CN108175768A - 伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用 - Google Patents

伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及癌症治疗药物，公开了伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用和在制备抗乳腺癌药物中的应用。所述氟维司群获得性耐药细胞为MCF‑7细胞通过药物压力筛选培养得到的，具有三阴性特征，伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为2‑6:1。本发明通过将伊马替尼和拉帕替尼联合用药，能够双靶向抑制c‑Abl和EGFR，尽可能多的阻碍氟维司群获得性耐药细胞中的多条通路，显著抑制耐药细胞的生长，有效地治疗氟维司群获得性耐药乳腺癌，伊马替尼和拉帕替尼均为临床常用抑制剂，原料易得，用法简单，为临床治疗乳腺癌耐药提供了一种新思路。

Description

伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑 制剂中的应用
技术领域
本发明涉及癌症治疗药物，尤其涉及伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用。
背景技术
乳腺癌（mammary carcinoma）是由乳腺导管上皮细胞在各种内外致癌因素的作用下，细胞失去正常特性而异常增生，以致超过自我修复的限度而发生癌变的疾病，作为一种异质性疾病，表现出多种病理学特点，临床以乳腺肿块为主要表现。其发病的病因是一个多因素、多突变积累的过程，目前尚未清楚其发生机制。乳腺癌是世界女性癌症的第一大杀手，世界范围内每年有大约120万的女性患乳腺癌，其中超过50万人死亡。
目前乳腺癌患者的治疗方式仍然以药物治疗为主，然而，由于多药耐药性的产生，许多乳腺癌患者在经过化疗后仍会出现肿瘤转移或者复发，导致生活质量和生存率的下降。乳腺癌对化疗药物的高耐药性是肿瘤转移复发乃至治疗失败的关键因素（Eur JCancer, 1995,31A Suppl 7:S15-S17）。临床在用的抗乳腺癌药物从他莫昔酚（Tamoxifen）到氟维司群（Fulvestrant）都存在严重的耐药问题，成为了临床治疗无法走出的困境。氟维司群作为乳腺癌晚期患者的“最后一根救命稻草”，仍然无法逃脱耐药的问题，而且目前临床上尚无治疗氟维司群获得性耐药的有效方案，因此解决氟维司群获得性耐药已经成为迫在眉睫的关键所在。
目前为止针对耐药的氟维斯群患者通常还是换用单一药物治疗，由于氟维司群获得性耐药的形成机制可能涉及多条通路，单一药物治疗成功率极低，无法抑制或杀死乳腺癌氟维司群获得性耐药细胞，没有起到有效的治疗作用，因此寻找有效治疗氟维司群获得性耐药的新方法成为晚期乳腺癌耐药患者的当务之急。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，能够有效抑制氟维司群获得性耐药细胞的生长，为临床治疗乳腺癌耐药提供了一种新思路。
本发明的具体技术方案为：伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用。
作为优选，所述氟维司群获得性耐药细胞具有三阴性特征。
作为优选，氟维司群获得性耐药细胞为MCF-7细胞通过药物压力筛选培养得到的。
乳腺癌对化疗药物的高耐药性是肿瘤转移复发乃至治疗失败的关键因素，氟维司群作为乳腺癌晚期患者的“最后一根救命稻草”，仍然无法逃脱耐药的问题，而且目前临床上尚无治疗氟维司群获得性耐药的有效方案。关于氟维司群产生获得性耐药的研究，目前认为在氟维司群获得性耐药细胞中表皮生长因子受体（EGFR）的表达和活性极显著地升高，但是单独使用EGFR抑制剂，氟维司群获得性耐药的治疗效果并不理想，因为氟维司群获得性耐药的形成机制可能涉及多条通路。
非受体酪氨酸激酶c-Abl是一个多功能的原癌基因蛋白，它可以调节细胞的迁移、氧化应激反应以及凋亡，研究发现，在乳腺癌发病机制中，c-Abl表达是一种常见的现象，它在乳腺癌细胞的生长和侵袭中扮演了重要的角色，且与乳腺癌晚期的转移密切相关。申请人研究发现，运用c-Abl抑制剂能显著提高乳腺癌细胞对氟维司群和他莫昔芬的敏感性，伊马替尼为c-Abl抑制剂，能够抑制c-Abl活性，拉帕替尼为EGFR抑制剂，能够抑制EGFR活性，通过将伊马替尼和拉帕替尼联用，能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞株的增殖。
本发明中，申请人利用MCF-7细胞，通过长期药物压力筛选培养得到了氟维司群获得性耐药细胞株（FRBC），并证明氟维司群获得性耐药细胞也具有三阴性特征，将伊马替尼和拉帕替尼联合用药，发现伊马替尼和拉帕替尼联合用药能够双靶向抑制c-Abl和EGFR，尽可能多的阻碍氟维司群获得性耐药细胞中的多条通路，显著抑制氟维司群获得性耐药细胞的生长，更有效地治疗氟维司群获得性耐药乳腺癌。
作为优选，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为2-6:1。
作为优选，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为3-5:1。
作为优选，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为4:1。
伊马替尼和拉帕替尼联合用药在制备抗乳腺癌药物中的应用
作为优选，所述乳腺癌为氟维司群获得性耐药乳腺癌。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：伊马替尼和拉帕替尼联合用药，作为氟维司群获得性耐药细胞抑制剂，能够显著抑制耐药细胞的生长，有效地治疗氟维司群获得性耐药乳腺癌，伊马替尼和拉帕替尼均为临床常用抑制剂，原料易得，使用方法简单，为治疗氟维司群获得性耐药提供一种全新用药方案，为临床治疗乳腺癌耐药提供了一种新思路。
附图说明
图1为MTT 法和Western blot法检测氟维司群获得性耐药细胞的生物学特性；
图2为MTT法比较伊马替尼和拉帕替尼单独用药跟联合用药对耐药细胞的抑制作用。
具体实施方式
本发明运用MCF-7细胞，通过长期的药物压力筛选培养得到了氟维司群获得性耐药细胞株(FRBC)。通过MTT法确证了耐药细胞株FRBC对氟维司群的耐药性（主要指生长能力的影响）；用Western blot法检测了FRBC细胞中ER、PR、Her2的表达量，确证了耐药细胞呈现类三阴性特征；通过MTT法检测伊马替尼和拉帕替尼联合用药与单独用药对FRBC细胞株的抑制作用，发现伊马替尼和拉帕替尼联合用药与其单独运用相比，能够显著抑制FRBC细胞的生长。
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的描述。
实施例1：
1.明确氟维司群获得性耐药细胞的生物学特性
采用MTT法检测耐药细胞FRBC以及亲代细胞MCF-7对氟维司群敏感性：取对数生长期细胞FRBC1、FRBC2、MCF-7，用PBS洗涤2次，加含体积分数10％胎牛血清DMEM/F12培养基，接种于96 孔板，调整细胞浓度，每孔加入1×103个细胞，总体积为100 μL。接种24小时后，分别以10-8、10-7、10-6、10-5 μM氟维司群加以处理，作用96小时后，每孔加入20 μL 5mg/ml 的MTT工作液，混匀后置37℃、5％ CO2饱和湿度培养箱中培养4小时。加入100μL三联液(10％十二烷基硫酸钠-5％异丁醇-0.012M 盐酸)，使紫蓝色甲臜沉淀完全溶解。置于酶标仪中，用酶标仪 (570 nm) 检测吸光度值，所有试验重复三次。结果见图1A，显示耐药细胞FRBC1和FRBC2相对于亲代细胞MCF-7，对氟维司群敏感性大大降低。
采用Western blot法检测耐药细胞中ER、PR、Her2以及c-ABL和EGFR等蛋白的表达情况。结果见图1B，显示耐药细胞呈类三阴性特征，并且EGFR以及c-ABL的底物Crkl的磷酸化水平升高。
2. 伊马替尼和拉帕替尼联合用药有效抑制氟维司群耐药细胞生长
采用MTT法检测伊马替尼和拉帕替尼联合用药与单独用药对FRBC细胞株的抑制作用：取对数生长期细胞FRBC1和FRBC2，用PBS洗涤2次，加含体积分数10％胎牛血清DMEM/F12培养基，接种于96 孔板，调整细胞浓度，每孔加入3×103个细胞，总体积为100μL。接种24小时后，分别用伊马替尼20μM, 拉帕替尼5μM单独或联合处理6、12、24、48小时后，每孔加入20μL5mg/ml 的MTT工作液，混匀后置37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养4小时。加入100μL三联液 (10％十二烷基硫酸钠-5％异丁醇-0.012 M 盐酸)，使紫蓝色甲臜沉淀完全溶解。置于酶标仪中，用酶标仪(570 nm)检测吸光度值，所有试验重复三次。结果见图2，显示伊马替尼联合拉帕替尼与其单独运用相比，能够显著抑制耐药细胞的生长。
3. 伊马替尼和拉帕替尼联合用药的剂型及给药途径
伊马替尼联合拉帕替尼并加入药学可接收的辅料，可按常规方法制成各种剂型，如各种规格的液体注射剂、粉针注射剂、注射用乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、膏剂、霜剂、贴剂、擦剂、粉剂、喷雾剂、植入剂、滴剂、栓剂、软膏剂、糖果剂等。
伊马替尼联合拉帕替尼的给药途径包括各种给药途径，如口服给药、注射给药、植入给药、腔内给药、舌下给药、透皮给药、内外敷等。
实施例2：
除分别用伊马替尼10 μM，拉帕替尼5 μM单独或联合处理FRBC细胞株以外，其余制备、检测方法与实施例1相同。结果显示伊马替尼联合拉帕替尼与其单独运用相比，抑制耐药细胞生长的效果更佳。
实施例3：
除分别用伊马替尼15 μM，拉帕替尼5 μM单独或联合处理FRBC细胞株以外，其余制备、检测方法与实施例1相同。结果显示伊马替尼联合拉帕替尼与其单独运用相比，抑制耐药细胞生长的效果更佳。
实施例4：
除分别用伊马替尼25 μM，拉帕替尼5 μM单独或联合处理FRBC细胞株以外，其余制备、检测方法与实施例1相同。结果显示伊马替尼联合拉帕替尼与其单独运用相比，抑制耐药细胞生长的效果更佳。
实施例5：
除分别用伊马替尼30μM，拉帕替尼5 μM单独或联合处理FRBC细胞株以外，其余制备、检测方法与实施例1相同。结果显示伊马替尼联合拉帕替尼与其单独运用相比，抑制耐药细胞生长的效果更佳。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (8)

1.伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中含有伊马替尼和拉帕替尼。
2.如权利要求1所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述氟维司群获得性耐药细胞具有三阴性特征。
3.如权利要求1或2所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述氟维司群获得性耐药细胞为MCF-7细胞通过药物压力筛选培养得到的。
4.如权利要求1所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为2-6:1。
5.如权利要求4所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为3-5:1。
6.如权利要求5所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在氟维司群获得性耐药细胞抑制剂中的应用，其特征在于，所述伊马替尼和拉帕替尼的用药摩尔比为4:1。
7.伊马替尼和拉帕替尼联合用药在制备抗乳腺癌药物中的应用。
8.如权利要求7所述的伊马替尼和拉帕替尼联合用药在制备抗乳腺癌药物中的应用，其特征在于，所述乳腺癌为氟维司群获得性耐药乳腺癌。
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