CN108157393B - 一种白芷提取物及其作为植物抗菌物的应用 - Google Patents
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Abstract
一种白芷提取物,所述的白芷提取物为水提物或醇提物,其中醇提物提取方法为:是称取粉碎样品800g,用5倍量的乙醇浸泡植物干粉,室温下静置12h;超声提取2h;减压抽滤,连续提取3次,合并滤液,在45℃下用旋转蒸发仪浓缩,干燥后,4℃中保存、备用;还包括白芷提取物作为植物抗菌物的应用。本发明涉及的白芷提取物是一种植物源生物农药,其具有抗菌活性高、抑菌谱广、不易产生抗性、对人和动物无毒的特点,还对炭黑曲霉产OTA能力具有显著的抑制作用,可以提高葡萄果实食品安全性。
Description
技术领域
本发明涉及生物农药领域,具体涉及植物源生物农药,更具体涉及一种白芷提取物及其作为植物抗菌物的应用。
背景技术
由于葡萄外形风味俱佳且营养丰富,且近20年来栽培葡萄获得了良好的经济效益和社会效益,我国葡萄产业发展迅速。但是,葡萄与其它园艺作物一样,病虫害的严重危害是产业健康发展的限制因子,常见的、危害严重的葡萄病害如葡萄灰霉病、白腐病、炭疽病等;这些病害的为害严重影响葡萄质量和产量,不但是我国葡萄生产上必须解决的困难,而且也是世界性葡萄生产上的难题。此外,真菌毒素是影响食品安全重要因素,其中最重要的有炭黑曲霉病菌产生的赫曲霉毒素A(OTA)毒素;该毒素含量超标会对人体造成很大的伤害,甚至致癌。
农业生产中,常用防控方法为使用化学农药,但是化学防治存在引起葡萄病原菌的抗药性、残留污染、再猖獗等风险。因此寻找非化学农药是产业发展的重要任务,也是科学研究的重要课题。从植物中挖掘植物源方法,包括开发植物源农药、从植物源化合物中寻找先导化合物、甚至植物浸提液的直接利用,是这个发展方向的重要内容。
白芷[Angelica dahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.et Hook.f.ex Franch.etSav.]是伞形科(Umbelliferae)当归属(Angelica)植物,产我国东北及华北地区。常生长于林下,林缘,溪旁、灌丛及山谷草地。目前国内北方各省多栽培供药用。根在东北各省有些地区称“大活”或“独活”入药,能发表、祛风除湿,用于治疗伤风头痛,风湿性关节疼痛及腰脚酸痛等症,嫩茎剥皮后可供食用。根的水煎剂有杀虫、灭菌作用,对防治菜青虫、大豆蚜虫、小麦杆锈病等有一定效果。但未见将其应用到葡萄病害防治的报道和研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种白芷提取物及其作为植物抗菌物的应用,其可防治葡萄重要病害,提高葡萄食品安全性。
一种白芷提取物,所述的白芷提取物为水提物或醇提物,其中所述的水提物提取方法为:称取白芷粉碎干品100g,加蒸馏水1000mL,浸泡30min。先用武火煮沸,后改用文火,煎煮提取40min。药液用4层纱布趁热过滤。重复提取一次,合并2次滤液后用文火浓缩至浓度为1000mg/mL。4℃保存、备用;所述的醇提物提取方法为:是称取粉碎样品800g,用5倍量的乙醇浸泡植物干粉,室温下静置12h;超声提取2h;减压抽滤,连续提取3次,合并滤液,在45℃下用旋转蒸发仪浓缩,干燥后,4℃中保存、备用。
还涉及一种白芷提取物作为植物抗菌物的应用,所述的白芷提取物对以下病害病原菌有显著的抑菌活性,主要包括葡萄灰霉病菌、葡萄白腐病菌、葡萄炭疽病菌和炭黑曲霉病菌。
进一步,其中所述的葡萄炭疽病菌包括对多菌灵高抗炭疽病菌菌株,所述的灰霉病菌包括对多菌灵高抗灰霉病菌菌株。
进一步,所述的水提物浓度为6.25mg/mL-100mg/mL,所述的醇提物浓度为0.3125mg/mL-5mg/mL。
进一步,当水提物深度为100mg/mL时,对白腐病菌的抑菌率为85.06%,对炭疽病菌的抑菌率为52.24%;当醇提物浓度为5mg/mL时,对炭疽病菌、白腐病菌、灰霉病菌和炭黑曲霉病菌的抑制率分别为63.36%、93.61%、84.26%和50.35%;当醇提物浓度为5mg/mL时,对多菌灵高抗炭疽病菌菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89抑制率分别为60.24%、59.61%和64.71%;当其浓度为5mg/mL时,对多菌灵高抗灰霉病菌菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7抑制率分别为55.17%、61.59%和50.69%。
进一步,所述的醇提物对炭黑曲霉病菌产生OTA具有明显的抑制作用,当醇提物浓度为5mg/mL时,OTA产生滞后最明显。
本发明具有以下优点:
本发明涉及的白芷提取物作为有效成分的杀菌药物是一种植物源生物农药,属于生物药物的一种,符合现代社会对新农药的要求。其次,白芷提取物具有抗菌活性高、抑菌谱广、不易产生抗性、对人和动物无毒的特点。另外,其不仅对葡萄果实常见病原菌有抑制效果,还对炭黑曲霉产OTA能力具有显著的抑制作用,可以提高葡萄果实食品安全性。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
实施例1:
一、水提物和醇提物的制备
本发明所用的白芷购自安徽亳州药材市场。将备用材料晒干,粉碎,放在通风干燥处保存备用。白芷水提物提取方法为:称取白芷粉碎干品100g,加蒸馏水1000mL,浸泡30min。先用武火煮沸,后改用文火,煎煮提取40min。药液用4层纱布趁热过滤。重复提取一次,合并2次滤液后用文火浓缩至浓度为1000mg/mL。4℃保存、备用。醇提步骤为:是称取粉碎样品800g,用5倍量的乙醇浸泡植物干粉,室温下静置12h;超声提取2h;减压抽滤,连续提取3次,合并滤液,在45℃下用旋转蒸发仪浓缩,干燥后,4℃中保存、备用。
二、抑菌培养及OTA的检测方法
采用菌丝生长速率法测定白芷水提物、醇提物对葡萄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、葡萄白腐病菌(Coniothyriumdiplodiella)、葡萄炭疽病菌(Glomerellacingulata)和炭黑曲霉(Aspergilluscarbonarius)的抑菌活性。具体步骤如下:
将菌种活化后,用无菌打孔器(Ф=5mm)在培养皿边缘菌丝生长旺盛处均匀打孔,制得菌饼,接种接到带药培养基上,在温度为25-28℃,湿度为73%的培养箱中倒置培养2-7d后,用十字交叉法测菌落直径,计算抑制率。每个处理设3个重复。
进一步检测白芷醇提物炭黑曲霉病菌产毒素的影响,具体为菌种在CYA培养基上培养14d,每天用无菌打孔器(Φ=5mm)打取12块带菌体的培养物,连续14d。将带菌培养物放于5mL小试管中,称量后加入甲醇2mL,漩涡震荡1min,静止提取60min后,先用0.45μm滤膜过滤,然后用0.22μm滤膜过滤,最后用超高效液相-串级质谱仪进行检测,检测条件:采用美国Water的超高液相色谱仪XevoTM TQ-S,进行编程并自动进样。流动相为A1:色谱乙腈;A2:色谱甲醇;B1:0.2%甲酸;B2:水;流速设置为:0.3mL/min;进样量:1μL。根据所取琼脂块的质量和检测出的毒素含量计算出每克培养物中的毒素浓度,表示为毒素产量(ng/g)。
三、水提物及醇提物的抑菌作用
结果表明,白芷水提物对白腐病菌的抑菌效果优于炭疽病菌、灰霉病菌和炭黑曲霉病菌。当水提物深度为100mg/mL时,对炭疽病菌、白腐病菌、灰霉病菌和炭黑曲霉病菌的抑制率最高,其中对白腐病菌的抑菌率最高为85.06%。
白芷醇提物对4种葡萄病原真菌表现出不同程度的抑菌效果。醇提物对白腐病菌的抑制效果最好,其次是灰霉病菌。当醇提物浓度为5mg/mL时,对炭疽病菌、白腐病菌、灰霉病菌和炭黑曲霉病菌的抑制率分别为63.36%、93.61%、84.26%和50.35%,EC50为分别为2.83、0.31、1.67和4.21mg/mL。尤其是当醇提物浓度为0.625mg/mL时,对白腐病菌的抑制率高达71.89%。
四、醇提物对多菌灵敏感炭疽病菌菌株的抑制作用
当白芷醇提物浓度为5mg/mL时,对多菌灵敏感炭疽病菌菌株FJZZ-62、coll-9、coll-20抑制率分别为58.95%、70.54%和66.67%,其EC50分别为3.70、2.63和2.49mg/mL。其中对coll-9抑制活性最好。
五、醇提物对多菌灵高抗炭疽病菌菌株的抑制作用
多菌灵浓度为100μg/mL时,对高抗菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89的抑制率分别为9.80%、21.50%和10.01%。而白芷醇提物对多菌灵高抗炭疽病菌菌株表现出很强的抑制作用。当醇提物浓度为5mg/mL时,对多菌灵高抗炭疽病菌菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89抑制率分别为60.24%、59.61%和64.71%,其EC50分别为3.41、3.15和3.14mg/mL,抑制效果明显优于100μg/mL多菌灵。
六、醇提物对多菌灵敏感灰霉病菌菌株的抑制作用
白芷醇提物浓度为5mg/mL时,对多菌灵敏感灰霉病菌菌株GXGL-7、GXNN-6和GXNN-7抑制率分别为46.33%、43.85%和45.77%,其EC50分别为4.78、5.01和4.73mg/mL。
七、醇提物对多菌灵高抗灰霉病菌菌株的抑制作用
浓度为100μg/mL的多菌灵对高抗菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7的抑制率分别为53.45%、55.11%和14.76%。白芷醇提物对多菌灵高抗灰霉病菌菌株具有一定的抑制作用。当其浓度为5mg/mL时,对多菌灵高抗灰霉病菌菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7抑制率分别为55.17%、61.59%和50.69%,其EC50分别为3.44、2.80和4.34mg/mL,抑制作用大于100μg/mL多菌灵。
八、醇提物对黑曲霉产毒素的抑制作用
在空白对照中,OTA在第3d开始产生,浓度为6.22ng/g,第9d OTA产量达到高峰,浓度为2970.78ng/g。当培养炭黑曲霉的培养基加上白芷醇提物时,OTA的产生较空白对照出现延滞。白芷醇提物浓度越高,OTA产生的时间越滞后。当白芷醇提物浓度为5mg/mL时,OTA产生滞后最明显,第6d才有OTA产生,第8d时OTA含量为2635.33ng/g,第9d OTA产量为2028.67ng/g,明显低于空白对照OTA的含量。
通过上述实验验证白芷醇提物对不同抗性的葡萄灰霉病菌、葡萄炭疽病菌均有抑制作用,同时还可有效抑制黑曲霉病菌产毒素的产生。该结果为代替化学农药防控抗性菌株提供了有效的理论依据,也说明其可作为植物源杀菌剂用于病害防治。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种白芷提取物作为抗葡萄病原菌的应用,其特征在于:所述的白芷提取物为水提物或醇提物,所述的水提物浓度为6.25mg/mL-100mg/mL,所述的醇提物浓度为0.3125mg/mL-5mg/mL,其中所述的水提物提取方法为:称取白芷粉碎干品100g,加蒸馏水1000mL,浸泡30min,先用武火煮沸,后改用文火,煎煮提取40min,药液用4层纱布趁热过滤,重复提取一次,合并2次滤液后用文火浓缩至浓度为1000mg/mL,4℃保存、备用;所述的醇提物提取方法为:是称取粉碎样品800g,用5倍量的乙醇浸泡植物干粉,室温下静置12h;超声提取2h;减压抽滤,连续提取3次,合并滤液,在45℃下用旋转蒸发仪浓缩,干燥后,4℃中保存、备用,所述病原菌为葡萄白腐病菌。
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