CN108277270B

CN108277270B - Fbxw5及其抑制剂在制备治疗脂肪肝及相关疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN108277270B
Application number: CN201810037222.9A
Authority: CN
Inventors: 李红良; 白兰
Original assignee: Wuhan University WHU
Current assignee: Wuhan University WHU
Priority date: 2018-01-15
Filing date: 2018-01-15
Publication date: 2020-10-13
Anticipated expiration: 2038-01-15
Also published as: CN108277270A

Abstract

本发明公开了FBXW5及其抑制剂在制备治疗脂肪肝及相关疾病药物中的应用。本发明以L02细胞系、FBXW5过表达的L02细胞系、野生型C57BL/6小鼠原代肝细胞、全身性FBXW5基因敲除小鼠原代肝细胞为实验对象，通过棕榈酸酯体外刺激诱导的肝脏细胞脂肪变性模型来研究FBXW5基因的功能。研究发现在相同的PA刺激下，FBXW5过表达的L02细胞系脂肪滴的面积较人正常肝细胞L02细胞系显著增多；FBXW5‑KO小鼠原代肝细胞中脂肪滴积累程度较WT小鼠原代肝细胞显著降低。这表明FBXW5被抑制后，可以抑制脂肪堆积。因此FBXW5为研制预防、缓解和/或治疗脂肪肝及相关疾病的药物提供靶标。

Description

FBXW5及其抑制剂在制备治疗脂肪肝及相关疾病药物中的应用

技术领域

本发明属于基因的功能与应用领域，特别涉及一种FBXW5作为药物靶标在筛选治疗脂肪肝药物中的应用，以及FBXW5的抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝及相关疾病的药物中应用。

背景技术

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除酒精以外其他因素造成的肝脏弥漫性脂肪浸润。NAFLD是很常见的慢性肝病之一，高发人群为40-50岁的中年人，无显著性别差异。随着生活水平提高，NAFLD的发病率也在逐渐上升。NAFLD的病因比较复杂，目前临床上认为肥胖、糖尿病、长期使用激素、不当的饮食与生活方式以及锻炼不足等均是其诱因，但其具体发病机制仍不确定，对应的治疗手段也非常有限[1-2]。NAFLD的治疗主要以祛除病因及诱因和调整饮食为主，药物仅起辅助治疗作用。目前治疗NAFLD的各种药物虽然能够一定程度缓解NAFLD病症，但也会具有一定副作用，甚至引发其他疾病，因此寻找更多有效且无副作用的治疗NAFLD的药物显得极其紧迫[3-4]。

F-Box And WD Repeat Domain Containing 5(FBXW5)属于E3泛素连接酶，最早是从IL-1β诱导的TAK1复合物中发现。FBXW5可以在IL-1β刺激下，参与内源TAK1的表达，过表达FBXW5会抑制IL-1β诱导的JNK/P38MAPKs和NF-κB激活以及TAK1的Thr187位点的磷酸化，而抑制FBXW5会导致IL-1β诱导的TAK1持续性的激活。FBXW5作为中心体调节因子PLK4和APC/C的底物，调控中心体聚集因子HsSAS-6的降解。FBXW5泛素化降解Eps8(肌动蛋白细胞骨架重塑因子，与细胞增殖和运动密切相关)是有丝分裂过程中细胞形态改变的重要机制。据报道，与FBXW5同为F-box家族的FBXW7能够通过调控RIG-1的泛素化影响干扰素和炎症因子的产生。FBXW5定位在细胞质和细胞核里，通过DDB1-Cul4A-Rbx1复合体增强核内c-myb苏木化，并且诱导c-myb定位到核点状结构域。此外，CRL4A-DDB1-FBXW5泛素连接酶复合体泛素化并降解DLC1(编码RhoA-GTP)，调控RhoA信号通路。但是关于本发明FBXW5与脂肪肝病之间的直接关系暂未见报道[5-7]。

参考文献:

[1]Musso G,Cassader M,Gambino R.Non-alcoholic steatohepatitis:emerging molecular targets and therapeutic strategies.Nat Rev Drug Discov2016；15:249-274.

[2]朱鹏,徐宗,王宇明.世界胃肠病学会全球指南:非酒精性脂肪性肝病及非酒精性脂肪性肝炎.临床肝胆病杂志2014；30:842-845.

[3]Review T,LaBrecque DR,Abbas Z,Anania F,Ferenci P,Khan AG,etal.World Gastroenterology Organisation global guidelines:Nonalcoholic fattyliver disease and nonalcoholic steatohepatitis.J Clin Gastroenterol 2014；48:467-473.

[4]Bellentani S.The epidemiology of non-alcoholic fatty liverdisease.Liver Int2017；37Suppl 1:81-84

[5]Hu,Jian,et al."WD40protein FBW5promotes ubiquitination of tumorsuppressor TSC2by DDB1–CUL4–ROC1ligase."Genes&development 22.7(2008):866-871.

[6]Minoda,Yasumasa,et al."An F-box protein,FBXW5,negatively regulatesTAK1MAP3K in the IL-1βsignaling pathway."Biochemical and biophysical researchcommunications 381.3(2009):412-417.

[7]Puklowski,Anja,et al."The SCF-FBXW5 E3-ubiquitin ligase isregulated by PLK4and targets HsSAS-6 to control centrosome duplication."Nature cell biology13.8(2011):1004-1009.

发明内容

为解决上述现有技术的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种FBXW5基因的表达与脂肪肝病之间的相互关系，提供一个用于治疗脂肪肝病的靶基因FBXW5的新用途，进而把FBXW5基因应用于脂肪肝病的治疗。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明以人正常肝细胞L02细胞系、FBXW5过表达的L02细胞系、野生型C57BL/6小鼠(WT)原代肝细胞、全身性FBXW5基因敲除小鼠(FBXW5-KO)原代肝细胞为实验对象，通过棕榈酸酯(palmitate，PA)体外刺激诱导的肝脏细胞脂肪变性模型来研究FBXW5基因的功能。研究发现在相同的PA刺激下，FBXW5过表达的L02细胞系脂肪滴的面积较人正常肝细胞L02细胞系显著增多；与此相反，FBXW5-KO小鼠原代肝细胞中脂肪滴积累程度较WT小鼠原代肝细胞显著降低。上述结果表明FBXW5基因能够促进脂肪肝病的发生发展。

在此基础上，本发明第一方面，提供FBXW5作为药物靶标在筛选保护肝脏的药物中的应用。

本发明第二方面，提供FBXW5作为药物靶标在筛选预防、缓解和/或治疗脂肪肝及其相关疾病的药物中的应用。

本发明第三方面，提供FBXW5的抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝及其相关疾病的药物中的应用。

优选的，所述FBXW5的抑制剂是抑制FBXW5蛋白质活性或蛋白质水平的抑制剂、或者抑制FBXW5的mRNA水平的抑制剂，其抑制活性是可逆的或不可逆的。

优选的，所述抑制FBXW5蛋白质活性或蛋白质水平的抑制剂包括FBXW5的抗体、抑制FBXW5蛋白质活性或蛋白质水平的蛋白质、多肽、酶、天然化合物、合成化合物、有机物、无机物；所述抑制FBXW5蛋白质活性或蛋白质水平的抑制剂是指可以结合FBXW5但在结合时不产生生物应答的物质，或者所述抑制剂可以阻断、抑制或减弱由激动剂介导的应答，并可与激动剂竞争结合FBXW5。

优选的，所述FBXW5的抗体包括但不限于单克隆抗体、合成抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)(包括双特异性scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、二硫键连接的Fv(sdFv)和任何上述的表位结合片段。特别地，用于本发明的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。用于本发明的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。优选地，抗体是人或人源化单克隆抗体。

如本文所用，“人”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且包括从人免疫球蛋白文库或从由人基因表达抗体的小鼠或其它动物分离的抗体。

优选的，抑制FBXW5的mRNA水平的抑制剂可以是其反义核酸序列、siRNA、miRNA、shRNA、dsRNA，或者其它能够抑制FBXW5的mRNA水平的蛋白质、多肽、酶、化合物。

本发明药物的剂型可以是口服剂的形式，例如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、悬浮剂、糖浆剂等；也可以是注射给药的剂型，例如注射液、粉针剂等，通过静脉内、腹膜内、皮下或肌肉内的途径。所有使用的剂型形式都是药学领域普通技术人员所熟知的。

本发明的药物可施用于会发生或已经发脂肪肝及相关疾病的任何动物。这些动物包括人类和非人类的动物，例如宠物或牲畜等。

本发明的药物可以本领域已知的途径施用于受试者，包括但不限于口服，胃肠外，皮下，肌内，静脉内，腹腔内，肝内，心肌内，肾内，阴道，直肠，颊，舌下，鼻内，透皮方式等。

施用的剂量将取决于接受者的年龄、健康和体重，联用药物的种类，治疗频率，给药途径等。药物可以单一日剂量施用，或者总日剂量以每天两次，三次或四次的分开剂量施用。剂量可以施用一次或多次，施药时间可以单日至几个月或更长时间。

所述脂肪肝及相关疾病包括但不限于：胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖、糖尿病、高血糖、高血脂症、单纯性肝脏脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎，肝纤维化、肝硬化、肝癌等。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明发现FBXW5的新功能，即FBXW5具有恶化脂肪肝病的作用。

(2)基于FBXW5在恶化脂肪肝疾病中的功能，其为研制预防、缓解和/或治疗脂肪肝病的药物提供靶标。

(3)FBXW5的抑制剂可用于制备预防、缓解和/或治疗脂肪肝病的药物。

附图说明

图1是空质粒和过表达FBXW5质粒转染肝细胞后，各组L02细胞中FBXW5的蛋白表达图。

图2是正常L02细胞实验组和FBXW5稳定过表达L02细胞实验组中细胞油红O染色结果图。

图3是WT原代肝细胞实验组和FBXW5-KO原代肝细胞实验组中细胞油红O染色结果图。

图4是WT原代肝细胞实验组和FBXW5-KO原代肝细胞实验组中炎症因子TNF-a的mRNA水平测定结果图(**P<0.01vs WT原代肝细胞实验组)。

具体实施方式

通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。

以下实施例所用化学试剂都是常规试剂，均可商购获得。未做特殊说明的实验方法都是采用本领域已知的常规方法。

实验用细胞及动物：

实验细胞：人肝脏细胞系L02购自中国科学院细胞库(目录号GNHu6)，人胚肾HEK293T细胞购自美国菌种保藏中心(American type culture collection，ATCC)。上述细胞均采用DMEM高糖培养基(含10％FBS，1％青霉素-链霉素)置于5％CO₂的37℃恒温细胞专用培养箱培养，实验用细胞培养时间不超过三个月，每三个月进行一次支原体检测。细胞冻存采用含10％DMSO的FBS冻存。

实验动物：选用8-10周龄、体重在23.5-27.5g，背景为雄性C57BL/6的野生型小鼠(WT)、全身性FBXW5基因敲除小鼠(FBXW5-KO)为实验对象。C57BL/6小鼠购自北京华阜康生物科技有限公司；FBXW5基因敲除小鼠(自己构建)。

全身性FBXW5基因敲除小鼠的构建：

利用CRISPR-Cas9技术构建全身性FBXW5基因敲除小鼠。首先，通过在线CRISPR设计工具(http://crispr.mit.edu)预测小鼠FBXW5的引导序列，设计2条单链oligo：

oligo1：3’-taggCAATTCTACCGCTACTACC-5’

oligo2：3’-aaacGGTAGTAGCGGTAGAATTG-5’

oligo1和oligo2退火形成双链DNA，将双链DNA连入经BsaI限制性内切酶酶切的pUC57-sgRNA(Addgene，51132)构建sgRNA表达载体。

以上述构建的sgRNA表达载体为模板，使用如下引物通过PCR扩增含有T7启动子及引导序列的DNA片段：

Forward primer：3’-GATCCCTAATACGACTCACTATAG-5’

Reverse primer：3’-AAAAAAAGCACCGACTCGGT-5’

以所扩增的PCR产物为模板使用MEGAshortscript Kit(Ambion，AM1354)进行体外转录；Cas9质粒(Addgene 44758)通过T7Ultra kit(Ambion，Am1345)进行转录。将转录得到的Cas9和引导序列RNA的mRNA使用miRNeasy Micro Kit(Qiaen，217084)纯化后，通过FemtoJet 5247显微注射系统注射入野生型C57BL/6小鼠的单细胞受精卵内。选取经显微注射后存活的受精卵，将其移植到健康雌鼠输卵管中，经过19天妊娠之后得到F0代小鼠。

F1代及F2代小鼠通过PCR鉴定，野生型小鼠包含一段长406的DNA序列，而突变小鼠(FBXW5基因敲除小鼠)含有375的DNA序列，最终蛋白产物通过WB进行检测鉴定。其中，PCR鉴定引物如下：

FBXW5-F：5’-TGGGCAGAATGTCACGATGG-3’，

FBXW5-R：5’-ATTGAGAGCCGACAGACAGC-3’。

实验所用小鼠为突变体纯合子。

动物饲养环境：SPF级实验动物中心，SPF级小鼠饲料购自北京华阜康生物科技有限公司。饲养条件：室温在22-24℃之间，湿度在40-70％之间，明暗交替照明时间为12h，自由饮水摄食。

原代细胞分离培养：

体外分离和培养小鼠原代肝细胞：本实验分离野生型WT小鼠和FBXW5-KO小鼠的原代肝细胞，设置3次重复。用3％戊巴比妥钠麻醉小鼠，固定，消毒，手术开腹，穿刺肝脏门静脉，剪断下腔静脉，进行原位灌流。首先用前灌流液(生理盐水)灌流至肝脏无血色，然后用后灌流液(0.5mg/ml胶原酶的D Hanks溶液)灌流20min左右，取下完整肝脏置于基础培养基中，剪碎分离肝细胞。细胞悬液经70μm滤网过滤，离心5min(离心力大小为50g)，弃上清，沉淀用基础培养基洗一次，最后细胞沉淀用DMEM培养基(含10％FBS)重悬，用台盼蓝染色计数，以0.5×10⁶/孔的密度转移细胞至6孔细胞培养板生长。

FBXW5过表达L02稳定转染细胞系的建立：

1.FBXW5慢病毒过表达质粒构建

1)PCR扩增FBXW5基因，引物为：

正向：5’-TCGGGTTTAAACGGATCC ATGGACGAGGGCGGCACGCC-3’

反向：5’-GGGCCCTCTAGACTCGAG TCAGCGCCTCTGGCTGGCAA-3’；

2)PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，随后使用DNA凝胶回收试剂盒(天根)进行DNA片段的回收；

3)将所得DNA产物和限制性内切核酸酶FastDigest restriction enzymes(Thermo)、

buffer or

Green buffer、ddH₂O混合均匀(50μl体系)，置于37℃条件下反应。使用

AxyPrep^TM PCR Clean-Up Kit Axygen)回收酶切产物；

4)使用

PCR一步定向克隆试剂盒(Novoprotein)按照试剂盒说明书进行重组反应；

5)制作大肠杆菌感受态细胞，将上述连接产物进行转化实验，涂板，置于37℃培养箱，过夜培养；

6)从37℃培养箱中取出过夜培养的平板，挑克隆摇菌，并检测菌落PCR阳性克隆；

7)将PCR鉴定为阳性的菌液吸取5-10μl接种至5ml LB(含抗性)培养基中，在220rpm，37℃摇床中过夜培养；

8)取出过夜培养的菌液，对已经混浊的菌液进行质粒提取(天根质粒DNA小提试剂盒)；

9)提取后的质粒可直接用于FBXW5瞬转或构建慢病毒稳转细胞系。

2.慢病毒载体的构建和包装：

1)用胰酶消化并记数HEK293T细胞，按1×10⁶个HEK293T/孔传至6孔板中；

2)第二天细胞汇合度至80％时开始转染；

3)取1.5ml灭菌EP管，加入2个包装质粒(pSpax，Addgene，#12260和pMD2G，Addgene，#12259)和过表达或干扰质粒各1μg溶于100μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。

4)取1.5ml灭菌EP管，取3μl PEI(1.6μg/μl)溶于100μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。

5)将DNA溶液和PEI溶液轻柔混匀，室温孵育15min；

6)将上述DNA-PEI混合液，逐滴加入6孔板中；

7)转染6h后，换新鲜培养基；

8)转染后48-72h收获含病毒的上清，3000rpm离心10min，去除沉淀，并用0.45μm的滤膜过滤；

9)过滤后的病毒可立即用于感染或-80℃贮存。

3.细胞感染：

1)细胞铺板：每种病毒感染两个孔，并留出一孔作为空白对照，以便后期筛选细胞用。

2)第一次感染：将病毒液与待感染的细胞(和普通转染密度一致)培养基混合，混合比率取决于病毒滴度和细胞承受能力(本次每孔使用500μl病毒液+2ml完全培养基)，并随后加入2.5μl聚凝胺(8mg/ml)，使其终浓度为8μg/ml。

3)感染后最快2h即可换液终止感染，若细胞承受力强，最长可持续感染24h。

4)第二次感染：感染24h后，再感染一次。

4.加药筛选细胞

第一次感染48h后，在六孔板中(包括空白孔)加入含有嘌呤霉素的完全培养基(终浓度为1μg/mL)，待空白孔细胞完全死亡，将六孔板中细胞传代至T25培养瓶，一般空白细胞在24～48h后全部死亡。待细胞长满后，收取一部分细胞做WB验证FBXW5过表达情况，并冻存部分细胞。

Western blot操作方法：

1)细胞中蛋白提取

细胞加入裂解液，裂解完成后离心取上清，运用BCA Protein Assay Kit定量收集的蛋白样品。

2)上样与电泳

配置好电泳凝胶，并在电泳槽内加入电泳液。把蛋白样品上样到SDS-PAGE胶加样孔内，点样完成后开始电泳。

3)转膜

①配制转膜液，于4℃预冷。

②将PVDF在甲醇中浸泡15s后放入转膜液中备用。

③取出凝胶板中的凝胶，用转膜液洗涤凝胶，将凝胶平铺在负极的滤纸上，将PVDF膜覆盖其上，夹上夹板。

④将夹板放入转膜槽中，灌满转膜液以淹没凝胶。

⑤转膜槽接通电源，电压设为250V，电流设为0.2A。转移1.5h。

⑥转移结束后，取出PVDF膜。

4)封闭

把蛋白膜放置到预先准备好的TBST中，洗去膜上的转膜液。蛋白膜放入封闭液中，在摇床上缓慢摇动，室温封闭1-4h。

5)一抗孵育

①用TBST洗涤蛋白膜3次，每次5min。

②封口机将薄膜封入杂交袋中，加上一抗：Anti-FBXW5 Antibody(ATLAS，HPA038504)。

③将杂交袋放入4℃摇床中，过夜。

6)二抗孵育

①将薄膜取出用TBST洗涤3次，每次5min，回收一抗。

②将膜放入对应的加有二抗Goat Anti-Mouse lgG(H+L)(Jackon，115-035-003)的二抗稀释液中，避光孵育1h。

7)蛋白检测

二抗孵育后用TBST洗涤3次，每次5min。利用Bio-Rad Chemi Doc XRS+凝胶成像系统检测目的条带。

油红O染色具体操作：

1)样品组和对照组用1×PBS洗涤2次，加入300μl 3％多聚甲醛固定20min；

2)加入1×PBS洗涤2次后，加入60％异丙醇漂洗10s；

3)加入1×PBS洗涤2次，通风橱吹干；

4)每孔500μl加入油红O染色1h；

5)加入1×PBS洗涤2次，60％异丙醇进行分选，再加入1×PBS洗2次；镜检，拍照。

【实施例1】建立FBXW5过表达的L02稳转细胞系

根据实施方式中L02稳定转染细胞系建立的步骤，建立FBXW5过表达的L02稳转细胞系。之后收集细胞，WB验证FBXW5在L02细胞中的表达情况。结果如图1所示，可见感染FBXW5过表达慢病毒系统的L02细胞中，FBXW5的表达显著升高，说明FBXW5过表达的L02稳转细胞系建立成功。

【实施例2】FBXW5过表达对L02细胞脂肪堆积的影响

1.实验细胞分组：正常L02细胞对照组、FBXW5稳定过表达L02细胞对照组、正常L02细胞实验组、FBXW5稳定过表达L02细胞实验组。

2.脂肪肝细胞模型的建立与检测：待细胞贴壁，细胞培养到50％愈合度之后，向两个实验组中加入0.5mM棕榈酸酯(PA)刺激，对照组中加入同等量的BSA，在刺激的0、3、6、9、12h分别收集各组细胞样品，进行油红O染色。

油红O染色结果如图2所示，对照组细胞无明显红色，而当实验组中加入PA进行刺激后，实验组中红色脂肪滴的面积相比于对照组显著增加，且FBXW5稳定过表达L02细胞中的红色脂肪滴的面积增加的更为明显。该结果说明，FBXW5过表达可恶化因PA刺激产生的脂质沉积。

【实施例3】FBXW5敲除对肝细胞脂肪堆积的影响

(1)实验细胞分组：WT原代肝细胞对照组、FBXW5-KO原代肝细胞对照组、WT原代肝细胞实验组、FBXW5-KO原代肝细胞实验组。

(2)脂肪肝细胞模型的建立与检测：待细胞一贴壁，细胞培养到50％愈合度之后，向两个实验组中加入0.5mM棕榈酸酯(PA)刺激，对照组中加入同等量的BSA，在刺激的0、3、6、9、12h分别收集各组细胞样品，进行油红O染色和RT-PCR检测。

油红O染色结果如图3所示，对照组细胞无明显红色，实验组在加入PA刺激后，细胞中红色脂肪滴的面积增多，但FBXW5-KO原代肝细胞实验组中的红色脂肪滴的面积较WT原代肝细胞实验组有显著的降低。该结果说明FBXW5敲除可抑制PA刺激诱导的脂质沉积。图4所示RT-PCR检测结果显示，FBXW5-KO原代肝细胞实验组TNFα的mRNA水平较WT原代肝细胞实验组的也有显著下降。

上述结果显示FBXW5基因过表达可显著促进肝细胞脂质堆积；而FBXW5基因敲低可显著抑制肝细胞脂质堆积，抑制脂肪肝病的发生发展，说明FBXW5基因对脂肪肝病具有显著的恶化作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 武汉大学

<120> FBXW5及其抑制剂在制备治疗脂肪肝及相关疾病药物中的应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

taggcaattc taccgctact acc 23

<210> 2

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aaacggtagt agcggtagaa ttg 23

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gatccctaat acgactcact atag 24

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

aaaaaaagca ccgactcggt 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tgggcagaat gtcacgatgg 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

attgagagcc gacagacagc 20

<210> 7

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tcgggtttaa acggatccat ggacgagggc ggcacgcc 38

<210> 8

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gggccctcta gactcgagtc agcgcctctg gctggcaa 38

Claims

1. FBXW5基因作为药物靶标在筛选预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用，其特征在于，所述药物是抑制FBXW5基因表达的药物，所述的药物具有抑制肝脏脂质蓄积的功能，所述的应用是非诊断和非治疗的。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制FBXW5基因表达的药物是抑制FBXW5蛋白质水平的抑制剂、或者抑制FBXW5基因的mRNA水平的抑制剂，其抑制活性是可逆的或不可逆的。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制FBXW5蛋白质水平的抑制剂包括抑制FBXW5蛋白质水平的多肽。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制FBXW5基因的mRNA水平的抑制剂是其siRNA、miRNA、shRNA，或者其它能够抑制FBXW5基因的mRNA水平的多肽。