CN108148817B - 一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株 - Google Patents

一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种甜菜夜蛾核型多角体病毒新毒株及其在甜菜夜蛾防治中的应用，新毒株的保藏编号为CCTCC No:V201768。基因组序列分析证明该毒株是一种新的杆状病毒，与已知的甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV‑US1基因组相似率为45.8％。本发明的毒株对甜菜夜蛾幼虫和甜菜夜蛾细胞系均有较好的防治和侵染效果，可用于制备防治甜菜夜蛾的生物杀虫剂。

Description

一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株
技术领域
本发明属于害虫生物防治技术领域，具体涉及一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株。
背景技术
甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)，异名Laphygma exigua(Hübner)，又名菜褐夜蛾、玉米夜蛾，属鳞翅目(Lepidoptera)、夜蛾科(Noctuidae)，是世界性的重要农业害虫之一。近年来，甜菜夜蛾在我国发生危害范围逐渐扩大，且有不断扩大的趋势，危害日趋严重。目前，我国对甜菜夜蛾的防治仍以化学防治为主，一些地区滥用农药现象十分严重，由于化学农药用量的增多，带来了农药残留、环境污染和害虫抗药性产生等一系列问题。随着人们环保意识的提高以及可持续农业发展战略的实施，寻找环保、安全、有效的生物防治措施越来越被人们重视。
昆虫病毒杀虫剂具有环境友好、对非靶标生物安全以及对害虫具有特异性杀虫效果等优点，不同于化学农药，是完全源于自然的绿色环保产品，是当前新型农药发展的重要方向之一，具有广阔的发展前景。自然界中已经发现的昆虫病毒有15个科600多种，然而大部分病毒对昆虫的侵染率和致病力并不高，在害虫的生物防治上还缺乏较好的控制能力。目前，作为生物杀虫剂进行产业化应用的主要是杆状病毒科(Baculoviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)和痘病毒科(Poxviridae)的病毒，其中开发应用最多的是杆状病毒杀虫剂。杆状病毒科主要包括核型多角体病毒(Nucleopolyhedrovirus，NPV)和颗粒体病毒(Granulovirus，GV)，最新的病毒分类根据杆状病毒基因组序列将杆状病毒科划分为4个属：(1)α-杆状病毒属(Alphabaculovirus)，宿主是鳞翅目昆虫的NPV；(2)β-杆状病毒属(Betabaculovirus)，主要包括颗粒体病毒(GV)；(3)γ-杆状病毒属(Gammabaculovirus)，宿主是膜翅目昆虫的NPV；(4)δ-杆状病毒属(Deltabaculovirus)，宿主是双翅目昆虫的NPV。一种杆状病毒往往有多个不同的毒株或分离株，自Steinhaus(1949)在美国加利福尼亚州首次分离出1株甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeMNPV)后，世界各地陆续分离获得多株SeMNPV野生病毒株，如SeMNPV-SP3、SeMNPV-UZB、SeMNPV-TH等，不同地域的宿主昆虫对不同毒株的敏感性会有差异，有针对性地分离和筛选对害虫具有高毒力的毒株，才能生产出杀虫活性较高的产品。因此，本发明分离筛选新的具有高毒力的毒株对于甜菜夜蛾的无公害防治具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株，从而弥补现有技术的不足。
本发明的一个方面提供一种甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV-QD(Spodopteraexigua Nucleopolyhedrovirus SeMNPV-QD)，其于2017年12月16日保藏于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:V201768。
本发明分离的病毒毒株，可用于制备用于防治甜菜夜蛾的生物杀虫剂。
本发明再一个方面提供一种防治甜菜夜蛾的生物杀虫剂，其中包含有药理有效浓度的SeMNPV-QD病毒株。
本发明分离的病毒菌株，可侵染甜菜夜蛾胚胎细胞系，通过细胞系增殖的病毒对甜菜夜蛾具有较好的杀虫效果。
本发明还提供从病毒中得到的4个特异基因，其蛋白序列见SEQ ID NO:1(ORF24)、SEQ ID NO:2(ORF39)、SEQ ID NO:3(ORF59)和SEQ ID NO:4(ORF94)。
本发明的病毒毒株分离于山东省青岛市城阳区的甜菜夜蛾病死虫，对甜菜夜蛾幼虫具有很高的杀虫活性。
附图说明
图1：本发明的甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV-QD的形态图，其中A为扫描电子显微镜图，B为透射电子显微镜图。
图2：本发明的甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV-QD与其他杆状病毒通过核心基因构建的系统发育树图。
图3：本发明的甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV-QD对甜菜夜蛾细胞系的侵染图，其中A为Se-3对照细胞，B为SeMNPV-QD感染4d的Se-3细胞。
具体实施方式
本发明对分离于我国山东省青岛市的一株具有防治甜菜夜蛾的病毒的形态、毒力进行研究，通过基因组序列分析比较，显示该病毒为一种新型的病毒，对甜菜夜蛾具有较高的毒力，将在甜菜夜蛾的防治中具有良好的应用潜力和广阔的应用前景。
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
实施例1：病毒的筛选
一、病毒的筛选
1、病毒筛选
本发明的病毒是由山东省青岛市城阳区的甜菜夜蛾病死虫体内分离得到的，采用饲料混合法，将分离的病毒以108PIB/mL的浓度接种于甜菜夜蛾三龄初期幼虫，每头接毒量10μL，置于(27±1)℃、光暗比为16h：18h的光照培养箱内培养，待幼虫出现感染症状后，及时回收病死虫。
2、病毒提纯
收集病死虫，每头虫加1mL灭菌水，研磨病死虫，并用3层纱布过滤。加入终浓度为1％的SDS，室温放置30min，期间振荡多次。5000×g、4℃离心10min后，收集沉淀并用水悬浮，置于4℃冰箱中保存。在离心管中制备40％到65％的蔗糖梯度，将1.5mL浓度为4.0×109PIB/mL的病毒液加入到装有蔗糖梯度溶液的离心管中，96000×g、4℃离心3h。吸取白色纯净的病毒于离心管中，加水稀释，5000×g、4℃离心10min后，去上清，用水再洗2次，4℃保存。
3、病毒对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定
将筛选的病毒株分别设1×106、1×105、1×104、1×103和1×102PIB/mL 5个浓度病毒悬浮液，以无菌水作为对照，每个处理重复3次，每个重复30头三龄甜菜夜蛾幼虫。在24孔培养板中进行测定，每孔加适当大小的人工饲料(幼虫一天内吃完)，然后在饲料上分别均匀滴加10μL不同浓度的病毒悬浮液或无菌水，置于27±1℃，光暗比为16h：8h的光照培养箱内饲养，待带毒饲料吃完后，更换新鲜饲料继续饲养，逐日检查并记录各处理死亡虫数，用DPS数据处理软件计算LD50及其95％置信限。
用筛选的病毒株感染三龄甜菜夜蛾幼虫，随着病毒浓度的提高，甜菜夜蛾幼虫的死亡率也随之升高。经计算，筛选的病毒株对三龄甜菜夜蛾幼虫的LC50为5.90×103PIB/mL，其95％置信区间为6.04×102PIB/mL～3.69×105PIB/mL，死亡率几率值与病毒浓度对数的回归方程为Y＝2.8475+0.5709X。以上结果表明，筛选的病毒株对甜菜夜蛾幼虫具有明显的杀虫效果，具有良好的防治甜菜夜蛾的应用潜力。
二、筛选的病毒株的形态学特征
1、扫描电镜形态观察
将提纯的病毒株用3％戊二醛固定4h，0.1mol/L磷酸缓冲液漂洗，1％锇酸固定90min，0.1mol/L磷酸缓冲液漂洗，在浓度为30％、50％、70％、80％、100％酒精中梯度脱水，每次10min，100％酒精2次。浓乙酸异戊脂置换，浓度50％一次，100％两次。使用Eiko公司XD-1型二氧化碳临界点干燥器干燥，IB-3型离子镀金仪喷金镀膜，扫描电镜观察。
扫描电镜下，所筛选的病毒株表面较为光滑，边缘整齐，呈多面体结构、近球形、不规则形等形状(图1A)。多角体的大小范围在0.8～1.65μm之间，平均大小为1.16±0.47μm。
2、超薄切片的制备及透射电镜观察
将病毒株用4％的琼脂预包埋，2.5％戊二醛4℃固定4h。用0.2mol/L pH 7.4的磷酸缓冲液冲洗3次，每次10min。经1％锇酸4℃固定2h后，再用0.2mol/L pH 7.4的磷酸缓冲液冲洗3次，每次10min。以浓度为30％、50％、70％、90％、100％系列丙酮梯度脱水，每次10min，浓度100％丙酮脱水两次。环氧树脂Epon812浸透包埋，于37℃、45℃、65℃温箱固化，每级温度24h。使用UltracutE超薄切片机超薄切片，经醋酸双氧铀和硝酸铅双染色，在JEOL公司JEM-1200EX透射电镜下观察。
透射电子显微镜下可以看到，病毒粒子在多角体内被蛋白质晶格紧密封闭包埋，随机分布。病毒属于多粒包埋型，病毒束内所包含的病毒粒子大多数为1～19个，病毒束为长杆状(图1B)，单个病毒粒子长度为246.68±8.62nm，直径为25.07±1.32nm。
三、病毒株基因组测定和分析
1、病毒粒子提纯
取提纯的病毒株900μL，加入1mol/L Na2CO3病毒裂解液100μL，室温放置30min。加入1mol/L的Tris-HCl(pH7.6)100μL中和溶液，7000×g、4℃离心10min，取上清。12000×g、4℃离心30min，弃上清，并加入1mL灭菌纯水水洗，离心后弃上清，沉淀即病毒粒子，溶于200μL纯水，置于4℃冰箱保存。
2、病毒基因组提取
使用东洋纺(上海)生物科技有限公司的MagExtrator R-Genome-试剂盒将分离纯化的病毒粒子进行病毒基因组DNA的提取，并送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。
3、病毒基因组序列分析
ORF使用DNAstar 5.0进行预测，将大于50个氨基酸的序列作为一个ORF。通过BLAST对比不同序列间的同源性，使用Megalign对比分析不同ORF间编码蛋白质相似度。使用MEGA6.06，利用已测序的杆状病毒37个核心基因进行系统发育树的构建。
所筛选的病毒株的基因组序列分析表明，新病毒毒株的基因组序列全长为128,523bp，比甜菜夜蛾核型多角体病毒US1株SeMNPV-US1(NC_002169)基因组少7,088bp；基因组序列C+G％为37.41％，少于SeMNPV-US1(43.8％)，并且低于杆状病毒groupⅠ(44.9％)以及groupⅡ(41.6％)的平均G+C％。所筛选的病毒株的基因组共包含大于150bp的ORF 126个，编码区占整个基因组的87.53％。在所筛选的病毒株的基因组中，包含了杆状病毒基因组中的37个核心基因。通过对杆状病毒37个核心基因建立进化树(图2)，发现筛选的病毒株属于杆状病毒科(Baculoviridae)、α-杆状病毒属(Alphabaculovirus)、第二组(groupⅡ)，是一种新的甜菜夜蛾病毒。
进一步分析发现，筛选的病毒株与斜纹夜蛾Spodoptera lituranucleopolyhedrovirus II(SpliNPV-II)(GenBank accession no.NC_011616)、草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus(SfMNPV)(GenBankaccession no.NC_009011)、黄地老虎Agrotis segetum nucleopolyhedrovirus(AgseNPV)(GenBank accession no.NC_007921)、黄地老虎AgseNPV-B(GenBank accessionno.NC_025960)、小地老虎Agrotis ipsilon multiple nucleopolyhedrovirus(AgipNPV)(GenBank accession no.NC_011345)也具有较近的同源关系。考虑到所筛选的病毒株分离自甜菜夜蛾病死虫且与甜菜夜蛾核型多角体病毒的遗传关系较近，所以将病毒株命名为甜菜夜蛾核型多角体病毒SeMNPV-QD(Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus SeMNPV-QD)，并于2017年12月16日保藏于位于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:V201768。
本发明的另一个方面涉及新病毒毒株的4个特异基因，其蛋白序列见SEQ ID NO:1(ORF24)、SEQ ID NO:2(ORF39)、SEQ ID NO:3(ORF59)和SEQ ID NO:4(ORF94)。
实施例2:SeMNPV-QD对甜菜夜蛾细胞系的侵染
一、SeMNPV-QD对甜菜夜蛾细胞系的侵染
取对数生长期生长状况良好的甜菜夜蛾细胞系Se-3，稀释细胞浓度至1×105cell/mL，接入24孔板中，每孔1mL，27℃培养使细胞贴壁，弃培养基，接入感染复数(MOI)为10的SeMNPV-QD病毒，每孔1mL，置于垂直摇床缓慢摇1h，弃病毒液，每孔加入1mL新鲜培养基，每个处理3个重复，并设置空白对照，27℃静置培养，显微镜下观察并计算细胞的感染率和病毒多角体产量。
用SeMNPV-QD病毒感染甜菜夜蛾细胞系Se-3，3d后可在显微镜下观察到细胞发生病变，细胞核膨大，部分细胞内有多角体形成，4d后病毒感染症状明显，大量细胞中形成多角体(图3)，之后细胞逐渐破碎，多角体开始释放到培养基中。经计算，4d的细胞感染率为97.6％，平均每个细胞的病毒多角体产量为56.8个。
二、细胞增殖的SeMNPV-QD对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定
将Se-3细胞增殖的SeMNPV-QD的多角体进行计数，分别稀释至1×106、1×105、1×104、1×103和1×102PIB/mL 5个浓度，以无菌水作为对照，每个处理重复3次，每个重复30头三龄甜菜夜蛾幼虫。在24孔培养板中进行测定，每孔加适当大小的人工饲料(幼虫一天内吃完)，然后在饲料上分别均匀滴加10μL不同浓度的病毒悬浮液或无菌水，置于27±1℃，光暗比为16h：8h的光照培养箱内饲养，待带毒饲料吃完后，更换新鲜饲料继续饲养，逐日检查并记录各处理死亡虫数，用DPS数据处理软件计算LD50及其95％置信限。
利用细胞增殖的SeMNPV-QD对三龄甜菜夜蛾幼虫进行生物测定，在接毒第3～4天开始有试虫发病，病毒感染的典型死亡症状为行动缓慢，体色变淡，表皮一触即破，并流出乳白色液体。随着病毒浓度的增加，幼虫死亡率增加，SeMNPV-QD的LC50为7.36×103PIB/mL，其95％置信区间为9.83×102PIB/mL～1.99×105PIB/mL，死亡率几率值与病毒浓度对数的回归方程为Y＝2.7711+0.5764X。SeMNPV-QD经甜菜夜蛾细胞系增殖后，对甜菜夜蛾幼虫仍具有较好的杀虫效果。
实施例3：SeMNPV-QD生物杀虫剂对甜菜夜蛾的杀虫效果测定
一、SeMNPV-QD生物杀虫剂的制备
1、SeMNPV-QD的增殖
SeMNPV-QD的增殖可以通过以下两种方法进行：
(1)活虫体增殖：取浓度为108PIB/mL的病毒液与人工饲料混合，以106PIB/虫的剂量饲喂四龄甜菜夜蛾幼虫，待幼虫出现感染症状时收集病死虫，加适量的灭菌水，置4℃冰箱中保存。
(2)细胞系增殖：在25cm2或75cm2细胞培养瓶中培养甜菜夜蛾细胞Se-3，以感染复数(MOI)为10的SeMNPV-QD病毒接种细胞，27℃静置培养，待细胞感染出现典型症状时，收集细胞悬液，经5000×g离心20min后，弃去上清，置4℃冰箱中保存。
2、SeMNPV-QD的提纯
SeMNPV-QD的提纯根据病毒增殖方法的不同，通过以下两种方法进行：
(1)病死虫体内病毒多角体的提纯：将收集的病死虫用研磨器匀浆，稀释后用3层纱布过滤；滤液中加入终浓度为1％的SDS，室温处理30min；滤液经5000×g、离心20min后，弃去上清液；将沉淀用水悬浮，再经5000×g、离心20min后，弃去上清液，所得沉淀为病毒多角体。
(2)细胞增殖病毒多角体的提纯：将收集的感染细胞加入适量无菌水，超声波破碎细胞；加入终浓度为1％的SDS，室温处理30min；悬液经5000×g、离心20min后，弃去上清液；将沉淀用水悬浮，再经5000×g、离心20min后，弃去上清液，所得沉淀为病毒多角体。
3、SeMNPV-QD杀虫剂的制备
用水悬浮收集的病毒多角体沉淀，稀释病毒多角体浓度至1×109PIB/mL，即为SeMNPV-QD杀虫剂。
二、SeMNPV-QD生物杀虫剂对甜菜夜蛾幼虫的室内毒力测定
将SeMNPV-QD杀虫剂分别用水稀释至1×108、1×107、1×106、1×105和1×104PIB/mL等5个浓度，以无菌水作为对照。在养虫盒中的人工饲料表面，按每平方厘米饲料0.1mL病毒液或水的比例分别均匀喷雾不同浓度的病毒液或无菌水，阴凉处放置待饲料表面无液体后，每个养虫盒内接种30头一龄甜菜夜蛾幼虫，每个处理重复3次。置于27±1℃，光暗比为16h：8h的光照培养箱内饲养，逐日检查并记录各处理死活虫数，用DPS数据处理软件进行数据处理。
SeMNPV-QD生物杀虫剂对甜菜夜蛾一龄幼虫的防治效果见表1，随着病毒浓度的提高，甜菜夜蛾幼虫的死亡率也随之升高。在浓度大于1×106PIB/mL时，病毒杀虫剂对甜菜夜蛾一龄幼虫7天和10天的校正死亡率均在90％以上，在浓度大于1×105PIB/mL时，病毒杀虫剂对甜菜夜蛾一龄幼虫7天和10天的校正死亡率均高于80％。结果表明，病毒杀虫剂对甜菜夜蛾幼虫有很高的杀虫活性，具有良好的防治甜菜夜蛾的应用潜力。
表1：SeMNPV-QD生物杀虫剂对甜菜夜蛾一龄幼虫的防治效果
序列表
<110> 青岛农业大学
<120> 一种具有防治甜菜夜蛾功能的病毒株
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 473
<212> PRT
<213> 多角体病毒(Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus)
<400> 1
Met Ala Leu Val Lys Lys Ser Cys Asn Ile Ser Gly Val Glu Cys Glu
1 5 10 15
Ile Trp Ile Val Glu Val Glu Lys Asp Lys Phe Met Tyr Gly Gly His
20 25 30
Gly Val Ala Gln Phe Leu Gly Tyr Lys Gln Pro Lys Asp Ala Ile Arg
35 40 45
Val His Val Lys Pro Ala Trp Arg Lys Asn Trp Glu Glu Ile Lys Val
50 55 60
Ala Ile Asn Tyr Ser Pro Leu Val Thr Ser Ser Gln Thr Ile Thr Thr
65 70 75 80
Pro Ala Asn Trp Gln Pro Asn Thr Val Phe Ile Ser Glu Ala Gly Val
85 90 95
Tyr Ala Leu Ile Met Arg Ser Lys Leu Pro Ala Ala Glu Glu Phe Gln
100 105 110
Arg Trp Leu Phe Glu Glu Val Leu Pro Glu Leu Arg Arg Thr Gly Lys
115 120 125
Tyr Gln Ala Ser Ser Gly Thr Asp Val Val Asn Tyr Asp Lys Lys Leu
130 135 140
Ala Asp Ser Gln Met Glu Ala Leu Gln Leu Lys Leu Gln Leu Ser Glu
145 150 155 160
Ala Asn Thr Thr Ile Ser Glu Ile Lys Arg Asn Tyr Glu Asn Gln Ile
165 170 175
Ala Glu Phe Lys Glu Arg Glu Tyr Lys Met Gln Leu Gln Met Lys Asp
180 185 190
Met Val Asn Ala Ala Asn Met Thr Met Thr Gln Phe Ala Val Asn Ala
195 200 205
Leu Leu Ala Lys Asp Asn Ile Glu Glu Asn Gln Gln Met Arg Gln Thr
210 215 220
Leu Thr Asp Ile Ser Gly Arg Val Val Pro Glu Leu Lys Glu Gln Pro
225 230 235 240
His Lys Glu Glu Tyr Ile Thr Gly Tyr Glu Arg Ile Val Asn Gly Lys
245 250 255
Arg Arg Ile Arg Met Cys Arg Ser Gln Phe His Thr Ile Ala Gln His
260 265 270
Asp Lys Val Ile Gln Arg Tyr Arg Asp Val Ala Gln Asn Lys Arg Pro
275 280 285
Lys Thr Gly Thr Ser Asn Ser Lys Arg Tyr Ala Trp Leu Arg Asp Ser
290 295 300
Glu Lys Phe Leu Gln Leu Lys Cys Pro Ser Pro Val Met Val Trp Ile
305 310 315 320
Lys Val Arg Thr Glu Arg Pro His Met Phe Tyr Gly Leu Arg Tyr Thr
325 330 335
Asn Lys Leu Lys Thr Glu Met Glu Val Leu Asn Glu Gln Glu Leu Arg
340 345 350
Ala Lys Tyr Arg Ser Asp Val Asp Met Cys Lys Arg Asn Arg Val Asn
355 360 365
His Ser Lys Leu Ile Glu Glu Phe Lys Ser Leu Lys Leu Ser Asp Glu
370 375 380
Asn Asp Cys Val Ala Lys Cys Leu Met Ser Ser Val Asp Val Lys Glu
385 390 395 400
Arg Ile Asn Thr Ile Val Glu Lys Ile Ile Glu Asp Met Lys Glu Phe
405 410 415
Val Pro Asn Thr Gln Gln Arg Ser His Ser Asn Ala Gly Asp Ile Tyr
420 425 430
Thr Ala Glu Gln Val Val Tyr Ala Met Asn Asn Cys Gln Asn Tyr Phe
435 440 445
Val Lys Asn Ile Tyr Asn Ile Asn Leu Phe Ala Ala Thr Asn Ala Ala
450 455 460
Ser Ile Glu Asn Val Ser Ser Glu Lys
465 470
<210> 2
<211> 112
<212> PRT
<213> 多角体病毒(Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus)
<400> 2
Met Ser Thr Tyr Lys Asp Gln Met Val Lys Ala Gln Gln Lys Asn Ile
1 5 10 15
Ile Asn Arg Ile Ala Asn Arg Glu Ile Asn Gly Thr Leu Asp Lys Phe
20 25 30
Glu Thr Ala Leu Ser Thr Asn Arg Leu Tyr Cys Ile Met Asp Lys Lys
35 40 45
Asn Gln Ser Leu Asn Asn Asp Asn Arg Lys Cys Pro Tyr Leu Tyr Glu
50 55 60
Ala Glu Ser Ile Asp Phe Ser Lys Ser Leu Tyr Arg Thr Arg Glu Ile
65 70 75 80
Ile Lys Arg Cys Val Ile Cys Thr Arg Ala Leu His Leu Leu Phe Asp
85 90 95
Leu Lys Arg Asn Val Cys Ser Phe Cys Asn Cys Ser Thr Gly Lys Lys
100 105 110
<210> 3
<211> 275
<212> PRT
<213> 多角体病毒(Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus)
<400> 3
Met Leu Pro Ile Lys Ser Glu Leu Phe Lys Phe Glu Asp Lys Gln Phe
1 5 10 15
Lys Leu Arg Tyr Val Ile Asp Lys Asp Asp Lys Ile Leu Phe Val Ala
20 25 30
Lys Asp Val Ala His Ala Leu Gln Tyr Asp Asn Ile Lys Arg Ala Ile
35 40 45
Ala Ile Tyr Val Asp Thr Lys Tyr Lys Ser Ile Tyr Asn Val Asn Ser
50 55 60
Ser Asp Glu Ser Gln Thr Ile Met Ile Asn Lys Ser Gly Val Ile Gln
65 70 75 80
Leu Ile Met Lys Ser Lys Ser Pro Lys Ala Ile Gln Leu Gln Ala Trp
85 90 95
Phe Leu Glu Gln Val Ile Pro Gln Val Leu Ser Thr Lys Thr Ala Thr
100 105 110
Asp Val Glu His Lys Lys Asp His Leu Ala Glu Gln Met Lys Lys Val
115 120 125
Cys Glu Gln Lys Asp Arg Thr Ile Asn Gln Ile Leu Lys Arg Met Thr
130 135 140
His Met Tyr Thr Arg Phe His Gln Asp Met Leu Lys Glu Arg Ala Arg
145 150 155 160
Thr Val Ala Phe Pro Lys Lys His Asn Lys Met Pro Val Ile Cys Ile
165 170 175
Leu Gln Asp Asn Asn Val Val Glu Ala Ile Thr Gly Gln Arg Lys Tyr
180 185 190
Val Glu Lys Gln Lys Ala Ile Arg Lys Phe Lys Lys Glu Tyr Ile Ile
195 200 205
Leu Glu Thr Thr Arg Ile Asn Pro Ala Leu Asp Trp Thr Asn Ala Val
210 215 220
Glu Lys Leu Lys Leu Leu Ser Lys Arg His Arg Val Lys Lys Phe Pro
225 230 235 240
Arg Ser Val His Phe Lys His Lys Glu Asp Ala Val Arg Phe Thr Asn
245 250 255
Met Ile Lys Thr Met Phe Leu Lys Gly Asn Asn Val Ile Asp Gln Ile
260 265 270
Lys Tyr Leu
275
<210> 4
<211> 67
<212> PRT
<213> 多角体病毒(Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus)
<400> 4
Met Asp Thr Asp Asp Ile Phe Glu Arg Glu Lys Ile Lys Ile Ile Pro
1 5 10 15
Tyr Asp Leu Tyr Gly Thr Leu Lys Arg Tyr Lys Phe Val Arg Ala His
20 25 30
Asp Gly Glu Tyr Tyr Tyr Leu Asp Lys Tyr Thr Asp Lys Val Arg Lys
35 40 45
Phe Ser Lys Gln Leu Lys Thr Leu Ser Asp Tyr Lys Asp Tyr Leu Ile
50 55 60
Leu Val Tyr
65

Claims (4)

1.一种病毒株，其特征在于，所述的病毒株的保藏编号为CCTCC No:V201768。
2.权利要求1所述的病毒株在制备用于防治甜菜夜蛾的生物杀虫剂中的应用。
3.一种杀虫剂，其特征在于，所述的杀虫剂，其中包含有药理有效浓度的权利要求1所述的病毒株。
4.权利要求1所述的病毒株在防治甜菜夜蛾中的应用。
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