CN108187041A - 硒化卡拉胶的应用、含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法 - Google Patents

硒化卡拉胶的应用、含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法 Download PDF

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胡云章
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胡凝珠
孙静
乌美妮
李彦涵
李建芳
施建东
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Abstract

本发明涉及硒化卡拉胶的应用、含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法，所述硒化卡拉胶作为佐剂在疫苗中的用量为：每单份疫苗液中含有0.1～1mg的硒化卡拉胶。本发明佐剂原料易得，疫苗制备工艺简单，成本低，性能稳定，毒副作用小，从机体免疫调节的多个方面共同促进免疫应答，有效提高了免疫应答水平，在免疫剂量范围内使用是安全可靠的，能够有效的诱导抗原特异性的体液免疫应答，显著增强抗原特异性的体液免疫反应，效果优于无佐剂，和铝佐剂组相当。

Description

硒化卡拉胶的应用、含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及硒化卡拉胶的应用、含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法，属于免疫学领域。
背景技术
疫苗作为人类抵抗疾病的武器，从传统的病毒疫苗到现在的亚单位、DNA疫苗，发展十分迅速。疫苗佐剂作为增强疫苗免疫效果的物质，随着疫苗产业的发展，对其的研究也越来越受到重要。传统疫苗佐剂虽然使用广泛，但仍具有一些局限性和副作用，如铝佐剂可能导致淋巴疾病和神经毒性，因此研发新型疫苗佐剂具有重要意义。
多糖物质是地球上最丰富的生物大分子物质之一，有许多研究表明多糖能介导机体炎症、自生免疫、病原体感染等多种生理病理过程。卡拉胶(carrageenan)是从海藻中提取的天然硫酸多糖，广泛应用于食品行业。卡拉胶具有炎症刺激作用，被用于各种炎症模型构建，不仅能促进巨噬细胞增殖、增强巨噬细胞吞噬能力、TNF-α分泌，还能通过上调TLR4表达进而激活NF-κB途径。同时也有研究表明卡拉胶能够通过与IL-8结合来刺激TLR4-BCL10介导的固有免疫反应。并且已有研究指出对其进行修饰后，其免疫活性更高。卡拉胶还具有抗HIV、HSV等病毒的抗病毒作用。硒位于金属元素与非金属元素之间，不仅是营养物质，而且对机体免疫也有重要影响。硒多糖具有抗氧化、抗病毒、抗癌等多种生理特性，且硒化后多糖活性能提高。硒化卡拉胶(Kappa-Selenocarrageenan)是由卡拉胶与无机硒(亚硒酸钠、亚硒酸、硒粉)通过酸解或酶解化学合成的，一种新型的有机硒化合物，保留并增强了卡拉胶的生物活性。硒化卡拉胶不仅可以作为硒补充剂，还可增强T、B细胞增殖、增强腹腔巨噬细胞释放的肿瘤坏死因子的活性及增加自然杀伤性细胞(NK细胞)活性，现在也被用于抗HBV病毒、肝癌的治疗。目前，尚未出现将硒化卡拉胶用于疫苗佐剂的研究报道。
发明内容
为解决现有疫苗佐剂存在的价格昂贵、促进免疫应答效果不显著等问题，本发明提供硒化卡拉胶在制备疫苗佐剂中的应用，以及提供一种经济、有效、安全、稳定的含有硒化卡拉胶的疫苗剂及其制备方法。
本发明通过下列技术方案实现：硒化卡拉胶在制备疫苗佐剂中的应用。
所述硒化卡拉胶作为佐剂在疫苗中的用量为：每单份疫苗液中含有0.1～1mg的硒化卡拉胶。
进一步地，作为一个优选，所述硒化卡拉胶用量为0.5mg。
本发明的另一目的还在于提供一种含有硒化卡拉胶的疫苗剂，所述疫苗剂为300μL，由下列组分组成：
单份疫苗液、
硒化卡拉胶0.1～1mg、
生理盐水为余量。
上述含有硒化卡拉胶的疫苗剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)在适量的生理盐水中加入0.1～1mg的硒化卡拉胶，待硒化卡拉胶完全溶解后得佐剂混合液；
(2)在步骤(1)所得佐剂混合液中加入单份疫苗液得到含佐剂的疫苗液；
(3)在步骤(2)所得含佐剂的疫苗液中加入生理盐水至300μL，混合均匀，即得含有硒化卡拉胶的疫苗剂。
所述硒化卡拉胶为市购产品或按常规由卡拉胶与无机硒(亚硒酸钠、亚硒酸、硒粉)通过酸解或酶解化学合成。硒化卡拉胶为硒化天然硫酸多糖，具有硒元素对免疫系统发育的促进和卡拉胶多糖对免疫反应反应的促进。
本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：(1)本发明的硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂原料易得，疫苗制备工艺简单，成本低，性能稳定，毒副作用小，从机体免疫调节的多个方面共同促进免疫应答，有效提高了免疫应答水平，在免疫剂量范围内使用是安全可靠的；(2)硒化卡拉胶佐剂也能够有效的诱导抗原特异性的体液免疫应答，显著增强抗原特异性的体液免疫反应，效果优于无佐剂，和铝佐剂组相当。(3)硒化卡拉胶无明显蓄积毒性作用；Ames试验、骨髓微核试验及小鼠精子畸形试验均未见致突变作用；亚慢性毒性试验中除高剂量(420mg/kg)组动物有体重增长受限，部分动物肝脏呈肝硬化变化，其余各组及生化指标等检验均未见明显异常。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件，文中所述的较佳条件实施方法仅作示范之用。
实施例1
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解0.1mg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗。
另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的甲肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶为市购产品，硒化卡拉胶(99％)购自深圳安泰生物科技有限公司；铝佐剂为Al(OH)3胶体(12.5mg/mL)，由中国医学科学院医学生物学研究所提供；HAV抗原为市购的滴度为256EU/mL 18EU HAV抗原液，购自中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所。
所得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗的免疫试验和效果如下：
A、免疫
将6-8周龄、18-22g的清洁级ICR小鼠随机分为硒化卡拉胶佐剂组、氢氧化铝佐剂组、无佐剂组和空白组，共四组，每组7只；所用氢氧化铝为常用的氢氧化铝胶体佐剂，在人体中的剂量为1.8-2.7mg。
对硒化卡拉胶佐剂组：经皮下多点注射实施例1的含有硒化卡拉胶佐剂的甲肝疫苗至小鼠体内，注射剂量为每只小鼠300μL，其中300μL疫苗中含有硒化卡拉胶100μg，甲肝抗原18EU。
对氢氧化铝佐剂组：将氢氧化铝300μg与甲肝抗原18EU混合后注射用生理盐水加至300μL，经皮下多点注射到小鼠体内，注射剂量为每只小鼠300μL。
对无佐剂组：将甲肝抗原18EU与注射用生理盐水混合至300uL，再经皮下多点注射到小鼠体内，注射剂量为每只小鼠300μL。
对空白组：仅注射注射用生理盐水，注射剂量为每只小鼠300uL。
免疫方案：在第0周经皮下多点注射到小鼠体内，免疫次数为一次。
B、ELISA检测血清抗－HAV IgG水平
在免疫后的第4周、8周、12周、16周，采集小鼠尾静脉血，分离血清，ELISA检测血清抗-HAV IgG水平，按KPL公司生产的小鼠IgG ELISA试剂盒说明书进行检测操作。
C、数据分析
对所获得的实验数据以Graphpad prism5统计软件进行t检验，以P<0.05为差异的统计学意义。
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HAVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第12周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在免疫后12周，产生的抗体水平比无佐剂组水平略高；而铝佐剂组在免疫后8、12、16周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表1。表明硒化卡拉胶可增强HAV抗原特异性体液免疫应答。
表1为使用实施例1提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAV IgG水平(抗体效价值)。
表1
实施例2
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解0.25mg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗。
另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的甲肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝、HAV抗原获得方式同实施例1。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表2。
表2为使用实施例2提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAV IgG水平(抗体效价值)。
表2
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HAVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第12周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在12周的抗体滴度都最高，并显著高于无佐剂组(P<0.05)，差异都有统计学意义；而铝佐剂组在免疫后8、12、16周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表2，表明卡拉胶佐剂组可增强HAV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
实施例3
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解0.5mg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗。
另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3，)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的甲肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝、HAV抗原获得方式同实施例1。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表3。
表3为使用实施例3提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAV IgG水平(抗体效价值)。
表3
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HAVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在8周的抗体滴度都最高，与铝佐剂组相当(P>0.05)；在免疫后8、12周抗体水平高于无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表3。表明卡拉胶佐剂组可增强HAV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂，与铝佐剂组相当。
实施例4
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解1mg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的甲肝疫苗。
另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HAV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的甲肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝、HAV抗原获得方式同实施例1。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表4。
表4为使用实施例4提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAV IgG水平(抗体效价值)。
表4
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HAVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第12周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在12周的抗体滴度都最高，高于无佐剂组；而铝佐剂组在免疫后8、12、16周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表4。表明卡拉胶佐剂组可增强HAV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
实施例5
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解250μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗。
另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的乙肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。乙肝表面抗原为常规的含乙肝表面抗原1μg的市购产品，购自中国医学科学院医学生物学研究所。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的乙肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表5。
表5为使用实施例5提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HBV IgG水平(抗体效价值)。
表5
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HBVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在第8周的抗体滴度都最高，高于无佐剂组；而铝佐剂组在免疫后8、12周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表5。表明卡拉胶佐剂组可增强HBV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
实施例6
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解500μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗。另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的乙肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。乙肝表面抗原为常规的含乙肝表面抗原1μg的市购产品，购自中国医学科学院医学生物学研究所。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的乙肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表6。
表6为使用实施例6提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HBV IgG水平(抗体效价值)。
表6
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HBVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在第4、8周的抗体滴度水平高于无佐剂组(P<0.05)，与铝佐剂组相当(P>0.05)；而铝佐剂组在免疫后8、12周抗体水平高于无佐剂组(P<0.05)。见表6。表明卡拉胶佐剂组可增强HBV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂，与铝佐剂组相当(P>0.05)。
实施例7
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗是：用注射用生理盐水溶解1000μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的乙肝疫苗。另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份HBV抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的乙肝疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。乙肝表面抗原为常规的含乙肝表面抗原1μg的市购产品，购自中国医学科学院医学生物学研究所。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的乙肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表7。
表7为使用实施例7提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HBV IgG水平(抗体效价值)。
表7
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗-HBVIgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在8周的抗体滴度都最高，高于无佐剂组；而铝佐剂组在免疫后第12周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表7。表明卡拉胶佐剂组可增强HBV抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
实施例8
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗是：用注射用生理盐水溶解250μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗。另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3，)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的狂犬疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。狂犬病毒抗原为常规的含狂犬病毒抗原0.125IU的市购产品，购自大连汉信生物制药有限公司。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的狂犬疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表8。
表8为使用实施例8提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗狂犬病毒IgG水平(抗体效价值)。
表8
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗狂犬病毒IgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在8周的抗体滴度都最高，高于无佐剂组；而铝佐剂组在免疫后第8、12周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表8。表明卡拉胶佐剂组可增强狂犬病毒抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
实施例9
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗是：用注射用生理盐水溶解500μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗。另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的狂犬疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。狂犬病毒抗原为常规的含狂犬病毒抗原0.125IU的市购产品，购自大连汉信生物制药有限公司。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表9。
表9为使用实施例9提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗狂犬病毒IgG水平(抗体效价值)。
表9
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗狂犬病毒IgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在第8周的抗体滴度水平高于无佐剂组(P<0.05)，与铝佐剂组相当(P>0.05)；而铝佐剂组在免疫后第8、12周抗体水平高于无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表9。表明卡拉胶佐剂组可增强狂犬病毒抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂，与铝佐剂组相当(P>0.05)。
实施例10
本例提供的含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗是：用注射用生理盐水溶解1000μg硒化卡拉胶后，混合充分得多糖衍生物佐剂备用液，多糖衍生物佐剂中按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有硒化卡拉胶多糖衍生物佐剂的狂犬疫苗。另外还设置氢氧化铝佐剂组(AL(OH)3)：用AL(OH)3 300μg，按常规加入每单份狂犬病毒抗原(即动物实验中使用的单次注射剂量)，最后加入注射用生理盐水至300μL，混合均匀，得含有AL(OH)3佐剂的狂犬疫苗。
其中，硒化卡拉胶、氢氧化铝获得方式同实施例1。狂犬病毒抗原为常规的含狂犬病毒抗原0.125IU的市购产品，购自大连汉信生物制药有限公司。
本例所得含有硒化卡拉胶佐剂的狂犬疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表10。
表10为使用实施例10提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗狂犬病毒IgG水平(抗体效价值)。
表10
通过数据分析可以看出，除空白组外，各实验组小鼠免疫4周后，均检测到抗狂犬病毒IgG，并随着时间的延长呈上升趋势，于第8周后达到峰值，此后逐渐下降。硒化卡拉胶佐剂组在8周的抗体滴度都最高，高于无佐剂组；而铝佐剂组在免疫后第8、12周抗体水平高于硒化卡拉胶佐剂组和无佐剂组(P<0.05)，差异有统计学意义。见表10。表明卡拉胶佐剂组可增强狂犬病毒抗原特异性体液免疫应答，具有佐剂效应，其体液免疫增强效果高于无佐剂。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.硒化卡拉胶在制备疫苗佐剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述硒化卡拉胶作为佐剂在疫苗中的用量为：每单份疫苗液中含有0.1～1mg的硒化卡拉胶。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述硒化卡拉胶作为佐剂在疫苗中的用量为：每单份疫苗液中含有0.5mg的硒化卡拉胶。
4.一种含有硒化卡拉胶的疫苗剂，其特征在于：所述疫苗剂为300μL，由下列组分组成：
单份疫苗液、
硒化卡拉胶 0.1～1mg、
生理盐水为余量。
5.权利要求4所述含有硒化卡拉胶的疫苗剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）在适量的生理盐水中加入0.1～1mg的硒化卡拉胶，待硒化卡拉胶完全溶解后得佐剂混合液；
（2）在步骤（1）所得佐剂混合液中加入单份疫苗液得到含佐剂的疫苗液；
（3）在步骤（2）所得含佐剂的疫苗液中加入生理盐水至300μL，混合均匀，即得含有硒化卡拉胶的疫苗剂。
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