CN102283257A - 白花地胆草在防治烟草青枯病上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及白花地胆草在农业上的应用。白花地胆草全草的乙醇提取物、水提取物均对烟草青枯病原菌有较好的拮抗活性。该提取物为天然植物源成分，替代化学农药，可减少化学农药的环境污染和残留，是农业上理想的生物杀菌剂。白花地胆草全草做绿肥使用，对烟草青枯病的发生有良好的防控效果，并能促进烟草植株生长，具有良好经济效益、社会效益和生态效益。

Description

白花地胆草在防治烟草青枯病上的应用

技术领域

本发明涉及植物活性成分的提取方法及其在植物病害方面的应用，特别是涉及白花地胆草在防治烟草青枯病上的应用。

背景技术

白花地胆草(Elephantopus tomentosus Linn.)别名牛舌草(海南岛)，属菊科(Compositae)地胆草属(Elephantopus)植物，该属植物约有30余种，大部分产于美洲，少数分布于非洲、亚洲及大洋洲。我国仅有地胆草和白花地胆草2个种，分布于华南和西南地区，生于山坡旷野、路边或灌丛中。

白花地胆草是中药苦地胆的植物来源。民间认为苦地胆具有清热、凉血、利湿的功效。早在《岭南草药志》中就有记载白花地胆草用于治疗黄疽；《中国民族药志》中记载地白花胆草配合火烧花树皮使用，可以治疗疟疾；《全国中草药汇编》记载白花地胆草配合小叶榕使用可以治疗眼结膜炎。我国西南地区少数民族和东南亚、南美洲以及非洲一些国家民间都喜用这一药物，其活性成分及应用已有大量报道。现代药理学研究表明白花地胆草有抗菌、抗炎、保肝、抗肿瘤、抗糖尿病、解热和降血压等药理活性。Sim等人对菲律宾产白花地胆草煎剂抑菌实验表明，其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有强烈的体外抑制作用。我们发现海南产白花地胆草全草乙醇提取物、水提取物均具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性和抗金黄色葡萄球菌活性。

烟草青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的系统侵染性病害，广泛分布于热带、亚热带及温带地区，在我国南方各省市均有严重发生。烟草青枯病是烟草上一种典型的维管束病害，烟株一旦染病往往造成整株死亡。目前该病造成的损失已居各类病害第四位，因此必须重视该病的防治工作。由于生产上抗病品种匮乏，轮作也较难大面积实施，因此筛选有效的药剂成为该病防治研究的一项重要内容。

目前对烟草青枯病还没有理想的防治措施，农业防治、抗病育种和化学防治等对防治青枯病发有一定的作用，但在高温高湿产烟区青枯病常暴发流行，同时该病有时还与黑胫病、赤星病等其他病害混合发生，从而导致一些抗青枯病品种抗性丧失。生产上长期和大量使用化学药剂防治该病，病原菌抗药性增强，防效下降，用药量增加，烟叶农药残留和环境污染严重。与化学农药相比，生物农药选择性强，无污染，不易产生抗性，生产原料广泛，抑菌效果持久、稳定，对人体无害，是一种具有广阔前景的绿色农药。我们发现海南产白花地胆草全草乙醇提取物、水提取物均具有拮抗烟草青枯病原菌的活性。

同时，现有化肥和复合肥容易造成土壤板结，地力下降和土壤污染，威胁生态农业发展等不足之处，绿肥原料易得，有机碳占干物重的40％左右，肥效高，不板结和污染土壤。施入土壤后可以增加土壤有机质，改善土壤的物理性状，提高土壤保水、保肥和供肥能力，减少养分损失，保护生态环境。采用具有抗烟草青枯病活性的白花地胆草作为种植烟草的绿肥还改善农作物茬口，减少病害发生。

白花地胆草种质资源丰富，广泛分布于我国海南、广东、广西、台湾等省，目前，其提取物在防治植物病害及作为绿肥方面的研究及应用尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种白花地胆草活性成分提取物在植物病害防治上的应用。本发明的另一目的是提供一种白花地胆草抗植物病害活性成分的提取方法。本发明的又一目的是提供一种白花地胆草作为烟草大田绿肥的制备和使用方法。

本发明所采用的技术方案：

白花地胆草活性成分的提取方法：取粉碎后的白花地胆草全草为原料，用清水洗净，晒干，粉碎，加入乙醇至浸没白花地胆草原料；冷浸法提取，共提取3次，每次提取5d～7d，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草乙醇提取物。取粉碎后的白花地胆草全草为原料，用清水洗净，晒干，粉碎，加水煮沸提取3次，每次提取1h～3h，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草水提取物。

白花地胆草绿肥的制备方法：取白花地胆草全草在湿度30-60％下，于45-50℃条件下自然发酵5-10天，烘干至水分含量在10％一下，得到绿肥。

白花地胆草绿肥的另一种制备方法：在种植烟草的耕地中先种植白花地胆草，成株期时通过犁地将其埋于土壤中，得到所需绿肥，再种植烟草。

本发明工艺简单，所得白花地胆草活性成分提取物用于农业病原菌的防治具有防治效果好、防治成本低、无污染、无残留的特点，具有良好的社会效益和生态效益。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。

实施例1白花地胆草活性物质的提取

采集白花地胆草全草240.0kg，用清水洗净，晒干，粉碎，原料一半用乙醇浸泡7天，冷浸法提取，共提取3次，每次提取5d～7d，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草乙醇提取物浸膏1453.0g。另一半，加水煮沸提取3次，每次提取1h～3h，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草水提取物1643.0g。

实施例2白花地胆草活性成分抗烟草青枯病原菌活性试验

采用实施例1的白花地胆草活性物质，分别将乙醇提取物、水提取物编号为1、2，加入有机溶剂三氯甲烷，配制成1mg/20μL的样品溶液，各取1.6μl测定其抗烟草青枯病原菌的活性。阳性对照选用山东海讯生物化学有限公司生产的总有效成分含量为50％的多菌灵。

烟草青枯病原菌用牛肉膏固体培养基活化，用其液体培养基培养病原菌备用(浓度约1×10⁷)。刚灭菌的固体牛肉膏培养基冷却至50-60℃(不烫手)，每在200mL培养基中加2000μL烟草青枯病原菌培养液，充分摇匀，倒平板待用。待平板凝固后按上述方法和剂量点接待测样品和对照溶剂。将上述处理平板于28℃下培养2天，用抑菌圈直径大小表示样品的拮抗活性。

试验结果表明，本发明方法制备的白花地胆草乙醇提取物、水提取物均对烟草青枯病原菌表现出明显的抑制作用(表1)。

表1白花地胆草提取物抗烟草青枯菌抑制活性

实施例3白花地胆草活性物质抗烟草青枯病原菌大田试验

设置防治田和空白对照田，防治田分开施用实施例1中生产的乙醇提取物、水提取物，将其加入乙醇配制成为1g/20L的杀菌剂。空白对照田不做处理，4次重复。

试验采用随机区组排列，每小区栽烟20株，四周设置保护行。防治田分别采用实施例3中杀菌剂，在施药前1h稀释灌根，施药时间为：发病初期开始，每10d灌根1次，连灌2次，每株灌根30-40ml。在每次灌根前调查每个烟株发病率和病情指数，并对所调查的数据进行统计分析，比较2种药剂对烟草青枯病抑制的差异性。经过连续2年的小区药效试验表明：施用白花地胆草的乙醇提取物作为药剂后，随着时间推移，青枯病的发病速度和危害程度明显降低，水提取物次之(表2)。

表2两种药剂处理对烟草青枯病的抑制效果

注：表中数据均为平均值。

实施例4白花地胆草作为绿肥的制备方法

取白花地胆草全草在湿度30-60％下，于45-50℃条件下自然发酵5-10天，烘干至水分含量在10％一下，得到绿肥。

实施例5白花地胆草作为绿肥的制备方法

在种植烟草的耕地中先种植白花地胆草，成株期时通过犁地将其埋于土壤中，得到所需绿肥，再种植烟草。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.白花地胆草在防治植物病害中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述植物病害为烟草青枯病。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：白花地胆草制成杀菌剂和绿肥。

4.如权利要求3所述的杀菌剂，其特征在于：所述杀菌剂由白花地胆草全草为原料经由乙醇提取法、水提取法制备得到。

5.如权利要求4所述的杀菌剂，其特征在于：所述乙醇提取法包括以下过程：取粉碎后的白花地胆草全草为原料，加入乙醇至浸没白花地胆草原料；冷浸法提取，共提取3次，每次提取5d～7d，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草乙醇提取物。

6.如权利要求4所述的杀菌剂，其特征在于：所述水提取法包括以下过程：取粉碎后的白花地胆草全草为原料，加水煮沸提取3次，每次提取1h～3h，过滤合并滤液浓缩成膏状，得到白花地胆草水提取物。

7.如权利要求3所述的绿肥，其制备方法为：取白花地胆草全草在湿度30-60％下，于45-50℃条件下自然发酵5-10天，烘干至水分含量在10％一下，得到绿肥。

8.如权利要求3所述的绿肥，其制备方法为：在种植烟草的耕地中先种植白花地胆草，成株期时通过犁地将其埋于土壤中，得到所需绿肥，再种植烟草。