CN108210512A - 熟地多糖及其衍生物的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物在制备治疗化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药物中的应用；以及熟地多糖及其衍生物的制备方法。采用本发明的方法制备的熟地多糖及其衍生物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等剂型内服，可以明显改善化疗后或化疗期间体重下降、腹泻、绒毛隐窝损害等症状，可以有效治疗化疗性肠道黏膜炎或减轻化疗相关的疲劳。

Description

熟地多糖及其衍生物的制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中草药熟地的新用途，尤其是熟地多糖及其衍生物的制备方法和应用。

背景技术

地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)的新鲜或干燥根茎，始载于《神农本草经》，列为上品，熟地黄是经生地黄炮制而成，性微温，具有滋阴补血、益精填髓的功效，是临床常用的补肾益精中药。熟地中熟地多糖含量较高，为其主要活性成分之一。药理研究表明熟地多糖具有护肝、防辐射及抗缺氧等生物活性。目前，熟地多糖正逐渐成药理研究及开发新药的热点。

化疗后所导致的消化道黏膜炎的发生率为40％，尤其是应用长春新碱、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、依托泊苷等化疗药时黏膜炎的发生率为90％。根据化疗方案不同，胃肠道黏膜炎(gastrointestinal mucositis，GIM)的发生率可达40％-76％，成为近年来肿瘤支持治疗的研究热点。50％～80％经5-FU化疗患者发生肠道粘膜炎，严重的炎症、溃疡、及出血可发生在胃肠道任何部位，尤其好发于小肠。严重的不良反应常导致化疗的中断或推迟，严重影响化疗的效果。

目前已有很多学者采取不同的治疗方法进行研究，但至今尚无特效疗法，用盐酸雷莫司琼(RAM)是化疗性肠道黏膜炎减轻症状的主要手段。虽然RAM能不同程度地减轻症状，但其上市前进行安全性评价显示有约5％的患者会出现不良反应。主要的不良反应包括发热、头痛、头重、胸闷、呼吸困难、喘鸣、颜面潮红、发红、瘙痒、发绀、血压降低甚至休克等。此外，在国外有使用RAM类药物出现癫痫样发作的报告。

化疗性肠道黏膜炎基本病机是肾精亏损，胃肠运化无源。化疗药损耗肾精，使机体精气匮乏，肠道反应亦与中医肾脏关系密切，因此，补肾益精是治疗化疗性肠道黏膜炎的根本。

中医药治疗是中国传统特色疗法，在化疗联合中医中药治疗中的作用逐渐被大家认识。但是针对肿瘤化疗后导致的机体炎症性肠病及疲劳症等疾病的治疗尚未见报道。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供熟地多糖及其衍生物的一种新用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

作为本发明的第一个方面，本发明提供了熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物在制备治疗化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药物中的应用。

本发明涉及熟地多糖及其衍生物的新用途，具体涉及熟地多糖及其衍生物在制备治疗化疗性肠道黏膜炎、化疗后疲劳的药物及药物制剂，以及制备对于胃肠功能减退、免疫力低下方面有保健作用的保健食品或保健食品添加剂。其中所述的药物可以是熟地多糖与常规用量的医学上可接受的辅料制成的内服制剂，或以熟地多糖为原料接受蛋白质、维生素、脂肪酸为辅料的任何一种药剂学上的剂型，或食品(例如软糖)等。

作为本发明的第二个方面，本发明提供了熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物在制备减轻化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的保健品或保健品添加剂中的应用。应当说明的是，本发明中的保健品可以是保健食品，也可以是保健药品。

优选地，所述化疗性肠道黏膜炎的症状包括化疗期间或化疗后腹泻、体重减轻、细胞组织学改变中的至少一种。

优选地，所述细胞组织学改变包含空肠绒毛长度变化、隐窝深度变化、空肠绒毛长度和隐窝深度的比值变化中的至少一种。

优选地，所述化疗相关的疲劳的症状包含化疗期间或化疗后血红蛋白降低、白细胞数降低、肝糖原降低、肌糖原降低、血乳酸增高、血清尿素氮增高、精神不振、代谢下降、体弱易病、食欲不振、免疫力低下中的至少一种。

作为本发明的第三个方面，本发明提供了一种用于治疗化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药物，所述药物中包含熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物。

作为本发明的第四个方面，本发明提供了一种用于减轻化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药品、保健品或保健品添加剂，所述药品、保健品或保健品添加剂中包含熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物。

作为本发明的第四个方面，本发明还提供了上述熟地多糖及其衍生物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

干燥熟地粉碎→水提醇沉至少2次→过滤，得沉淀→依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤→干燥→加水复溶→sevage法除蛋白至少5次，得上清液→将所得上清液置于烧瓶中，挥去有机溶剂，浓缩→加入质量浓度为95％的乙醇→过夜→过滤，得沉淀→将所得沉淀置于烧瓶中，加入水复溶解，挥去乙醇→得粘稠状浸膏→将浸膏置于真空环境下，冷冻干燥→得到所述的熟地多糖。

其中，水提醇沉的次数可以根据需要调整，可以是2次，也可以是3次，4次，甚至更多次；sevage法除蛋白的次数至少为5次，可以根据需要调整为6次、7次、8次、9次或10次，甚至更多次；95％的乙醇的加入量优选为上清液的浓缩液的5倍体积；优选地，采用旋转蒸发仪挥去有机溶剂或乙醇；由上述方法提取的熟地多糖的质量百分含量为90-95％。

优选地，所述sevage法中采用的溶剂为体积比为5：1的氯仿：正丁醇的混合液。

作为本发明的第五个方面，本发明还提供了一种熟地多糖的衍生物的制备方法，包括以下步骤：将上述制备方法制得的熟地多糖进行硫酸化、羧甲基化或降解，得到所述熟地多糖的衍生物。

综上所述，本发明的有益效果为：

本发明的熟地多糖及其衍生物制成片剂、胶囊剂、口服液等剂型内服，可以明显改善化疗后或化疗期间体重下降、腹泻、绒毛隐窝损害等症状，可以有效治疗或减轻化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳；其次，熟地多糖相较于中药材中其他成份如黄酮、皂苷、生物碱等，具有无色无味、高效无毒的优点。

附图说明

图1为各组小鼠空肠的H&E染色切片结果图，其中A图：PBS+蒸馏水组(正常组)；B：5-FU+蒸馏水组(对照组)；C：5-FU+HRGP组(化疗+熟地多糖高剂量组)；D：5-FU+MRGP组(化疗+熟地多糖中剂量组)；E：5-FU+LRGP组(化疗+熟地多糖低剂量组)(HE,×100)。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明中的熟地多糖的制备方法一种实施例，包括如下步骤：

取熟地药材适量，烘干，粉粹，过晒(20目)；在上述熟地粉末中加入其质量10倍量体积的纯水，煎煮3次，每次2h，过滤，合并滤液，得熟地水提取液。减压浓缩熟地提取液，至其比重为1.30。在上述浓缩的熟地提取液，边搅拌边加入质量浓度95％乙醇，调节乙醇浓度至质量浓度为75％，静置过夜。待沉淀析出后，以3000rpm离心上述溶液10min，取沉淀加入适量丙酮、乙醇、乙醚反复抽提三次、冷冻干燥，得棕黑色粉末状的白术粗多糖，采用sevage法除蛋白(其中溶剂为氯仿：正丁醇(体积比)＝5：1，振摇1小时，分离，得清液)10次，将其置于烧瓶中，使用旋转蒸发仪挥去有机溶剂，浓缩，加入5倍质量浓度为95％的乙醇，过夜，过滤，得沉淀。将其置于烧瓶中，加入水复溶解，使用旋转蒸发仪挥去乙醇，得粘稠状浸膏，将其真空冷冻干燥，得到熟地多糖。使用硫酸-苯酚法测定含量，检测波长为490nm，该方法提取熟地多糖的质量百分含量为90-95％。

实施例2

本发明中的熟地多糖衍生物的制备方法的一种实施例：

①熟地多糖的硫酸化：在室温条件下，无水吡啶中，单一纯熟地多糖与氯磺酸反应后，经碱中和，透析、冻干可得硫酸化的熟地多糖。

②熟地多糖的羧甲基化：在NaOH水溶液中，单一纯熟地多糖与氯乙酸反应后，经酸中和，透析、冻干可得羧甲基化的熟地多糖。

③熟地多糖的降解产物：在熟地多糖的水溶液中，加入酶或稀酸水解得到熟地多糖的降解产物。

实施例3

制备本发明中软胶囊剂型的具体方法：

按配方量称取实施例1制得的多糖，混合均匀，加入配方量使用色拉油混悬均匀，装入软胶囊机中压制成囊即得。

实施例4

制备本发明中片剂的具体方法：

按配方量称取实施例1制得的多糖，干燥、粉碎，过80目筛，与微晶纤维素、羧甲基淀粉钠过80目筛混合均匀，以5％PVP制粒或干法制粒，整粒，加入硬脂酸镁，压片，包衣，即得。

实施例5

一种富含熟地多糖的功能性软糖，成品软糖中熟地多糖含量大于或等于3g/kg，除熟地多糖以外的其它原辅料的配比按质量计为：甜味剂100、水20～40、胶凝剂2～10、酸味剂0.1～0.5；所用的甜味剂为白砂糖和淀粉糖浆，质量配比为白砂糖∶淀粉糖浆＝1∶(0.4～1)；所用的酸味剂为柠檬酸或苹果酸。

功能性软糖具体的制备方法包括如下步骤：将熟地粗多糖和明胶用其质量1.5～2倍的常温水浸润，然后置于45～55℃的水浴中使之溶化；将琼脂浸泡于其质量20倍的常温水中，待充分溶胀后加热至85～95℃使之溶化；将白砂糖与卡拉胶混合均匀，用其质量0.2～0.4倍的水加热溶化，然后加入淀粉糖浆，加热至沸腾，再加入已溶化的琼脂，在100～115℃条件下熬糖至糖料水分含量为20％～24％时出锅，待糖料温度凉至75～85℃时，加入已溶化的熟地粗多糖和明胶、食用酸，混合均匀，然后经成型、烘干、冷却、包装、检验等工序操作制得成品。超声提取条件为超声频率25kHz、功率200～600w、处理时间10～40min。

实施例6本发明中熟地多糖的药效学实验

1药品、试剂与实验仪器

熟地多糖为实施例1制备而得。5-FU(上海旭东海普药业有限公司，批号：FA140518)；无水乙醇、丙酮、乙醚均为分析纯，购于天津富宇精细化工有限公司；EiclpseNi显微镜(日本尼康)；RM2135型切片机(德国Leica仪器公司)。

2实验动物及实验环境

7周龄SPF级雄性BALB/c小鼠，体重18g～22g(由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(粤)2013-0002)。实验前所有小鼠适应性喂养7天，室温22℃～26℃，相对湿度40％～60％，明暗交替12h，自由饮水、采食。实验动物室保持安静，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。糖原检测试剂盒:南京建成生物工程研究所。全血乳酸检测试剂盒:南京建成生物工程研究所。血红蛋白检测试剂:南京建成生物工程研究所。UV754分光光度计:上海第三分析仪器厂。DK-8D型电热恒温水槽上海森信实验仪器有限公司。

3方法

3.1分组和给药方法

熟地多糖为实施例1制备而得。小鼠随机分为正常(PBS+蒸馏水组)组、模型(5-FU+蒸馏水)组、雷莫司琼(5-FU+RAM)组、熟地多糖组(5-FU+高、中、低剂量熟地多糖组)，每组8只。5-FU相关组给予腹腔注射5-FU(50mg·kg^-1)，第1次给药记为给药第0天，每天上午8:00给药，每天1次，连续给药5次，正常组给药相应体积的蒸馏水；高、中、低多糖组分别给予熟地多糖(RGP)100mg·kg^-1、50mg·kg^-1、25mg·kg^-1，RAM组给予RAM 0.1g·kg^-1，每天上午9:00给药及下午17:00给药各1次，从5-FU给药前2天开始给药，连续7天。

3.2观测指标

3.2.1腹泻和体重情况体重是一个综合系统的考察指标，它反应肠道食物的吸收和水分的吸收等情况。给药第0天开始观测大便的情况和测量体重情况。体重的改变通过体重百分比表示：体重百分比＝第n天的体重*100/第0天的体重。腹泻症状评分：0分，正常；1分，微湿；2分，中等湿度；3分，松散便；4分，水样便。

3.2.2组织学评价末次给药后，空腹12小时，用1％戊巴比妥钠麻醉小鼠，打开腹腔，取新鲜的小鼠空肠始端组织约3cm，4％多聚甲醛溶液固定24h，行脱水、透明、浸蜡后包埋组织，病理切片行苏木精-伊红染色(HE)，镜下观察。通过测量的空肠绒毛长度、隐窝深度、空肠绒毛长度/隐窝深度比值来评价其形态学的改变。另取1段约4cm空肠组织，保存在-80℃条件下，备用。

3.2.3疲劳检测

负重游泳时间是最常用的耐力评判指标；生化指标主要包括血红蛋白、白细胞、血乳酸(LA)、血清尿素氮(SUN)、肝糖原、肌糖原等。

负重游泳时间反应了机体的运动耐受力，负重游泳时间越长，说明机体运动耐受力越好。负重游泳时间可以非常直观地反应机体的抗疲劳状况。

机体长时间剧烈运动血LA会随之增加，从而导致机体p H降低。p H值下降会阻碍神经-肌肉接头的兴奋传递，损害内质网功能，抑制血红蛋白与氧的结合，抑制激素敏感酯酶活性，进而对多种生化过程产生影响，使机体发生疲劳。因此，血LA含量的增加是导致机体疲劳的重要原因，通过减少机体血LA的生成或者是加速血LA的清除速率均可以降低血LA的含量，延缓疲劳的产生。

血清尿素氮(SUN)含量主要反映机体内蛋白质的代谢情况。机体在长时间运动后，体内能源储备糖原物质消耗，就会开始消耗体内蛋白质，从而产生大量的SUN。机体对运动负荷的适应性越低，形成的尿素越多。反之，机体运动后SUN含量越低，表明机体对运动负荷的适应能力强，疲劳的产生得到延缓。

肝糖原和肌糖原是机体重要的能源储备物质。在运动过程中，及时补充糖原储备量，或者是在运动过程中力争节约糖原的消耗，或者在运动过程中糖原恢复的速度加快，这些可以使得机体内的血糖保持长时间的恒定，疲劳的发生就会被推迟。

3.3统计分析

采用软件SPSS 22.0进行统计分析。计量资料用均以表示，采用单因素方差分析，方差齐性检验使用Levene检验，方差齐时，组间两两比较采用LSD法。方差不齐时，组间两两比较采用dunnett T3法，P＜0.05认为差异有统计学意义。

4结果

熟地多糖无任何毒副作用，经小鼠急性毒性实验表明，在灌服3.75g/kg剂量(为成人用量的185倍)后未见死亡。

4.1熟地多糖对化疗小鼠体重的影响

由表1可见。用药后第1天：PBS+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+蒸馏水组体重显著下降(P＝0.000)，5-FU+RAM组(P＝0.000)、5-FU+RGP三组(P＝0.000)小鼠体重显著下降。与5-FU+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+RAM组(P＝0.179)、5-FU+HRGP组(P＝0.431)、5-FU+MRGP组(P＝0.068)、5-FU+LRGP组(P＝0.099)小鼠体重分数无显著差异。

用药第3天时：与PBS+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+蒸馏水组体重显著下降(P＝0.000)，5-FU+RAM组(P＝0.000)、5-FU+RGP三组小鼠体重显著下降。与5-FU+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+HRGP组(P＝0.019)、5-FU+MRGP组(P＝0.002)、5-FU+LRGP组(P＝0.017)小鼠体重分数明显更高，5-FU+RAM组(P＝0.132)体重分数无显著差异。而各干预组间体重无显著差异(P>0.05)。

用药第5天时：与PBS+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+蒸馏水组体重显著下降(P＝0.000)，5-FU+RAM组(P＝0.000)、5-FU+RGP三组小鼠体重显著下降。与5-FU+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+RAM组(P＝0.001)、5-FU+HRGP组(P＝0.001)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)、5-FU+LRGP组(P＝0.044)小鼠体重分数明显更高；与5-FU+RAM组体重相比，5-FU+HRGP组(P＝0.012)体重分数显著更高(P＜0.005)。

以上结果提示，5-FU能使化疗小鼠体重显著减轻，而RAM和RGP对使用5-FU引起的体重减轻的小鼠有一定保护作用，5-FU+HRGP组第5天的体重分数明显高于5-FU+RAM组。

表1熟地多糖及其衍生物对各组小鼠体重的影响(x±s)

注：与PBS+蒸馏水组比较，^**P<0.01；与5-FU+蒸馏水组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与5-FU+RAM组比较，^bP<0.05

4.2 RGP对化疗小鼠大便得分的影响

给药第0、1天各组小鼠的大便得分为0。第1天PBS+蒸馏水组、5-FU+HRGP组、5-FU+MRGP组、5-FU+LRGP组大便湿度适中，5-FU+蒸馏水组、5-FU+RAM组大便干燥，每粒大便体积小。

用药第3天时：PBS+蒸馏水组、5-FU+HRGP组、5-FU+MRGP组、5-FU+LRGP组大便湿度适中，5-FU+蒸馏水组、5-FU+RAM组大便更干燥，每粒大便体积更小。小鼠腹泻得分各组无显著差异。

用药第5天时：PBS+蒸馏水组得分最低，而5-FU+蒸馏水大便得分最高，腹泻症状最严重。与PBS+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+蒸馏水组(P＝0.000)、5-FU+HRGP组(P＝0.001)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)、5-FU+LRGP组(P＝0.001)小鼠腹泻得分无显著差异。与5-FU+蒸馏水组小鼠相比，5-FU+HRGP组(P＝0.010)、5-FU+MRGP组(P＝0.033)小鼠腹泻得分明显更低，5-FU+LRGP组(P＝0.148)小鼠腹泻得分无显著差异。5-FU+RAM组与高、中、剂量的RGP效果相当。

以上结果提示，5-FU导致小鼠腹泻，而RAM、高、中、低剂量的RGP对其腹泻症状有一定缓解作用。5-FU+RAM组与高、中、剂量的RGP效果相当。

表2 RGP对5-FU化疗小鼠腹泻得分的影响

注：与PBS+蒸馏水组比较，^*P<0.05，^**P<0.01；与5-FU+蒸馏水组比较，^#P<0.05，^##P<0.01。

4.3熟地多糖小肠绒毛、隐窝的保护作用

绒毛高度：由表3、图1可知，与PBS+蒸馏水组相比，5-FU+蒸馏水组(P＝0.000)、5-FU+RAM组(P＝0.001)、5-FU+HRGP组(P＝0.014)、5-FU+MRGP组(P＝0.023)、5-FU+LRGP组(P＝0.000)小鼠空肠绒毛长度明显更短，说明5-FU导致小鼠空肠绒毛萎缩、变短。与5-FU+蒸馏水组相比，5-FU+RAM组(P＝0.002)、5-FU+HRGP组(P＝0.000)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)小鼠空肠绒毛长度明显更长，这说明RAM、高剂量和中剂量的RGP能显著抑制5-FU引起的小肠绒毛萎缩现象；而5-FU+LRGP组(P＝0.226)小鼠空肠绒毛长度差异无显著性。与5-FU+LRGP组相比，5-FU+RAM组(P＝0.034)、5-FU+HRGP组(P＝0.003)、5-FU+MRGP组(P＝0.002)小鼠空肠绒毛长度明显更长，说明RGP抑制绒毛缩短效果成一定的量效关系。

隐窝深度：由表3、图1可知，与PBS+蒸馏水组相比，5-FU+蒸馏水组(P＝0.000)、5-FU+RAM组(P＝0.004)、5-FU+LRGP组(P＝0.009)小鼠空肠隐窝深度更大，其差异有显著性，这说明5-FU导致小肠隐窝深度增加。与PBS+蒸馏水组相比，5-FU+HRGP组(P＝0.467)、5-FU+MRGP组(P＝0.326)小鼠空肠隐窝深度差异无显著性；与5-FU+蒸馏水组相比，5-FU+RAM组(P＝0.030)、5-FU+HRGP组(P＝0.000)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)、5-FU+LRGP组(P＝0.013)小鼠空肠隐窝深度更小，其差异有显著性，这说明RAM、RGP对5-FU对小肠隐窝的损害具有保护作用；与5-FU+LRGP组相比，5-FU+HRGP组(P＝0.048)小鼠空肠隐窝深度更小，差异有显著性，这说明高剂量的RGP比低剂量的RGP具有更好的疗效。5-FU+RAM组(P＝0.698)、5-FU+MRGP组(P＝0.082)小鼠空肠隐窝深差异无显著性。与5-FU+RAM组相比，5-FU+HRGP组(P＝0.021)、5-FU+MRGP组(P＝0.037)小鼠空肠隐窝深度更小，其差异有显著性，这说明高剂量RGP、中剂量RGP对5-FU对小鼠小肠隐窝损害的保护作用效果比RAM更为显著。

绒毛高度/隐窝深度比值：由表3、图1可知，与PBS+蒸馏水组相比，5-FU+蒸馏水组(P＝0.000)、5-FU+RAM组(P＝0.000)、5-FU+HRGP组(P＝0.007)、5-FU+MRGP组(P＝0.008)、5-FU+LRGP组(P＝0.000)小鼠空肠绒毛高度/隐窝深度比值更小，比值差异具有显著性，说明5-FU导致肠绒毛高度/隐窝深度比值减小。与5-FU+蒸馏水组相比，5-FU+RAM组(P＝0.002)、5-FU+HRGP组(P＝0.000)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)小鼠空肠绒毛高度/隐窝深度比值更大，比值差异具有显著性，这说明RAM、高、中剂量RGP对5-FU引起小鼠肠绒毛高度/隐窝深度比值减少有一定的抑制作用，而5-FU+LRGP组(P＝0.007)小鼠空肠绒毛高度/隐窝深度比值差异无显著性。与5-FU+LRGP组相比，5-FU+HRGP组(P＝0.000)、5-FU+MRGP组(P＝0.000)小鼠空肠绒毛高度/隐窝深度比值更大，比值差异具有显著性，说明其效果存在一定的量效关系。与5-FU+RAM组相比，5-FU+HRGP组(P＝0.016)、5-FU+MRGP组(P＝0.015)小鼠空肠绒毛高度/隐窝深度比值更大，比值差异具有显著性。

以上结果提示：本研究通过组织病理学证据表明5-FU导致严重的肠道粘膜损害：切片外观上绒毛形态萎缩、缺失；通过测量，绒毛长度缩短、隐窝深度增加、绒毛长度/隐窝深度比下降。而高、中剂量的RGP和RAM能够显著抑制5-FU对空肠的绒毛萎缩、变短，隐窝深度增加、绒毛长度/隐窝深度比下降，高剂量RGP、中剂量RGP对5-FU对小鼠小肠隐窝损害的保护作用效果比RAM更为显著。

表3 RGP对化疗小鼠小肠黏膜形态学参数的影响

注：与PBS+蒸馏水组比较，^**P<0.01；与5-FU+蒸馏水组比较，^#P<0.05，^##P<0.01；与5-FU+RAM组比较，^aP<0.05；与5-FU+LRGP组比较，^bbP<0.01。

5疲劳测试

分别测试上述实验条件下各组的负重游泳时间、血红蛋白、白细胞、血乳酸(LA)、血清尿素氮(SUN)、肝糖原、肌糖原以评价熟地多糖对机体的抗疲劳疗效。熟地多糖组小鼠活泼，精神状态好，皮毛光滑，未见任何不良反应。见表4-6。

表4 RGP对5-FU造模小鼠白细胞(WBC)的影响

与模型组比较，^*P<0.05。与造模前比较，^#P<0.05。与RAM组比较，^bP<0.05。

以上结果提示：高剂量的RGP和RAM能够显著抑制5-FU对白细胞的抑制作用，高剂量RGP对白细胞的保护作用效果比RAM更为显著。

表5 RGP对化疗小鼠力竭游泳时间及运动前后全血乳酸的影响

注：与模型组比较，^*P<0.05。与RAM组比较，^bP<0.05。

以上结果提示：高剂量的RGP相对于RAM能够显著增加小鼠耐力，减少运动后血乳酸堆积，减轻疲劳。

表6 RGP对化疗小鼠血红蛋白、血清尿素氮、肝糖原、肌糖原的影响

注：与模型组比较，^*P<0.05。与RAM组比较，^#P<0.05。

以上结果提示：高剂量的RGP相对于RAM能够显著增加小鼠血红蛋白、肝糖原、肌糖原，减少血清尿素氮，表明RGP可以使机体对运动负荷的适应能力强，延缓疲劳。

综上所述：腹泻、消化吸收障碍是肠道黏膜炎常见的反应。5-FU诱导的肠道粘膜炎模型是常见的实验研究模型，体重和腹泻症状是肠道粘膜炎重要考察指标。目前，临床上常用5-羟色胺受体拮抗剂雷莫司琼(RAM)来预防胃肠道反应的发生。肠道的吸收功能和小肠绒毛高度和小肠隐窝深度有直接的关系。绒毛是食物吸收的场所，绒毛萎缩缩短反应吸收功能的减退。隐窝深度增加是隐窝细胞损害的表现、绒毛长度/隐窝深度比下降综合反应小肠粘膜损害程度加重。本实验发现熟地多糖(RGP)对使用5-FU引起的体重减轻的小鼠有一定保护作用，明显优于RAM组。RAM、高、中、低剂量的RGP对其腹泻症状有一定缓解作用，RAM组与高、中、剂量的RGP效果相当。高、中剂量的RGP和RAM能够显著抑制5-FU对空肠的绒毛萎缩、变短，隐窝深度增加、绒毛长度/隐窝深度比下降，高剂量RGP、中剂量RGP对5-FU对小鼠小肠隐窝损害的保护作用效果比RAM更加显著。

高剂量的RGP和RAM能够显著抑制5-FU对白细胞的抑制作用，高剂量RGP对白细胞的保护作用效果比RAM更为显著。高剂量的RGP相对于RAM能够显著增加小鼠血红蛋白、肝糖原、肌糖原，减少血清尿素氮，RGP可以使机体对运动负荷的适应能力强，延缓疲劳。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物在制备治疗化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药物中的应用。

2.熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物在制备减轻化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药品、保健品或保健品添加剂中的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述化疗性肠道黏膜炎的症状包括化疗期间或化疗后腹泻、体重减轻、细胞组织学改变中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细胞组织学改变包含空肠绒毛长度变化、隐窝深度变化、空肠绒毛长度和隐窝深度的比值变化中的至少一种。

5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述化疗相关的疲劳的症状包含化疗期间或化疗后血红蛋白降低、白细胞数降低、肝糖原降低、肌糖原降低、血乳酸增高、血清尿素氮增高、精神不振、代谢下降、体弱易病、食欲不振、免疫力低下中的至少一种。

6.一种用于治疗化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药物，其特征在于，所述药物中包含熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物。

7.一种用于减轻化疗性肠道黏膜炎或化疗相关的疲劳的药品、保健品或保健品添加剂，其特征在于，所述药品、保健品或保健品添加剂中包含熟地多糖或/和熟地多糖的衍生物。

8.如权利要求1～7任一项所述的熟地多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

干燥熟地粉碎→水提醇沉至少2次→过滤，得沉淀→依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤→干燥→加水复溶→sevage法除蛋白至少5次，得上清液→将所得上清液置于烧瓶中，挥去有机溶剂，浓缩→加入质量浓度为95％的乙醇→过夜→过滤，得沉淀→将所得沉淀置于烧瓶中，加入水复溶解，挥去乙醇→得粘稠状浸膏→将浸膏置于真空环境下，冷冻干燥→得到所述的熟地多糖。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述sevage法中采用的溶剂为体积比为5：1的氯仿：正丁醇的混合液。

10.一种熟地多糖的衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将如权利要求8或9的制备方法制得的熟地多糖进行硫酸化、羧甲基化或降解，得到所述熟地多糖的衍生物。