CN108186157A - 一种圆口铜鱼的人工授精方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种圆口铜鱼的人工授精方法，包括如下步骤：1）用两个20ml注射器分别抽取20ml的生理盐水和20ml葡糖糖溶液；2）用干燥的吸管吸取雄鱼精液；3）人工授精时先将盐水挤入一塑料盆中，再将精液挤入塑料盆内的盐水中，将精液稀释；4）将雌鱼抱起擦干水分，将鱼卵挤到已稀释的精液上，用羽毛轻轻搅拌使精卵充分混合；5）混合均匀后再将准备好的葡萄糖溶液挤入盆内激活精液；6）1‑2分钟后加入清水清洗鱼卵2‑3次完成受精过程；7）最后将受精卵转入孵化器中进行孵化；本发明主要是采用生理盐水对精子的短期保持，对雌雄不同步的亲鱼有一定的帮助，对雄鱼精量少的亲鱼，能利用生理盐水保存和稀释，利用葡萄糖提供营养，大大提高鱼卵的受精率。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体地说，涉及一种圆口铜鱼的人工授精方法。
背景技术
圆口铜鱼Coreius guichenoti（Sauvage et Dabry）隶属于鲤科、鮈亚科、铜鱼属，地方名有：方头、水密子、圆口、肥沱、方头水密子、沙壳鲫(岷江)、安猫鱼(云南朵美)、鸽子鱼、胡子鱼(金沙江中游)、麻花鱼等。常见于长江上游干流、嘉陵江中下游、沱江、金沙江下游、乌江下游等水系（丁瑞华, 1995; 刘乐和等, 1990），是长江上游特有鱼类和重要的经济鱼类。圆口铜鱼肉嫩肥美，富含脂肪(丁瑞华, 1995），是长江上游重要的经济鱼类和江河渔业的重要捕捞对象。
然而由于过度捕捞、电站建设对圆口铜鱼产卵场的破坏及工业的快速发展导致的水域污染等因素的影响，使得圆口铜鱼的野生资源急剧下降（杨志，2009），因此圆口铜鱼物种保护工作亟待开展。鱼类人工繁殖及增殖放流是目前开展物种保护、增加种群数量最有效的措施之一。完善的野生亲鱼的采集与驯养、人工繁育和大规模苗种培育是保证鱼类人工增殖放流工作顺利进行的先决条件。目前关于圆口铜鱼的研究报道主要涉及生物学（余志堂等，1984；郑曙明，1988；黄琇和邓中粦，1990；郑曙明和吴青，1998；张国华等，1999；葛清秀等，2001；张贤芳等，2005；）、生理生化（王友慧等，2005；王友慧等，2005；李荣等，2008；刘军等，2008；吴斌等，2008）、分子遗传学（廖小林， 2006；徐树英，2007；袁希平等，2008；孔焰，2010）、资源量（虞功亮等，2002；杨志，2009；杨志等，2011）、生态习性（刘乐和等，1990；曹文宣，2008）等，但人工繁殖方面的研究尚未见报道。
目前圆口铜鱼的人工繁殖还处在一个初级研究阶段，内塘培育的亲鱼成熟率低，特别是雄鱼的精量极少，且雌雄大都不同步，常规的干法授精方法是先挤卵后挤精液，往往把卵挤出后再挤精液时精液很难挤出或很少，严重影响受精率。
为解决上述问题，本发明提供了一种圆口铜鱼的人工授精方法，该方法简单，操作方便，克服了以上的不足，在亲鱼成熟率差、不同步、精量少的情况下能有效提高圆口铜鱼的受精率。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的不足，目的是提供一种圆口铜鱼的人工授精方法，该方法在圆口铜鱼的繁殖时将雄鱼精液在生理盐水中进行短期保存，在雌鱼顺利排卵时利用等量的葡萄糖用水激活，保证了精子的活力，提高了鱼卵的受精率，操作简单、方便。
一种圆口铜鱼的人工授精方法，包括如下步骤：
（1）试剂的准备：
A、分别准备一定质量浓度的生理盐水和葡萄糖注射液各一瓶，并将其放入与催产水温一致的水体中浸泡，备用；
B、准备MS222麻醉剂一袋，备用；
（2）工具的准备：
A、准备内壁光滑的塑料盆1-2个、鱼夹2-4个、20ml注射器2-4个、干燥的塑料吸管2-5个、毛巾2-4条、方形塑料盒2个、羽毛3-5根；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，按50-100ppm的浓度往其中一个塑料盒中加入MS222麻醉剂，然后将药物混合均匀备用；
C、准备一台增氧泵；
（3）人工受精操作：
A、将注射催产药物达到效应时间、并开始发情排卵的雌雄亲鱼拉网集中，然后挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼放入盛有麻醉剂溶液的塑料盒中麻醉；
B、取一个20mL的注射器从调节好水温的生理盐水注射液中吸取20ml生理盐水挤到准备好的塑料盆中；用另一个20ml注射器吸取等量的葡萄糖注射液备用；
C、取完全麻醉的一尾雄鱼放到鱼夹中，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分，保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里，用手轻压鱼腹部挤出精液，并用塑料吸管将雄鱼精液吸到塑料管内，然后再将精液挤到盛有生理盐水的塑料盆中，之后将亲鱼放到另一个盛有清水的塑料盒中使其缓慢苏醒；接着选一尾雌鱼放到鱼夹中，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分，保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里，用手轻压鱼腹部挤出卵子，卵子挤出到装有生理盐水和精液的塑料盆中，之后将亲鱼也放到盛有清水的塑料盒中并开启增氧泵增氧使其缓慢苏醒；最后，用羽毛轻轻搅动含有精液和卵子的生理盐水10-20秒，使其充分混合均匀，接着将20ml的葡萄糖注射液挤入盆中的精卵上，再用羽毛轻轻搅拌20-30秒使精子充分激活并使卵子受精；
D、往上述盛有精液和卵子的塑料盆中加入1-2kg清水，搅拌10秒左右后静置1-2分钟，最后用大量清水清洗受精卵2-3次，然后移到孵化器中进行孵化。
优选的，所述生理盐水的质量浓度为0.9%，葡萄糖注射液的质量浓度为5%；二者的体积均为250-500mL。
优选的，所述塑料盒中清水的装入量为塑料盒体积的1/2。
优选的，所述方形塑料盒盛水的容量大于50kg。
优选的，塑料盆b中精液的挤入量为2-3滴。
本发明人工授精方法主要通过生理盐水的盐度基本符合亲鱼体液的盐度，能使精液能在其中短时间内得到较好的保存，而葡萄糖又能将其激活并提供营养，提高精子活力，达到较高的受精率的目的。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
1）本发明取材方便，成本低廉，操作方法简单；
2）本发明是采用生理盐水对精子的短期保持，能有效地解决亲鱼雌雄不同步的问题；
3）本发明利用生理盐水对雄鱼精液进行稀释，使精卵迅速混合均匀、达到充分近距离接触、并利用葡萄糖为精子提供营养和能量，提高精子的活力和寿命，有效提高鱼卵的受精率。
具体实施方式：
下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明。应理解，所举实施例的目的在于进一步阐述本发明的内容，而不能在任何意义上解释为对本发明保护范围的限制。
实施例1：
2017年6月22日，在四川省大渡河境内安谷鱼类增殖站，循环水系统催产孵化及苗种培育车间的1口2m培育缸中挑选成熟较好的圆口铜鱼亲鱼4组（雌雄比为2:1）进行人工催产，分两针注射，第一针时间为上午10:00时，第二针为晚上20:00时，催产水温为19.2℃。到第二天14:00时发现亲鱼有追逐发情的迹象，但追逐不明显。到15：00时发现亲鱼追逐明显激烈，将亲鱼捞起检查时发现亲鱼（雌鱼）已开始排卵，轻压腹部有卵流出，雄鱼也能挤出少量精液，即准备进行人工授精。此次人工授精分两种方法进行，各为2组亲鱼，一组为试验组，采用先挤精液到生理盐水中，再后挤卵到盆中，最后加葡萄糖稀释的方法进行受精；对照组按我们常用的干法授精法进行受精。具体如下：
一、试验组
圆口铜鱼的人工授精方法，包括如下步骤：
（1）试剂的准备：
A、分别准备250ml装0.9%的生理盐水和250ml装5%葡萄糖注射液各一瓶，并将其放入与催产水温一致的水体中浸泡，备用；
B、准备MS222麻醉剂一袋备用；
（2）工具的准备：
A、准备内壁光滑的塑料盆1个、鱼夹2个、20ml注射器4个、干燥的塑料吸管5个、毛巾4条、50kg方形塑料盒2个和羽毛4根；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，水量控制在塑料盒总容积的1/2左右，并按80ppm的浓度往其中一个塑料盒中加入MS222麻醉剂，然后将药物混合均匀备用；
C、准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石；
（3）人工受精操作：
A、然挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼（2尾雌鱼1尾雄鱼）放入盛有麻醉剂溶液的塑料盒中麻醉；
B、取一个20mL的注射器从调节好水温的步骤（1）准备的生理盐水中吸取20ml生理盐水挤到准备好的塑料盆中，用另一个20ml注射器吸取等量的葡萄糖注射液备用；
C、取完全麻醉的一尾雄鱼放到鱼夹中，肛门朝上，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出精液，并用塑料吸管将雄鱼精液吸到塑料管内，然后再将精液挤到盛有生理盐水的塑料盆中，之后将亲鱼放到盛有清水的另一塑料盒中使其缓慢苏醒；接着选2尾雌鱼放到鱼夹中，肛门朝上，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出卵子，卵子挤出到装有生理盐水和精液的塑料盆中，之后将亲鱼也放到盛有清水的塑料盒中并开启增氧泵增氧使其缓慢苏醒；最后，用羽毛轻轻搅动含有精液和卵子的生理盐水20秒，使其充分混合均匀，并将20ml的葡萄糖用水挤入盆中精卵上，再用羽毛轻轻搅拌30秒使精子充分激活并使卵子受精；
D、往上述盛有精液和卵子的塑料盆中加入1.5kg清水，搅拌10s左右后静置2分钟，最后用大量清水清洗受精卵3次，再用量筒计量获卵1.8万粒（现有技术测定方法），并移到一个自制孵化篓中进行流水孵化，孵化水温为19.2℃。
（4）受精率统计：
经过12小时的孵化受精卵已发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机捞取三次取平均值）。统计结果为：第一次取卵388粒、受精卵345粒，受精率88.9%；第二次取卵402粒、受精卵358粒，受精率89.1%；第三次取卵268粒、受精卵241粒，受精率89.9%；平均受精率89.2%。
二、对照组
圆口铜鱼的干法人工授精方法，包括如下步骤：
1、受精前的试剂及工具准备
A、准备MS222麻醉剂一袋 、内壁光滑的塑料盆1个、鱼夹2个、20ml注射器3个、干燥的塑料吸管4个、毛巾3条、50kg方形塑料盒2个、4根羽毛；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，水量控制在塑料盆总容积的1/2左右，并按80ppm的浓度往其中一个塑料盒中加入MS222麻醉剂，并将药物混合均匀备用；并准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石；
2、人工授精操作
A、将能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼（2尾雌鱼1尾雄鱼）放到盛有麻醉剂的溶液中麻醉；
B、亲鱼完全被麻醉后，一人将1尾雌鱼放到鱼夹中提出，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），将卵挤到准备好的的擦干水分的盆中，亲鱼挤完卵后放到另一只盛有清水的塑料盒中使其缓慢苏醒；接着将雄鱼用同样的方法（放入鱼夹、擦干水分、挤精）将精液挤到装有卵的塑料盆中，然后用羽毛轻轻搅动15秒（使精卵充分混合）；接着加入少量清水并用羽毛轻轻搅拌25秒使精子充分激活并使卵子受精；
C、再用大量清水清洗受精卵3次，再用量筒计量获卵0.8万粒，移到一个自制孵化篓中进行流水孵化，孵化水温为19.2℃；
D、接着用上述方法进行第二条雌鱼的人工授精，获卵0.88万粒，移到另外一个自制孵化篓中孵化，孵化水温也为19.2℃。
3、受精率统计
经过12小时的孵化受精卵已发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机捞取三次取平均值）。统计结果为：第一次取卵356粒、受精卵224粒，受精率62.92%；第二次取卵458粒、受精卵289粒，受精率63.1%；第三次取卵384粒、受精卵242粒，受精率63.12%；平均受精率63.02%。
实施例2
2017年6月28日，在四川省泸州市黄仪镇境内一口网箱船上挑选6组亲鱼（雌雄比为1:1）进行催产。分两针注射，第一针时间为上午11:30时，第二针为晚上20:30时，催产水温为18.9℃。到第二天15:00估计到效应时间拉起网箱进行观察发现亲鱼还未排卵。到16：30时将亲鱼捞起检查时发现亲鱼（雌鱼）已开始排卵，轻压腹部有卵流出，雄鱼也能挤出较多精液，即准备进行人工授精。此次人工授精分两种方法进行，一种为试验组，选择亲鱼2组，采用先挤精液到生理盐水中，再后挤卵到盆中，最后加葡萄糖稀释的方法进行受精；对照组亲鱼4组，按我们常用的干法授精法进行受精。具体如下：
一、试验组
圆口铜鱼的人工授精方法，其步骤是：
（1）试剂的准备：
A、分别准备500ml装0.9%的生理盐水和500ml装5%葡萄糖注射液各一瓶，并将其放入与催产水温一致的水体中浸泡，备用；
B、准备MS222麻醉剂一袋备用；
（2）工具的准备：
A、准备内壁光滑的塑料盆1个、鱼夹2个、20ml注射器3个、干燥的塑料吸管4个、毛巾4条、60kg方形塑料盒2个和羽毛5根；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，水量控制在塑料盆总容积的1/2左右，并按80ppm的浓度往其中一个塑料盒中加入MS222麻醉剂，然后将药物混合均匀备用；
C、准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石；
（3）人工受精操作：
A、挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼（2尾雌鱼1尾雄鱼）放入盛有麻醉剂溶液的塑料盒中麻醉；
B、取一个20mL的注射器从调节好水温的步骤（1）中准备的生理盐水中吸取20ml生理盐水挤到准备好的塑料盆中，用另一个20ml注射器吸取等量的葡萄糖注射液备用；
C、取完全麻醉的一尾雄鱼放到鱼夹中，肛门朝上，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出精液，并用塑料吸管将雄鱼精液吸到塑料管内，然后再将精液挤到盛有生理盐水的塑料盆中，之后将亲鱼放到另一个盛有清水的塑料盒中使其缓慢苏醒；接着选2尾雌鱼依次放到鱼夹中，肛门朝上，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出卵子，卵子挤出到装有生理盐水和精液的塑料盆中，之后将亲鱼也放到盛有清水的塑料盒中并开启增氧泵增氧使其缓慢苏醒；最后，用羽毛轻轻搅动含有精液和卵子的生理盐水20秒，使其充分混合均匀，并将20ml的葡萄糖用水挤入盆中精卵上，再用羽毛轻轻搅拌25混合均匀，使精子充分激活并使卵子受精；
D、往上述盛有精液和卵子的塑料盆中加入1kg清水，搅拌10s左右后静置2分钟，最后用大量清水清洗受精卵2次，再放到天平上进行称量，计算所得鱼卵为2.1万粒，然后将其移到自制孵化篓中进行流水孵化，孵化水温为18.9℃。
（4）受精率统计
经过13小时的孵化受精卵发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机捞样三次取平均值）。统计结果为：第一次取卵218粒、受精卵199粒，受精率91.28%；第二次取卵336粒、受精卵307粒，受精率91.37%；第三次取卵304粒、受精卵278粒，受精率91.45%；平均受精率91.37%。
二、 对照组
圆口铜鱼的干法人工授精方法，其步骤是：
1、受精前的试剂及工具准备：
A、准备MS222麻醉剂一袋、内壁光滑的塑料盆2个、鱼夹2个、20ml注射器4个、毛巾3条、方形塑料盒2个容量70kg、5根羽毛；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，水量控制在塑料盒总容积的1/2左右，并按80ppm浓度往其中一个塑料盒中加入MS222，将药物混合均匀备用；准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石。
2、人工授精操作：
A、挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼（4组亲鱼分两次完成，每次2组：2尾雌鱼、2尾雄鱼）放到盛有麻醉剂的溶液中麻醉；
B、亲鱼完全被麻醉后，一人将1尾雌鱼放到鱼夹中提出，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），将卵挤到准备好的的擦干水分的塑料盆中；另一人用同样的方法将另1尾雌鱼的卵子也同时挤到塑料盆中。接着将雄鱼采用上述方法（放入鱼夹、擦干水分、挤精）将2尾雄鱼的精液挤到装有卵的塑料盆中，然后用羽毛轻轻搅动20秒，之后加入少量清水并用羽毛轻轻搅拌激活精子使卵子受精；
C、30秒后用大量清水清洗受精卵2次，再用天平秤称量共获卵1.8万粒，称量后将鱼卵移到另一个自制孵化篓中进行流水孵化，孵化水温为18.9℃；
D、接着用上述方法进行另外2组亲鱼的人工授精，获卵1.6万粒，并移到另外的孵化篓中孵化，孵化水温也为也为18.9℃。
3、受精率统计
经过13小时的孵化受精卵发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机在每个孵化器中捞取3次共6次取平均值）。统计结果为：第一次取卵322粒、受精卵225粒，受精率69.88%；第二次取卵245粒、受精卵173粒，受精率70.61%；第三次取卵178粒、受精卵128粒，受精率71.91%;第四次取卵268粒、受精卵182粒，受精率67.91%；第五次取卵387粒，受精卵264粒、受精率68.22%；第六次203粒、受精卵140粒，受精率68.97%；平均受精率69.37%。
实施例3
2017年7月5日，在四川省攀枝花市境内金沙江中游大唐观音岩水电站鱼类增殖放流站室内循化水系统3米缸内挑选成熟亲鱼2组（雌雄比为1:1）进行催产。分两针注射，第一针时间为上午10:00时，第二针为晚上18:30时，催产水温为22.4℃。到第二天6:30估计到效应时间拉起网箱进行观察发现亲鱼还未排卵。到8：00时发现亲鱼在网箱内有追逐现象，再过半小时发现亲鱼追逐激烈，身体抽搐有产卵迹象，捞起亲鱼检查时发现雌鱼已开始排卵，轻压腹部有卵流出，雄鱼也能挤出较多精液，即准备进行人工授精。此次人工授精分两种方法进行，一种为试验组，选择亲鱼1组，采用先挤精液到生理盐水中，再后挤卵到盆中，最后加葡萄糖稀释的方法进行受精；对照组亲鱼1组，按我们常用的干法授精法进行受精。具体如下：
一、试验组
圆口铜鱼的人工授精方法，其步骤是：
（1）试剂的准备：
A、分别准备250ml 0.9%的生理盐水和250m 5%的葡萄糖注射液各一瓶，并将其放入与催产水温一致的3m养殖缸内浸泡调节水温、备用；
B、准备MS222麻醉剂一袋备用；
（2）工具的准备：
A、准备内壁光滑的塑料盆2个、鱼夹2个、20ml注射器2个、干燥的塑料吸管4个、毛巾4条、70kg方形塑料盒2个；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，水量控制在塑料盒总容积的1/2左右，并按80ppm的浓度往其中一个塑料盒加入MS222麻醉剂，然后将药物混合均匀备用；
C、准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石。
（3）人工受精操作：
A、挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼（1尾雌鱼1尾雄鱼）放入盛有麻醉剂溶液的塑料盒中麻醉；
B、取一个20mL的注射器从调节好水温的步骤（1）中准备的生理盐水中吸取20ml生理盐水挤到准备好的塑料盆中，用另一个20ml注射器吸取等量的葡萄糖注射液备用；
C、取完全麻醉的一尾雄鱼放到鱼夹中，肛门朝上，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出精液，并用塑料吸管将雄鱼精液吸到塑料管内，然后再将精液挤到盛有生理盐水的塑料盆中，之后将亲鱼放到盛有清水的塑料盒中使其缓慢苏醒；接着选一尾雌鱼放到鱼夹中，肛门朝上，鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），用手轻压鱼腹部挤出卵子，卵子挤出到装有生理盐水和精液的塑料盆中，之后将亲鱼放到盛有清水的塑料盒中并开启增氧泵增氧使其缓慢苏醒；最后，用羽毛轻轻搅动含有精液和卵子的生理盐水20秒，使精卵充分混合均匀，并将20ml的葡萄糖用水挤入盆中精卵上再用羽毛轻轻搅拌25混合均匀；
D、30秒后往上述盛有精液和卵子的塑料盆中加入1kg清水，搅拌10s左右后静置1分钟，最后用大量清水清洗受精卵2次，进行计量，计算所得鱼卵为0.6万粒，计量完成后移到一个自制孵化篓中进行流水孵化，当时的孵化水温为22.5℃。
（4）受精率统计
经过10小时的孵化受精卵发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机捞样三次取平均值）。统计结果为：第一次取卵115粒、受精卵109粒，受精率94.78%；第二次取卵318粒、受精卵293粒，受精率92.14%；第三次取卵284粒、受精卵268粒，受精率94.37%，平均值93.44%。
二、 对照组
圆口铜鱼的干法人工授精方法，其步骤是：
1、受精前的试剂及工具准备
A、准备MS222麻醉剂一袋 、内壁光滑的塑料盆1个、鱼夹2个、20ml注射器3个、毛巾3条、方形塑料盒2个（容量70kg）、5根羽毛；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将两个塑料盒装上催产池清水（水量控制在塑料盆总容积的1/2左右），其中一个塑料盒按80ppm浓度加入MS222麻醉剂，并将药物混合均匀备用；准备一台增氧泵，包括电源、插线板和相关氧管、气石。
2、人工授精操作
A、将能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼放到盛有麻醉剂的溶液中麻醉；
B、亲鱼完全被麻醉后，一人将雌鱼放到鱼夹中提出，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分（保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里），将卵挤到准备好的的擦干水分的盆中；另一人接着将雄鱼采用上述方法（放入鱼夹、檫干水分、挤精）将雄鱼的精液挤到装有卵的塑料盆中，用羽毛轻轻搅动10-20秒再加入少量清水并用羽毛轻轻搅拌激活精子使卵子受精；
C、30秒后用大量清水清洗受精卵2次，再进行计量获卵0.65万粒，最后将鱼卵移到另一个自制孵化篓中进行循环水孵化，孵化水温为22.5℃；
3、受精率统计
经过10小时的孵化受精卵发育到原肠中期。随机用鱼苗捞网捞取少量鱼卵进行受精率统计（随机捞取3次取平均值）。统计结果为：第一次取卵155粒、受精卵93粒，受精率60%；第二次取卵249粒、受精卵156粒，受精率62.65%；第三次取卵176粒、受精卵113粒，受精率64.2%，平均值62.41%。
应当指出，以上所述具体实施方式可以使本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。因此，本领域技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或者等同替换；而一切不脱离本发明的精神和技术实质的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明专利的保护范围当中。
Claims (5)
1.一种圆口铜鱼的人工授精方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）试剂的准备：
A、分别准备一定质量浓度的生理盐水和葡萄糖注射液各一瓶，并将其放入与催产水温一致的水体中浸泡，备用；
B、准备MS222麻醉剂一袋，备用；
（2）工具的准备：
A、准备内壁光滑的塑料盆1-2个、鱼夹2-4个、20ml注射器2-4个、干燥的塑料吸管2-5个、毛巾2-4条、方形塑料盒2个、羽毛3-5根；
B、将塑料盆用毛巾擦干水分；将2个塑料盒装上与鱼催产池水温一致的清水，按50-100ppm的浓度往其中一个塑料盒中加入MS222麻醉剂，然后将药物混合均匀备用；
C、准备一台增氧泵；
（3）人工受精操作：
A、将注射催产药物达到效应时间、并开始发情排卵的雌雄亲鱼拉网集中，然后挑选能顺利挤出精卵的雌雄亲鱼放入盛有麻醉剂溶液的塑料盒中麻醉；
B、取一个20mL的注射器从调节好水温的生理盐水注射液中吸取20ml生理盐水挤到准备好的塑料盆中；用另一个20ml注射器吸取等量的葡萄糖注射液备用；
C、取完全麻醉的一尾雄鱼放到鱼夹中，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分，保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里，用手轻压鱼腹部挤出精液，并用塑料吸管将雄鱼精液吸到塑料管内，然后再将精液挤到盛有生理盐水的塑料盆中，之后将亲鱼放到另一个盛有清水的塑料盒中使其缓慢苏醒；接着选一尾雌鱼放到鱼夹中，用干毛巾擦干鱼体、鱼夹和操作人身上各部位的水分，保证含有麻醉剂的水不要滴到盆里，用手轻压鱼腹部挤出卵子，卵子挤出到装有生理盐水和精液的塑料盆中，之后将亲鱼也放到盛有清水的塑料盒中并开启增氧泵增氧使其缓慢苏醒；最后，用羽毛轻轻搅动含有精液和卵子的生理盐水10-20秒，使其充分混合均匀，接着将20ml的葡萄糖注射液挤入盆中的精卵上，再用羽毛轻轻搅拌20-30秒使精子充分激活并使卵子受精；
D、往上述盛有精液和卵子的塑料盆中加入1-2kg清水，搅拌10秒左右后静置1-2分钟，最后用大量清水清洗受精卵2-3次，然后移到孵化器中进行孵化。
2.根据权利要求1所述的授精方法，其特征在于，所述生理盐水的质量浓度为0.9%，葡萄糖注射液的质量浓度为5%；二者的体积均为250-500mL。
3.根据权利要求1-2任一项所述的授精方法，其特征在于，所述塑料盒中清水的装入量约为塑料盒体积的1/2。
4.根据权利要求1-3任一项所述的授精方法，其特征在于，所述方形塑料盒盛水的容量大于50kg。
5.根据权利要求1-4任一项所述的授精方法，其特征在于，塑料盆中精液的挤入量为2-3滴。
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- 2018-02-09 CN CN201810136911.5A patent/CN108186157A/zh active Pending
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