CN108169361A - 一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，属于化学检测领域，旨在提供一种测定补骨酯中补骨酯素有效成分的方法。该方法采用ASE萃取方法用乙醇萃取粉碎后的补骨酯，并制备乙醇萃取液；采用HPLC法检测乙醇萃取液中补骨酯素的含量。本发明可用于补骨酯中有效成分含量的测定。

Description

一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法
技术领域
本发明属于化学检测领域，尤其是一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法。
背景技术
补骨脂(学名：Psoralea corylifolia Linn.)，又名：破故纸，婆固脂，胡韭子。属蔷薇目，果实入药，具有补益肝肾，健脾益气，涩精止遗的功效，用于肝肾不足，脾气虚弱，面色萎黄，倦怠纳差，腰膝酸痛，遗精梦泄，并可治牛皮癣等皮肤病。
现有技术中没有关于补骨酯中补骨酯素含量测定的文献报道，为了更好的控制该产品的质量，保证患者服用的药物确实有效，有必要对含量测定方法进行研究。
发明内容
针对上述不足，本发明旨在提供一种测定补骨酯中补骨酯素有效成分的ASE-HPLC的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE萃取方法用乙醇萃取粉碎后的补骨酯，并制备乙醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法检测乙醇萃取液中补骨酯素、异补骨酯素的含量。
进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将补骨酯样品粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末0.5g；
步骤S2：将0.5g补骨酯粉末与0.3g石英砂混合，装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用乙醇萃取，蒸干，加乙醇溶解，并用乙醇定容至50ml；
步骤S4：将步骤3所得溶液离心，取上清液，得到乙醇萃取液。
进一步的，步骤S3所述的萃取，参数如下：萃取温度为90℃，萃取时间为5min，萃取次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s，压力为1500psi。
进一步的，步骤S4所述的离心参数为：速度为15000r/min，时间为3min。
进一步的，所述的步骤2的HPLC检测参数为：色谱柱为Thermo Accucore C18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为体积比为49:51的乙醇-水；检测波长：246nm。
进一步的，所述的色谱柱的规格为2.6μm，50mm×2.1mm。
进一步的，所述的萃取方法所采用的仪器为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；所述的HPLC法所采用的仪器为Thermo U3000 UHPLC液相色谱仪。
本发明与传统方法相比，具有以下优点：
1.本发明的质量分析方法在色谱条件下检出补骨脂素有效成分，检测方法经过参数的最优化组合，从而使本发明的检测方法灵敏度高，具有很好的分离度，基线稳定，阴性对照无干扰，检测方法的准确性、重现性、线性关系、稳定性均能达到科研和生产的要求；
2.本发明所采用的ASE萃取法提高了温度降低溶剂的黏度，从而减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；ASE提取溶剂的选择：
3.本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用乙醇索氏2h；为了减少杂质，故本实验选用乙醇、乙醇、乙腈作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示乙醇与乙醇提取后补骨脂素与异补骨脂素含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂乙醇；
4.萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态(液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力)；故我们选择采用90℃，提取5min，提取3次，即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。
附图说明
图1为补骨酯素以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
1、仪器设备及试剂
1.1仪器：
电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000 UHPLC液相色谱仪；
1.2试剂(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)：
水：符合GB/T 6682规定的一级水；
乙醇(CH4O)：色谱纯(液相色谱用)；
石英砂：粒径2mm。
2方法
2.1对照品溶液的制备：
取补骨脂素对照品适量，加乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
2.2供试品溶液的制备
2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流提取2小时，放冷，转移至100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。
2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：
步骤S1：将补骨酯样品粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末0.5g；
步骤S2：将0.5g补骨酯粉末与0.3g石英砂混合，装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用乙醇萃取，蒸干，加乙醇溶解，并用乙醇定容至50ml；
步骤S4：将步骤3所得溶液在15000r/min下离心3min，取上清液，得到乙醇萃取液。
2.3ASE萃取条件
萃取温度为90℃，萃取时间为5min，萃取次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s，压力为1500psi。
2.4色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
HPLC检测参数为：色谱柱为Thermo Accucore C18，2.6μm，50mm×2.1mm；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为体积比为49:51的乙醇-水；检测波长：246nm。
2.5测定法
按照高效液相色谱法(通则0512)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.6标准限值要求
本品按干燥品计算，含补骨脂素(C11H6O3)和异补骨脂素(C11H6O3)的总量不得少于0.70％。
2.7、计算(外标法)
式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；
AX——供试品的峰面积；
AR——对照品峰面积。
注意：
1.使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；
2.萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；
3.萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；
4.开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；
5.使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。
3结果
3.1线性关系
取补骨脂素对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加1乙醇制成每1ml含补骨脂素14.722μg、异补骨脂素11.472μg的溶液，然后分别精密吸取该溶液0.5μl、1μl、2μl、5μl进入LC测定，并依照上述方法测定。
补骨脂素线性试验结果详见表1。
以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归。
求得补骨脂素回归方程：y＝12154.8147x+10.3900，R2＝0.9996，补骨脂素在7.361～73.61μg/ml范围内呈良好的线性关系，详见图1。
表1
3.2重现性试验
取相同批号的样品(批号：1511073)0.5g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中补骨酯素的含量见表2，试验表明ASE提取方法重复性良好。
表2
3.3样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(3批)
结果见表3：
表3
4.讨论：
4.1 ASE提取溶剂的选择：
试验中，曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用乙醇索氏提取2h。为了减少杂质，故本实验选用乙醇、乙醇、乙腈作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示乙醇与乙醇提取后补骨脂素与异补骨脂素含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂乙醇。
4.2 ASE提取条件的优化
乙醇的熔沸点较低，ASE提取原理：A:提高温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；B:萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态(液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力)。故我们选择采用90℃，提取5min，提取3次，即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度90℃，提取时间5min，提取次数3次。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
步骤1：采用ASE萃取方法用乙醇萃取粉碎后的补骨酯，并制备乙醇萃取液；
步骤2：采用HPLC法检测乙醇萃取液中补骨酯素的含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：
步骤S1：将补骨酯样品粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末0.5g；
步骤S2：将0.5g补骨酯粉末与0.3g石英砂混合，装于放有滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；
步骤S3：用乙醇萃取，蒸干，加乙醇溶解，并用乙醇定容至50ml；
步骤S4：将步骤3所得溶液离心，取上清液，得到乙醇萃取液。
3.根据权利要求2所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，步骤S3所述的萃取，参数如下：萃取温度为90℃，萃取时间为5min，萃取次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s，压力为1500psi。
4.根据权利要求2所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，步骤S4所述的离心参数为：速度为15000r/min，时间为3min。
5.根据权利要求1所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，所述的步骤2的HPLC检测参数为：色谱柱为Thermo Accucore C18；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；流动相为体积比为49:51的乙醇-水；检测波长：246nm。
6.根据权利要求1或5所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，所述的色谱柱的规格为2.6μm，50mm×2.1mm。
7.根据权利要求1所述的一种测定补骨酯中补骨酯素含量的方法，其特征在于，所述的萃取方法所采用的仪器为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；所述的HPLC法所采用的仪器为Thermo U3000 UHPLC液相色谱仪。
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