CN108144745A - 一种分离装置以及减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及疫苗内毒素分离领域，特别涉及一种分离装置以及减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法。一种分离装置，包括容器、薄膜、免疫磁珠以及用于吸附磁珠的装置；薄膜将容器的内部分为至少两部分；免疫磁珠由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；免疫磁珠用于放入容器内的一部分，并在该部分的容器外部放置吸附磁珠的装置；薄膜的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质。本发明提供的分离装置，根据免疫磁珠法与膜阻断法结合进行设置，可有效减少疫苗中内毒素的含量，易于操作。

Description

一种分离装置以及减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法
技术领域
本发明涉及疫苗内毒素分离领域，具体而言，涉及一种分离装置以及减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法。
背景技术
布氏菌在疫苗生产过程中，由于多种因素的影响，大量的菌体死亡崩解，脂多糖(LPS)进入培养液中，构成内毒素的主要成分。疫苗中内毒素过高，会导致严重的副作用，可能会引起受免动物体温升高、精神萎靡、产奶量减少等现象，会给农牧民造成经济损失。
目前减少布氏菌病活疫苗中内毒素的方法，主要是采用优化菌的培养条件、控制收菌时间等方法，尽量减少疫苗中死菌的数量。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种分离装置，该分离装置以免疫磁珠法与膜阻断法相结合进行设置，可有效有效减少疫苗中内毒素的含量。
本发明的第二目的在于提供一种减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，该方法采用免疫磁珠法与膜阻断法相结合，可有效有效减少疫苗中内毒素的含量。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种分离装置，包括容器、薄膜、免疫磁珠以及用于吸附磁珠的装置；
所述薄膜将所述容器的内部分为至少两部分；
所述免疫磁珠由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；
所述免疫磁珠用于放入所述容器内的一部分，并在该部分的容器外部放置吸附磁珠的装置；
所述薄膜的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质。
本发明提供的分离装置，根据免疫磁珠法与膜阻断法结合进行设置，这样将待分离的疫苗液放入容器中的一部分时，其中的疫苗液中的LPS、菌体碎片等，渗透薄膜进入容器中的其他部分，并与容器其他部分中的免疫磁珠结合，形成复合物，进而被吸附磁珠的装置吸附住，这样，从加入待分离疫苗液的容器部分将待分离的疫苗液吸出，LPS、菌体碎片等以复合物的形式被吸附磁珠的装置吸附住而残留在容器中的某部分中，吸出的待分离的疫苗液中的这些毒素和杂质明显减少，实现了疫苗液的纯化。
进一步地，所述吸附磁珠的装置为磁力架。
优选地，所述薄膜的孔隙为0.2-0.5μm。
优选地，所述吸附磁珠的装置设置在远离未放置所述免疫磁珠的容器部分的外壁上。
进一步地，所述磁珠的粒径为0.3-0.5μm。
本发明还提供了一种减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，脂多糖抗体与磁珠偶联制备免疫磁珠；
所述免疫磁珠放入上述的分离装置中的容器外部放置有吸附磁珠的装置的容器部分，待分离布氏菌病活疫苗液加入至容器的另外部分中；
静置一段时间后，吸出待分离布氏菌病活疫苗液即可得到内毒素含量减少的疫苗液。
本发明提供的减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，采用免疫磁珠法与膜阻断法相结合，LPS抗体与磁珠偶联制备免疫磁珠，薄膜阻断疫苗完整菌体，疫苗液中的LPS、菌体碎片等，渗透并穿过薄膜与另一端的磁珠－LPS抗体复合物结合，正常菌体不能穿过薄膜。磁珠-LPS抗体-LPS形成复合物，LPS浓度减少，由于渗透压作用，疫苗液中的LPS不断穿过膜，与免疫磁珠结合。磁力架吸附磁珠-LPS抗体-LPS复合物，LPS及菌碎片不会再通过渗透作用穿膜进入疫苗液中，从而有效减少疫苗中内毒素含量。该方法操作简便易行，实现了疫苗液的纯化，减少疫苗的副反应，意义重大。
优选地，先在容器的一部分加入待分离布氏菌病活疫苗液，待容器中各部分的液面稳定后，再在容器外部放置有吸附磁珠的装置的容器部分加入所述免疫磁珠。
进一步地，加入待分离布氏菌病活疫苗液后，轻抽混匀，静置1-3min。
进一步地，所述静置的时间为8-15min。
进一步地，所述薄膜的孔隙为0.22-0.45μm。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明提供的分离装置，以免疫磁珠法与膜阻断法相结合进行设置，可有效有效减少疫苗中内毒素的含量。
(2)本发明采用免疫磁珠法与膜阻断法相结合，可有效有效减少疫苗中内毒素的含量，方法简便，并且安全无毒。
(3)经过本发明提供的减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法处理后，疫苗中的内毒素含量减少85％以上，效果显著。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例1中的分离装置的结构示意图；
图2为本发明实施例2中的分离装置的结构示意图；
图3为本发明实施例加入布氏菌病活疫苗时的分离装置的结构示意图。
图中：
1-容器；2-薄膜；3-免疫磁珠；4-磁力架；5-菌体；6-脂多糖；7-液面。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明实施例提供了一种分离装置，如图和图2所示，包括容器1、薄膜2、免疫磁珠3以及用于吸附磁珠的装置；
所述薄膜2将所述容器1的内部分为至少两部分；
所述免疫磁珠3由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；
所述免疫磁珠3用于放入所述容器1内的一部分，并在该部分的容器1外部放置吸附磁珠的装置；
所述薄膜2的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质。
本发明提供的分离装置，根据免疫磁珠法与膜阻断法结合进行设置，这样将待分离的疫苗液放入容器1中的一部分时，其中的疫苗液中的LPS、菌体碎片等，渗透薄膜进入容器中的其他部分，并与容器其他部分中的免疫磁珠3结合，形成复合物，进而被吸附磁珠的装置吸附住，这样，从加入待分离疫苗液的容器部分将待分离的疫苗液吸出，LPS、菌体碎片等以复合物的形式被吸附磁珠的装置吸附住而残留在容器1中的某部分中，吸出的待分离的疫苗液中的这些毒素和杂质明显减少，实现了疫苗液的纯化。
进一步地，所述吸附磁珠的装置为磁力架4。磁力架4贴附容器1外壁设置，易于制备。
优选地，所述薄膜2的孔隙为0.2-0.5μm。薄膜2的孔隙根据所分离的物质选择，一般分离疫苗中的内毒素等，该孔隙大小可满足需求。
优选地，所述吸附磁珠的装置设置在远离未放置所述免疫磁珠3的容器1部分的外壁上。即吸附磁珠的装置如磁力架放置在离加入待分离疫苗液的容器远的容器1外壁上，以防止后续吸出疫苗液时，该吸力对磁珠吸附的物质影响。
进一步地，所述磁珠的粒径为0.3-0.5μm。适当大小的磁珠既保证吸附足量的内毒素以及菌体碎片等，又能保证适当的吸引力。
本发明还提供了一种减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，脂多糖抗体与磁珠偶联制备免疫磁珠3；
所述免疫磁珠3放入上述的分离装置中的容器1外部放置有吸附磁珠的装置的容器1部分，待分离布氏菌病活疫苗液加入至容器1的另外部分中；
静置一段时间后，吸出待分离布氏菌病活疫苗液即可得到内毒素含量减少的疫苗液。
本发明提供的减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，采用免疫磁珠法与膜阻断法相结合，LPS抗体与磁珠偶联制备免疫磁珠3，薄膜2阻断疫苗完整菌体，疫苗液中的LPS、菌体碎片等，渗透并穿过薄膜2与另一端的磁珠－LPS抗体复合物结合，正常菌体不能穿过薄膜2。磁珠-LPS抗体-LPS形成复合物，LPS浓度减少，由于渗透压作用，疫苗液中的LPS不断穿过膜，与免疫磁珠3结合。磁力架4吸附磁珠-LPS抗体-LPS复合物，LPS及菌碎片不会再通过渗透作用穿膜进入疫苗液中，从而有效减少疫苗中内毒素含量。该方法操作简便易行，实现了疫苗液的纯化，减少疫苗的副反应，意义重大。
其中，磁珠(市售)采用活泼酯法活化，与LPS抗体(抗体制备采用传统方法制备，不再赘述)进行共价偶联，制备成免疫磁珠3。
优选地，先在容器1的一部分加入待分离布氏菌病活疫苗液，待容器1中各部分的液面稳定后，再在容器1外部放置有吸附磁珠的装置的容器1部分加入所述免疫磁珠3。
这样，待分离布氏菌病活疫苗液通过薄膜进行溶液扩散，疫苗液中的LPS、菌体碎片等扩散到容器1中的其他部分，而布氏菌病活疫苗由于粒径大而不能扩散到容器1中的其他部分，这样容器1中各部分液面7稳定后，再在容器1中的某部分加入免疫磁珠3，容器1中该部分扩散出的LPS、菌体碎片等快速吸附，形成复合物。
若先加入免疫磁珠3，容器中的LPS、菌体碎片等在扩散过程中容易聚集在一起，影响LPS、菌体碎片等的充分向外扩散。
进一步地，加入待分离布氏菌病活疫苗液后，轻抽混匀，静置1-3min。通过混匀，使得疫苗液中的各成分分散均一，防止物质间的凝聚。
进一步地，所述静置的时间为8-15min。通过静置，溶液向容器1中其他部分扩散，并达到液面的平衡。
进一步地，所述薄膜2的孔隙为0.22-0.45μm。如在不同的实施例中，薄膜2的孔隙可以为0.22μm、0.25μm、0.30μm、0.35μm、0.40μm、0.45μm等等。
以下列举具体的例子对分离装置的结构以及减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法进行说明。
实施例1
如图1所示，本发明提供的分离装置，包括容器1、薄膜2、免疫磁珠3以及用于吸附磁珠的装置；
薄膜2将所述容器1的内部分为两部分，(1)室和(2)室；
免疫磁珠3由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；
免疫磁珠3用于放入容器1内的(2)室，并在该部分的容器外部放置吸附磁珠的装置-磁力架4；
薄膜2的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质；
进一步地，薄膜2的孔隙为0.2-0.5μm，磁珠的粒径为0.3-0.5μm。
实施例1
如图1所示，本发明提供的分离装置，包括容器1、薄膜2、免疫磁珠3以及用于吸附磁珠的装置；
薄膜2将所述容器1的内部分为三部分，(1)室、(2)室和(3)室；
免疫磁珠3由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；
免疫磁珠3用于放入容器1内的(2)室和(3)室，并在(2)室和(3)室的容器外壁放置吸附磁珠的装置-磁力架4；
薄膜2的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质；
进一步地，薄膜2的孔隙为0.2-0.5μm，磁珠的粒径为0.3-0.5μm。
实施例3
采用实施例1中的分离装置，磁珠(直径为0.3～0.5μm，市售)采用活泼酯法活化，与LPS抗体(抗体制备采用传统方法制备，不再赘述)进行共价偶联，制备成免疫磁珠3；
薄膜2采用0.22μm膜。
使用前分离装置均充分灭菌。
如图3所示，某品牌市售牛布氏菌病活疫苗(600×108cfu/mL)，牛布氏菌病活疫苗中含有菌体5、内毒素脂多糖6，由于浓度太高，加入稀释液后充分混匀，用注射器吸取稀释后的所有疫苗液(约10mL)，加入容器(1)室中，轻抽混匀，静置2min；
当(1)室中液体渗透至(2)室且液面7平齐时，疫苗液中的脂多糖6、菌体碎片等，渗透并穿过薄膜2与另一端的免疫磁珠3结合，正常菌体5不能穿过薄膜，此时达到一个平衡状态；
移液器加制备好的免疫磁珠3 500μL(50mg/10mL)到(2)室中，轻混，静置10min；
将磁力架4靠近(2)室远离(1)室一侧，吸附固定磁珠-LPS抗体-LPS复合物；
注射器从(1)室吸出疫苗液，进行免疫动物。
内毒素检测试剂盒(市售)检测疫苗去除内毒素前后内毒素含量，未去除内毒素前该疫苗液中含内毒素含量为6.43×107U/mL，去除内毒素后疫苗液内毒素含量为9.28×106U/mL，去除率达到85.6％，疫苗中内毒素含量明显减少。
实施例4
采用实施例1中的分离装置，磁珠(直径为0.3～0.5μm，市售)采用活泼酯法活化，与LPS抗体(抗体制备采用传统方法制备，不再赘述)进行共价偶联，制备成免疫磁珠3；
薄膜2采用0.45μm膜。
使用前分离装置均充分灭菌。
如图3所示，某品牌市售牛布氏菌病活疫苗(5×109cfu/mL)，含有菌体5、内毒素脂多糖6，用注射器吸取所有疫苗液(约10mL)，加入容器(1)室中，轻抽混匀，静置1min；
当(1)室中液体渗透至(2)室且液面7平齐时，疫苗液中的脂多糖6、菌体碎片等，渗透并穿过薄膜2与另一端的免疫磁珠3结合，正常菌体5不能穿过薄膜，此时达到一个平衡状态；
移液器加制备好的免疫磁珠3 500μL(50mg/10mL)到(2)室中，轻混，静置8min；
将磁力架4靠近(2)室远离(1)室一侧，吸附固定磁珠-LPS抗体-LPS复合物；
注射器从(1)室吸出疫苗液，进行免疫动物。
内毒素检测试剂盒(市售)检测疫苗去除内毒素前后内毒素含量，未去除内毒素前该疫苗液中含内毒素含量为6.25×107U/mL,去除内毒素后疫苗液内毒素含量为8.12×106U/mL，去除率达到87％，疫苗中内毒素含量明显减少。
实施例5
采用实施例1中的分离装置，磁珠(直径为0.3～0.5μm，市售)采用活泼酯法活化，与LPS抗体(抗体制备采用传统方法制备，不再赘述)进行共价偶联，制备成免疫磁珠3；
薄膜2采用0.36μm膜。
使用前分离装置均充分灭菌。
如图3所示，某品牌市售牛布氏菌病活疫苗(8×108cfu/mL)，含有菌体5、内毒素脂多糖6，用注射器吸取所有疫苗液(约10mL)，加入容器(1)室中，轻抽混匀，静置3min；
当(1)室中液体渗透至(2)室且液面7平齐时，疫苗液中的脂多糖6、菌体碎片等，渗透并穿过薄膜2与另一端的免疫磁珠3结合，正常菌体5不能穿过薄膜，此时达到一个平衡状态；
移液器加制备好的免疫磁珠3 500μL(50mg/10mL)到(2)室中，轻混，静置15min；
将磁力架4靠近(2)室远离(1)室一侧，吸附固定磁珠-LPS抗体-LPS复合物；
注射器从(1)室吸出疫苗液，进行免疫动物。
内毒素检测试剂盒(市售)检测疫苗去除内毒素前后内毒素含量，未去除内毒素前该疫苗液中含内毒素含量为6.15×107U/mL，去除内毒素后疫苗液内毒素含量为6.50×106U/mL，去除率达到89.4％，疫苗中内毒素含量明显减少。
另外，去除其他疫苗中的毒素也有非常明显的效果，去除率也均达95％以上。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种分离装置，其特征在于，包括容器、薄膜、免疫磁珠以及用于吸附磁珠的装置；
所述薄膜将所述容器的内部分为至少两部分；
所述免疫磁珠由待分离物质的抗体与磁珠偶联制备而成；
所述免疫磁珠用于放入所述容器内的一部分，并在该部分的容器外部放置吸附磁珠的装置；
所述薄膜的孔隙大于待分离物质，且小于被分离物质。
2.根据权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述吸附磁珠的装置为磁力架。
3.根据权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述薄膜的孔隙为0.2-0.5μm。
4.根据权利要求1-3任一项所述的分离装置，其特征在于，所述吸附磁珠的装置设置在远离未放置所述免疫磁珠的容器部分的外壁上。
5.根据权利要求1-3任一项所述的分离装置，其特征在于，所述磁珠的粒径为0.3-0.5μm。
6.一种减少布氏菌病活疫苗的内毒素含量的方法，其特征在于，脂多糖抗体与磁珠偶联制备免疫磁珠；
所述免疫磁珠放入权利要求1-5任一项所述的分离装置中的容器外部放置有吸附磁珠的装置的容器部分，待分离布氏菌病活疫苗液加入至容器的另外部分中；
静置一段时间后，吸出待分离布氏菌病活疫苗液即可得到内毒素含量减少的疫苗液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，先在容器的一部分加入待分离布氏菌病活疫苗液，待容器中各部分的液面稳定后，再在容器外部放置有吸附磁珠的装置的容器部分加入所述免疫磁珠。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，加入待分离布氏菌病活疫苗液后，轻抽混匀，静置1-3min。
9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为8-15min。
10.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述薄膜的孔隙为0.22-0.45μm。
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