重性；给药途径；患者的肾功能和肝功能；以及所采用的具体化合物或其盐。具有普通技能的医师或兽医可以容易地确定和开具预防、对抗或阻止病状进展的所需的药物的有效量。

剂量方案可以是本披露化合物的每日给药(例如每24小时)。剂量方案可以是连续几天的每日给药，例如，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或至少七个连续日。每日给药可以多于一次，例如，每日两次、三次或四次(每24小时一次)。给药方案可以是每日给药，接着是至少一天、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天或至少六天不给药。

本披露所披露的化合物的配制和给药技术可见于Remington:the Science andPractice of Pharmacy,19^th edition,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1995)[雷明顿：药学科学与实践，第19版，麦克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州(1995)]。在一个实施例中，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐在药物配制中与药学上可接受的载体或稀释剂组合使用。适合的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂和无菌水或有机溶液。化合物将以足以提供在本文所述范围内的期望剂量的量存在于此类药物组合物中。

用于治疗癌症的本披露的方法包括治疗恶性横纹肌样瘤(MRT)。在优选的实施例中，本披露的方法用于治疗患有卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)的受试者。MRTO也可称为卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)。在某些实施例中，MRTO或SCCOHT和/或受试者被表征为SMARCA4阴性。如本文所用，SMARCA4阴性细胞在SMARCA4基因、相应的SMARCA4转录物(或其cDNA拷贝)、或SMARCA4蛋白质中含有突变，该突变阻止SMARCA4基因的转录、SMARCA4转录物的翻译、和/或降低/抑制SMARCA4蛋白质的活性。细胞的SMARCA4阴性状态使得细胞对EZH2驱动的肿瘤发生敏感。

本披露的方法可用于治疗为SMARCA4阴性或具有一个或多个可以是SMARCA4阴性的细胞的受试者。可通过荧光和非荧光免疫组织化学(IHC)方法(包括本领域普通技术人员熟知的方法)评估SMARCA4表达和/或SMARCA4功能。在某个实施例中，该方法包括：(a)从受试者获得生物样品；(b)将生物样品或其部分与特异性结合SMARCA4的抗体接触；并且(c)检测与SMARCA4结合的抗体的量。可替代地或另外地，SMARCA4表达和/或SMARCA4功能可通过包括以下的方法来评估：(a)从受试者获得生物样品；(B)对编码来自该生物样品或其部分的SMARCA4蛋白质的至少一个DNA序列进行测序；并且(c)确定编码SMARCA4蛋白质的至少一个DNA序列是否含有影响SMARCA4蛋白质表达和/或功能的突变。SMARCA4表达或SMARCA4的功能可通过任选地使用来自受试者的相同生物样品，检测与SMARCA4结合的抗体的量和通过测序至少一种编码SMARCA4蛋白质的DNA序列来评估。

除非另外指出，否则本文使用的所有百分比和比率都是按重量计。

根据不同实例，本披露的其他特征和优点是清楚的。所提供的实例说明在实施本披露中有用的不同组分和方法。这些实例并不限制要求保护的披露。基于本披露，技术人员可以识别并利用可用于实施本披露的其他组分和方法。

实例

为了使本文披露的本发明可得到更有效的理解，提供以下实例。应理解的是，这些实例仅是出于说明目的，而不应当被解释为以任何方式限制本披露。

实例1：用tazemetostat治疗SMARCA4阴性MRTO/SCCOHT

用口服片剂每天两次(BID)给予1600mg EPIZ-6438(Tazemetostat)成功治疗了被诊断患有SMARCA4阴性MRTO/SCCOHT的27岁人类女性。在治疗8周后肿瘤大小从基线降低，并且从治疗16周后的8周测量值进一步降低。

该受试者于2013年被诊断患有SMARCA4阴性MRTO/SCCOHT。在整个2014年，受试者用顺铂/环磷酰胺/多柔比星/依托泊苷疗程以及随后的卡铂/依托泊苷/环磷酰胺疗程进行治疗。治疗过程均没有成功。然后受试者接受了自体造血细胞移植，该移植也未能治疗SMARCA4阴性MRTO/SCCOHT。

受试者目前正在经历用口服片剂每天两次(BID)给予1600mg tazemetostat的疗法。图6A提供了初步结果，然而，治疗正在进行并且将持续至少24周。

实例2：INI1和SMARCA4阴性肿瘤的缓解

用tazemetostat治疗INI1和SMARCA4阴性肿瘤诱导肿瘤组织中HeK27me3的药效学抑制。

在tazemetostat治疗后评估MRT和MRTO/SCCOHT的临床活性显示疾病稳定至少6个月、部分缓解或完全缓解。

实例3：全外显子组测序识别SWI/SNF亚基中的变体

将存档或基线福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)样品提交基因组DNA分离(n＝25)。25个样品中的18个具有足够的DNA来进行文库制备和全外显子组测序。18个样品中的16个通过了测序质量控制。大于300X中值测序覆盖SWI/SNF组分。将在dbSNP中识别的变体和具有<5％等位基因频率的变体过滤掉。

在I期实体瘤患者中表征了SWI/SNF复合物的遗传变体(参见表1)。在实现部分缓解(PR)的患者中检测到SMARCA4无义突变。通过免疫组织化学(IHC)识别了表现出INI1蛋白质损失的患者中SMARCB1的无义和移码突变。仅在无响应患者(例如3/13例ARID1A突变患者)的SWI/SNF组分中识别了另外的体细胞突变。

表1

表2描述了1期临床试验设计(发起人协议编号：E7438-G000-001，ClinicalTrials.gov标识符：NCT01897571)。研究人群包括患有复发性或难治性实体瘤或B细胞淋巴瘤的患者。受试者分别在接受800mg BID和1600mg BID的扩展群组或者在确定食物对以400mg BID给药的效果的群组中接受3+3剂量递增。主要终点是确定推荐的II期剂量(RP2D)/最大耐受剂量(MTD)。次要终点包括安全性、药代动力学(PK)、药效学(PD)和肿瘤反响应，每8周评估一次。

表2

表3说明了不同的患者肿瘤类型。

表3

*通过IHC证实为INI1或SMARCA4阴性

表4总结了实体肿瘤患者人口统计学。

表4

*恶性横纹肌样瘤患者-仅确定性手术和/或铺助放射疗法

表5描述了NHL(非霍奇金淋巴瘤)和实体瘤患者(n-51)的安全性特征。

表5

*无论归因如何，频率＞10％

表6说明了患有INI1或SMARCA4阴性肿瘤的患者的临床活性。

表6

*通过RECIST 1.1标准确认的响应

+仍在研究中的患者

实例4：EZH2抑制剂在卵巢高钙血症型小细胞癌(SCCOHT)模型中的临床前和临床评估

H3K27组蛋白甲基转移酶EZH2是多梳抑制复合物2(PRC2)的催化组分，并且在多种癌症类型中被扩增、过表达、或突变，从而支持其作为致癌基因的功能。除了EZH2本身的遗传改变之外，其他蛋白质中的远端遗传变化可能导致对EZH2活性的致癌依赖性。已经确定，INI1(SNF5/SMARCB1)(转化/蔗糖非发酵性(SWI/SNF)染色质重塑复合物的核心组分)中的细胞系和异种移植物在选择性EZH2抑制剂tazemetostat(EPZ-6438，参见例如Knutson等人PNAS[美国国家科学院院刊]2013；110：7922-7927，该文献通过引用以其全文结合在此)存在下显示出高度的敏感性和持久的消退。

在临床前观察淋巴瘤和INI1阴性肿瘤中的活性后，启动tazemetostat的1期剂量递增研究(ClinicalTrials.gov标识符：NCT01897571)。据报道，在患有INI1阴性(经IHC确认)复发的恶性横纹肌样瘤的患者中观察到完全缓解。已经提出的是，横纹肌样瘤成瘾于或依赖于失调的PRC2活性。已经证实了先前提出的SWI/SNF与PRC2的拮抗关系，该拮抗关系在INI1缺陷型肿瘤中受到干扰。INI1的损失诱导不适当的SWI/SNF功能，从而废除PRC2活性的抑制。这导致多梳靶基因，诸如参与分化和肿瘤抑制的那些多梳靶基因被异常抑制。除了INI1的缺失之外，还有许多报道描述了其他SWI/SNF复合物成员的遗传改变。鉴于INI1缺陷型肿瘤对PRC2活性的致癌依赖性，本研究调查了其他SWI/SNF突变癌症类型对EZH2抑制的敏感性。具体而言，在本研究中调查了EZH2抑制在携带SWI/SNF复合物成员ARID1A和SMARCA4中的体细胞突变的卵巢癌中的作用。

在增加浓度的EZH2抑制剂存在下，使一组不同组织学的卵巢癌细胞系在2-D组织培养物中进行增殖测定14天。还将所选择的细胞系在3-D培养物中进行测试。发现SWI/SNF组分SMARCA2和SMARCA4(也称为BRG1)缺陷的卵巢癌细胞系在临床上可实现的浓度下对EZH2抑制最敏感，如通过减少的增殖和/或形态变化所证明。相反，在2-D或3-D体外测定中，未观察到卵巢癌细胞系中的另一SWI/SNF组分ARID1A中的突变广泛赋予对EZH2抑制的敏感性。在用tazemetostat治疗的两名SCCOHT(SMARCA4阴性)患者的1期试验中观察到临床活性。

SCCOHT的特征在于SMARCA2和SMARCA4损失，并且显示在临床前和临床研究中证明的对EZH2的依赖。具体地，在所测试的约20种卵巢细胞系中，所测试的三种SCCOHT细胞系在14天增殖测定中对化合物D最敏感(IC₅₀：5-17nM)。在患有复发的SMARCA4阴性卵巢恶性横纹肌样瘤(SCCOHT)的患者中观察到临床活性(SD≥6个月和确认的PR)。

检查跨越卵巢癌细胞系的SMARCA2/4蛋白质水平导致识别另外两个先前错误分类的SCCOHT细胞系(图14)。

SCCOHT细胞系中核心SWI/SNF蛋白质的免疫组织化学分析显示了SMARCA4/BRG1和SMARCA2/BRM的双重损失(图15)。

在CRISPR汇集筛选中测试的SCCOHT细胞系(COV434)对EZH2敲除敏感，而其他三种卵巢细胞系不敏感(图16)。

发现双SMARCA2和SMARCA4缺陷卵巢细胞系在长期增殖测定中对tazemetostat最敏感(图17A)。使用tazemetostat在长期增殖测定中测试33个卵巢细胞系。观察到0.073μM与>10μM之间的IC₅₀。损失SMARCA2和SMARCA4两者的细胞系对tazemetostat最敏感(IC₅₀值小于1μM)。

在四种SMARCA2缺陷型和SMARCA4缺陷型细胞系中，在tazemetostat治疗后观察到细胞生长的剂量依赖性抑制。在单缺陷或WT细胞系(SMARCA4缺陷型JHOC-5和TYKNU；SMARCA2缺陷型PA-1和OAW42；或SMARCA2和SMARCA4 WT ES-2或COV362细胞系，图17B)中观察到较低的敏感性。

在具有相似突变或SWI/SNF组分损失的不同癌细胞系中检查对EZH2抑制的敏感性。表7总结了另外的SWI/SNF改变的癌症(包括肺腺癌)中的EZH2活性。

表7

*Proquinase 3D IC₅₀

实例5：在SCCOHT异种移植模型(Bin-67)中体内治疗肿瘤

将来自SCCOHT细胞系Bin-67的体内异种移植肿瘤用tazemetostat给药18天。在Bin-67模型中18天后肿瘤与载体相比在体积上显示统计学显著差异(图18A)。在第18天收集的异种移植组织中通过H3K27me3水平评估EZH2靶抑制(图18B)。每个点代表来自单个动物的肿瘤的H3K27me3与总H3的比率。

实例6：在SCCOHT异种移植模型(COV434)中体内治疗肿瘤

将来自SCCOHT细胞系COV434的体内异种移植肿瘤用tazemetostat给药28天。在COV434模型中28天后肿瘤与载体相比在体积上显示统计学显著差异(图19A)。在第28天后，保留COV434异种移植物群组的一部分以监测无治疗下的肿瘤再生长，均没有发现有再生长。在第28天收集的异种移植组织中通过H3K27me3水平评估EZH2靶抑制(图19B)。每个点代表来自单个动物的肿瘤的H3K27me3与总H3的比率。

实例7：在SCCOHT异种移植模型(TOV112D)中体内治疗肿瘤

将来自SCCOHT系TOV112D的体内异种移植肿瘤用tazemetostat给药14天，每日两次。在TOV112D模型中14天后肿瘤与载体相比在体积上显示统计学显著差异(图20A)。在第14天收集的异种移植组织中通过H3K27me3水平测量EZH2靶抑制(图20B)。每个点代表来自单个动物的肿瘤的H3K27me3与总H3的比率。

本文引用的全部公开案和专利文献都通过引用并入本文，如同每一份这样的公开案或文献都被具体地且分别地指出已通过引用结合在此。公开和专利文件的引用不旨在为承认任何这些是相关的现有技术，也不构成对关于相同内容或日期的任何承认。本发明现在已经通过书面描述的方式进行了描述，本领域的技术人员将认识到本发明可以以各种实施例的方式来实施，并且在前面的描述和下面的实例是为了说明的目的，而不是限制后面的权利要求。如果使用细胞系或基因的名称，除非另有说明或从上下文中明显可见，否则缩写和名称符合美国典型培养物保藏中心(ATCC)或国家生物技术信息中心(NCBI)的命名法。

在不背离本发明的精神或本质特征的情况下，本发明可以体现为其他具体形式。因此前述实施例应当在所有方面被视为是说明性的而非限制本文所述的发明。因此本发明的范围是由所附权利要求书而非前述说明书指示的，并且属于权利要求书的含义和等效范围内的所有变化意图被包含在其中。

Claims (14)

1.EZH2抑制剂在制备用于治疗卵巢恶性横纹肌样瘤/卵巢高钙血症型小细胞癌的药物中用途，

其中，该EZH2抑制剂是

或其药学上可接受的盐，并且其中，该卵巢恶性横纹肌样瘤/卵巢高钙血症型小细胞癌是SMARCA4阴性的且SMARCA2阴性的。

2.如权利要求1所述的用途，其中，该EZH2抑制剂抑制组蛋白3的赖氨酸27(H3K27)的三甲基化。

3.如权利要求1所述的用途，其中，该药物用于口服给予。

4.如权利要求1所述的用途，其中，该药物被配制为口服片剂。

5.如权利要求1所述的用途，其中，该药物以10mg/kg/天与1600mg/kg/天之间的剂量给药该EZH2抑制剂。

6.如权利要求1所述的用途，其中，该药物以100、200、400、800、或1600mg的剂量给药该EZH2抑制剂。

7.如权利要求1所述的用途，其中，该药物以800mg的剂量给药该EZH2抑制剂。

8.如权利要求1所述的用途，其中，该药物每天给药两次(BID)。

9.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，该药物用于给药至小于40岁的受试者。

10.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，该药物用于给药至小于30岁的受试者。

11.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，该药物用于小于20岁的受试者。

12.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，该药物用于在20至30岁之间，包括端值在内的受试者。

13.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，治疗包括预防和/或抑制卵巢恶性横纹肌样瘤/卵巢高钙血症型小细胞癌细胞的增殖。

14.tazemetostat或其药学上可接受的盐在制备用于治疗卵巢恶性横纹肌样瘤/卵巢高钙血症型小细胞癌的药物中的用途，其中，该卵巢恶性横纹肌样瘤/卵巢高钙血症型小细胞癌是SMARCA4阴性的且SMARCA2阴性的，

其中该tazemetostat被配制为口服片剂，

其中该治疗有效量是800mg/kg，并且

其中该tazemetostat每天给药两次。

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