CN108184735B - 一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法，其是将100mg/mL的8‑Br‑cAMP、100mg/mL的Zn(II)PPIX与33‰盐浓度的灭菌PBS按照0.5:2.5:97的体积比混合，得到注射工作液；然后按照每40g雌虾注射100μL的方式，将所述注射工作液注射入雌虾体内。本发明采用信号通路激活/抑制的方式促进凡纳滨对虾卵巢发育，与传统采用单侧眼柄摘除促进凡纳滨对虾雌虾卵巢成熟的办法相比，本发明无需摘除母虾的眼柄，不会造成伤害和破坏内分泌系统，具有缩短卵巢发育时间、减少亲虾死亡率以及操作容易等优点。

Description

一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法
技术领域
本发明属水产养殖生物技术领域，更具体地说，本发明涉及一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法。
背景技术
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)俗称南美白对虾，原产自太平洋东海岸，由于其生长速度快、抗病抗逆能力强、对饲料要求低、肉质鲜美、出肉率高和离水存活时间长等优点，是世界公认的养殖对虾优良品种。自1988年从美国夏威夷引进后，凡纳滨对虾已发展成我国最重要的对虾养殖品种，其养殖产量超过全国对虾养殖总产量的70％。然而，在人工养殖条件下，雌虾性腺难以自然发育，必须进行人工催熟。目前生产上普遍采用和相对有效的催熟方法是单侧眼柄摘除。但是，眼柄摘除会造成亲虾感染和发生应激反应，增加死亡率；同时也会破坏亲虾的内分泌系统，卵子的受精率和孵化率均低于自然成熟亲虾。
凡纳滨对虾卵巢发育包括卵子发生和卵黄发生两个阶段，其中卵黄发生阶段时，卵巢增大明显。在人工养殖环境下，卵巢无法自然成熟的凡纳滨对虾雌虾，一般都是停滞在卵黄发生阶段的开始。凡纳滨对虾的卵黄发生依赖于肝胰腺卵黄蛋白原(Vg)基因的表达，而肝胰腺卵黄蛋白原基因表达是由鸟苷环化酶(GC)/环鸟苷酸(cGMP)通路的抑制和腺苷环化酶(AC)/环腺苷酸(cAMP)通路的激活所引起的。
发明内容
本发明的目的在于：针对目前人工养殖条件下，凡纳滨对虾雌虾性腺难以自然发育，必须进行人工催熟，且单侧眼柄摘除促进卵巢发育方法存在的不足，提供一种通过环磷酸腺苷类似物和鸟苷环化酶阻断剂促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法，其包括如下步骤：
S1、将100mg/mL的8-Br-cAMP(cAMP类似物8-Bromoguanosine 3',5'-cyclicmonophosphate sodium salt monohydrate，简称8-Br-cAMP，分子量为446.1)、100mg/mL的Zn(II)PPIX(GC阻断剂Protoporphyrin IX zinc(II)，简称Zn(II)PPIX，分子量为626.03)与33‰盐浓度的灭菌PBS按照0.5:2.5:97的体积比混合，得到注射工作液；
S2、按照每40g雌虾注射100μL的方式，将所述注射工作液注射入雌虾体内。
当注射3天后所述雌虾性腺仍未发育时，按照每40g雌虾注射100μL的方式，再次将所述注射工作液注射入雌虾体内。
优选地，所述雌虾的体重大于等于35g。
需要说明的是，本发明方法中涉及的注射，为简单的液体注入操作步骤，无需专业医护人员操作即可完成工业化大量生产。
相对于现有技术，本发明具有如下优点和有益效果：
与现在的单侧眼柄摘除促进凡纳滨对虾卵巢发育方法相比，本发明无需摘除母虾的眼柄，不会造成伤害和破坏内分泌系统，具有缩短卵巢发育时间、减少亲虾死亡率以及操作容易等优点。
附图说明
图1为采用本发明方法注射的凡纳滨对虾亲虾(即雌虾)性腺发育情况。
图2为通过本发明方法注射后9天的凡纳滨对虾亲虾性腺切片(HE染色)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。实施例中除特殊说明外，均为本领域常规试剂和方法步骤。
本发明实施例中，8-Br-cAMP购自Sigma公司，配制方法是：称取100mg 8-Br-cAMP溶于1mL灭菌去离子水，配备为100mg/mL浓度的储存液，储存液呈现透明无色到淡黄色。Zn(II)PPIX购自Sigma公司，配制方法是：称取100mg Zn(II)PPIX溶于1mL灭菌去离子水，配备为100mg/mL浓度的储存液，储存液呈现透明淡红到淡紫。
实施例1
按8-Br-cAMP储存液：Zn(II)PPIX储存液：33‰盐浓度灭菌PBS＝0.5:2.5:97的体积比配备注射工作液。选取体重范围为37-45g卵巢发育I期的凡纳滨对虾雌虾72头，随机均分为两组(每组36头)，其中实验组按2.5μL/g体重注射配备的8-Br-cAMP/Zn(II)PPIX/PBS工作液，对照组注射按2.5μL/g体重注射PBS。在注射后0、1、3、5、7、9天，对照组与实验组分别各取凡纳滨对虾6头，称量体重并处死取出卵巢称量。性腺指数公式为：性腺指数＝卵巢重量/体重。发现从注射后第3天开始，实验组的性腺指数明显大于对照组(如图1所示)。
实施例2
按8-Br-cAMP储存液：Zn(II)PPIX储存液：33‰盐浓度灭菌PBS＝0.5:2.5:97的体积比配备注射工作液。对3头重量分别为51g、49g、53g卵巢发育I期的凡纳滨对虾雌虾注射8-Br-cAMP/Zn(II)PPIX/PBS工作液125μL，在注射后9天将其处死取出卵巢作石蜡切片与HE染色。另3头重量为51g、50g、52g卵巢发育I期的凡纳滨对虾雌虾，不注射8-Br-cAMP/Zn(II)PPIX/PBS工作液，处死取出卵巢作石蜡切片与HE染色作为对照组。发现经过本方法注射处理的凡纳滨对虾雌虾卵巢中的卵细胞直径，明显大于未注射对虾(其中不注射与注射后9天组各1例，如图2所示)
实施例3
按8-Br-cAMP储存液：Zn(II)PPIX储存液：33‰盐浓度灭菌PBS＝0.5:2.5:97的体积比配备注射工作液。对重量为36g、卵巢发育I期的凡纳滨对虾雌虾注射工作液90μL，3天后未见卵巢明显发育，第3天补注射一针，到补注射后2天见肉眼见卵巢明显发育。
根据上述说明书的揭示和指导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。

Claims (3)

1.一种促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将100mg/mL的8-Br-cAMP、100mg/mL的Zn(II)PPIX与33‰盐浓度的灭菌PBS按照0.5:2.5:97的体积比混合，得到注射工作液；
S2、按照每40g雌虾注射100μL的方式，将所述注射工作液注射入雌虾体内。
2.根据权利要求1所述的促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法，其特征在于，注射3天后所述雌虾性腺仍未发育时，按照每40g雌虾注射100μL的方式，再次将所述注射工作液注射入雌虾体内。
3.根据权利要求1或2所述的促进凡纳滨对虾卵巢发育的方法，其特征在于，所述雌虾的体重大于等于35g。
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