CN108210529A - 锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肺癌药物方面的应用 - Google Patents

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朱华
笪舫芳
何瑞婷
戴忠华
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Abstract

本发明涉及药物应用领域,特别是锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肺癌药物的应用。本发明所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。本发明提供的锡叶藤醇提取物对肺癌细胞的抑制作用明显优于其他类型提取物。当锡叶藤醇提取物的作用浓度为80~160mg/L,对肺癌细胞的抑制作用效果与顺铂持平甚至优于顺铂。

Description

锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肺癌药物方面的 应用
技术领域
本发明涉及药物应用领域,特别是锡叶藤及其提取物在制备治疗和/ 或预防肺癌药物的应用。
背景技术
锡叶藤为五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根。其性凉,味苦,具有收敛止泻,消肿止痛之功。常用于治疗腹泻、痢疾、脱肛等症。其药材中富含鞣质、黄酮、萜类类物质等多种生物活性成分,具有明显的抑菌、抗炎、抗肿瘤等活性[国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草[M].第3卷.上海:上海科学技术出版社,1999:510-511.]。锡叶藤药材资源丰富,我国南部与西南各省均产,为民间常用的中草药之一。
如公布号为CN106236795A的中国专利申请公开了一种具有抑菌作用的中药制剂,特别是一种以锡叶藤(五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根)的提取物制成的中药制剂;研究结果表明,该中药制剂能对贺氏痢疾杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和伤寒杆菌具有抑菌活性作用,显示出良好的抑菌消炎作用。
目前尚未有锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肺癌药物的应用的报道。
发明内容
为了克服现有技术存在的不足,本发明提供锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肺癌药物的应用。
本发明所述锡叶藤,均为五桠果科锡叶藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
锡叶藤在制备治疗和/或预防肺癌药物的应用。
优选地,取锡叶藤,加溶剂提取,得锡叶藤提取物。
优选地,所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。
优选地,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入纯化水,在90~110℃煎煮1~2h,重复2~4次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入体积百分比为40~60%的乙醇,在70~90℃水浴回流提取1~2h,重复2~4次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取 10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20 次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取10~20 次,每次40~60mL,正丁醇萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:25加入纯化水,在100℃煎煮1h,重复3次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:25加入体积百分比为50%的乙醇,在80℃水浴回流提取1h,重复3次,合并,即得。
优选地,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为50%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
优选地,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为50%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取15次,每次50mL,正丁醇萃取液合并,即得。
本发明还提供一种药物组合物,所述药物组合物由所述锡叶藤与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
本发明还提供一种药物组合物,所述药物组合物由任一所述锡叶藤提取物与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
与现有技术比较,本发明的方法具有以下优点:
1.本发明提供的锡叶藤提取物对肺癌细胞具有明显的抑制作用,能有效应用于肺癌的治疗和/或预防。
2.本发明提供的锡叶藤醇提取物对肺癌细胞的抑制作用明显优于其他类型提取物。
3.当锡叶藤醇提取物的作用浓度为80~160mg/L,对肺癌细胞的抑制作用效果与顺铂持平甚至优于顺铂。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1锡叶藤水提取物的制备
取粉碎后的锡叶藤药粉200g,每次加入5000mL纯水,在100℃煎煮1h,重复3次,合并3次所得提取液,浓缩成水提取物浸膏,使每1g水提取物浸膏含生药量为7.0771g。
实施例2锡叶藤醇提取物的制备
取粉碎后的锡叶藤药粉100g,每次加入2500mL,50%乙醇,在80℃水浴回流提取1h,重复3次,合并3次所得提取液,浓缩得锡叶藤乙醇提取物浸膏,使1g醇提取物浸膏含生药量为6.9638g。
实施例3锡叶藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物的制备
取实施例2所得醇提取物浸膏,分散于50%乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取15次,每次50mL,萃取液合并,得锡叶藤乙酸乙酯提取物浸膏;剩余物用正丁醇连续萃取15次,每次50mL,萃取液合并,得锡叶藤正丁醇提取物浸膏。随后在80℃浓缩,使1g乙酸乙酯提取物浸膏含生药量为52.0833g,使1g正丁醇提取物浸膏含生药量为41.6667g。
实施例4对肺癌细胞A549的抑制作用实验
(1)实验材料:
人肺癌细胞A549细胞:购于上海中国科学院细胞库。培养条件:将细胞培养于含10%优质胎牛血清和1%青霉素-链霉素双抗的DMEM培养基中, 2-3d换液1次,细胞80%融合度时传代,可按照1:3传代比例进行,于37℃, 5%CO2及饱和湿度培养箱中培养。
水提取物母液及稀释液:称取实施例1所得水提物浸膏100mg,溶于 1mLDMSO中,过滤除菌即配制为100mg/mL的母液,置于4℃冰箱保存备用。用时用DMSO分别稀释为10、20、40、80、160、400、600、800mg/L。
醇提取物母液及稀释液:称取实施例2所得醇提物浸膏100mg,溶于 1mL DMSO中,过滤除菌即配制为100mg/mL的母液,置于4℃冰箱保存备用。用时用DMSO分别稀释为10、20、40、80、160、400、600、800mg/L。
乙酸乙酯提取物母液及稀释液:称取实施例3所得乙酸乙酯提取物浸膏100mg,溶于1mL DMSO中,过滤除菌即配制为100mg/mL的母液,置于 4℃冰箱保存备用。用时用DMSO分别稀释为10、20、40、80、160、400、 600、800mg/L。
正丁醇提取物母液及稀释液:称取实施例3所得正丁醇提取物浸膏 100mg,溶于1mL DMSO中,过滤除菌即配制为100mg/mL的母液,置于4℃冰箱保存备用。用时用DMSO分别稀释为10、20、40、80、160、400、600、 800mg/L。
顺铂母液配制及稀释液:称取顺铂(齐鲁制药有限公司)25mg溶于 8.33mL DMSO中,过滤除菌配制为3mg/mL母液,置于4℃冰箱保存备用。用时用DMSO稀释为60ug/mL。
(2)实验方法:
1)取A549细胞,计数调整细胞浓度至1×105/mL。
2)分别接种于96孔板中,每孔100μL,随后将96孔板移入培养箱中培养,孵育过夜,以使细胞完全贴壁。
3)次日,将稀释为10、20、40、80、160、400、600、800mg/L的水提取物稀释液、醇提取物稀释液、乙酸乙酯提取物稀释液、正丁醇提取物稀释以及60ug/mL的顺铂稀释液加入到96孔板相应孔中,每孔10μL,每个样品 3个复孔。
4)同时设置正常组(未经处理的细胞、培养基)和空白组(培养基),然后将细胞在培养箱中孵育48h。
5)随后每孔加入10μL的CCK-8溶液,于培养箱内孵育1-4h。
6)用酶标仪测定在450nm处的吸光度OD值。
并根据以下公式计算药物对细胞的存活率。
存活率=[(A-X)/(A-A0)]×100%
其中,A代表空白组的吸光度值,A0代表正常组的平均吸光度值,X 代表药物处理组的平均吸光度值。最后,使用Graphpad Prism 5.0软件拟合生长抑制曲线并计算IC50值。
(3)实验结果
表1各种锡叶藤提取物对肺癌细胞A549存活率的作用影响
由表1可知,当锡叶藤醇提取物的作用浓度为80~160mg/L,对肺癌细胞的抑制作用效果与顺铂持平甚至优于顺铂。
表2各种锡叶藤提取物对肺癌细胞A549的IC50
提取物 IC50浓度(生药g/L)
乙酸乙酯 11.30
正丁醇 5.89
醇提取物 0.68
水提取物 1.70
由表2可知,各类提取物IC50从小到大依次为醇提取物<水提取物<正丁醇<乙酸乙酯。因此,本发明提供的锡叶藤醇提取物对肺癌细胞的抑制作用明显优于其他类型提取物。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.锡叶藤在制备治疗和/或预防肺癌药物的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,取锡叶藤,加溶剂提取,得锡叶藤提取物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤提取物选自以下任一种或一种以上的混合:锡叶藤水提取物、锡叶藤醇提取物、锡叶藤乙酸乙酯提取物、锡叶藤正丁醇提取物。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤水提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入纯化水,在90~110℃煎煮1~2h,重复2~4次,合并,即得。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤醇提取物由以下方法制得:取锡叶藤并粉碎,每次按料液比1:20~30加入体积百分比为40~60%的乙醇,在70~90℃水浴回流提取1~2h,重复2~4次,合并,即得。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤乙酸乙酯提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液合并,即得。
7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述锡叶藤正丁醇提取物由以下方法制得:取所述锡叶藤醇提取物分散于体积百分比为40~60%的乙醇中,用乙酸乙酯连续萃取10~20次,每次40~60mL,乙酸乙酯萃取液舍去;剩余物用正丁醇连续萃取10~20次,每次40~60mL,正丁醇萃取液合并,即得。
8.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物由权利要求1所述锡叶藤与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
9.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物由权利要求2~7任一所述锡叶藤提取物与药学上可接受的辅助性成分或治疗性成分配伍而成。
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