CN108333156B - 桃蚜气味结合蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及桃蚜气味结合蛋白及其应用。所述氨基酸序列选自如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4和SEQ ID No.6所示的氨基酸序列中的至少一种。

Description

桃蚜气味结合蛋白及其应用

技术领域

本申请涉及一种来源于桃蚜的氨基酸序列和核苷酸序列，特别涉及该氨基酸序列和核苷酸序列在用于识别气味化合物中的应用。

背景技术

桃蚜(Myzus persicae(Sulzer))隶属于半翅目蚜科，是一种具有严重破坏性的多食性害虫。它们能够利用400多种植物进行无性繁殖(Van Emden HF,Eastop VF,HughesRD，et al.The ecology of Myzus persicae.Annu.Rev.Entomol.,1969,14:197-270)，不仅直接取食植物汁液，而且桃蚜可以传播100多种病毒病，如马铃薯卷叶病毒(RLRV)(Eskandari F,Sylvester ES and Richardson J.Evidence for lack of propagationof potato leaf roll virus in its aphid vector,Myzus persicae.Phytopathology,1979,69:45-47)，黄瓜花叶病毒(CMV)(Bwye AM,Proudlove W,Berlandier FA,etal.Effects of applying insecticides to control aphid vectors and cucumbermosaic virus in narrow-leafed lupins(Lupinus angustifolius).Aus.J.Exp.Agr.,1997,37:93-102)，对农作物的质量和产量造成重大损失。桃蚜体色具有多态性，可随着寄主植物变化而变化，绿色桃蚜可以产生红色后代，红色桃蚜也可产生绿色后代，桃蚜复杂的生活史对于防治桃蚜非常困难。目前防治桃蚜主要依靠广谱性的杀虫剂，如有机磷酸酯类、拟除虫菊酯和新烟碱类等。化学农药的大量使用不仅导致蚜虫产生了抗性，而且对环境造成了严重污染，因此，有必要发展一种新型有效的、环境友好的可持续发展防治方法。

此外，蚜虫在受到外界危险时(如天敌捕食)，蚜虫之间可以通过通风报信落在地上或逃跑，从而导致难以有效地利用天敌昆虫进行生物防治桃蚜。

发明内容

本申请之一提供了一种氨基酸序列，其选自如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4和SEQID No.6所示的氨基酸序列中的至少一种。

本申请之二提供了能够编码本申请之一所述的氨基酸序列的核苷酸序列。

在一个具体实施方式中，所述的核苷酸序列选自SEQ ID No.1、SEQ ID No.3和SEQID No.5中的至少一种。

本申请之三提供了根据本申请之一所述的氨基酸序列在用于识别气味化合物中的应用。

在一个具体实施方式中，所述气味化合物为(E)-β-法尼烯。

本申请之四提供了根据本申请之二所述的核苷酸序列在用于识别气味化合物中的应用。

在一个具体实施方式中，所述气味化合物为(E)-β-法尼烯。

本申请之五提供了根据本申请之一所述的氨基酸序列在用于监测和/或防治桃蚜中的应用。

本申请之六提供了根据本申请之二所述的核苷酸序列在用于监测和/或防治桃蚜中的应用。

本申请之七提供了一种鉴别气味化合物的方法，其包括如下步骤：

1)获得如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4和SEQ ID No.6所示的氨基酸序列中的至少一种的蛋白；

2)选取气味化合物，通过荧光竞争结合实验来确定所述蛋白是否识别所述气味化合物。

在一个具体实施方式中，在步骤1)中，通过原核生物或真核生物表达系统获得所述蛋白；

在步骤2)中，将荧光探针与所述蛋白以1:1的摩尔比在缓冲液中混合，得到荧光探针混合液，并测定所述荧光探针混合液的第一最大荧光强度；

然后，将所述气味化合物与所述蛋白以1:(1-10)的摩尔比加入到所述荧光探针混合液中，得到竞争混合液，并测定所述竞争混合液的第二最大荧光强度；

根据所述第二最大荧光强度相对于所述第一最大荧光强度的下降程度来判断所述气味化合物是否能与所述蛋白结合。

在一个具体实施方式中，所述荧光探针选自所述荧光探针选自N-苯基-1-萘胺(1-NPN)、8-苯氨基-1-萘磺酸(1,8-ANS)、1-氨基蒽(1-AMA)中的一种。

在一个具体实施方式中，在步骤2)中，首先将所述荧光探针和所述气味化合物分别溶于HPLC级甲醇中，然后再加入到所述缓冲液中，所述缓冲液为45至55mM的pH 7.2至7.6的Tris-HCl缓冲液。

在一个具体实施方式中，在步骤2)中，所述荧光探针和所述气味化合物分别溶于HPLC级甲醇中的浓度独立地为1至2mM。

在本申请中涉及的数值为允许存在一定的误差的数值，在误差范围内不影响通过其产生的技术效果。

本申请的有益效果：

昆虫利用他们灵敏的嗅觉系统来感知世界。蚜虫可以利用嗅觉器官主要是触角来进行化学交流，如定位寄主植物、交配、产卵、躲避天敌昆虫等。例如当蚜虫受到天敌昆虫的攻击时释放报警信息素(一类气味化合物)来通知周围其他蚜虫逃跑或进行防御。

通过实验证实，本申请开发的蛋白可以识别(E)-β-法尼烯(EβF)信息素，因此，可以判定本申请的蛋白属于气味结合蛋白。据此，可以利用本申请的蛋白来进一步确定其是否能够识别其他气味化合物。从而可以大大简化开发引诱剂组分的工序，降低工作量，并明显缩短了开发周期。

还可以利用RNAi等技术使桃蚜虫体内的编码本申请蛋白的基因沉默，或者通过其他方式使桃蚜虫体内的本申请的蛋白失活，实现干扰桃蚜通过EβF报警，从而进一步辅助其他手段实现防治桃蚜的目的。

此外，利用本申请的蛋白不仅有利于阐明蚜虫，特别是桃蚜的嗅觉识别机制，丰富蚜虫化学生态学理论，而且在实践中可以为害虫监测防治及利用天敌昆虫来防治害虫提供新途径和新方法，从而有效阻断蚜虫与外界环境及蚜虫间信息交流，达到害虫防治的目的。

附图说明

图1显示了桃蚜触角、头、足和身体RNA提取电泳图。

图2显示了文库质量检测标准图。

图3显示了荧光探针1-NPN分别与蛋白3、蛋白7和蛋白9的结合曲线。

图4显示了荧光探针1-NPN分别结合蛋白3、蛋白7和蛋白9的量与游离的荧光探针1-NPN量之比的Scathard方程关系。

图5显示了EβF和荧光探针1-NPN分别对蛋白3、蛋白7和蛋白9的竞争结合曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本申请作进一步详细描述。以下实施例用于说明本申请，而不是用来限制本申请的范围。

实施例1

cDNA文库的构建

1.1无翅桃蚜RNA的提取、反转录合成第一链cDNA和ds cDNA

取约2000头桃蚜成虫触角、头、足和身体，对该四个部位分别利用Trizol法进行RNA的提取，电泳检测RNA质量(见图1)，同时分光光度计测定RNA的浓度分别为172.5ng/μl、244.9ng/μl、145.6ng/μl、2021.8ng/μl。用oligo(dT)磁珠将mRNA从总RNA中分离出来，94℃孵育5分钟将其片段化。然后分别利用六个随机碱基作为随机引物，使触角、头、足和身体四个部位分别获得的RNA在反转录酶M-MuLV Reverse Transcriptase作用下分别合成第一链cDNA，然后再分别以各部位的第一链cDNA为模板，加入dNTPs、DNA polymerase I和RNase H快速合成第二链cDNA，从而得到触角、头、足和身体四个部位ds cDNA。

1.2纯化ds cDNA

利用Agencourt AMPure XP Beads对各部位合成的ds cDNA分别进行纯化。将重悬浮的AMPure XP Beads加入到新合成的ds cDNA中并充分混匀，室温下放置5min；用磁架将带有目的DNA的磁珠与上清分离，80％的乙醇清洗磁珠，在空气中干燥5min；0.1X TEBuffer或者10mM Tris-HCl洗脱目的DNA，即可得到纯化的ds cDNA。

1.3 ds cDNA末端修复、加A尾、接头连接及纯化

用NEBNext End Repair Reaction Buffer和NEBNext End Prep Enzyme Mix对上述1.2纯化的各部位的ds cDNA分别进行末端修复。加入Blunt/TA Ligase Master Mix和Diluted NEBNext Adaptor加A尾并连接测序接头。用AMPure XP Beads对上述修饰后的dscDNA进行纯化，利用磁架将带有目的DNA的磁珠与上清分离，80％的乙醇清洗磁珠，在空气中干燥5min；0.1×TE Buffer或者10mM Tris-HCl洗脱目的DNA，重复此纯化过程2次。

1.4 PCR扩增及产物的纯化

以上述1.3得到的各部位的cDNA分别为模板，采用购自NEW ENGLAND BioLabs的试剂盒，按照下述体系及条件扩增。

NEBNext Q5Hot Start HiFi PCR Master Mix 25μl

Index(X)Primer 2.5μl

Universal PCR Primer 2.5μl

98℃ 30秒；(98℃ 10秒；65℃ 75秒)15循环；65℃ 5分钟；4℃保存。

纯化过程同前。得到各部位的PCR纯化产物即构成四个cDNA文库，即触角、头、足和身体的cDNA文库。

1.5生物分析仪检测cDNA文库的质量

取2-3μl构建好的cDNA文库，用10mM Tris或者0.1×TE进行稀释，取1μl稀释后的样品用基因芯片检测，观察电泳图谱是否在约300bp处有比较集中的峰出现(如图2)，如果在约300bp处有比较集中的峰出现，则表明cDNA文库构建合格。

实施例2

蛋白的克隆、表达与纯化

2.1从cDNA文库中获得目标基因和蛋白

将构建好的触角、头、足和身体的cDNA文库送到北京赛默百合生物科技有限公司测序。

对于测序得到的原始测序序列(Sequenced Reads或raw reads)，里面含有带接头的、低质量的reads，为保证信息分析质量，对raw reads过滤，得到clean reads。利用Trinity软件将clean reads进行组装生成unigenes。组装后，将所有的unigenes在NCBI的数据库nr和nt中做BLASTx和BLASTn比对，E-value<1.0×10-5的被保留下来。在本申请中共得到110,059,204raw reads，在清除接头序列和低质量序列后，得到107,199,360cleanreads，组装后产生50352个unigenes，长度在201bp到27.17kb，平均长829bp。

然后根据测序结果，克隆、表达候选基因，纯化候选蛋白，并通过荧光竞争实验，从众多的候选基因中最终筛选得到了3个能够识别(E)-β-法尼烯(EβF)信息素的基因，这三个基因都为全长，包含有完整的开放阅读框。其中，第一个基因的序列为SEQ ID No.1，其编码的氨基酸序列为SEQ ID No.2(对应于蛋白3)；第二个基因的序列为SEQ ID No.3，其编码的氨基酸序列为SEQ ID No.4(对应于蛋白7)；第三个基因的序列为SEQ ID No.5，其编码的氨基酸序列为SEQ ID No.6(对应于蛋白9)。

2.2蛋白3、蛋白7、蛋白9的基因表达与蛋白纯化

蛋白3、蛋白7、蛋白9的基因序列中没有Nde I(catatg)和EcoRI(gaattc)酶切位点，所以原核表达时，正向引物添加Nde I，反向引物添加EcoR I酶切位点。此设计方案表达的蛋白不带有任何标签，纯化方式为离子交换和分子筛。

设计带有酶切位点的特异性引物：

P3-F(SEQ ID No.7)和P3-R(SEQ ID No.8)用于蛋白3的基因克隆。

P7-F(SEQ ID No.9)和P7-R(SEQ ID No.10)用于蛋白7的基因克隆。

P9-F(SEQ ID No.11)和P9-R(SEQ ID No.12)用于蛋白9的基因克隆。

以桃蚜触角、头、足和身体的第一链cDNA的混合物为模板，以上述引物对分别为引物进行PCR扩增后，利用Axygen琼脂糖凝胶DNA纯化试剂盒回收PCR产物，PCR产物经胶回收后克隆于pGEM-T Easy载体上(按试剂盒说明操作)，分别得到pGEM-P3(含SEQ ID No.1所示的序列)、pGEM-P7(含SEQ ID No.3所示的序列)和pGEM-P10(含SEQ ID No.5所示的序列)三种质粒。重组克隆载体转化到DH5α感受态细胞，然后涂布在含有氨苄青霉素/X-gal/IPTG的LB平板上，37℃倒置培养15h。经蓝白斑筛选后，挑取6个阳性克隆在LB液体中(含氨苄青霉素)培养过夜，用菌液PCR，电泳检测挑取的阳性克隆能否扩增出目的条带，然后将能扩增出条带的菌液送到华大基因公司进行测序验证是否为上述3个编码序列。

将测序正确的菌液摇菌，次日用Axygen质粒提取试剂盒提取质粒。重组质粒pGEM-P3、pGEM-P7和pGEM-P10分别经Nde I和Eco RI双酶切后，回收与对应目的片段大小的条带，与经同样双酶切的原核表达载体PET-30a(+)相连接，分别得到PET-P3(含SEQ ID No.1所示的序列)、PET-P7(含SEQ ID No.3所示的序列)和PET-P10(含SEQ ID No.5所示的序列)三种表达质粒，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，挑取酶切和测序鉴定正确的单克隆于5mL LB液体培养基中(含有终浓度为100μg/mL的卡那霉素)，次日以1:100的比例转接到新鲜的LB液体培养基中，继续培养至A₆₀₀值达到0.4-0.6，此时加入IPTG诱导蛋白的表达。经优化蛋白表达条件为IPTG终浓度为1mM，摇床转速220r/min，诱导时间10-12h。诱导表达完成后8000rpm，离心10min收集菌体，SDS-PAGE电泳分析表达情况，并检测蛋白在包涵体中表达。

对包涵体进行复性重折叠后，并进行纯化。其中，蛋白3或蛋白9用阴离子交换纯化。

主要步骤如下：

(1)采用阴离子交换层析柱HiTrap Q HP柱(GE Healthcare Biosciences，乌普萨拉，瑞典)分别对两种重组蛋白进行粗纯化；

(2)重复步骤(1)；

(3)采用阴离子交换层析柱Mini Q 4.6/50(GE Healthcare)分别对两种重组蛋白进行精细纯化；

(4)采用分子筛Superdex 75 10/300GL柱(GE Healthcare)对蛋白进行最终的纯化；

(5)重复步骤(4)一次；

(6)纯化好的蛋白用脱盐柱HiTrap Desalting柱(GE Healthcare)进行脱盐处理；

(7)用分子量为10kDa超滤管对蛋白进行浓缩；

(8)利用SDS-PAGE分别对两种重组蛋白的纯化纯度及分子量大小进行鉴定；

(9)利用质谱(mass spectroscopy，MS)分别对三种重组蛋白的纯度及分子量大小进行鉴定；

(10)以牛血清蛋白BSA(bovine serum albumin，BSA)为标准蛋白，采用Bradfordmethod方法(Bradford，1976)对纯化并浓缩好的三种重组蛋白进行浓度测定。

蛋白7用阳离子交换纯化，主要步骤如下：

(1)采用阳离子交换层析柱HiTrap SP HP(GE Healthcare Biosciences，乌普萨拉，瑞典)对重组蛋白进行粗纯化；

(2)重复步骤(1)；

(3)采用阳离子交换层析柱Mini S 4.6/50(GE Healthcare)对重组蛋白进行精细纯化；

(4)采用分子筛Superdex 75 10/300GL柱(GE Healthcare)对蛋白进行最终的纯化；

(5)重复步骤(4)一次；

(6)纯化好的蛋白用脱盐柱HiTrap Desalting柱(GE Healthcare)进行脱盐处理；

(7)用分子量为10kDa超滤管对蛋白进行浓缩；

(8)利用SDS-PAGE重组蛋白的纯化纯度及分子量大小进行鉴定；

(9)利用质谱(mass spectroscopy，MS)对重组蛋白的纯度及分子量大小进行鉴定；

(10)以牛血清蛋白BSA(bovine serum albumin，BSA)为标准蛋白，采用Bradfordmethod方法(Bradford，1976)对纯化并浓缩好的重组蛋白进行浓度测定。

经过质谱和蛋白电泳分析确定纯化的蛋白与其对应大氨基酸序列大小相符，为目标蛋白，蛋白3大小为13.3KD，蛋白7大小为14.4KD，蛋白9大小为16KD。

实施例3

荧光竞争实验

荧光竞争结合实验的原理是：荧光探针和气味结合蛋白结合后，在激发光的作用下会发射荧光，此时利用机器检测时会检测出一个荧光值，当加入气味化合物后，如果气味化合物和蛋白结合，那么气味化合物会和荧光探针进行竞争，气味化合物和蛋白进行结合，此时检测的荧光值就会下降，随着加入的气味化合物的量不断增多，荧光值会逐渐下降。

在F-380型荧光分光光度计(天津港东)上进行，所用容器为1cm宽的石英杯，缝宽为10nm，灵敏度为2。除上述纯化好的蛋白3、蛋白7和蛋白9外，所用试剂还有荧光探针1-NPN、气味化合物EβF和50mM的Tris-HCl(PH＝7.4)。荧光探针和气味化合物都分别溶于HPLC级别的甲醇中，荧光探针和气味化合物终浓度分别为1mM。

3.1测定目标蛋白和荧光探针1-NPN的结合

具体步骤为：设定激发波长为337nm，扫描的发射波长范围为390-500nm。向荧光比色皿中加入1ml 50mM的Tris-HCl缓冲液(PH＝7.4)，然后向比色皿中加入目标蛋白，使目标蛋白的终浓度为2μM，待荧光强度稳定后扫描并记录荧光值，然后陆续比色皿中加入溶于甲醇的荧光探针1-NPN，使加入的荧光探针从2μM递增到16μM。每加入一次1-NPN就记录一次最大荧光强度值。即向比色皿中加入蛋白后，加入荧光探针的终浓度为2μM，等待30s，测量并记录最大荧光值；再加入荧光探针的终浓度为4μM，等待30s后，再测量并记录最大荧光值；循环此操作至比色皿中的荧光探针浓度为16μM。利用Scatchard方程计算蛋白和1-NPN的结合常数，1-NPN和蛋白的结合曲线和Scathard方程关系如图3和图4。

3.2气味化合物和荧光探针1-NPN的竞争蛋白结合

设定激发光波长为337nm，扫描的发射光波长范围为390-500nm。在荧光比色皿中加入50mM Tris-HCl缓冲液(PH＝7.4)1ml，然后加入目标蛋白和荧光探针1-NPN，使目标蛋白和荧光探针1-NPN的终浓度分别为2μM，待荧光强度稳定后，记录最大荧光强度。将溶于甲醇的气味化合物标样依次加入到含有终浓度分别为2μM的目标蛋白和荧光探针1-NPN的荧光比色皿中，气味化合物的浓度从2μM递增到20μM，记录荧光强度变化情况。即向比色皿中加入分别为2μM的目标蛋白和荧光探针1-NPN后，等待30s，测量并记录最大荧光值；再加入终浓度为2μM的气味化合物，等待30s后，再测量并记录最大荧光值；加入终浓度至4μM的气味化合物，等待30s后，再测量并记录最大荧光值；循环此操作至比色皿中的气味化合物的浓度至20μM。每次试验重复三次。根据公式K_i＝[IC₅₀]/(1+[1-NPN]/K_1-NPN)计算配基气味分子和蛋白的结合常数，其中IC₅₀是指目标蛋白和1-NPN复合物的荧光强度下降一半时配基气味分子的浓度；[1-NPN]为未结合的1-NPN的浓度，K_1-NPN为目标蛋白和1-NPN复合物的结合常数。蛋白3、蛋白7和蛋白9与气味化合物的结合常数分别为3.20μmol/L、1.88μmol/L和5.23μmol/L。气味化合物和荧光探针1-NPN的竞争蛋白结合曲线如图5。

序列表

<110> 中国农业科学院植物保护研究所

<120> 桃蚜气味结合蛋白及其应用

<130> LHA1860030

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 426

<212> DNA/RNA

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 1

atgatttcgt cgacgtttta cataactttg ctgttcggta ttgcgatgct gatttcatgt 60

ggctacgggc gattttcgac ggaacaaatc gattattacg gaaaagcgtg caatgccagc 120

gaagatgacc tcgtcgtagt caaatcctac aaagtaccaa ctacagaaac cggaaagtgt 180

ctgatgaaat gcatgatcac caaactagga ctgctaaacg acgatggttc gtacaacaaa 240

actggcatgg aagcgggttt gaagaaatac tggtcggagt ggtctacgga gaagattgag 300

gctataaaca acaagtgtta tgaagaagcc ttacttgtgt cgaaggaggt aatagcgacg 360

tgcaattact cgtacactgt gatggcatgt ttgaacaagc agttggatct cgacaagtca 420

acttga 426

<210> 2

<211> 141

<212> PRT

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 2

Met Ile Ser Ser Thr Phe Tyr Ile Thr Leu Leu Phe Gly Ile Ala Met

1 5 10 15

Leu Ile Ser Cys Gly Tyr Gly Arg Phe Ser Thr Glu Gln Ile Asp Tyr

20 25 30

Tyr Gly Lys Ala Cys Asn Ala Ser Glu Asp Asp Leu Val Val Val Lys

35 40 45

Ser Tyr Lys Val Pro Thr Thr Glu Thr Gly Lys Cys Leu Met Lys Cys

50 55 60

Met Ile Thr Lys Leu Gly Leu Leu Asn Asp Asp Gly Ser Tyr Asn Lys

65 70 75 80

Thr Gly Met Glu Ala Gly Leu Lys Lys Tyr Trp Ser Glu Trp Ser Thr

85 90 95

Glu Lys Ile Glu Ala Ile Asn Asn Lys Cys Tyr Glu Glu Ala Leu Leu

100 105 110

Val Ser Lys Glu Val Ile Ala Thr Cys Asn Tyr Ser Tyr Thr Val Met

115 120 125

Ala Cys Leu Asn Lys Gln Leu Asp Leu Asp Lys Ser Thr

130 135 140

<210> 3

<211> 450

<212> DNA/RNA

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 3

atgaataata tgataccagc tacagttttg ctcgctgtta tagcagcgac cgtcttaaag 60

gattgcgatg cttacttgag tgaagcggcc attaaaaaaa cacaacagat gttgaaaacc 120

gtatgctcca agaaacattc agtcgaagag gacgtattta ctgacatcaa gaaaggaata 180

tttccggaga acaacaacaa cataaaatgt tactttgcct gtaatttcaa aactatgcaa 240

atgatcaatc aaaaaggaac cctcgacaaa aaattattca aagacaagat gtcgatgatg 300

gcaccaccga acatatacaa cattttatta ccagctattg aacagtgcat tggaatagat 360

aaaggcgaag aactttgtca gtcttcgtac aacttcatta agtgtgcaca ccgcgtggat 420

ccaaaaagtt tagagtatct accactatag 450

<210> 4

<211> 149

<212> PRT

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 4

Met Asn Asn Met Ile Pro Ala Thr Val Leu Leu Ala Val Ile Ala Ala

1 5 10 15

Thr Val Leu Lys Asp Cys Asp Ala Tyr Leu Ser Glu Ala Ala Ile Lys

20 25 30

Lys Thr Gln Gln Met Leu Lys Thr Val Cys Ser Lys Lys His Ser Val

35 40 45

Glu Glu Asp Val Phe Thr Asp Ile Lys Lys Gly Ile Phe Pro Glu Asn

50 55 60

Asn Asn Asn Ile Lys Cys Tyr Phe Ala Cys Asn Phe Lys Thr Met Gln

65 70 75 80

Met Ile Asn Gln Lys Gly Thr Leu Asp Lys Lys Leu Phe Lys Asp Lys

85 90 95

Met Ser Met Met Ala Pro Pro Asn Ile Tyr Asn Ile Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Ile Glu Gln Cys Ile Gly Ile Asp Lys Gly Glu Glu Leu Cys Gln Ser

115 120 125

Ser Tyr Asn Phe Ile Lys Cys Ala His Arg Val Asp Pro Lys Ser Leu

130 135 140

Glu Tyr Leu Pro Leu

145

<210> 5

<211> 501

<212> DNA/RNA

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 5

atgttaataa aaaagacatt gttagtgtca gtttttgttc ttttcagttg tttgttttca 60

atcaataagg ctactgatga cgcagacaca gcggataagg aattaatgtc aaaattattc 120

actgtggttt ttaaatgctt taaggatgcc gattggggca cgtgcggtga aatgataaca 180

actaaatatg atataactca agctaaatat aagcaatgta catgtcacat ggcgtgtgcc 240

ggggaagaac ttggattgat aaattcttcg gggcaaccag aacctgcgaa gttcctcgaa 300

tacgtgaacc gtatcaataa tccgggtatt aagagtcaat tgcaacatat ttacgacaaa 360

tgccaaaatg tcaaagggac ggagaaatgc gatctcgcag aacaatttgc tatatgtgct 420

tttaaggaat cgccagcact aaaggaacgc gcgactacgt tgatggaaat tttaatgaag 480

atgaaaccaa aatcgaaata a 501

<210> 6

<211> 166

<212> PRT

<213> 桃蚜(Myzus persicae Sulzer)

<400> 6

Met Leu Ile Lys Lys Thr Leu Leu Val Ser Val Phe Val Leu Phe Ser

1 5 10 15

Cys Leu Phe Ser Ile Asn Lys Ala Thr Asp Asp Ala Asp Thr Ala Asp

20 25 30

Lys Glu Leu Met Ser Lys Leu Phe Thr Val Val Phe Lys Cys Phe Lys

35 40 45

Asp Ala Asp Trp Gly Thr Cys Gly Glu Met Ile Thr Thr Lys Tyr Asp

50 55 60

Ile Thr Gln Ala Lys Tyr Lys Gln Cys Thr Cys His Met Ala Cys Ala

65 70 75 80

Gly Glu Glu Leu Gly Leu Ile Asn Ser Ser Gly Gln Pro Glu Pro Ala

85 90 95

Lys Phe Leu Glu Tyr Val Asn Arg Ile Asn Asn Pro Gly Ile Lys Ser

100 105 110

Gln Leu Gln His Ile Tyr Asp Lys Cys Gln Asn Val Lys Gly Thr Glu

115 120 125

Lys Cys Asp Leu Ala Glu Gln Phe Ala Ile Cys Ala Phe Lys Glu Ser

130 135 140

Pro Ala Leu Lys Glu Arg Ala Thr Thr Leu Met Glu Ile Leu Met Lys

145 150 155 160

Met Lys Pro Lys Ser Lys

165

<210> 7

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 7

gtcatatgcg attttcgacg gaacaaatc 29

<210> 8

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 8

ctgaattctc aagttgactt gtcgagatcc a 31

<210> 9

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 9

gtcatatgta cttgagtgaa gcggccatta 30

<210> 10

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 10

ctgaattcct atagtggtag atactctaaa ctttttggat 40

<210> 11

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 11

gtcatatgac tgatgacgca gacacagcg 29

<210> 12

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列(non)

<400> 12

ctgaattctt atttcgattt tggtttcatc ttc 33

Claims (5)

1.一种蛋白在用于识别(E)-β-法尼烯中的应用，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.6所示。

2.能够编码如权利要求1所述的应用中的蛋白的核酸在用于识别(E)-β-法尼烯中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

4.根据权利要求1所述的应用中的蛋白在用于监测和/或防治桃蚜中的应用。

5.根据权利要求2或3所述的应用中的核酸在用于监测和/或防治桃蚜中的应用。

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