CN108349876B - 一种取代的联苯基化合物及其药物组合物 - Google Patents

一种取代的联苯基化合物及其药物组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种取代的联苯基化合物及其药物组合物，所述取代的联苯基化合物如为式（I）所示的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、前药、立体异构体、水合物或溶剂化合物。本发明的化合物具有更好的脑啡肽酶抑制活性，具有更好药效学/药代动力学性能，化合物的适用性好、安全性高，可用于制备治疗脑啡肽酶相关的疾病，具有良好的市场开发前景。

Description

一种取代的联苯基化合物及其药物组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种取代的联苯基化合物及其药物组合物，其可用于治疗脑啡肽酶介导的相关疾病。
背景技术
脑啡肽酶((NEP)是一种发现于许多器官和组织，包括脑、肾、肺、胃肠道、心脏和外周血管结构中的内皮膜结合Zn2+金属肽酶。NEP使许多内源性肽降解和失活，所述肽如脑啡肽(enkephalin)、循环缓激肽(circulating bradykinin)、血管紧张素肽(angiotensinpeptide)和利钠肽(natriuretic peptide)，其中利钠肽具有数种作用，包括例如血管舒张和尿钠排泄/利尿以及抑制心肥大和心室纤维化。因此，NEP在血压恒定和心血管健康中起重要作用。
脑啡肽酶参与多种生物活性寡肽类的分解，在疏水性氨基酸残基的氨基侧裂解肽键。被代谢的肽包括心房钠尿肽(ANP)、铃蟾肽、缓激肽、与降钙素基因相关的肽、内皮素、脑啡肽类、神经降压肽、P物质和血管活性肠肽。这些肽中的一些具有有效的血管舒张和神经激素功能、利尿和促尿钠排泄活性或调节行为效应。
研究表明可溶性脑啡肽酶(sNEP)对急性心力衰竭可能的预后价值和动态变化。通过检验350例急性心力衰竭住院患者在入院时其可溶性脑啡肽酶水平(平均值为0.67ng/mL)。无论是短期(2个月)或长期(1.2年)随访结果均显示，可溶性脑啡肽酶的水平与心血管死亡和心衰住院的复合终点事件相关。入院时的可溶性脑啡肽酶浓度对2个月时患者复合终点趋势走向有临床指示意义的在2个月，且在随访终点的附加分析中也与各种临床变量及NT-proBNP浓度有显著的关联。在出院时可溶性脑啡肽酶浓度将从0.70ng/mL降至0.52ng/mL(J.Lupón et.Al.,JACC Heart Fail,2015,3,641-644)。
中国正快步进入了老龄化社会，2013年底≥65岁人口为1.32亿，预计到2050年>60岁人口达到1/3。老龄化可能致心衰患者激增、住院增多。2013年的荟萃分析资料显示，中国心衰患病率为1.3％，比2003年的增加0.4％。社区调查显示：年龄每增加10岁心衰患病率大致翻一倍。中国人群心衰发病率为每千人0.7-0.9，每年新发心衰病人50万例。心衰患者预后很差，5年病死率在50％以上。心力衰竭死亡率居高不下，一项在不同城市42家医院，10714例心力衰竭患者进行的研究显示，1980、1990、2000心衰死亡率分别为39.9％、37.7％和41.1％。
因此，本领域仍需要开发对脑啡肽酶有抑制活性或更好药效学性能的化合物。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种脑啡肽酶抑制剂、药物组合物及其应用，其具有更好的脑啡肽酶抑制活性和/或具有更好药效学/药代动力学性能。
对此，本发明采用的技术方案为：
一种脑啡肽酶抑制剂，如式(I)所示取代的联苯基化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化合物，
Figure GDA0002522599310000021
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27各自独立地为氢、氘、卤素或三氟甲基；
附加条件是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、R27中至少一个是氘代的或氘。
作为本发明的进一步改进，R1、R2、R3、R4和R5各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R15、R16、R17和R18各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R19、R20、R21和R22各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R23、R24、R25、R26和R27各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，所述化合物可选自下述化合物或其药学上可接受的盐，
但不局限于下列化合物：
Figure GDA0002522599310000031
Figure GDA0002522599310000041
Figure GDA0002522599310000051
Figure GDA0002522599310000061
采用此技术方案，氘在药物分子中的形状和体积与氢基本上相同，如果药物分子中氢被选择性替换为氘，氘代药物一般还会保留原来的生物活性和选择性。同时发明人经过实验证实，碳氘键的结合比碳氢键的结合更稳定，可直接影响一些药物的吸收、分布、代谢和排泄等属性，从而提高药物的疗效、安全性和耐受性。
优选的，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量(0.015％)，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
具体地说，在本发明中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26和R27各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
在另一优选例中，所述化合物不包括非氘代化合物。
本发明还公开了一种药物组合物，其含有药学上可接受的载体和如上所述的所述的脑啡肽酶抑制剂，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、立体异构体、前药或同位素变体的药物组合物。
作为本发明的进一步改进，所述药学上可接受的载体包括助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂中的至少一种。
作为本发明的进一步改进，所述药物组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球或气溶胶。
给予本发明药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。优选口服给药或注射给药。
本发明的药物组合物可以采用本领域周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
作为本发明的进一步改进，其还包含其他活性化合物，所述活性化合物可选自：HMG-Co-A还原酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、钙通道阻滞剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、利尿剂、ApoA-I拟似物、抗糖尿病药、减肥药、醛固酮受体阻滞剂、内皮素受体阻滞剂、醛固酮合酶抑制剂、CETP抑制剂和5型磷酸二酯酶抑制剂。
本发明还提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与如上所述的脑啡肽酶抑制剂，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，形成药物组合物。
本发明化合物具有脑啡肽酶酶抑制活性，因此预期其适用作治疗罹患通过抑制脑啡肽酶或通过增加其肽底物含量而得以治疗的疾病或病症的患者的治疗剂。因此，本发明的一个方面涉及一种治疗罹患通过抑制脑啡肽酶而得以治疗的疾病或病症的患者的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的另一方面涉及一种治疗心血管疾病的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的另一方面涉及一种治疗高血方面涉及一种抑制哺乳动物中的脑啡肽酶的方法，其包含向所述哺乳动物投与脑啡肽酶抑制量的本发明化合物。
本发明还公开了一种如上所述的取代的联苯基脑啡肽酶抑制剂的用途，即本发明化合物可有利地适用作治疗如高血压和心脏衰竭的病状的治疗剂。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文中，如无特别说明，“卤素”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤原子选自F、Cl和Br。
本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。
本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。
药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的化合物对脑啡肽酶具有优异的抑制性；通过氘化这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性；用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，提高化合物在动物体内的药物浓度，提高了药物疗效；用氘取代化合物中的氢原子，可以抑制某些代谢产物，提高了化合物的安全性。
具体实施方式
下面更具体地描述本发明式(I)结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0℃～100℃，优选0℃～80℃)下进行。反应时间通常为0.1小时-60小时，较佳地为0.5-24小时。
实施例1制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-3,4-d2-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-1)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000091
步骤1 Boc-L-酪氨酸甲酯(化合物2)的合成。
在反应瓶中加入L-酪氨酸甲酯(10g，50mmol)，加入250mL的二氯甲烷溶解，向反应瓶中加入三乙胺(13.3g，100mmol)，加入二碳酸二叔丁酯(12.3g，56mmol，在30℃下搅拌3小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到12g化合物2，收率82％，LC-MS(APCI):m/z＝196.3(M-100+1)+。
步骤2(R)-3-三氟甲磺酸-苯基-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸甲酯(化合物3)的合成。
在反应瓶中加入化合物2(12g，40.6mmol)，加入100mL二氯甲烷溶解，室温下加入吡啶(8.1g，1.02mmol)，冷却至-15℃，滴加三氟甲磺酸酐(14.4g，51mmol)。-15℃搅拌30分钟。LC-MS检测原料反应完全，加水100ml稀释，用乙酸乙酯(150ml x 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩，柱层析纯化得到4.4g化合物3，收率25.4％，LC-MS(APCI):m/z＝428.3(M+1)+。
步骤3(R)-3-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸甲酯(化合物5)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入四三苯基膦钯(38.8mg，0.03mmol)，化合物3(480mg，1.12mmol)，苯硼酸(270mg，2.24mmol)和碳酸钾(232mg，1.6mmol)，加入甲苯10mL，升温至80℃反应3小时，TLC检测化合物3完全反应，浓缩反应液，柱层析纯化得到340mg化合物5，收率85％，LC-MS(APCI):m/z＝356(M+1)+。
步骤4(R)-3-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸(化合物6)的合成。
向反应瓶中加入化合物5(340mg，0.95mmol)，加入10mL的四氢呋喃溶解，加入1mL1M的氢氧化钠溶液，室温下搅拌反应2小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，向反应瓶中加入10mL的水和10mL的乙酸乙酯稀释，用1M的盐酸溶液调节pH至酸性，用乙酸乙酯(50mLx 3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到230mg黄色油状化合物6，收率67.6％，LC-MS(APCI):m/z＝340(M-1)-。
步骤5(R)-3-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基-甲氧基甲基胺基丙酸(化合物7)的合成。
向反应瓶中加入化合物6(4.65g，13.63mmol)，甲氧基甲基胺(1.6g，25.89mmol)，EDCI(5.22g，27.26mmol)，三乙胺(1.625g，16.35mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT，2.76g，20.44mmol)，加入溶剂二氯甲烷60mL，室温下搅拌反应16小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到4.51g化合物7，收率83.3％，LC-MS(APCI):m/z＝401(M+1)+。
步骤6(R)-3-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙醛(化合物8)的合成。
氮气保护下，向反应瓶中加入氢化铝锂(386mg，10.19mmol)，加入四氢呋喃100mL。冷却至0℃，加入化合物7(2.72g，6.79mmol)，0℃下搅拌反应1小时，用硫酸氢钾水溶液淬灭，加入1M的盐酸溶液20mL，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到2.3g化合物8，收率～100％，LC-MS(APCI):m/z＝326(M+1)+。
步骤7(R)-3-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2-烯-2-甲基-戊酸乙酯(化合物10)的合成
向反应瓶中加入化合物8(2.1g，6.45mmol)，加入50mL二氯甲烷溶解，加入乙氧甲酰基亚乙基三苯基膦(4.68g，12.92mmol)，室温搅拌反应18小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到2.4g化合物10，收率90.9％，LC-MS(APCI):m/z＝410(M+1)+。
步骤8(R)-3-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-3,4-d2-2-甲基-戊酸乙酯(化合物11)的合成。
向反应瓶中加入化合物10(0.3g，0.732mmol)，用8mL氘代甲醇溶解，向反应瓶中加入10％的钯碳91mg，通入在氘气(50psi)下反应24小时，TLC检测原料反应完全，加入硅藻土过滤，40mL甲醇洗涤滤饼，浓缩有机相得到0.3g化合物11，收率99.6％，LC-MS(APCI):m/z＝414(M+1)+。
步骤9(R)-3-联苯-4-基-2-氨基-3,4-d2-2-甲基-戊酸乙酯(化合物12)的合成。
向反应瓶中加入化合物11(300mg，0.755mmol)，加入乙酸乙酯50mL溶解，室温加入4M的盐酸二氧六环1mL，室温下反应3小时，TLC检测原料完全反应，浓缩除去溶剂得到300mg化合物12，不需纯化直接用于下一步。
步骤10 4-(4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-3,4-d2-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物13)的合成.
向反应瓶中加入化合物12(300mg，0.946mmol)，丁二酸酐(0.143mg，1.417mmol)，加入6mL的二氯甲烷和6mL的吡啶溶解，在室温下反应24小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，加入水和乙酸乙酯，1M的盐酸溶液洗三次，饱和氯化钠溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化到340mg化合物13，收率86.7％，LC-MS(APCI):m/z＝414(M-1)-。
步骤11 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-3,4-d2-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物14)的合成
氮气保护下向反应瓶中加入化合物13(340mg，0.819mmol)，加入甲苯5mL溶解，加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(681mg，3.33mmoL)。80℃反应3小时，TLC检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得到91mg化合物14，收率29.9％，LC-MS(APCI):m/z＝470.6(M+1)+。
步骤12 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-3,4-d2-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-1)的合成。
向反应瓶中加入化合物14(91mg，0.194mmol)，加入二氯甲烷2mL溶解，室温加入三氟乙酸(89mg，0.776mmol)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到46mg化合物S-1，收率57.5％，LC-MS(APCI):m/z＝414(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.61-7.55(m,2H),7.52(d,J＝8.1Hz,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(dd,J＝8.4,6.1Hz,1H),7.28-7.20(m,2H),5.90(t,J＝10.1Hz,1H),4.23(d,J＝7.1Hz,1H),4.12(q,J＝7.1Hz,2H),2.83(m1H),2.64(t,J＝6.5Hz,2H),2.48-2.32(m,2H),1.35-1.18(m,6H)。
实施例2制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-(d5-乙氧基)-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-2)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000121
步骤1(R)-3-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2-甲基-戊酸乙酯(化合物15)的合成。
向反应瓶中加入化合物10(0.3g，0.732mmol)，用8mL甲醇溶解，加入10％钯碳90mg，通入氢气(50psi)反应3小时，TLC检测原料反应完全，用硅藻土过滤，用40mL甲醇洗涤滤饼，浓缩有机相得到0.3g化合物15，收率99.6％，LC-MS(APCI):m/z＝412(M+1)+。
步骤2(R)-3-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-戊酸(化合物16)的合成。
向反应瓶中加入化合物11(870mg，2.19mmol)，用20mL甲醇溶解，加入氢氧化钾(368mg，6.57mmol)室温下反应5小时。TLC检测原料完全反应，用1M盐酸调节pH至酸性，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到550mg化合物16，收率68.1％，LC-MS(APCI):m/z＝368(M-1)-。
步骤3(R)-3-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-d5-戊酸乙酯(化合物17)的合成
向反应瓶中加入化合物16(250mg，0.676mmol)，用1mL氘代乙醇溶解，向反应液中加入4M的盐酸二氧六环1.25mL，升温至60℃反应3小时，TLC检测原料反应完全，向反应液中加入6mL水，用碳酸钠水溶液调节pH至碱性，用乙酸乙酯(30mLx 4)萃取，合并有机相，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得到230mg产物17，收率100％，LC-MS(APCI):m/z＝317(M+1)+。
步骤4 4-(4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物18)的合成。
向反应瓶中加入化合物17(230mg，0.726mmol)，丁二酸酐(11mg，1.09mmol)，用6mL的二氯甲烷和6mL的吡啶溶解，室温下反应24小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，加入乙酸乙酯和水稀释，1M的盐酸溶液洗涤三次，饱和氯化钠溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到197mg化合物18，直接用于下一步反应。
步骤5 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物19)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入化合物18(197mg，0.470mmol)，用甲苯5mL溶解。加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(395mg，1.94mmol)。80℃反应2小时，LC-MS检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，饱和氯化钠溶液洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得到67mg化合物19，收率49.7％，LC-MS(APCI):m/z＝475(M+1)+。
步骤6 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(S-2)的合成。
向反应瓶中加入化合物19(67mg，0.14mmol)，用二氯甲烷2mL溶解，加入三氟乙酸(64mg，0.564mmol)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到23mg化合物S-2，收率39.6％，LC-MS(APCI):m/z＝417(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.55(m,J＝15.7,7.7Hz,4H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.2Hz,1H),7.28-7.18(m,2H),5.89(d,J＝8.6Hz,2H),4.24(d,J＝3.3Hz,2H),2.93-2.76(m,2H),2.59(m,3H),2.42(t,J＝6.3Hz,2H),1.94(m1H),1.52(m1H),1.16(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例3制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-d4-氧代丁酸(化合物S-3)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000131
步骤1 4-(4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-d4-氧代丁酸(化合物20)的合成。
向反应瓶中加入化合物15(617mg，1.98mmol)，氘代丁二酸酐(288mg，2.77mmol)，加入6mL的二氯甲烷和6mL的吡啶溶解，然后在室温下反应6小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，向反应瓶中加入乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液洗三次，用饱和氯化钠溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物20的粗产品409mg，直接用于下一步反应。
步骤2 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-d4-氧代丁酸叔丁酯(化合物21)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入化合物20(409mg，1.992mmol)，加入甲苯20mL溶解。然后加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(0.84g，3.97mmoL)。80℃反应3.5小时，TLC检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到78mg化合物21，收率33.1％，LC-MS(APCI):m/z＝465(M+1)+。
步骤3 4-((2S,4R)-1-(1,1’-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-d4-氧代丁酸(化合物S-3)的合成。
向反应瓶中加入化合物21(78mg，0.165mmol)，加入二氯甲烷8mL溶解，然后向反应瓶中加入三氟乙酸(78mg，0.66mmol)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到55mg化合物S-3，收率80.8％，LC-MS(APCI):m/z＝416(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.61-7.55(m,2H),7.52(d,J＝8.1Hz,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.3Hz,1H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),5.97(d,J＝8.7Hz,1H),4.24(m,J＝8.9,5.7Hz,1H),4.12(q,J＝7.1Hz,2H),2.88-2.76(m,2H),2.62-2.47(m,1H),1.94(m,J＝13.8,11.2,6.4Hz,1H),1.52(m,J＝14.2,9.9,4.2Hz,1H),1.30-1.19(m,3H),1.16(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例4制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-4)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000151
步骤1L-d2-酪氨酸(化合物22)的合成。
向微波反应瓶中加入化合物1(1g，15mmol)，氢氧化钠(104mg，2.6mmol)，加入重水15mL。微波加热至180℃反应1小时，冷却至室温，有固体析出，过滤后用水洗涤滤饼3次，滤饼在低于50℃真空干燥箱烘干得到0.66g化合物22，收率66％，LC-MS(APCI):m/z＝182(M-1)-；1H NMR(300MHz,DMSO)δ9.48(d,J＝9.4Hz,1H),7.08-6.92(m,2H),3.65(s,3H),3.02(qd,J＝14.1,5.3Hz,2H)。
步骤2L-d2-酪氨酸甲酯(化合物23)的合成。
向反应瓶中加入22(2g，10mmol)，加入甲醇(40mL)溶解，冷却至0℃，在0℃下向反应中滴加氯化亚砜(2.7g，20mmol)，滴加完成后自然升至室温搅拌18小时，浓缩反应液，除去过量的氯化亚砜得到2.45g化合物23，直接用于下一步反应。
步骤3L-d2-Boc-酪氨酸甲酯(化合物24)的合成。
向反应瓶中加入23的粗品(2.45g，8.24mmol)，加入二氯甲烷60ml溶解，加入三乙胺(3.35g，33.1mmol)，升温至30℃，加入Boc酸酐(3.07g，14.08mmol)，搅拌3反应小时，TLC检测原料完全反应，浓缩反应液，柱层析纯化得到2.8g化合物24，黄色固体，收率87.5％，LC-MS(APCI):m/z＝298(M+1)+。
步骤4(R)-3-三氟甲磺酸-d2-苯基-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸甲酯(化合物25)的合成。
在反应瓶中加入化合物24(2.9g，9.35mmol)，加入50mL二氯甲烷溶解，室温下加入吡啶(2g，25mmol)。冷却至-15℃，加入三氟甲磺酸酐(3.4g，12.05mmol)。反应液在该温度下搅拌30分钟。LC-MS检测原料反应完全，反应中加入水100mL稀释，用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化得到4g化合物25，收率95.4％，LC-MS(APCI):m/z＝430.3(M+1)+。
步骤5(R)-3-d2-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸甲酯(化合物26)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入四三苯基膦钯(322mg，0.279mmol)，化合物25(4g，9.32mmol)，苯硼酸(2.27g，18.63mmol)和碳酸钾(1.93g，13.97mmol)，加入甲苯80mL，反应升温至80℃反应3小时，LC-MS检测化合物25完全反应，浓缩反应液，柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得到2.5g化合物26，收率75.1％，LC-MS(APCI):m/z＝358(M+1)+。
步骤6(R)-3-d2-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸(化合物27)的合成。
向反应瓶中加入化合物26(2.5g，6.99mmol)，用30mL的四氢呋喃溶解，然后再加入28mL 1M的氢氧化钠溶液，室温下搅拌反应4小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，向反应瓶中加入30mL的水和30mL的乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液调节pH至酸性，用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到2.23g化合物27，黄色油状物，收率92.9％，LC-MS(APCI):m/z＝342(M-1)-。
步骤7(R)-3-d2-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基-甲氧基甲基胺基丙酸(化合物28)的合成。
向反应瓶中加入化合物27(2.23g，6.50mmol),甲氧基甲基胺(637mg，12.32mmol)，碳化二亚胺(EDCI，2.48g，13.14mmol)，三乙胺(0.773g，7.78mmol)，HOBT(1.313g，9.7mmol)，加入二氯甲烷40mL，室温下搅拌18反应小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到2.04g化合物28，收率78.1％，LC-MS(APCI):m/z＝403(M+1)+。
步骤8(R-3-d2-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙醛(化合物29)的合成。
氮气保护下，向反应瓶中加入氢化铝锂(290mg，7.6mmol)，加入四氢呋喃50mL。冷却至0℃后加入化合物28(2.04g，5.07mmol)，在0℃下搅拌1小时，用硫酸氢钾淬灭，加入1M的盐酸溶液20mL，乙酸乙酯萃取3次后，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到1.838g化合物29，收率～100％，LC-MS(APCI):m/z＝328(M+1)+。
步骤9(R)-3-d2-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2烯-2-甲基-戊酸乙酯(化合物30)的合成。
向反应瓶中加入化合物29(1.83g，5.5mmol)，用40mL的二氯甲烷溶解，向反应瓶中加入乙氧甲酰基亚乙基三苯基膦(4.46g，12.3mmol)，室温搅拌17小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化后得到1.71g化合物30，收率74.3％，LC-MS(APCI):m/z＝412.5(M+1)+。
步骤10(R)-3-d2-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2-甲基-戊酸乙酯(化合物31)的合成。
向反应瓶中加入化合物30(0.7g，1.70mmol)，用10mL甲醇溶解，向反应瓶中加入钯碳100mg，在氢气(50psi)下反应3小时，TLC检测原料反应完全，使用硅藻土过滤，用40mL甲醇洗涤滤饼，浓缩有机相得到0.77g化合物31，收率100％LC-MS(APCI):m/z＝414(M+1)+。
步骤11(R)-3-d2-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-戊酸乙酯(化合物32)的合成。
向反应瓶中加入化合物31(790mg，1.92mmol)，加入10mL乙酸乙酯溶解，然后向反应液中加入4M的盐酸二氧六环4mL，室温反应4小时。LCMS检测原料反应完全，浓缩反应液得到化合物32粗品0.714g，直接用于下一部反应。LC-MS(APCI):m/z＝314(M+1)+。
步骤12 4-(4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物33)的合成
向反应瓶中加入化合物32(700mg，2.23mmol)，丁二酸酐(3.35mg，3.35mmol)，加入15mL的二氯甲烷和15mL的吡啶溶解，室温下反应6小时。LC-MS检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，向反应瓶中加入乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液洗三次，饱和氯化钠溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到0.982g化合物33，直接用于下一步反应，不进行进一步纯化。
步骤13 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物34)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入化合物33(982mg，9.51mmol)，加入甲苯20mL溶解。加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(2.01mg，9.51mmoL)。升温至80℃反应1小时，TLC检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析得到284mg化合物34，收率34.5％，LC-MS(APCI):m/z＝470(M+1)+。
步骤14 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-4)的合成。
向反应瓶中加入化合物34(284mg，0.6mmol)，加入二氯甲烷4mL溶解，然后向反应瓶中加入三氟乙酸(4mL)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到157mg化合物S-4，收率62.8％，LC-MS(APCI):m/z＝414(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.62-7.55(m,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.34(m,J＝8.4,6.2Hz,1H),7.23(d,J＝7.0Hz,2H),5.79(d,J＝12.6Hz,1H),4.10(m,J＝16.9,9.7Hz,2H),2.85(d,J＝1.7Hz,2H),2.68-2.59(m,2H),2.55(m,J＝14.2,8.2,5.0Hz,1H),2.47-2.35(m,2H),1.93(dd,J＝14.2,9.5Hz,1H),1.60-1.48(m,1H),1.29-1.20(m,3H),1.16(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例5制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-5)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000181
步骤1 d5-溴苯(化合物36)的合成。
向反应瓶中加入浓硫酸(11.89g，6.5mL)，加入水24mL稀释，降温至0℃，滴加氘代苯(3g，0.035mol)，滴加完后，0℃分两次加入溴酸钠(5.92g，0.039mol)，室温反应18小时，加入冰水50mL，用正己烷萃取三次，合并有机相，分别用饱和碳酸氢钠，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，低于30℃浓缩得到2.38g化合物36，收率41.8％。
步骤2 d5-苯硼酸(化合物37)的合成。
在干燥的反应瓶中加入化合物36(2.379g，14.68mmol)、联硼酸频那醇酯(5.5g，21mmol)、Pd(dppf)Cl2(1.04g，4.4mmol)和乙酸钾(4.2g，43.5mmol)，氮气保护下加入100mL无水二氧六环，加热至88℃搅拌反应6小时，TLC检测原料反应完全，加入乙酸乙酯100mL稀释，浓缩得油状液体，柱层析纯化得到1.5g化合物37，收率81.5％。
步骤3 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸甲酯(化合物38)的合成。
氮气保护下向反应瓶中加入四三苯基膦钯(212mg，0.16mmol)，化合物3(2.63g，6.13mmol)，d5-苯硼酸(1.48g，12.27mmol)和碳酸钾(12.71g，8.8mmol)，加入甲苯60mL，升温至80℃搅拌反应5小时，TLC检测化合物3反应完全，浓缩反应液，柱层析纯得到1.82g化合物38，收率81.9％，LC-MS(APCI):m/z＝361(M+1)+。
步骤4 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙酸(化合物39)的合成。
向反应瓶中加入化合物38(1.82g，5.05mmol)，加入30mL的四氢呋喃溶解，然后再加入15mL1M的氢氧化钠溶液，反应液在室温下搅拌反应2小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，向反应瓶中加入20mL的水和20mL的乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液调节pH至～2，用乙酸乙酯(50mLx 3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到1.75g黄色油状物化合物39，收率100％，LC-MS(APCI):m/z＝365(M-1)-。
步骤5 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基-甲氧基甲基胺基丙酸(化合物40)的合成
向反应瓶中加入化合物39(1.75g，5.05mmol)，甲氧基甲基胺(0.59g，9.59mmol)，EDCI(1.93g，10.09mmol)，三乙胺(0.6g，6.05mmol)，HOBT(1.02g，7.57mmol)，加入二氯甲烷40mL，在室温下搅拌反应16小时。LC-MS检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到1.25g化合物40，收率60.9％，LC-MS(APCI):m/z＝406(M+1)+。
步骤6 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-叔丁氧羰基-氨基丙醛(化合物41)的合成。
氮气保护下，向反应瓶中加入氢化铝锂(180mg，4.63mmol)，加入四氢呋喃50mL。冷却至0℃，加入化合物40(1.25g，3.08mmol)，在0℃下搅拌1小时，硫酸氢钾溶液淬灭，加入1M的盐酸溶液10mL，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，用无水硫酸钠干燥后得到0.962g化合物41，收率约为94.3％，LC-MS(APCI):m/z＝331(M+1)+。
步骤7 (R)-3-d5-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2希-2-甲基-戊酸乙酯(化合物42)的合成。
向反应瓶中加入化合物41(0.962g，2.91mmol)，用30mL的二氯甲烷溶解，然后向反应瓶中加入乙氧甲酰基亚乙基三苯基膦(2.11g，5.84mmol)，室温搅拌反应18小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到0.928g化合物42，收率76.7％，LC-MS(APCI):m/z＝415(M+1)+。
步骤8 (R)-3-d5-联苯-4-基-叔丁氧羰基-氨基-2-甲基-戊酸乙酯(化合物43)的合成。
向反应瓶中加入化合物42(0.7g，1.69mmol)，用15mL甲醇溶解，然后向反应瓶中加入钯碳100mg，在氢气(50psi)下反应3小时，TLC检测原料反应完全，用硅藻土过滤，用40mL甲醇洗涤滤饼，浓缩有机相得到0.69g化合物43，收率98.1％，LC-MS(APCI):m/z＝417(M+1)+。
步骤9 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-戊酸乙酯(化合物44)的合成。
向反应瓶中加入化合物43(0.96mg，2.30mmol)，加入乙酸乙酯50mL溶解，向反应液中加入盐酸二氧六环4M 2mL，室温下反应3小时，TLC检测原料完全反应，浓缩除去溶剂得到562mg化合物44，直接用于下一步，不进行进一步纯化。
步骤10 4-(4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物45)的合成
向反应瓶中加入化合物44(562mg，1.77mmol)，丁二酸酐(243mg，2.43mmol)，加入8mL的二氯甲烷和8mL的吡啶溶解，然后在室温下反应24小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，向反应瓶中加入乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液洗三次，用饱和氯化钠溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到0.829mg化合物45的粗产品，直接用于下一步反应。
步骤11 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物46)的合成
氮气保护下向反应瓶中加入化合物45(829mg，1.992mmol)，用甲苯20mL溶解。加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(1.7g，8.03mmol)。80℃反应3小时，TLC检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化后得到264mg化合物46，收率37.5％，LC-MS(APCI):m/z＝473.6(M+1)+。
步骤12 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(S-5)的合成
向反应瓶中加入化合物46(264mg，0.558mmol)，用二氯甲烷8mL溶解，向反应瓶中加入三氟乙酸(256mg，2.25mmol)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到178mg化合物S-5，收率76.7％，LC-MS(APCI):m/z＝417(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.54(d,J＝8.2Hz,2H),7.24(d,J＝8.2Hz,2H),5.77(d,J＝8.7Hz,1H),4.26(d,J＝8.8Hz,1H),4.13(qd,J＝7.2,3.0Hz,2H),2.86(d,J＝6.6Hz,2H),2.71-2.59(m,2H),2.60-2.50(m,1H),2.49-2.38(m,2H),1.99-1.88(m,1H),1.56(m,J＝14.2,10.0,4.3Hz,1H),1.33-1.24(m,3H),1.17(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例6制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-6)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000211
步骤1 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-戊酸(化合物47)的合成。
向反应瓶中加入化合物43(300mg，0.745mmol)，加入10mL甲醇溶解，然后向反应液中加入氢氧化钾(125mg，2.24mmol)室温下反应6小时。TLC检测原料完全反应，1M盐酸调节pH至酸性，用乙酸乙酯(60mLx 3)萃取，合并有机相用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到214mg化合物47，收率46.7％，LC-MS(APCI):m/z＝373(M-1)-。
步骤2 (R)-3-d5-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-d5-戊酸乙酯(化合物48)的合成。
向反应瓶中加入化合物47(214mg，0.571mmol)，加入1.5mL氘代乙醇溶解，向反应液中加入4M的盐酸二氧六环1.5mL，升温至60℃反应3小时，TLC检测原料反应完全，向反应液中加入6mL水，用碳酸钠水溶液调节pH至碱性，用乙酸乙酯(30mLx 4)萃取，柱层析纯化后得到186mg化合物48，收率100％，LC-MS(APCI):m/z＝322(M+1)+。
步骤3 4-(4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物49)的合成。
向反应瓶中加入化合物48(186mg，0.578mmol)，丁二酸酐(88mg，0.867mmol)，加入5mL的二氯甲烷和5mL的吡啶溶解，在室温下反应24小时。LC-MS检测原料反应完全，浓缩反应液除去吡啶和二氯甲烷，向反应瓶中加入乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液洗三次，用饱和氯化钠溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥后浓缩得到化合物49的粗产品290mg，直接用于下一步反应。
步骤4 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物50)的合成
氮气保护下向反应瓶中加入化合物49(290mg，0.684mmol)，用甲苯5mL溶解。然后加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(580mg，2.82mmol)。80℃反应3小时，LC-MS检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化后得到109mg化合物50，收率50.6％，LC-MS(APCI):m/z＝480(M+1)+。
步骤5 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d5-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-6)的合成
向反应瓶中加入化合物50(109mg，0.227mmol)，用二氯甲烷2mL溶解，然后向反应瓶中加入三氟乙酸(105mg，0.91mmol)，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化后得到89mg化合物S-6，收率93.6％，LC-MS(APCI):m/z＝422(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.62-7.43(m,2H),7.34-7.13(m,2H),5.92(d,J＝8.7Hz,1H),4.22(m,J＝30.2,15.1Hz,1H),2.92-2.76(m,2H),2.62(dd,J＝13.1,6.6Hz,2H),2.54(m,J＝14.3,8.3,5.0Hz,1H),2.42(t,J＝6.4Hz,2H),1.93(m,J＝13.8,9.5,4.1Hz,1H),1.53(m,J＝14.1,9.9,4.2Hz,1H),1.16(d,J＝7.1Hz,3H)。
实施例7制备4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-7)，具体合成步骤如下：
Figure GDA0002522599310000231
步骤1 (R)-3-d2-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-戊酸(化合物51)的合成。
向反应瓶中加入化合物31(500mg，1.25mmol)，用20mL甲醇溶解，然后向反应液中加入氢氧化钾(210mg，3.75mmol)室温下反应5小时。TLC检测原料完全反应，用1M盐酸调节pH至酸性，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到246mg化合物51，收率53.0％，LC-MS(APCI):m/z＝370(M-1)-。
步骤2 (R)-3-d2-联苯-4-基-2-氨基-2-甲基-d5-戊酸乙酯(化合物52)的合成。
向反应瓶中加入化合物51(246mg，0.662mmol)，用1.5mL氘代乙醇溶解，然后向反应液中加入4M的盐酸二氧六环1.25mL，升温至60℃反应3小时，TLC检测原料反应完全，向反应液中加入6mL水，用碳酸钠水溶液调节pH至碱性，用乙酸乙酯(30mLx 4)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得到221mg化合物52，收率100％，LC-MS(APCI):m/z＝319(M+1)+。
步骤3 4-(4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物53)的合成。
向反应瓶中加入化合物52(211mg，0.662mmol)和丁二酸酐(86mg，0.86mmol)，用5mL的二氯甲烷和5mL的吡啶溶解，在室温下搅拌反应24小时。TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，除去溶剂，向反应瓶中加入乙酸乙酯，用1M的盐酸溶液洗三次，用饱和氯化钠溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到化合物53的粗产品276mg，直接用于下一步反应。
步骤4 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物54)的合成
氮气保护下向反应瓶中加入化合物53(276mg，0.657mmol)，用甲苯5mL溶解。然后加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(552mg，2.7mmoL)。80℃下反应2小时，TLC检测原料反应完全，冷却至室温，加入1M盐酸，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化得到111mg化合物54，收率48.3％，LC-MS(APCI):m/z＝475(M+1)+
步骤5 4-((2S,4R)-1-(1,1’-d2-联苯-4-基)-5-d5-乙氧基-4-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物S-7)的合成
向反应瓶中加入化合物54(111mg，0.232mmol)，用二氯甲烷2mL溶解，然后向反应瓶中加入三氟乙酸2mL，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化得到72mg化合物S-7，收率75％，LC-MS(APCI):m/z＝419(M+1)+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.61-7.55(m,2H),7.43(t,J＝7.5Hz,2H),7.33(t,J＝7.3Hz,1H),7.28-7.21(m,2H),5.88(d,J＝12.6Hz,1H),2.89-2.74(m,2H),2.62(m,J＝12.9,6.2Hz,2H),2.54(m,J＝14.2,8.2,4.9Hz,1H),2.42(t,J＝6.4Hz,2H),1.97-1.82(m,1H),1.62-1.46(m,1H),1.17(t,J＝6.8Hz,3H)。
生物活性测试。
代谢稳定性评价。
微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma Life Science；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。
储备液的配制：精密称取一定量的实施例化合物粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。
磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的0.5M磷酸二氢钾150mL和700mL的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁，pH为7.4。
配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。
配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。
样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2μL 0.25mM的的工作液中，混匀。
代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μL NADPH再生系统溶液，作为0min样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。
数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t1/2和CLint，其中V/M即等于1/蛋白浓度。
Figure GDA0002522599310000251
表1实施例化合物的肝微粒代谢评价
Figure GDA0002522599310000252
如上表所示，与沙库比曲相比，本发明化合物在人肝微粒体实验和大鼠肝微粒体实验中都表现出优异的代谢稳定性。
大鼠药代动力学实验
实验目的：研究大鼠给予Sacubitril(沙库比曲)、实施例化合物后，考察本发明化合物的药代动力学行为。
实验动物：
种类及品系：SD大鼠等级：SPF级
性别及数量：雄性，6只
体重范围：180～220g(实际体重范围为187～197g)
来源：上海西普尔必凯实验动物有限公司
实验过程：
在血样采集之前，预先在EDTA-K2抗凝管中加入20μL的2M氟化钠溶液(酯酶抑制剂)，于80度烘箱内烘干后，置于4度冰箱存放。
大鼠，雄性，体重187～197g，随机分为2组，于实验前一天下午开始禁食过夜但可自由饮水，给药后4h给食物。A组给予Sacubitril 3mg/kg，B组给予实施例化合物3mg/kg，分别于给药后15min、30min、1、2、3、5、8、10h从大鼠眼眶静脉取血100-200μL左右，置于经EDTA-K2抗凝的0.5mL的Eppendorf管中，立即混匀，抗凝后，尽快将试管轻轻颠倒混匀5-6次后,血取好后放置在冰盒中，30min内把血样本在4000rpm，10min，4℃条件下离心分离血浆，收集全部血浆后立即于-20℃保存。所有时间点样品采集后测定每个时间点的血浆中的血药浓度。
根据上述所得的给药后平均血药浓度-时间数据，采用Winnonin软件，按非房室统计矩理论求算雄性SD大鼠分别i.g给予Sacubitril(3mg/kg)、实施例化合物(3mg/kg)后的药代动力学相关参数。
实验表明，与Sacubitril相比，本发明化合物具有比Sacubitril更优的活性，并且具有优异的药代动力学性质，因此更适合作为抑制脑啡肽酶的化合物，进而适合制备治疗心脏衰竭的药物。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.化合物，其中，所述化合物选自下述化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002653152870000011
2.一种药物组合物，其含有药学上可接受的载体和权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其还包含其他活性化合物。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述活性化合物可选自：HMG-Co-A还原酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、钙通道阻滞剂、内皮素拮抗剂、肾素抑制剂、利尿剂、ApoA-I拟似物、抗糖尿病药、减肥药、醛固酮受体阻滞剂、内皮素受体阻滞剂、醛固酮合酶抑制剂、CETP抑制剂和5型磷酸二酯酶抑制剂中的一种或多种。
5.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求2～4中任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防与脑啡肽酶介导的疾病的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述疾病选自心脏衰竭、高血压或肺高血压。
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