CN108159065A - 莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及莫诺苷在促进缺血随意皮瓣存活的作用。在促进缺血随意皮瓣存活的过程中采用腹腔注射的方式，使用方法为每日腹腔注射剂量30mg/kg，5～7天为一疗程。通过大量的动物实验得出结论，使用莫诺苷可以使得皮瓣的成活面积比明显提高，能很好地促进缺血随意皮瓣存活。

Description

莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用

技术领域

本发明涉及莫诺苷的新用途，具体是莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。

背景技术

近年来，工业、交通、能源等呈现高速发展，与此相关的大面积创伤、组织缺损等各种创伤日益严重。这类创伤在修复后多遗留不同程度的畸形和功能障碍，尤其是手部和颜面部的创伤畸形。而病患对完美外形、功能恢复的要求日益提升，创面问题的修复技术和治疗手段成为医学的一项重要思考。临床上，随意皮瓣作为创面修复最基本且最常用的手术方法因其“灵活性”、“随意性”，被临床上广泛应用于修复组织缺损 (图1)。然而随意皮瓣的血液灌注有限，往往出现皮瓣远端的缺血坏死。如何能改善随意皮瓣远端的血供状况以及组织对缺血的耐受能力，有效减少可能发生的缺血坏死，成为创面治疗修复中核心问题之一，具有较强的社会价值、经济价值和理论、实践研究价值。

莫诺苷，是从中药山茱萸中提取出来的主要活性成分，具有保护细胞免于H₂O₂诱导的细胞毒性抗细胞凋亡的作用，因此可作为一种神经保护类药物。莫诺苷还可以降低血糖，减轻脑缺血再灌注损伤，但是对皮瓣存活的影响未见报道。

发明内容

本发明涉及莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中，按每1毫克莫诺苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克体重大鼠每日剂量30mg莫诺苷，腹腔注射或灌胃给药，5～7天为一疗程。

通过大量的动物实验得出结论，使用莫诺苷可以使得皮瓣的成活面积比明显提高，能很好地促进缺血超长随意皮瓣存活。

附图说明

图1 缺血随意皮瓣模型建立；

图2 莫诺苷实验组与生理盐水对照组术后7天大鼠背部皮瓣存活情况的对比图；

图3莫诺苷实验组与生理盐水对照组术后7天皮瓣成活面积柱状对比图；

图4 莫诺苷实验组与生理盐水对照组术后七天两组皮瓣血流灌注量对比观察；

图5 莫诺苷实验组与生理盐水对照组皮瓣氧化铅造影对比观察；

图6 显微镜下（100倍）莫诺苷组与生理盐水组中间区域皮瓣HE染色观察情况；

图7 莫诺苷组与生理盐水组皮瓣中区微血管密度对比；

图8莫诺苷组与生理盐水组皮瓣血管内皮生长因子表达（免疫组化 ×400）；

图9 莫诺苷组与生理盐水组皮瓣SOD值和MDA含量对比。

具体实施方式

莫诺苷可以促进缺血超长随意皮瓣存活性明显提高。在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用腹腔注射的方式。按每1毫克莫诺苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克大鼠每日腹腔注射（或灌胃给药）剂量30mg莫诺苷，5～7天为一疗程。 以下为莫诺苷在促进缺血随意皮瓣存活的作用评价：

1、缺血随意皮瓣模型建立

选用健康的雄性SD大鼠40只，由温州医科大学实验动物中心提供，清洁级，SCXK（浙）2005-0019，体重200-250g，2—3个月龄。将大鼠按照随机数字表法分为莫诺苷实验组和生理盐水对照组，每组20只。采用改良的McFarlane皮瓣制作方法，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，将动物俯卧位固定，脱毛，碘伏消毒，铺巾，以大鼠尾部两髂嵴连线为蒂，在背部正中设计一宽3cm、长9cm矩形随意型皮瓣，设计线切开皮肤，皮下组织，达深筋膜浅层，保留真皮下毛细血管网，于深筋膜浅层表面分离皮下组织，遇到知名血管即以4-0号丝线结扎。皮瓣完全掀起后，彻底止血，立即用4-0医用慕丝缝线间断缝合。切口周围碘伏消毒后涂抹金霉素软膏，腹腔注射生理盐水(50 ml／kg)抗休克。

莫诺苷实验组：30 mg/kg莫诺苷腹腔注射；生理盐水对照组：相同剂量腹腔注射，均每日1次，连续注射7天。因大鼠有自残现象，为避免其术后回头撕咬伤口影响皮瓣存活，均为其带上防止其自残的“颈套”（见图1），并独笼喂养。为减少手术操作带来的误差，所有手术由1人完成。

2、观察指标：

2.1 皮瓣存活面积比的检测

皮瓣存活面积比的检测：术后第7天，各组大鼠在麻醉状态下用透明纸准确测量皮瓣成活及坏死面积，并剪成成活或死亡两部分，分别以电子秤称重。按以下公式计算皮瓣存活面积比：皮瓣存活面积比=皮瓣存活面积玻璃纸重量/皮瓣总表面积玻璃纸重量×100%。皮瓣坏死标准：皮瓣颜色发黑，组织回缩、弹性差，质地坚硬，切割组织不出血。病理表现为组织崩解、细胞核消失、炎症细胞广泛浸润、有局灶出血。

术后7天，莫诺苷组中间区域皮瓣颜色淡红，表面无痂壳形成，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。生理盐水组皮瓣中间区域及远端区域颜色均发黑，表面有痂壳形成，弹性极差，原位掀起皮瓣见皮瓣出血较少，肉膜下炎性分泌物较多，血管相对较疏（见图2）。

7天后实验组皮瓣的成活面积比为(74.12±4.13%)，对照组皮瓣成活面积比为(52.02±4.13%), 比较两组皮瓣的成活面积比，差异有统计学意义（P<0.01）（见图3）。

2.2激光多普勒血流仪测定新生血管

激光多普勒血流仪是利用激光多普勒原理，监测动物或人体组织微循环血流灌注量的一种设备。本学科实验室拥有该仪器并配套操作软件采集和分析血流信号。术后7天，分别测定大鼠皮瓣处血流，报告通用报告、百分比报告、PORH报告及频率报告等形式，观察新生血管处有效血流信号。

7天后激光多普勒血流仪显示莫诺苷组皮瓣的血流量明显多于对照组，莫诺甘组皮瓣的血流灌注量为(318.63±95.73)，对照组皮瓣血流灌注量为(29.77±13.12), 比较两组皮瓣的血流灌注量，差异有统计学意义（P<0.01）（见图4）。

2.3明胶-氧化铅血管造影

术后第7天，麻醉后先通过向大鼠一侧颈动脉注入0.9%生理盐水，同侧颈静脉放血排净大鼠体内血液，然后将预置的明胶+氧化铅灌注液（100ML/kg）缓慢注射入颈动脉，当观察到大鼠巩膜及四肢末端色泽变成造影剂颜色后停止注射。灌注成功后将大鼠冷藏12-24小时，使明胶凝集，最后将大鼠背部皮瓣及周围皮肤解剖，平铺行X线摄影。莫诺苷组皮瓣远端造影剂充盈，而对照组的造影剂局限在皮瓣近端和中间区域（见图5）。

2.4组织学检测

术后 7天，在皮瓣中点处取样。样本经 10％甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，术后7d光镜下(×100)观察肉芽组织层厚度、毛细血管的结构变化、组织水肿、坏死、炎性细胞浸润等情况。

莫诺苷组见成纤维细胞增生，肉芽组织较薄，组织水肿较少，炎症细胞浸润少。生理盐水组成纤维细胞增生较少，组织水肿明显，炎症细胞浸润严重（见图6）。

莫诺苷组在皮瓣中区微血管密度为(30.02±6.18)，对照组在皮瓣中区微血管密度为 (13.68±2.98)，两组皮瓣中区微血管密度比较，差异有统计学意义（P＜0.05)（见图7）。

2.5 免疫组化观察

石蜡切片进行脱蜡，高温抗原修复，用3% 过氧化氢消除过氧化物酶活性，血清封闭后，滴加目的一抗（VEGF，1：200；bFGF，1:100）孵育过夜，滴加生物素标记的二抗IgG，再滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，DAB显色，苏木素复染后封，采用Image-Pro Plus 6.0彩色图像分析系统分析各组切片免疫组织化学染色结果。

免疫组化染色发现莫诺苷组大鼠皮瓣VEGF表达明显高于对照组。莫诺苷组的VEGF表达为(3992±517.06)，对照组的VEGF表达为(1973.83±251.76)，两组VEGF表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05)。（见图8）

2.6 超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达的检测

术后7 天，于皮瓣中区正中部位切取0.5 cm×0.5 cm全层组织，去除肉膜层，称质量，稀释，冰水匀浆液．按照SOD、MDA检测试剂盒说明书，检测二者含量。

莫诺苷组的SOD值为(55.87±4.95 U/mg protein)，对照组的SOD值为 (21.40±3.30 U/mg protein)，莫诺苷组的MDA含量为(17.76±3.79 nmol/mg protein)，对照组的MDA含量为 (61.71±9.95 nmol/mg protein)，两组SOD值和MDA含量比较，差异有统计学意义（P＜0.05)（见图9）。

Claims (2)

1.莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。

2.根据权利要求1所述的莫诺苷在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用，其特征在于：按每1毫克莫诺苷粉末溶于1毫升的生理盐水，配成1mg/ml溶液，使用方法为每千克体重大鼠每日剂量30mg莫诺苷，腹腔注射或灌胃给药，5～7天为一疗程。