CN108342469A - 一种皮肤基因检测的基因芯片 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种皮肤基因检测的基因芯片及其试剂盒，所述基因芯片包括抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片。所述试剂盒包括所述基因芯片，能够快速对个体抗太阳斑能力、抗雀斑能力及抗晒黑能力进行检测，在太阳斑、雀斑发生前获得个体抵抗长斑能力的遗传信息，同时也帮助个体了解自身皮肤颜色变化的遗传信息，指导个体采取相关的预防措施，为个性化医疗美容提供有力支撑。本发明采用基因芯片进行检测，检测基因位点众多，结合调查问卷和实际观察，检测效果灵敏度好，准确率高，实用性强，而且采样方便，方便美容行业推广使用。

Description

一种皮肤基因检测的基因芯片
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及皮肤基因SNP检测载体芯片以及相关的检测试剂盒。
背景技术
基因检测是指通过血液、口腔黏膜细胞或其他组织细胞对基因组DNA进行检测的技术。提取细胞中的DNA并扩增相关基因后，通过特定设备对细胞中的基因信息进行检测，分析它所含有的基因型信息，使人们从基因层面了解自身与他人的不同，从而利用针对性的手段来预防或改善相关基因可能会造成的影响。
每个人的体细胞核内都包含由DNA和核糖体蛋白组成的23对染色体，这些染色体上共约有30亿个碱基对，基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性就称为SNP，人类基因组上的SNP总量大约为3×106个，占已知多态性的90%以上。SNP自身的特性决定了它更适合于对复杂性状与疾病的遗传解读以及基于群体的基因识别等方面的研究。因此，通过基因检测，可以明确个体的SNP分型，解读这些SNP位点，就可以判断该个体的遗传和健康状况。
太阳光会使皮肤黑色素细胞活跃，分泌大量黑色素，组成人体皮肤的第一道防线。当紫外线较强时，如果没有做好防晒，黑色素细胞会分泌大量黑色素颗粒来吸收紫外线，保护深层皮肤不受射线损伤。与此同时，这些黑色素颗粒的沉积会使面部出现斑点，并逐渐加深、变大，最终形成太阳斑。
雀斑是发生于面部皮肤上的黄褐色点状色素沉着斑，大多需要特定因素诱发，如紫外线过度照射等。遗传因子起作用时会让黄褐色的色素开始沉淀在皮肤表面，然后在时间的作用下慢慢形成一个小小的斑点，从而形成雀斑。
热辐射或太阳光照射皮肤时，会激发并活化基底层内的黑色素细胞，其含有的色素颗粒，会在内质网中合成黑色素体，并催化酪氨酸进行系列反应，生成黑色素蛋白；同时酪氨酸酶失去活性，担任运输工作，将其转移至角质细胞，转移的黑色素蛋白越多，肤色越深。
不论是太阳斑、雀斑等面部斑点的发生还是皮肤颜色的变化，与人体内的遗传基因均密切相关。利用现有技术，如皮肤检测仪，太阳斑和雀斑等面部斑点在发生前均不能被检出，但提前知晓自身抗太阳斑、抗雀斑及抗晒黑能力强弱，利于人们预防、治疗面部长斑和改善皮肤肤色。因此，提供一种提前检测皮肤抗太阳斑、抗雀斑、抗晒黑等基因的检测试剂盒显得十分必要。
专利201710964440.2公开了一种基因检测试剂盒，包括雀斑基因芯片、痤疮基因芯片、肤色基因芯片，该专利虽然检测了雀斑及痤疮相关基因，达到了便于个性化定制预防医疗方案的效果，但是其检测位点少，准确率低。
因此，本发明提供了一种检测抗太阳斑基因、抗雀斑基因及抗晒黑基因的基因芯片，检测位点多，准确率高，实用性强。
发明内容
本发明设计了一种能够检测抗太阳斑基因、抗雀斑基因及抗晒黑基因的基因芯片及其试剂盒，所述含有本发明所述基因芯片的试剂盒可以在皮肤出现太阳斑、雀斑或晒黑之前检测出抗太阳斑、抗雀斑或抗晒黑的能力，检测位点多，准确率高，实用性强。
本发明的实施需要依靠以下技术与要求：
一种皮肤基因检测的基因芯片，包括抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片；
所述抗太阳斑基因芯片包括检测抗太阳斑基因的三个单核苷酸多态性（SingleNucleotide Polymorphisms，SNP）的探针组A，所述探针组A包含探针1-6，所述探针组A中探针的序列如SEQ ID NO：1-6所示；
所述抗雀斑基因芯片包括检测抗雀斑基因的五个SNP的探针组B，所述探针组B包含探针1-10，所述探针组B中探针的序列如SEQ ID NO：1-10所示；
所述抗晒黑基因芯片包括检测抗晒黑基因的六个SNP的探针组C，所述探针组C包含探针1-2和探针9-18，所述探针组C中探针的序列如SEQ ID NO：1-2和SEQ ID NO：9-18所示。
优选的，所述的抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均包含有固相载体。
进一步优选的，所述的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、玻璃片、硅片或聚丙烯膜中的一种或两种以上的组合。
在本发明的具体实施例中，所述的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯中的一种或两种以上的组合。
所述抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均含有探针，将探针固定在固相载体上。
基因芯片又称DNA芯片、DNA微阵列，是通过运用微缩技术，将核酸序列密集有序地排列固定在固相载体预先设置的区域内，形成的微型检测器件。采用上述技术与要求，通过探针与样本分子杂交，根据杂交信号的强度获取样本的序列信息。
本发明所述的抗太阳斑基因芯片包含探针组A，探针组A包含探针1-6，探针序列如SEQ ID NO：1-6所示，能够用于检测人IRF4基因的c.492+386C>T位点、MC1R基因的c.880G>C位点和MC1R基因的c.488G>A位点。在受检者中，拥有IRF4基因c.492+386C>T位点CC基因型、MC1R基因c.880G>C位点GG基因型或MC1R基因c.488G>A位点AA基因型的受检者具有较强的抗太阳斑能力，这些受检者经过实际观察与调查问卷发现确实没有太阳斑；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点CT基因型、MC1R基因c.880G>C位点GC基因型或MC1R基因c.488G>A位点GA基因型的受检者具有一般的抗太阳斑能力，实际观察这类受检者发现，其中有部分人长了太阳斑，经过调查问卷得知，长太阳斑的这些受检者基本都是不注重肌肤护理、不采取防晒措施的人；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点TT基因型、MC1R基因c.880G>C位点CC基因型或MC1R基因c.488G>A位点GG基因型的个体具有较弱的抗太阳斑能力，实际调查得知，这类受检者即便做了相应的防晒措施，也大多都长了太阳斑。
本发明所述的抗雀斑基因芯片包含探针组B，探针组B包含探针1-10，探针序列如SEQ ID NO：1-10所示，能够用于检测人IRF4基因的c.492+386C>T位点、BNC2基因的c.3+6123G>A位点、MC1R基因的c.880G>C位点、MC1R基因的c.488G>A位点和TYR基因的c.575C>A位点。其中IRF4基因的c.492+386C>T位点、MC1R基因的c.880G>C位点和MC1R基因的c.488G>A位点不仅与抗太阳斑能力相关，还和抗雀斑能力相关。在受检者中，拥有IRF4基因c.492+386C>T位点CC基因型、BNC2基因c.3+6123G>A位点GG基因型、MC1R基因c.880G>C位点GG基因型、MC1R基因c.488G>A位点AA基因型或TYR基因c.575C>A位点AA基因型的受检者具有较强的抗雀斑能力，这些受检者经过实际观察与调查问卷发现确实没有雀斑；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点CT基因型、BNC2基因c.3+6123G>A位点GA基因型、MC1R基因c.880G>C位点GC基因型、MC1R基因c.488G>A位点GA基因型或TYR基因c.575C>A位点CA基因型的受检者具有一般的抗雀斑能力，实际观察这类受检者发现，其中有部分人长了雀斑，经过调查问卷得知，长雀斑的这些受检者基本都是不注重肌肤护理的人；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点TT基因型、BNC2基因c.3+6123G>A位点AA基因型、MC1R基因c.880G>C位点CC基因型、MC1R基因c.488G>A位点GG基因型或TYR基因c.575C>A位点CC基因型的受检者具有较弱的抗雀斑能力，实际调查得知，这类受检者即便做了相应的防晒措施，也大多都长了雀斑。
本发明所述的抗晒黑基因芯片包含探针组C，探针组C包含探针1-2和探针9-18，探针序列如SEQ ID NO：1-2和SEQ ID NO：9-18所示，能够用于检测人IRF4基因的c.492+386C>T位点、OCA2基因的c.1772A>G位点、SLC24A5基因的c.331A>G位点、HERC2基因的c.13158+874T>C位点、TYR基因的c.575C>A位点或SLC45A2基因的c.1122C>G位点。其中，TYR基因的c.575C>A位点不仅与抗雀斑能力相关，还和抗晒黑能力相关；而IRF4基因的c.492+386C>T位点则与抗太阳斑能力、抗雀斑能力和抗晒黑能力都相关。在受检者中，拥有IRF4基因c.492+386C>T位点TT基因型、OCA2基因c.1772A>G位点GG基因型、SLC24A5基因c.331A>G位点AA基因型、HERC2基因c.13158+874T>C位点CC基因型、TYR基因的c.575C>A位点AA基因型或SLC45A2基因的c.1122C>G位点CC基因型的受检者具有较强的抗晒黑能力，这些受检者经过实际观察与调查问卷发现确实肤色较白；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点TC基因型、OCA2基因c.1772A>G位点GA基因型、SLC24A5基因c.331A>G位点AG基因型、HERC2基因c.13158+874T>C位点CT基因型、TYR基因的c.575C>A位点CA基因型或SLC45A2基因的c.1122C>G位点GC基因型的受检者具有一般的抗晒黑能力，实际观察这类受检者发现，大部分受检者肤色较白，其中也有部分人肤色较深，经过调查问卷得知，肤色较黑的这些受检者基本都是不注重防晒工作的人；拥有IRF4基因c.492+386C>T位点CC基因型、OCA2基因c.1772A>G位点AA基因型、SLC24A5基因c.331A>G位点GG基因型、HERC2基因c.13158+874T>C位点TT基因型、TYR基因的c.575C>A位点CC基因型或SLC45A2基因的c.1122C>G位点GG基因型的受检者具有较弱的抗晒黑能力，实际调查得知，这类受检者即便做了相应的防晒措施，也大多都肤色较深。
本发明还提供了一种包含上述基因芯片的皮肤基因检测的试剂盒，所述试剂盒包含抗太阳斑基因芯片、多重PCR引物组1、抗雀斑基因芯片、多重PCR引物组2及抗晒黑基因芯片、多重PCR引物组3。
优选的，所述试剂盒包含检测抗太阳斑基因的探针组A和多重PCR引物组1，探针组A包含探针1-6，探针序列如SEQ ID NO：1-6所示，多重PCR引物组1包含引物19-24，引物序列如SEQ ID NO：19-24所示；抗雀斑基因的探针组B和多重PCR引物组2，探针组B包含探针1-10，探针序列如SEQ ID NO：1-10所示，多重PCR引物组2包含引物19-28，引物序列如SEQ IDNO：19-28所示；抗晒黑基因的探针组C和多重PCR引物组3，探针组C包含探针1-2和探针9-18，探针序列如SEQ ID NO：1-12和SEQ ID NO：9-18所示，多重PCR引物组3包含引物19-20和引物27-36，引物序列如SEQ ID NO：19-20和SEQ ID NO：27-36所示。
优选的，所述抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均包含有固相载体。进一步优选的，所述固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、玻璃片、硅片或聚丙烯膜中的一种或两种以上的组合。
在本发明的一个具体实施方式中，所述固相载体为硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯。
优选的，所述试剂盒还包括杂交液、洗涤液。
所述的杂交液选自质量浓度百分比为50％的甲酰胺和质量浓度百分比为0.2％的SDS（十二烷基硫酸钠），或6×SSPE （ saline sodium phosphate EDTA）和25%甲酰胺，pH6.6-6.9。
在本发明的一个具体实施方式中，所述杂交液包含质量浓度百分比为50％的甲酰胺和质量浓度百分比为0.2％的SDS（十二烷基硫酸钠）。所述洗涤液为无水乙醇。
通过采用上述技术方案，所述抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均含有探针，将探针固定在固相载体上。
本发明所述的基因芯片可以通过原位合成法、点样法或其他可以将探针固定在固相载体上的方法。
其中，(1)原位合成法是基于组合化学的合成原理，通过一组定位模板来决定基片表面上不同化学单体的偶联位点和次序，把腺嘌呤 (A)、鸟嘌呤 (G)、胞嘧啶 (C)、胸腺嘧啶 (T) 四种不同碱基的核苷酸按不同次序化学偶联在相应的位点，原位合成序列不同的寡核苷酸探针，形成 DNA芯片；
(2) 点样法制备基因芯片首先按常规方法制备cDNA(或寡核苷酸) 探针库，然后通过特殊的微喷头，分别把不同的探针溶液按照预先排定的顺序逐点点在片基表面，并通过物理和化学作用使探针固定于基片表面，探针片段除了可使用寡聚核苷酸探针，也可使用较长的基因片段以及核酸类似物探针。
上述的基因芯片的制备方法为公知技术，本领域的技术人员可依据现有的技术制备得到检测太阳斑、雀斑或抗晒黑的基因芯片。
本发明所述的试剂盒的使用步骤如下：
1）用引物组通过PCR体系扩增出产物；
2）为产物加荧光标记，纯化产物；
3）与杂交液杂交，变性、冰浴；
4）将步骤3）获得的物质上样于基因芯片；
5）用洗涤液清洗杂交后的基因芯片，扫描，检测。
优选的，所述PCR体系如下：
如以下内容配置反应体系（这里是针对某一个基因芯片来的，如抗太阳斑基因芯片，下述的Primer Mix就是引物组1）：
反应体系 体积/μL
2x PCR Solution Premix PrimeSTAR®HS 12.5
Template(50-100ng/μL) 1
Primer Mix（10μM） 1.2-2.4
Cy3-dCTP或Cy5-dCTP 2
H2O 补齐到25
反应条件：（98℃ 10 sec，55℃ 5 sec，72℃ 1 min）× 30 Cycles，4℃ 5 min。
本发明的更进一步技术为：所述皮肤基因检测试剂盒还包括用于扩增检测抗太阳斑基因IRF4和MC1R共三个SNP的多重PCR引物组1，引物组1包含引物19-24，引物序列如SEQID NO：19-24所示；用于扩增检测抗雀斑基因IRF4、BNC2、MC1R和TYR共五个SNP的多重PCR引物组2，引物组2包含引物19-28，引物序列如SEQ ID NO：19-28所示；用于扩增检测抗晒黑基因IRF4、OCA2、SLC24A5、HERC2、TYR和SLC45A2共六个SNP的多重PCR引物组3，引物组3包含引物19-20和引物27-36，引物序列如SEQ ID NO：19-20和SEQ ID NO：27-36所示。
通过采用上述技术方案，多重PCR引物组1，用于扩增检测抗太阳斑基因IRF4和MC1R；多重PCR引物组2，用于扩增检测抗雀斑基因IRF4、BNC2、MC1R和TYR；多重PCR引物组3，用于扩增检测抗晒黑基因IRF4、OCA2、SLC24A5、HERC2、TYR和SLC45A2。
综上所述，本发明具有以下优点：通过本皮肤基因检测试剂盒中的抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片，对受检者进行基因检测，得到受检者相关SNP信息，可以使受检者提前知道自己长太阳斑或雀斑的遗传风险以及自身抗晒黑能力的强弱，及时做出相应的预防措施，使机体免受相关损伤；此外，本发明采用基因芯片进行检测，检测基因位点众多，同时结合调查问卷和实际观察，检测效果灵敏度好，准确率高，实用性强，而且采样方便，方便美容行业推广使用。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一、试剂盒组分
一种皮肤基因检测试剂盒，包括抗太阳斑基因芯片、多重PCR扩增引物组1、抗雀斑基因芯片、多重PCR扩增引物组2、抗晒黑基因芯片、多重PCR扩增引物组3，杂交液和洗涤液。
1、抗太阳斑基因芯片
包括固相载体（尼龙膜）和探针组A。所述探针组A包含探针1-6，所述探针组A中探针的序列如SEQ ID NO：1-6所示。
2、抗雀斑基因芯片
包括固相载体（硝酸纤维素膜）和探针组B。所述探针组B包含探针1-10，所述探针组B中探针的序列如SEQ ID NO：1-10所示。
3、抗晒黑基因芯片
包括固相载体（聚苯乙烯）和探针组C。所述探针组C包含探针1-2和探针9-18，所述探针组C中探针的序列如SEQ ID NO：1-2和SEQ ID NO：9-18所示。
4、多重PCR扩增引物组1
用于扩增人IRF4基因和MC1R基因，引物组1包含引物19-24，引物序列如SEQ ID NO：19-24所示，包括IRF4基因正向引物19和反向引物20，序列信息如SEQ ID NO 19-20所示；MC1R基因c.880G>C位点正向引物21和反向引物22，序列信息如SEQ ID NO 21-22所示；MC1R基因c.488G>A位点正向引物23和反向引物24，序列信息如SEQ ID NO 23-24所示。
5、多重PCR扩增引物组2
用于扩增人IRF4、MC1R、BNC2和TYR基因，引物组2包含引物19-28，引物序列如SEQ IDNO：19-28所示，包括IRF4基因正向引物19和反向引物20，序列信息如SEQ ID NO 19-20所示；MC1R基因c.880G>C位点正向引物21和反向引物22，序列信息如SEQ ID NO 21-22所示；MC1R基因c.488G>A位点正向引物23和反向引物24，序列信息如SEQ ID NO 23-24所示；BNC2基因位点正向引物25和反向引物26，序列信息如SEQ ID NO 25-26所示；TYR基因位点正向引物27和反向引物28，序列信息如SEQ ID NO 27-28所示。
6、多重PCR扩增引物组3用于扩增人IRF4、TYR 、OCA2、SLC24A5、HERC2和SLC45A2基因，引物组3包含引物19-20和引物27-36，引物序列如SEQ ID NO：19-20和SEQ ID NO：27-36所示，包括IRF4基因正向引物19和反向引物20，序列信息如SEQ ID NO 19-20所示；TYR基因位点正向引物27和反向引物28，序列信息如SEQ ID NO 27-28所示；OCA2基因位点正向引物29和反向引物30，序列信息如SEQ ID NO 29-30所示；SLC24A5基因位点正向引物31和反向引物32，序列信息如SEQ ID NO 31-32所示；HERC2基因位点正向引物33和反向引物34，序列信息如SEQ ID NO 33-34所示；SLC45A2基因位点正向引物35和反向引物36，序列信息如SEQID NO 35-36所示。
7、杂交液包含质量浓度百分比为50％的甲酰胺和质量浓度百分比为0.2％的SDS（十二烷基硫酸钠）。
8、洗涤液为无水乙醇。
其中，探针及引物的核苷酸序列信息见表1。
二、制备方法
1、将探针固定在固相载体上。按常规方法制备cDNA(或寡核苷酸) 探针库，然后通过特殊的微喷头，分别把不同的探针溶液按照预先排定的顺序逐点点在片基表面，并通过物理和化学作用使探针固定于固相载体表面，探针片段除了可使用寡聚核苷酸探针，也可使用较长的基因片段以及核酸类似物探针。
2、配制洗涤液及杂交液。
实施例2
样本筛选：随机选取面部含有太阳斑、雀斑或深肤色以及正常肌肤的受检者，通过棉签拭子获取其口腔上皮细胞，提取基因组DNA，以基因组DNA为模板分别扩增IRF4基因、MC1R基因、BNC2基因、TYR基因、OCA2基因、SLC24A5基因、HERC2基因和SLC45A2基因，并进行Sanger测序。IRF4基因扩增引物为19-20，引物序列如SEQ ID NO：19-20所示，MC1R基因扩增引物为21-24，引物序列如SEQ ID NO：21-24所示，BNC2基因扩增引物为25-26，引物序列如SEQ IDNO：25-26所示，TYR基因扩增引物27-28，引物序列如SEQ ID NO：27-28所示，OCA2基因扩增引物为29-30，引物序列如SEQ ID NO：29-30所示，SLC24A5基因扩增引物为31-32，引物序列如SEQ ID NO：31-32所示，HERC2基因扩增引物为33-34，引物序列如SEQ ID NO：33-34所示，SLC45A2基因扩增引物为35-36，引物序列如SEQ ID NO：35-36所示。分别将测序得到的序列和参考基因组序列进行比对，通过Chromas软件查看测序峰图，确定SNP。最终，筛选出在IRF4基因c.492+386C>T位点基因型为CT/TT的受检者，或在MC1R基因c.880G>C位点、c.488G>A位点基因型为GC/CC、GA/GG的受检者为太阳斑基因个体。筛选在IRF4基因c.492+386C>T位点基因型为CT/TT的受检者，或在BNC2基因c.3+6123G>A位点基因型为GA/AA的受检者，或在MC1R基因c.880G>C位点、c.488G>A位点基因型为GC/CC、GA/GG的受检者，或在TYR基因c.575C>A位点基因型为CA/CC的受检者为雀斑基因个体。筛选出在IRF4基因c.492+386C>T位点基因型为CT/CC的受检者，或在OCA2基因c.1772A>G位点基因型为CT/TT的受检者，或在SLC24A5基因c.331A>G位点基因型为AG/GG的受检者，或HERC2基因c.13158+874T>C位点基因型为AG/AA的受检者，或在TYR基因c.575C>A位点基因型为CA/CC的受检者，或在SLC45A2基因c.1122C>G位点基因型为CG/GG的受检者为深肤色基因型个体。筛选出不包括以上各基因型的受检者为正常基因型个体。
1) 抗太阳斑基因检测
样本处理：提取太阳斑基因个体和正常基因型个体的口腔上皮细胞基因组DNA，以基因组DNA为模板，利用多重PCR扩增引物组1扩增IRF4和MC1R基因，多重PCR扩增后，用荧光标记。同时选取等体积无菌水作为空白对照组。
杂交：将上述多重PCR扩增得到的DNA序列经PCR产物纯化试剂盒进行纯化，加入杂交液，95℃变性处理5 min，冰上放置3 min，上样于抗太阳斑基因芯片。空白对照组经相同处理后上样于抗太阳斑基因芯片。
芯片清洗和扫描：杂交后的抗太阳斑基因芯片用洗涤液在42℃下清洗10 min。采用芯片扫描仪(GenePIX4100B)对芯片进行扫描。
芯片数据获得与处理：用扫描仪(GenePIX4100B)扫描芯片，获得杂交图谱，根据杂交信号数值强弱判断SNP位点。空白对照组无杂交信号。
实验结果判定：利用ArrayPro软件将芯片扫描后得到的原始图像信息转变为数字信息，并根据数据信息判定抗太阳斑基因的SNP位点信息。
2) 抗雀斑基因检测
样本处理：提取雀斑基因个体和正常基因型个体的口腔上皮细胞基因组DNA，以基因组DNA为模板，利用多重PCR扩增引物组2扩增IRF4、BNC2、MC1R和TYR基因，多重PCR扩增后，用荧光标记。同时选取等体积无菌水作为空白对照组。
杂交：将上述多重PCR扩增得到的DNA序列经PCR产物纯化试剂盒进行纯化，加入杂交液，95℃变性处理5 min，冰上放置3 min，上样于抗雀斑基因芯片。空白对照组经相同处理后上样于抗雀斑基因芯片。
芯片清洗和扫描：杂交后的抗雀斑基因芯片用洗涤液在42℃下清洗10 min。采用芯片扫描仪(GenePIX4100B)对芯片进行扫描。
芯片数据获得与处理：用扫描仪(GenePIX4100B)扫描芯片，获得杂交图谱，根据杂交信号数值强弱判断SNP位点。空白对照组无杂交信号。
实验结果判定：利用ArrayPro软件将芯片扫描后得到的原始图像信息转变为数字信息，并根据数据信息判定抗雀斑基因的SNP位点信息。
3) 抗晒黑基因检测
样本处理：提取深肤色基因个体和正常基因型个体的口腔上皮细胞基因组DNA，以基因组DNA为模板，利用多重PCR扩增引物组3扩增IRF4、OCA2、SLC24A5、HERC2、TYR和SLC45A2基因，多重PCR扩增后，用荧光标记。同时选取等体积无菌水作为空白对照组。
杂交：将上述多重PCR扩增得到的DNA序列经PCR产物纯化试剂盒进行纯化，加入杂交液，95℃变性处理5 min，冰上放置3 min，上样于抗晒黑基因芯片。空白对照组经相同处理后上样于抗晒黑基因芯片。
芯片清洗和扫描：杂交后的抗晒黑基因芯片用洗涤液在42℃下清洗10 min。采用芯片扫描仪(GenePIX4100B)对芯片进行扫描。
芯片数据获得与处理：用扫描仪(GenePIX4100B)扫描芯片，获得杂交图谱，根据杂交信号数值强弱判断SNP位点。空白对照组无杂交信号。
实验结果判定：利用ArrayPro软件将芯片扫描后得到的原始图像信息转变为数字信息，并根据数据信息判定抗晒黑基因的SNP位点信息。
表1 探针及引物的核苷酸序列信息
实施例3 验证实验
1) 调查问卷
在进行基因检测之前，会进行调查问卷，了解受试者的面部情况，具体调查问卷的问题主要包括年龄、性别、肌肤肤质，生活中是否有压力或吸烟、酗酒、熬夜、常接触辐射、重金属的情况，是否有斑及斑的类型，皮肤颜色，使用的护肤品，是否用防晒剂使用次数等。调查问卷的结果可以为后续检测进行检验并私人订制每个人所适合的预防措施。
通过调查问卷选择其中一名受试者（张女士）进行后续的验证实验。
2) 实际观察
a. 通过对张女士洁面后的观察，可以清晰的看到张女士整体的皮肤颜色属于偏黑色的小麦色，左右脸颊有明显的黄褐色点状色素沉着斑，斑点很小，是明显的雀斑，但无特别明显的太阳斑出现。具体情况还需依据基因检测加以证实。
b. 生活环境：张女士家小区绿化较好，小区底楼湿气不重，蚊虫较少；小区周围治安状况优秀，偷盗数量和犯罪情况几乎没有；小区周围无相应废气排放、建筑垃圾及废弃物堆积等情况；周围交通、购物便捷。上述这些情况均说明张女士的生活环境对张女士的皮肤状态以及不良情绪无太大影响。
3) 基因型检测
按照实施例2中所述的抗太阳斑基因检测、抗雀斑基因检测及抗晒黑基因检测的实验方案对张女士的基因型进行检测，检测结果如表2所示。
表2 基因型检测结果
根据表2可知，通过基因型检测表明张女士的抗太阳斑能力一般，抗雀斑及抗晒黑的能力较弱。实际观察时张女士为小麦色皮肤、脸上有雀斑没有太阳斑。基因检测结果与实际观察吻合，证明本发明所述的试剂盒基因检测结果准确率高，效果很好。然而如果张女士在长出斑点之前进行皮肤基因检测，预测出可能的情况，并提前预防，那么张女士的皮肤会让自己更加满意。
具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
序列表
<110> 广州中安基因科技有限公司
<120> 一种皮肤基因检测的基因芯片
<160> 36
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
aaaagaaggc aaattcccc 19
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aaaagaaggt aaattcccc 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gccatcatcg accccctca 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gccatcatcc accccctca 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gggcgcggcg agccgttgc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gggcgcggca agccgttgc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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atagacagag ttgagggtt 19
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttgggggatc tgaaatctg 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ttgggggata tgaaatctg 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcttacagct taggatatc 19
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcttacagcc taggatatc 19
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gttgcaggca caactttca 19
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<212> DNA
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gttgcaggcg caactttca 19
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gagcattaaa tgtcaagtt 19
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gagcattaag tgtcaagtt 19
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gttgatgcac aagccccaa 19
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<212> DNA
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gttgatgcag aagccccaa 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtcatatggc taaacctggc 20
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<212> DNA
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gtttcatcca ctttggtggg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
atgtcagcac ctccttgagc 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
tttctcgccc tcatcatctg 20
<210> 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
tctccatctt ctacgcactg 20
<210> 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
atgaagagcg tgctgaagac 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttgcttaaca ggccaaggag 20
<210> 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acaatgtgac tgacaagccc 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
tgacctcttt gtctggatgc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggtgcttcat gggcaaaatc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcagagtaaa tgagctgtgg 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
aacactgtca ggcatttggc 20
<210> 31
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aattcaggag ctgaactgcc 20
<210> 32
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgttcagccc ttggattgtc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgaggccagt ttcatttgag 20
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aaaacaaaga gaagcctcgg 20
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aaagtgagga aaacacggag 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
tctacgaaag aggagtcgag 20

Claims (10)

1.一种皮肤基因检测的基因芯片，其特征在于，包括抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片；
所述抗太阳斑基因芯片包括检测抗太阳斑基因的三个SNP的探针组A，所述探针组A包含探针1-6，所述探针组A中探针的序列如SEQ ID NO：1-6所示；
所述抗雀斑基因芯片包括检测抗雀斑基因的五个SNP的探针组B，所述探针组B包含探针1-10，所述探针组B中探针的序列如SEQ ID NO：1-10所示；
所述抗晒黑基因芯片包括检测抗晒黑基因的六个SNP的探针组C，所述探针组C包含探针1-2和探针9-18，所述探针组C中探针的序列如SEQ ID NO：1-2和SEQ ID NO：9-18所示。
2.根据权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述的抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均包含有固相载体。
3.根据权利要求2所述的基因芯片，其特征在于，所述的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、玻璃片、硅片或聚丙烯膜中的一种或两种以上的组合。
4.根据权利要求3所述的基因芯片，其特征在于，所述的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯中的一种或两种以上的组合。
5.一种皮肤基因检测的试剂盒，其特征在于，包括抗太阳斑基因芯片、多重PCR引物组1、抗雀斑基因芯片、多重PCR引物组2和抗晒黑基因芯片、多重PCR引物组3。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，包括检测抗太阳斑基因共三个SNP的探针组A和多重PCR引物组1，所述探针组A包含探针1-6，所述探针组A中探针的序列如SEQ IDNO：1-6所示，所述多重PCR引物组1包含引物19-24，所述多重PCR引物组1中引物的序列如SEQ ID NO：19-24所示；
检测抗雀斑基因共五个SNP的探针组B和多重PCR引物组2，所述探针组B包含探针1-10，所述探针组B中探针的序列如SEQ ID NO：1-10所示，所述多重PCR引物组2包含引物19-28，所述多重PCR引物组2中引物的序列如SEQ ID NO：19-28所示；
检测抗晒黑基因共六个SNP的探针组C和多重PCR引物组3，所述探针组C包含探针1-2和探针9-18，所述探针组C中探针的序列如SEQ ID NO：1-2和SEQ ID NO：9-18所示，所述多重PCR引物组3包含引物19-20和引物27-36，所述多重PCR引物组3中引物的序列如SEQ ID NO：19-20和SEQ ID NO：27-36所示。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述抗太阳斑基因芯片、抗雀斑基因芯片和抗晒黑基因芯片内均包含有固相载体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、玻璃片、硅片或聚丙烯膜中的一种或两种以上的组合。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯中的一种或两种以上的组合。
10.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括杂交液、洗涤液。
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