CN108137562A - 吡唑嘧啶衍生物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了抑制酪蛋白激酶I(CKI)和/或白细胞介素‑1受体‑相关激酶1(IRAK1)的吡唑嘧啶衍生物以及它们的制造方法，包含它们的组合物以及其在治疗恶性疾病和失调的方法中的用途，以及治疗炎症性疾病和失调的方法。

Description

吡唑嘧啶衍生物及其用途
技术领域
本发明提供了吡唑嘧啶衍生物及其在治疗恶性疾病和失调的方法以及治疗炎症性疾病和失调的方法中的用途。
背景
酪蛋白激酶1家族(CK1或CKI)是在人类中具有六个成员(同种型)的丝氨酸/苏氨酸激酶：α、γ1、γ2、γ3、δ和ε。它们在长度以及N-末端序列(9-76个氨基酸)以及特别是C-末端(24-200个氨基酸)非催化结构域方面不同(Schittek and Sinnberg,MolecularCancer 2014,13:231)。
CK1δ和CK1ε在它们的激酶结构域中98％相同，在它们的C-末端调节结构域中53％相同(Fish KJ et al.J Biol Chem 1995,270:14875-14883)。鉴于CK1底物磷酸化存在一些冗余性，大多数CK1亚型具有不同的生物学作用。广泛的CK1底物表明CK1家族成员参与多种细胞过程，从调节膜运输、胞质分裂、小泡转运、核糖体生物发生、DNA修复、信号转导途径、细胞凋亡，以及涉及昼夜节律(Knippschild U et al.Cell Signal 2005,17:675-689；Cheong JK and Virshup DM.Int J Biochem Cell Biol 2011,43:465-469；Zemp I,etal.J Cell Sci 2014,127:1242-1253)。
CK1α在细胞分裂期间的有丝分裂纺锤体形成以及DNA修复机制中发挥作用，并参与RNA新陈代谢(Knippschild U et al.Cell Signal 2005,17:675-689)。它通过持续降解内源性mTOR抑制物DEPTOR来促进mTOR的活化(Duan S et al.Mol Cell 2011,44:317-324)。
CK1α在Wnt/β-连环蛋白信号转导途径的调节方面有重要作用。本申请的发明人已经显示CK1α是β-连环蛋白破坏复合物的关键组分。当Wnt受体不参与时，CK1α在丝氨酸残基S45处将β-连环蛋白磷酸化，这是引发另一个激酶GSK3的磷酸化所必需的(Amit etal.Genes Dev.2002 16:1066-1076)。
β-连环蛋白在残基T41、S37和S33处被GSK3磷酸化，产生遍在化降解决定子(ubiquitination degron)，征募E3SCF-β-TrCP，引起β-连环蛋白的遍在化和降解(CleversH and Nusse R Cell 2012,149:1192-1205)。本发明人进一步显示，小鼠肠上皮中CK1α的可诱导消融(ablation)触发大量的上皮Wnt应答，其令人惊讶地不改变肠内稳态，仅有很小的增强增殖并且没有肿瘤发生(Elyada et al.Nature 2011,470:409-413)。这与β-连环蛋白破坏复合物的其他组分例如APC的急性消融的结果是不同的，其引起稳态损失和肿瘤发生(O.J.Sansom,O.J.et al.Genes Dev.2004,18:1385-1390)。
本申请的发明人已经发现在CK1α消融之后稳态维持的原因是，平行于Wnt活化，CK1α消融诱导几个肿瘤抑制物途径，其中有DNA损伤应答(DDR)、细胞衰老和p53途径活化(Elyada E et al.Nature 2011,470:409-413,Pribluda A et al.Cancer Cell 2013,24:1-5)。
鉴于这些抗肿瘤途径活化的底层分子机制仍然是难以捉摸的，发明人已经发现，CK1α消融不成比例地诱导微小的DNA损伤，没有ATM活化的迹象，表明CK1α诱导的DDR和p53活化可能要求罕见的分子机制(Burstain I et al，未发表)。另外，发明人已经发现，CK1α消融引起一种新型炎性反应的诱导，称为副炎症(parainflammation)，其局限于上皮，没有常见的炎症反应征兆(炎性细胞浸润、灼热、发红、肿瘤和疼痛)(Pribluda A et al.CancerCell 2013,24:1-5,Lasry A and Ben-Neriah Y 2015,Trends in Immunology,Vol.36:217-228)。副炎症在抑制肿瘤发生时与WT p53活化协同作用，而在缺乏功能性p53时转变成肿瘤促进机制Pribluda A et al.Cancer Cell 2013,24:1-5，Aran et al.,GenomeBiol.2016Jul 8；17(1):145)。
鉴于已经确立的是CK1α是p53的主要调节物，发明人还发现的是，肠上皮中CKIδ和CK1ε的组合消融也引起p53活化，这可能与CK1α诱导的p53活化发生协同。
IRAK1被鉴定为MDS、AML的某些子集以及三阴性乳腺癌的治疗靶点(GarrettW.Rhyasen et al,2013,Cancer Cell 24,90-104,Rhyasen GW,Bolanos L,StarczynowskiDT,2013,Exp Hematol.41:1005-7,Zhen Ning Wee et al,2015,NATURE COMMUNICATIONS,6:8746)。IRAK1mRNA在～20-30％的MDS患者中过量表达，在所检查的大部分MDS骨髓样品中IRAK1蛋白显著地过量表达并且是超活化的。IRAK1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其介导引发自Tol-样受体(TLR)和白细胞介素-1受体(IL1R)的信号。在受体活化之后，IRAK1变为磷酸化的，其然后导致TRAF6征募，引起NF-κB和JNK途径的TRAF6活化。MDS(或AML)中IRAK1过量表达和/或超活化的分子来源不是确定性的。据认为，即使在没有感染的情况下，MDS克隆中TLR或必需辅因子的过表达可能导致慢性IRAK1活化。靶向IRAK1的小分子抑制物(IRAK1/4抑制物，Amgen Inc.)最初被开发用于自身免疫性和炎症性疾病。鉴于IRAK1在MDS中而不是在正常骨髓细胞中被超活化(即，磷酸化)，Starczynowski及其同事显示，IRAK抑制物治疗(IRAK1/4，Amgen)和IRAK1的敲低导致在体外和体内的MDS细胞增殖、祖细胞功能以及存活力的显著损害。Yu和同事显示，IRAK1过量表达通过NF-κB相关的细胞因子分泌赋予三阴性乳腺癌细胞(TNBC)生长优势，转移性TNBC细胞展现出IRAK1依赖性的增加，导致对IRAK1的遗传学和药理学抑制的高度易感性。紫杉醇处理TNBC细胞诱导强烈的IRAK1磷酸化、炎性细胞因子表达增加、癌症干细胞富集和对紫杉醇处理的获得性抗性。IRAK1的药理学抑制能够通过触发大量细胞凋亡来逆转紫杉醇抗性。还发现IRAK1是DEK转录靶点，对头颈部癌细胞的存活至关重要(Adams AK et al.Oncotarget.2015,22；6(41):43395-43407)，也是治疗炎症和免疫相关疾病的潜在靶点(Bahia MS et al.Cell Signal.2015Jun；27(6):1039-55)。
发明人因此发现，本发明的化合物能够抑制IRAK1，IRAK1是在血液恶性肿瘤中起重要作用的NF-κB途径的重要上游调节物。
一般说明
本发明提供了具有通式(I)的化合物，包括其任何立体异构体或盐：
其中
R1和R2各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C1-C5烷氧基、直链或支链C1-C5酰基，C5-C15芳基，C3-C7杂芳基，它们各自任选地被卤素、羟基、酯、醚、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基和酰胺中的至少一个取代；或
R1和R2与它们连接的氮原子一起形成可任选地包含N、O、NH、C＝N、C＝O或SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、卤素和氰基中的至少一个取代；
R3和R4各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基，它们任选地被卤素、羟基、烷氧基、C5-C15芳基，C3-C7杂芳基、酯和酰胺中的至少一个取代的；或
R1或R2与R3以及它们各自连接的碳原子和氮原子一起形成可任选地包含N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、羰基和卤素中的至少一个取代；
R5和R8各自独立地选自H、卤素、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；任选地被至少一个卤素取代；
R6选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基、C5-C10环烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基；任选地被直链或支链C1-C8烷基、C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤中的至少一个取代；
R7选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；被至少一个C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤取代。
本发明提供了具有通式(I)的化合物，包括其任何立体异构体或盐，其中：
R1和R2各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基、直链或支链C1-C5烷氧基、直链或支链C1-C5酰基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基，各自任选地被卤素、羟基、酯、醚、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基和酰胺中的至少一个取代；或
R1和R2与它们连接的氮原子一起形成可任选地包含N、O、NH、C＝N、C＝O或SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、直链或支链C2-C5烯基、直链或支链C2-C5炔基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、卤素和氰基中的至少一个取代；
R3和R4各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基，它们任选地被卤素、羟基、烷氧基、酯、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基和酰胺中的至少一个取代；
R1或R2与R3以及它们连接的碳原子和氮原子一起形成可任选地包含N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、直链或支链C2-C5烯基、直链或支链C2-C5炔基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、羰基和卤素中的至少一个取代；
R5和R8各自独立地选自任选地被至少一个卤素(在某些实施方式中，CF3)取代的H、卤素、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；
R6选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基、C5-C10环烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基；任选地被直链或支链C1-C8烷基、C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤中的至少一个取代；
R7选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；被C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤的至少一个取代。
在某些实施方式中，R1和R2各自独立地选自任选地被卤素、羟基、酯和酰胺的至少一个取代的H、直链或支链C1-C8烷基。
在某些实施方式中，R1和R2各自独立地选自任选地被卤素、羟基、酯和酰胺的至少一个取代的H、直链或支链C1-C5烷氧基。
在某些实施方式中，R1和R2各自独立地选自任选地被卤素、羟基、酯、醚和酰胺的至少一个取代的H、C1-C5酰基。
在其他实施方式中，R1和R2各自独立地选自任选地被卤素、羟基、酯、醚和酰胺取代的H、C5-C15芳基。
在某些实施方式中，R1和R2的至少一个是H。
在某些实施方式中，R4是H。在某些实施方式中，R3和R4是H。
在某些实施方式中，R5选自H、Cl和直链或支链C1-C4烷基。在某些实施方式中，R5是H。在某些实施方式中，R8选自H、Cl和直链或支链C1-C4烷基。在某些实施方式中，R8是H。在某些进一步的实施方式中，R5或R8之一是H(即，R5或R8中的仅一个是H，换句话说R5或R8之一不同于H)。
在某些实施方式中，R6选自直链或支链C1-C8烷基、C5-C10环烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基；以及R7选自被C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤的至少一个取代的直链或支链C1-C8烷基。
在某些实施方式中，R6选自直链或支链C1-C8烷基、C5-C10环烷基、4-6元饱和的杂环基。
在某些实施方式中，R7是被C3-C7环烷基和羟基的至少一个取代的直链或支链C1-C8烷基。
在某些实施方式中，R6选自各自任选地被直链或支链C1-C8烷基、C3-C7环烷基、卤素、羟基、CF3的至少一个取代的直链或支链C1-C8烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基。
在某些实施方式中，R7是被至少一个C3-C7环烷基取代的直链或支链C1-C8烷基。
在某些实施方式中，R1和R2与它们连接的氮原子一起形成任选包含N或O、NH、C＝N、C＝O或SO2的至少一个的4-7元饱和环(即，除了R1和R2连接的N原子之外)，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、羟基、卤素和氰基的至少一个取代。
在某些实施方式中，R1和R2与它们连接的氮原子一起形成4-7元饱和的环。
在某些实施方式中，R1和R2与它们连接的氮原子一起形成包含N或O的至少一个(除了R1和R2连接的N原子之外)的4-7元饱和的环。
在进一步的实施方式中，R1和R2与它们连接的氮原子一起形成任选地包含N或O的至少一个(除了R1和R2连接的N原子之外)的4-7元芳族环。
在某些实施方式中，R1或R2与R3和它们连接的碳原子和氮原子一起形成任选地包含N、NH、O、C＝O、SO2的至少一个的4-7元饱和的环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、羟基、羰基和卤素的至少一个取代。
在某些实施方式中，R1或R2与R3和它们连接的碳原子和氮原子一起形成包含NH、O或C＝O的至少一个的4-7元饱和的环。
在某些实施方式中，本发明的化合物选自以下的：
在某些实施方式中，本发明的化合物是：
在某些实施方式中，本发明的化合物是：
在其他实施方式中，本发明的化合物是：
术语“直链或支链C1-C8烷基”应当被理解为涵盖烃饱和链，其可以是直链或支链的，包含1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子
术语“直链或支链C2-C8烯基”或“直链或支链C2-C5烯基”应当被理解为涵盖烃链，其具有链中至少一个任何两个碳原子之间的双键的烃链，其可以是直链或支链的，分别包含2、3、4、5、6、7或8个碳原子或2、3、4、5个碳原子。
术语“直链或支链C2-C8炔基”应当被理解为涵盖烃链，其具有链中至少一个任何两个碳原子之间的三键，其可以是直链或支链的，包括2、3、4、5、6、7或8个碳原子。
术语“直链或支链C1-C5烷氧基”应当被理解为涵盖-OR9部分，其中R9是直链或支链C1-C5烷基。
术语“卤素”应当被理解为涵盖选自-F、-Br、-Cl、-I的任何卤素自由基。
术语“C1-C8烷基卤”应当被理解为涵盖任何直链或支链烷基链，其具有在直链或支链链的任一点被选自-F、-Br、-Cl、-I的至少一个卤素卤素取代的1到5个碳原子。在某些实施方式中烷基卤包括一个卤素；在其他实施方式中，烷基卤包含两个卤素原子(相同的或不同的)；在其他实施方式中，烷基卤包含三个卤素原子(相同的或不同的)，等等。
术语“羟基”应当被理解为涵盖-OH。
术语“酯”应当被理解为涵盖-C(＝O)OR10或-OC(＝O)R10的任一个，其中R10是直链或支链C1-C8烷基。
术语“酰胺”应当被理解为涵盖-C(＝O)NR11R12'、-NR11C(＝O)R12'的任一个，其中R11和R12'各自独立地是H或直链或支链C1-C8烷基。
术语“醚”应当被理解为涵盖-R13OR14'或-OR15'的任一个，其中R13选自直链或支链C1-C8亚烷基，R14'和R15'各自独立地选自直链或支链C1-C8烷基。
术语“直链或支链C1-C5酰基”应当被理解为涵盖-C(＝O)R16的任一个，其中R16是C1-C5直链或支链烷基。
术语“C5-C15芳基”应当被理解为涵盖包含5到7个碳原子的任何单一或稠合芳族环系统。实例包括但不限于苯基、并环戊二烯基、萘基(naphatalenyl)、蒽基及其任何组合。
术语“C3-C7杂芳基”应当被理解为涵盖包含5到7个碳原子和至少一个选自N、O和S的杂原子的任何单一或稠合芳族环系统。实例包括但不限于呋喃基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、吡咯基、吲哚基、异二氢吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并[c]噻吩基、咪唑基、苯并咪唑基、嘌呤基、吡唑基、吲唑基、恶唑基、苯并恶唑基、异恶唑基、苯并异噁唑基、噻唑基、苯并噻唑基、吡啶基，喹啉基(auinolinyl)、异喹啉基、嘧啶基(pyromodinyl)、喹唑啉基、哒嗪基、噌啉基及其任意组合。
当涉及R1和R2与它们连接的氮原子一起形成4-7元饱和、不饱和或芳族环的实施方式时，应当被理解为涉及任何环，其可以由包括氮原子的4、5、6或7个成员形成。所述环可以是饱和的，即具有全部的sigma键，是不饱和的，即具有至少一个双键或至少一个三键或其任何组合，或是芳族的，即，有芳族特征的环系统，稳定性(由于非局部化 (delocalization))显著大于推定的局部化结构(例如，Kekule结构)的环状的共轭分子环系统。
例如，所述环可以选自哌啶基、吡咯基、氮杂环丁烷基，等。
在某些实施方式中，所述环可以任选地包含(在环成员之内)N、O、NH、C＝N、C＝O或SO2的至少一个。在某些进一步的实施方式中，所述环可以是用直链或支链C1-C5烷基、羟基、卤素和氰基(-CN)任选地取代的(在环系统上通过取代所述环上的-H原子)。
当涉及R1或R2与R3和它们连接的碳原子和氮原子一起形成4-7元饱和、不饱和或芳族环的实施方式时，应当被理解为涉及任何环，其由包括氮原子的4、5、6或7个成员形成。这种环形成在式I化合物的骨架中具有环己基环的螺双环系统。所述环可以是饱和的，即具有全部sigma键，或是不饱和的，即具有至少一个双键或至少一个三键或其任何组合。在某些实施方式中，所述环是芳族环。
在某些实施方式中，所述环任选地包含环状构造之内的N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2中的至少一个。在某些进一步的实施方式中，所述环是用直链或支链C1-C8烷基羟基、羰基(-C-(＝O)R，其中R是H或C1-C5直链或支链烷基)和卤素任选地取代的(在环系统上通过取代所述环上的-H原子)。
术语“C5-C10环烷基”或术语“C3-C7环烷基”应当被理解为涵盖饱和的(即，环仅含有其成员之间的sigma键)烃环，其分别包含5、6、7、8、9或10个碳原子或3、4、5、6或7个碳原子。
术语“饱和、不饱和或芳族的4-6元杂环基”应当被理解为涵盖饱和的(即，环仅含有其成员之间的sigma键)、不饱和的或芳族的(即，环含有至少一个双键或至少一个三键或其任何组合)环，含有4、5或6个成员，其中至少一个是选自N、O、S、P的杂原子。
本文使用的术语“任选地取代的”是指所讨论的基团不被取代或被一个或更多个指定的取代基取代。当所讨论的基团被超过一个取代基取代时，所述取代基可以是相同的或不同的。
本文描述的某些化合物可以含有一个或更多个手性中心，或另外可以作为两种对映异构体或几种非对应异构体存在。因而，本发明的化合物还包括对映异构体的混合物，以及纯化的对映异构体或对映体富集的混合物。本发明的化合物还包括非对映异构体的混合物，以及纯化的非对映异构体或非对映异构体富集的混合物。
本发明还包括式(I)化合物的任何盐，包括任何药学上可接受的盐，其中本发明化合物具有净电荷(正或负)，添加至少一种抗衡离子(具有相反的负电荷或正电荷)来形成所述盐。如本文使用的，用语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的盐，其对于哺乳动物中的药物用途是安全的和有效的，并具有期望的生物学活性。药学上可接受的盐包括本发明的化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。药学上可接受的酸加成盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、葡糖二酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即、1、1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))盐。本发明的某些化合物可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。适合的碱盐包括但不限于铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌和二乙醇胺盐。药学上可接受的盐的综述参见，BERGE ET AL.,66J.PHARM.SCI.1-19(1977)，通过引用合并在本文中。
本发明进一步提供了包含如上文和下文定义的(根据通式I)至少一种化合物的组合物。
本发明还涉及药物组合物，其包含在与药学上可接受的辅助剂的混合物中的本发明的化合物，以及任选的其他治疗试剂。辅助剂必须是“可接受的”，意思是与组合物的其他成分相容，不为其接受者带来伤害。
药物组合物包括适合于口服、直肠、鼻部、表面(包括穿表皮、口腔和舌下)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌肉内、静脉内和皮内)施用的或通过植入施用的那些。所述组合物可以通过药学领域公知的任何方法来制备。
这样的方法包括使本发明的化合物或其组合与任何助剂结合的步骤。辅助剂也称为配合剂，包括本领域常规的那些，例如载体、填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂、抗氧化剂和润湿剂。
适合于口服施用的药物组合物可以作为离散剂量单位如丸剂、片剂、糖锭剂或胶囊剂，或作为粉剂或颗粒剂，或作为溶液或混悬液的形式存在。活性成分也可以作为团块或糊剂存在。所述组合物可以进一步加工成用于直肠施用的栓剂或灌肠剂。
本发明进一步包括与包装材料组合的如上文描述的药物组合物，包括为上文描述的用途使用所述组合物的说明书。
对于胃肠外施用，适合的组合物包括水性和非水性无菌注射液。所述组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如，密封的小瓶和安瓿瓶，并可以保存在冷冻干燥(冻干)的条件中，仅需要在使用前添加无菌的液体载体例如注射用水。对于穿表皮的施用，可以考虑例如凝胶、贴片或喷雾剂。适合于肺部施用，例如通过鼻吸入的组合物或制剂包括细尘或雾，其可以通过定量加压气雾剂、喷雾器或吹入器产生。
施用组合物的确切剂量和方案将必然地取决于要实现的治疗或营养效果，可以随特定的配方、施用途径、要施用组合物的单独对象的年龄和状况而变化。
本发明进一步提供了用于治疗的如上文和下文定义的(根据通式I)化合物。
本文使用的术语“治疗(treatment)”或“治疗(therapy)”是指为了对抗疾病、失调或状况的目的管理和照料患者。该术语意图包括延迟疾病、失调或状况的进展，缓解或减轻症状和并发症，和/或治愈或消除疾病、失调或状况。要治疗的患者优选地是哺乳动物，特别是人类。
要理解的是，上文列出的剂量范围仅仅是示范性的，不意图限制本发明的范围。每种活性化合物的治疗有效量可以随着多种因素而变化，包括但不限于所用化合物的活性、活性化合物在患者体内的稳定性、待减轻的状况的严重程度、所治疗患者的总重量、给药途径、活性化合物被身体吸收、分配和排泄的容易程度、待治疗患者的年龄和敏感性等，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。随着各种因素随时间变化，可以调整施用的数量。
对于口服递送，活性化合物可以掺入到制剂中，所述制剂包括药学上可接受的载体，例如结合剂(例如，明胶、纤维素、黄蓍树胶)、赋形剂(例如，淀粉、乳糖)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、二氧化硅)、崩解剂(例如，藻酸盐、Primogel和玉米淀粉)，以及甜味剂或调味剂(例如，葡萄糖、蔗糖、糖精、水杨酸甲酯和薄荷)。所述制剂可以以密封的胶囊或压制的片剂的形式口服递送。胶囊剂和片剂可以以任何常规技术来制备。胶囊剂和片剂还可以用本领域已知的各种包衣来包被，来修饰胶囊剂和片剂的气味、口味、颜色和形状。另外，液体载体例如脂肪油也可以包括到胶囊剂中。
适合的口服制剂还可以是混悬液、糖浆、咀嚼用胶、薄片、酏剂等的形式。如果希望，还可以包括用于修饰具体形式的气味、口味、颜色和形状的常规试剂。另外，为了方便不能吞咽的患者通过肠内喂养管施用，活性化合物可以溶于可接受的亲脂性植物油溶媒中，例如，橄榄油、玉米油和红花油。
活性化合物还可以以溶液或混悬液的形式胃肠外地施用，或处于能在使用前转化为溶液或混悬液的冻干形式。在这样的制剂中，可以使用稀释剂或药学上可接受的载体例如无菌水和生理盐水缓冲液。其他常规的溶剂、pH值缓冲液、稳定剂、抗细菌性试剂、表面活性剂和抗氧化剂都可以被包括。例如，有用的成分包括氯化钠、乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐缓冲液、甘油、葡萄糖、不挥发油、对羟基苯酸甲酯、聚乙二醇、丙烯甘醇、硫酸氢钠、苯甲醇、抗坏血酸，等。胃肠外制剂可以在任何常规的容器例如小瓶和安瓿瓶中保存。
局部施用的途径包括鼻部、口腔、粘膜、直肠或阴道的应用。对于局部施用，活性化合物可以配制成洗液、乳膏剂、软膏剂、凝胶、粉末、糊剂、喷雾剂、混悬液、滴剂和气雾剂。因而，一种或更多种增稠剂、湿润剂和稳定剂可以被包括在制剂中。这样的试剂的实例包括但不限于聚乙二醇、山梨醇、黄原胶、矿脂、蜂蜡或矿物油、羊毛脂、角鲨烯等。局部施用的特殊形式是通过穿表皮的贴片递送。例如，在Brown,et al.(1988)Ann.Rev.Med.39:221-229中公开了制备穿表皮贴片的方法，通过引用将其合并在本文中。
用于活性化合物持续释放的皮下植入也可能是适合的施用途径。这需要手术过程来将处在任何适合的制剂中的活性化合物植入皮下的空间，例如，在前部腹壁下方。参见，例如，Wilson et al.(1984)J.Clin.Psych.45:242-247。水凝胶可以用作活性化合物持续释放的载体。水凝胶是本领域公知的。一般通过将高分子量生物相容的聚合物交联成网络来制备它们，其在水中溶胀形成凝胶状材料。在某些情况下，水凝胶是生物可降解的或生物可吸收的。对本发明来说，有聚乙二醇、胶原蛋白或聚(乙醇酸-CO-L-乳酸)制成的水凝胶可能是有用的。参见，例如，Phillips et al.(1984)J.Pharmaceut.Sci.，73:1718-1720。
本发明进一步提供了上文和下文定义的(根据通式I)化合物，用于抑制酪蛋白激酶I(CKI)和白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)的至少一种。在某些实施方式中，上文和下文定义的(根据通式I)化合物用于抑制CKI和IRAK1。在以上实施方式中，使用上文和下文定义的(根据式I)本发明的化合物允许治疗与CKI和IRAK1的至少一种(或在某些实施方式中，CKI和IRAK1两者)相关的疾病、失调、症状和状况。在这些方面，本发明提供了与CKI和IRAK1(或在某些实施方式中，CKI和IRAK1两者)的抑制相关的、对疾病、失调、症状和状况的治疗。
在另一个方面中，本发明提供了上文和下文定义的(根据通式I)化合物，用于抑制白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)。
本发明进一步提供了上文和下文定义的(根据通式I)化合物，用于抑制酪蛋白激酶I(CKI)。
术语“酪蛋白激酶I”应当被理解为涵盖蛋白激酶家族，所述蛋白激酶家族是作为大多数真核细胞类型中的信号转导途径调节物起作用的丝氨酸/苏氨酸-选择性酶。CKI同种型涉及Wnt信号转导、昼夜节律、转录因子的核-细胞质穿梭、DNA修复、p53活化和DNA转录。
术语“白细胞介素-1受体-相关激酶1”应当被理解为涵盖由IRAK1基因编码的酶，其被发现是血液恶性肿瘤例如多发性骨髓瘤、MDS、白血病和淋巴瘤、乳腺癌、头颈癌、炎症性和免疫相关失调等的疾病途径中涉及的NF-κB途径的重要上游调节物。
当提及所述酶的“抑制”时，应当理解为涵盖由于至少一种本发明化合物与所述酶的直接或间接结合的、所述酶的活性的任何定性或定量降低。
本发明进一步提供了上文和下文定义的(根据通式I)化合物，用于治疗与恶性状况相关的状况、症状或疾病。
在某些实施方式中，所述恶性状况是癌症。在其他实施方式中，所述癌症是WT或突变p53的(钝化典型癌症状况p53的突变)。在进一步的实施方式中，所述癌症选自白血病、恶性黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和结肠直肠癌。在某些实施方式中，所述癌症具有WT p53。
本发明进一步提供了上文和下文定义的化合物，用于治疗具有WT p53的癌症，其中所述WT p53是所述化合物效力的生物标志物。因而，在这个方面，WT p53充当本发明的化合物或包含本发明化合物的组合物的癌症治疗效力的可测量指示物。本发明进一步提供了治疗有需要的对象的具有WT p53的癌症的方法，其中所述WT p53是所述化合物效力的生物标志物。
在某些实施方式中，所述用途进一步包括诱导癌症免疫治疗反应。因而，在本发明的某些实施方式中，本发明的化合物或包含本发明化合物的组合物提供了癌症的治疗(抗肿瘤、抗恶性活性)和癌症免疫治疗反应。
在某些实施方式中，所述恶性状况选自血液恶性肿瘤(多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症(MDS)、急性骨髓性白血病(AML)、黑素瘤和ER阴性乳腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性粒性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、头颈癌、以及其任何组合。
在另一个方面，本发明提供了上文和下文定义的化合物，用于诱导抗肿瘤反应。在某些实施方式中，所述抗肿瘤反应包括癌症免疫治疗反应。
术语“诱导的抗肿瘤反应”应当被理解为涵盖癌肿瘤的任何定性或定量的化学治疗。
术语“癌症免疫治疗反应”应当被理解为涵盖对象自身免疫系统对抗癌细胞的任何定性或定量的癌症免疫治疗诱导。一般地，免疫治疗可以被分类为主动、被动或混合的(主动和被动)，被设计以利用以下事实，癌细胞通常在它们的表面具有可被对象的免疫系统检测的分子，称为肿瘤相关抗原(TAA)；它们常常是蛋白质或其他大分子(例如，碳水化合物)。主动免疫治疗通过靶向TAA指导免疫系统攻击肿瘤细胞。被动免疫治疗增强现有的抗肿瘤反应。
在某些实施方式中，所述癌症免疫治疗反应涉及肿瘤细胞上、抗原递呈细胞上、T细胞上或天然杀伤(NK)细胞上免疫检查点分子的表达改变。
在某些实施方式中，所述癌症免疫治疗反应涉及诱导T细胞的抗肿瘤活性抑制的、肿瘤细胞上的免疫检查点分子的表达降低。
在某些实施方式中，所述癌症免疫治疗反应涉及检查点蛋白PD-L1的表达降低。在某些其他实施方式中，所述免疫治疗反应涉及PD-L1的抑制。在某些进一步的方面，本发明的化合物被用于抑制PD-L1的方法中。
本发明进一步提供了上文和下文定义的(根据通式I)化合物，用于治疗炎症和免疫相关失调，包括与之相关的状况、症状或疾病。
当提及“炎症和免疫相关失调”时，应当理解为涉及可用白细胞介素-1受体相关激酶抑制物治疗的任何类型的失调(包括与之相关的状况、症状和疾病)。例如已经显示，IRAK1是可以调节异常细胞因子水平的IL-Rs和TLR途径的不可缺少的元件，因而可以用于管理免疫和炎症相关的失调，例如，类风湿性关节炎、炎症性肠病、银屑病、痛风、哮喘和癌症(Bahia MS et al.Cell Signal.2015Jun；27(6):1039-55)。
本发明进一步提供了治疗有需要的对象的与恶性状况相关的状况、症状或疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用至少一种上文和下文定义的(根据通式I)的化合物的步骤。
本发明进一步提供了在有需要的对象中抑制酪蛋白激酶I(CKI)和白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)的至少一种的方法，包括向所述对象施用至少一种上文和下文定义的(根据通式I)化合物的步骤。
在另一个方面，本发明提供了在有需要的对象中抑制白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)的方法，包括向所述对象施用至少一种上文和下文定义的(根据通式I)化合物的步骤。
在某些实施方式中，本发明的方法进一步包括在所述对象中诱导癌症免疫治疗反应。
在另一个方面，本发明提供了在有需要的对象中诱导癌症免疫治疗反应的方法，所述方法包括向所述对象施用至少一种上文和下文公开的化合物的步骤。
本发明进一步提供了治疗炎症和免疫相关失调，包括与之相关的状况、症状或疾病的方法；所述方法包括向有需要的对象施用上文和下文定义的(根据通式I)化合物。
本发明还提供了在有需要的对象中抑制酪蛋白激酶I的方法，包括向所述对象施用至少一种上文和下文定义的(根据通式I)的化合物的步骤。
附图的简要说明
为了更好地理解本文公开的主题和例示它如何实际进行，现在将参考附图通过仅为非限制性的实例来描述实施方式，其中：
附图1A和1B显示了标明的本发明化合物的剂量反应(附图1A，化合物A36、A39、A6、A14、A35、A51、A29、A19-4、A41、A28、A42、A43、A46；附图1B，化合物A30-1、A30-2、A51、A60、A64、A65)——在RKO结肠直肠细胞系中筛选。RKO细胞在37℃与标明浓度的化合物孵育15小时，通过Western印迹来分析。显示的是β-连环蛋白和p53稳定化以及H2AX(γH2AX)的磷酸化，H2AX是一种DNA损伤的标志物，指示了CKIα激酶抑制。注意到，虽然β-连环蛋白和p53稳定化以及H2AX磷酸化是大多数化合物的常见作用，一些化合物不能稳定β-连环蛋白，而接近的类似物(例如，A19-4)仅稳定β-连环蛋白。CKIα蛋白质水平充当加载对照。
附图2A-2D显示了CKIα抑制物A14以剂量依赖性的方式诱导分离自CML胚细胞危象小鼠的骨髓细胞的细胞凋亡(离体)。附图2A是实验过程的示意图；与A14或DMSO孵育8小时。附图2B显示了在A14处理之后白血病细胞数量的显著降低——剂量反应曲线。附图2C显示了细胞凋亡细胞(Annexin5+/7AAD-)以剂量依赖性方式的增长百分比。附图2D显示了总死亡(7AAD+)细胞以剂量依赖性方式的增长百分比。
附图3A-3C表明，A14显著地降低CML胚细胞危象小鼠体内外周血和骨髓中的白血病细胞负荷。附图3A是实验过程的示意图，将来自CML胚细胞危象小鼠的BM细胞(GFP+细胞)接种到正常的C57Bl/6小鼠，每天用单独的A14或载体治疗(口服施用)。附图3B显示了在治疗后第9天外周血中GFP+白血病细胞的百分比；A14(N＝6)与载体治疗的小鼠(N＝6)相比较。附图3C显示了在治疗后第9天骨髓中GFP+白血病细胞的百分比：A14(N＝6)与载体治疗的小鼠(N＝6)相比较。
附图4A-4F显示了A14治疗CML胚细胞危象小鼠之后第9天的全血计数：附图4A显示了外周血中白细胞(WBC)的绝对数量(109/L)(N＝5)。附图4B显示了外周血中淋巴细胞(Lymph)的绝对数量(109/L)(N＝5)。附图4C显示了外周血中单核细胞(Mono)的绝对数量(109/L)(N＝5)。附图4D显示了外周血中粒细胞(Gran)的绝对数量(109/L)。附图4E显示了红细胞计数(RBC，1012/L)。附图4F显示了血红蛋白水平(HGB，g/L)。
附图5显示了在BM移植之后第9天，与载体治疗的CML胚细胞危象小鼠相比，来自A14治疗的小鼠的血涂片的代表照片。
附图6显示了制备AML小鼠模型的示意图。
附图7A-7D显示了A14对AML发展的抑制效果。附图7A是实验过程的示意图。附图7B展现了与载体治疗的小鼠相比，A14治疗的小鼠的外周血(PB)中GFP+白细胞的百分比。附图7C和7D显示了A14治疗之前一天(附图7C)和之后三天(附图7D)PB中GFP+白细胞的代表性流式细胞计分析曲线。
附图8A-8G显示了用本发明的A14治疗AML小鼠之后第9天的全血计数。附图8A显示了外周血中白细胞(WBC)的绝对数量(109/L)。附图8B显示了外周血中淋巴细胞(Lymph)的绝对数量(109/L)。附图8C显示了外周血中单核细胞(Mono)的绝对数量(109/L)。附图8D显示了外周血中粒细胞(Gran)的绝对数量(109/L)。附图8E显示了红细胞计数(RBC，1012/L)。附图8F显示了血红蛋白水平(HGB，g/L)。附图8G显示了外周血中的血小板(PLT)(109/L)。
附图9显示了在第一次A14治疗之后第9天，与载体治疗的AML小鼠相比，来自A14的血涂片的代表照片。
附图10显示了通过本发明的抑制物化合物A51和A14的IRAK1抑制。通过Western印迹收获和分析细胞。将印迹与下列抗体一起孵育：Phospho-IRAK1(Thr209)、(A1074,AssayBiothechnology；1/1,000)、Phospho-IKKα/β(Ser176/180)(16A6,Cell Signaling；1/1,000)、IKKα(2682,cell signaling；1/1,1000)、IKKβ(2370,cell signaling；1/1,1000)、Phospho-c-Jun(Ser 63)(9261,cell signaling；1/1,1000)、p53(DO-1&1801杂交瘤混合物；来自每一个的上清液1:20的稀释度)、CKIα(C-19；1/1,000；Santa CruzBiotechnology)和磷酸化组蛋白H2AX(S139；1/1,000；Millipore)。二抗是HRP-连接的山羊抗小鼠、山羊抗兔和兔抗山羊((全部为1/10,000；Jackson)Phospho-IRAKl、Phospho-IKKα/β和Phospho-c-Jun的抑制表明IRAK1抑制。DNA损伤的标志物H2AX(γH2AX)的p53稳定化和磷酸化是CKIα激酶抑制的指示。CKIα蛋白质水平充当加载对照。
附图11A-11E涉及AML小鼠中CKI抑制物A51的单剂量治疗实现的实验结果。附图11A示意地显示了AML小鼠的制备，以及自疾病诱导(白血病接种)起第30天用A51(20mg/Kg)治疗它们。附图11B和11E显示了自治疗起16小时之后(与用单独的载体治疗比较)，A51在降低血液中的总白血病细胞数方面的作用。附图11B显示了外周血(PB)中WBC的降低。附图11C显示了白血病脾脏的缩小，附图11D和11E分别显示了外周血(PB)和骨髓(BM)中白血病胚细胞(GFP+细胞)的比例的降低。
附图12A和12B显示了来自治疗的AML小鼠的脾脏和骨的图片。如上文公开的(附图12A)，在用A51治疗之后脾脏大小(脾肿大)实际减小，在单剂量治疗之后(附图12B)不透明的骨变成标准颜色。
附图13A-13E显示了CKI抑制物对分离自白血病小鼠骨髓的AML细胞的体外治疗效果的结果。显示的是死细胞(7AAD+)的百分比和抑制物对白细胞细胞中主要免疫检查点蛋白PD-L1的表达的影响；抑制物处理为在几个时间点10或100nM(5小时—附图13A，6小时—附图13B和13C，9小时—附图13D和13E)。
实施方式的详细说明
制备(E)-1-环丙基-4-(二甲基氨基)-3-(2-(甲基硫基)嘧啶-4-基)丁-3-烯-2-酮 (母核A)和4-(5-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基硫基)嘧啶(母核B)
步骤1：在0℃下将N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(25.14g，257.69mmol，1.72eq)，HATU(56.97g，149.82mmol，1.00eq)和TEA(45.48g，449.46mmol，3.00eq)加入到2-环丙基乙酸(15.00g，149.82mmol，1.00eq)的DCM(500mL)溶液中，然后在30℃下将混合物搅动3小时。产生的混合物倒入水(500mL)中。含水洗涤相用DCM(3×250mL)提取。合并的有机层在无水NaSO4上干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱层析(SiO2，石油醚(PE)：乙酸乙酯(EA)＝50：1到10：1)纯化得到作为无色液体的期望的化合物2(13.20g，82.97mmol，55.4％产率)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 3.65(s，3H)，3.17(s，3H)，2.33(d，J＝6.8Hz，2H)，1.09-1.06(m，1H)，0.54-0.50(m，2H)，0.16-0.14(m，2H)。
步骤2：在-78℃下，向4-甲基-2-甲基磺酰基-嘧啶(9.00g，64.19mmol，1.00eq)的THF(500mL)溶液中加入LDA(2M，48.46mL，1.51eq)。搅动1小时后，在-78℃下滴加化合物2(13.79g，96.29mmol，1.50eq)的THF(500mL)溶液，然后将反应混合物在-78℃下搅动4h。用饱和的NH4Cl水溶液(100mL)淬灭，水相用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物从石油醚/乙酸乙酯中结晶，得到作为黄色固体的期望的化合物4(13.60g，55.06mmol，85.8％产率)。
LCMS:RT＝0.629min，m/z 223.0[M+H]+。
步骤3：化合物4(13.60g，61.18mmol，1.00eq)的DMF-DMA(51.42g，2.45mol，40eq)溶液在90℃下搅动2h。真空除去溶剂。残余物在硅凝胶上柱层析纯化得到作为黄色固体的母核A(10.60g，36.30mmol，59.3％产率)。
LCMS:RT＝0.634min,m/z 278.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ 8.38(d,J＝6.8Hz,1H),7.62(s,1H),6.96(s,1H),2.96-2.87(m,6H),2.56(s,3H),2.38(d,J＝8.8Hz,2H),1.04-1.02(m,1H),0.52-0.46(m,2H),0.09-0.04(m,2H)。
步骤4：母核A(10.60g，38.21mmol，1.00eq)和水合肼(6.75g，114.63mmol，3.00eq)在乙醇(200mL)中的溶液在90℃下搅动3h。真空除去溶剂。残余物在硅凝胶上柱层析纯化得到作为淡黄固体的母核B(9.00g，35.8193.7％产率)。
LCMS:RT＝2.018min,m/z 247.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ 8.43(d,J＝5.2Hz,1H),8.04(s,1H),7.10(d,J＝5.2Hz,1H),3.12(d,J＝7.2Hz,2H),2.60(s,3H),1.19-1.14(m,1H),0.66(q,J＝5.2Hz,2H),0.32(q,J＝5.2Hz,2H)。
制备4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶(母核C)
步骤1：母核A(6.20g，22.35mmol，1.00eq)和甲肼(8.00g，69.46mmol，3.11eq)的乙醇(100mL)溶液在90℃下搅动16小时。真空除去溶剂。残余物通过pre-HPLC(碱性条件)纯化提供作为黄色固体的化合物5(1.80g，6.84mmol，30.6％产率)和作为黄色油的异构体5A(2.00g，7.30mmol，32.6％产率)。
化合物5：
LCMS:RT＝2.551min,m/z 261.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ 8.38(d,J＝5.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.11(d,J＝5.2Hz,1H),3.93(s,3H),3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.62(s,3H),1.12-1.09(m,1H),0.54-0.49(m,2H),0.32-0.28(m,2H)。
位置异构体5A：
LCMS:RT＝2.486min,m/z 261.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.41(d,J＝5.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.04(d,J＝5.2Hz,1H),3.92(s,3H),2.96(d,J＝6.4Hz,2H),2.61(s,3H),1.20-1.17(m,1H),0.50-0.45(m,2H),0.26-0.22(m,2H)。
步骤2：在0℃下向化合物1(1.50g，5.76mmol，1.00eq)的DCM(20mL)溶液中添加m-CPBA(2.98g，17.28mmol，3.00eq)，并在30℃下搅动2小时。产生的混合物用NaHSO3(2×1000mL)、饱和NaHCO3(100mL)水溶液和盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物在硅胶上柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1到1：1)得到作为黄色固体的化合物母核C(1.50g，5.08mmol，88.2％产率)。
LCMS:RT＝1.891min,m/z 293.0[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ 8.74(d,J＝5.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.58(d,J＝5.6Hz,1H),3.94(s,3H),3.37(s,3H),3.25(d,J＝6.8Hz,2H),1.14-1.11(m,1H),0.52-0.49(m,2H),0.37-0.35(m,2H)。
制备A-n的一般过程：
方法A：制备化合物n_6
母核B(25mmol，1.00eq)的DMF(50mL)溶液冷却到0℃，添加NaH(1.50eq)。在0℃下搅动1小时后，添加RBr(1.60eq)，反应混合物在20℃下搅动15小时。添加水(10.00mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)提取。合并的有机层用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩得到粗产物，纯化得到化合物n_6。
方法B：制备化合物n_7
在0℃下向化合物n_6(10mmol，1.00eq)的二氯甲烷(30mL)溶液中添加m-CPBA(3.00eq)，在20-30℃下搅动反应混合物5小时。产生的化合物用NaHSO3(2×50.00mL)、饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(10mL)洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩得到化合物n_7。
方法C：制备化合物A-n
DMSO(80mL)中化合物n_7(10mmol，1.0eq)、DIEA(10.00eq)和反式-4-氨基-环己醇(1.0-3.0eq)的混合物在160℃下加热3小时。反应混合物冷却到环境温度，注入水(100mL)中，然后用二氯甲烷(3×50ml)提取。组合的层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物通过pre-HPLC(碱性条件)纯化得到化合物A-n。
方法D：制备化合物A-n
化合物n_7(10mmol，1.00eq)和反式-环己烷-1，4-二胺(2.0-4.0eq)在二氧六环(40mL)中的溶液在130℃下伴随微波搅动2小时。过滤混合物，滤液用pre-HPLC(碱性条件)纯化得到A-n。
制备(1r，4r)–N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环 己烷-1,4-二胺(A-35)
步骤1：化合物35_6根据方法A中描述的过程合成，在HPLC(TFA条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：17.1％；
LCMS:RT＝1.959min,m/z 289.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.49-8.47(d,J＝2.8Hz,1H),8.06(s,1H),7.21-7.20(d,J＝5.6Hz,1H),4.63-4.60(t,J＝6.6Hz,1H),3.26-3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.65(s,3H),1.56(s,3H),1.55(s,3H),1.07-1.04(m,1H),0.54-0.51(m,2H),0.30-0.28(m,2H)。
步骤2：化合物35_7根据方法B中描述的过程合成，TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：57.8％；
LCMS:RT＝0.711min,m/z 321.1[M+H]+
步骤3：化合物A-35根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1,4-二胺(4.0eq)合成，作为白色固体获得。产率：19.7％
LCMS:RT＝1.223min,m/z 355.3[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17-8.16(d,J＝5.2Hz,1H),7.89(s,1H),6.72-6.71(d,J＝5.2Hz,1H),4.85-4.83(d,J＝8.8Hz,1H),4.60-4.53(m,1H),3.23-3.22(d,J＝6.4Hz,2H),2.20-2.18(d,J＝10Hz,2H),2.02-1.99(m,2H),1.54(s,3H),1.52(s,3H),1.40-1.27(m,4H),1.08-1.06(m,1H),0.52-0.48(m,2H),0.28-0.26(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(1-环戊基-5-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环 己烷-1,4-二胺(A-36)
步骤1：化合物36_6根据方法A中描述的过程合成，在prep-HPLC(TFA条件)纯化后作为黄色油获得。产率：14.7％。
LCMS:RT＝2.228min,m/z 315.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.31-8.30(d,J＝5.6Hz,1H),7.84(s,1H),7.03-7.01(d,J＝5.2Hz,1H),4.67-4.63(m,1H),3.20-3.18(d,J＝6.4Hz,2H),2.52(s,3H),2.05-2.02(m,7H),1.65-1.62(m,2H),0.98(m,1H),0.43-0.39(m,2H),0.23-0.20(m,2H)。
步骤2：化合物36_7根据方法B中描述的过程制造，柱层析纯化后作为黄色固体获得。产率：66.6％
LCMS:RT＝0.707min,m/z 347.2[M+H]+
步骤3：化合物A-36根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1，4-二胺(2.0eq)制备，在prep HPLC(TFA条件)纯化后作为白色固体获得。产率41.35％
LCMS:RT＝0.591min,m/z 381.4[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(s,1H),8.08-8.06(d,J＝6.4Hz,1H),7.27-7.25(d,J＝6.8Hz,1H),4.15(s,1H),3.33(s,3H),3.20(s,1H),2.25-1.99(m,11H),1.75(m,2H),1.64-1.58(m,4H),1.16(m,1H),0.57-0.55(m,2H),0.36-0.35(m,1H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基) 嘧啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-39)
步骤1：在0℃下向母核B(700.00mg，2.84mmol，1.00eq)的MeCN(14mL)溶液中添加CS2CO3(1.85g，5.68mmol，2.00eq)。30分钟后，添加4-溴四氢吡喃(703.03mg，4.26mmol，1.50eq)。在密封试管中在100℃下搅动混合物16小时。过滤反应混合物，浓缩滤液。粗产物通过prep-HPLC(TFA)纯化得到作为黄色固体的化合物39_6(45.0mg，136.18μmol，4.8％产率)。
LCMS:RT＝0.702min,m/z 331.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.42-8.40(d,J＝5.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.11-7.10(d,J＝5.2Hz,1H),4.37-4.33(m,1H),4.19-4.15(m,1H),3.59-3.54(m,2H),3.28-3.26(d,J＝6.4Hz,2H),2.6(s,3H),2.44-2.40(m,2H),1.87-1.84(m,2H),1.05-1.02(m,1H),0.55-0.50(m,2H),0.33-0.30(m,2H)。
步骤2：化合物39_7根据方法B中描述的过程制造，prep TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：72.6％
LCMS:RT＝0.607min,m/z 363.1[M+H]+
步骤3：化合物A-39根据方法C中描述的过程没有DIEA地用反式-环己烷-1，4-二胺(3.0eq)制备，在prep-HPLC(碱性条件)纯化后作为黄色固体获得。产率40.2％
LCMS:RT＝1.104min,m/z 397.4[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17-8.16(d,J＝4.4Hz,1H),7.89(s,1H),6.72-6.70(d,J＝5.2Hz,1H),5.12-5.07(m,1H),4.37-4.34(m,1H),4.18-4.15(m,2H),3.84(s,1H),3.59-3.53(m,2H),3.26-3.25(d,J＝6.4Hz,2H),2.77(s,1H),2.44-2.40(m,2H),2.16(s,2H),1.93(s,2H),1.87-1.83(m,2H),1.32-1.27(m,4H),1.05(s,1H),0.54-0.49(m,2H),0.29-0.27(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧 啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-43)
步骤1：化合物43_6根据方法A中描述的过程合成，在prep-HPLC(TFA条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：17.9％
LCMS:RT＝0.664min,m/z 303.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.44-8.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.04(s,1H),7.13-7.12(d,J＝5.6Hz,1H),5.89-5.34(m,1H),5.28-5.25(t,J＝6.6Hz,2H),5.03-5.00(t,J＝7.0Hz,2H),3.21-3.20(d,J＝6.4Hz,2H),2.6(s,3H),0.97-0.94(m,1H),0.51-0.46(m,2H),0.25-0.22(m,2H)。
步骤2：化合物43_7根据方法B中描述的过程合成，prep TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：79.6％
LCMS:RT＝0.566min,m/z 335.1[M+H]+
步骤3：化合物A-43根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1，4-二胺(3.0eq)合成，在prep HPLC(TFA条件)纯化后作为白色胶获得。产率24.7％；
LCMS:RT＝0.987min,m/z 369.3[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.40(s,1H),8.13-8.11(d,J＝6.8Hz,1H),7.31-7.29(d,J＝7.2Hz,1H),5.83-5.80(t,J＝7.0Hz,1H),5.15-5.12(t,J＝6.2Hz,2H),5.06-5.03(t,J＝7.0Hz,2H),4.12(s,1H),3.28-3.26(d,J＝6.4Hz,2H),3.19(s,1H),2.23-2.17(m,4H),1.62-1.60(m,4H),1.06(s,1H),0.53-0.52(m,2H),0.28-0.27(m,2H)。
制备(R)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(41_4)
在0℃下向(R)-四氢呋喃-3-醇(500.00mg，5.68mmol，1.00eq)的DCM(5mL)溶液中添加TEA(1.15g，11.36mmol，2.00eq)和甲磺酰氯(650.11mg，5.68mmol，1.00eq)。在20℃搅动混合物1小时。用水(20mL)稀释混合物，用DCM(10mL×2)提取。浓缩合并的有机层得到作为无色液体的41_4(900.00mg，5.42mmol，95.3％产率)。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.33-5.30(m,1H),4.06-3.90(m,4H),3.05(s,3H),2.28-2.23(m,2H)。
制备(1R，4S)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-((S)-四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基) 嘧啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-41)
步骤1：化合物41_6根据方法A中描述的过程合成，在prep-HPLC(TFA条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：13.1％
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.42-8.40(d,J＝4.4Hz,1H),7.94(s,1H),7.11-7.10(d,J＝7.2Hz,1H),5.04-5.00(m,1H),4.27-4.03(m,4H),3.29-3.27(d,J＝8.4Hz,2H),2.6(s,3H),2.48-2.42(m,2H),1.07-1.02(m,1H),0.53-0.49(m,1H),0.30-0.28(m,2H)。
步骤2：化合物41_7根据方法B中描述的过程合成，prep TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：57.5％
LCMS:RT＝0.585min,m/z 349.2[M+H]+
步骤3：化合物A-41根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1，4-二胺(4.0eq)合成，在prep HPLC(TFA条件)纯化后作为白色粘性固体获得。产率：17.2％
LCMS:RT＝0.969min,m/z 383.3[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(s,1H),8.10-8.09(d,J＝6.8Hz,1H),7.25-7.23(d,J＝6.8Hz,1H),5.28-5.23(m,1H),4.22-4.12(m,3H),3.99-3.95(m,2H),3.35-3.33(d,J＝6.8Hz,2H),3.19(s,1H),2.47-2.44(m,2H),2.35-2.17(m,4H),1.62-1.57(m,4H),1.14(s,1H),0.58-0.56(m,2H),0.36(m,2H)
制备(S)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(42_4)
化合物42_4按照与41_4相同的方式从(S)-四氢呋喃-3-醇制备，它是无色液体。产率：90.0％
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.33-5.30(m,1H),4.04-3.86(m,4H),3.05(s,3H),2.27-2.22(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1((R)-四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基) 嘧啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-42)
步骤1：化合物42_6根据方法A中描述的过程合成，在prep-HPLC(TFA条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：21.4％
LCMS:RT＝0.692min,m/z 317.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.42-8.40(d,J＝4.4Hz,1H),7.95(s,1H),7.12-7.10(d,J＝7.2Hz,1H),5.04-5.00(m,1H),4.27-4.03(m,4H),3.29-3.27(d,J＝8.4Hz,2H),2.6(s,3H),2.47-2.42(m,2H),1.06-1.03(m,1H),0.55-0.50(m,1H),0.31-0.29(m,2H)。
步骤2：化合物42_7根据方法B中描述的过程合成，prep TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：83.2％
LCMS:RT＝0.587min,m/z 349.1[M+H]+
步骤3：化合物A-42根据方法D中描述的过程合成，在prep HPLC(TFA条件)纯化后作为白色粘性固体获得。产率：51.5％
LCMS:RT＝1.078min,m/z 383.3[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(s,1H),8.10-8.08(d,J＝6.8Hz,1H),7.28-7.26(d,J＝6.8Hz,1H),5.27-5.24(m,1H),4.22-4.13(m,3H),3.99-3.96(m,2H),3.35-3.31(t,J＝6.8Hz,2H),3.19(s,1H),2.46-2.44(m,2H),2.36-2.17(m,4H),1.63-1.58(m,4H),1.15(s,1H),0.58-0.56(m,2H),0.36(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-吡唑-4-基) 嘧啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-38)
步骤1：38_1(1.20g，11.99mmol，1.40eq)和苄基N-氨基氨基甲酸酯(1.42g，8.56mmol，1.00eq)在MeOH(15mL)中的混合物在30℃下搅动2小时。添加NaBH3CN(2.69g，42.82mmol，5.00eq)。产生的混合物在30℃下搅动16小时。浓缩混合物，用水(50mL)和EA(50mL)稀释。浓缩有机层，通过柱层析(PE:EA＝10:1～2:1)纯化，得到作为无色油的38_2(1.50g，5.99mmol，70％产率)。
LCMS:RT＝0.568min,m/z 273.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.40-7.35(m,5H),6.25(s,1H),5.26-5.14(m,2H),3.86-3.73(m,3H),3.48-3.30(m,2H),1.91-1.85(m,2H),1.59-1.46(m,2H)。
步骤2：向38_2(1.60g，6.39mmol，1.00eq)的甲醇(15mL)溶液中添加Pd(OH)2(179.54mg，1.28mmol，0.20eq)。混合物在20℃下在H2(15psi)下搅动16小时。过滤混合物，浓缩滤液得到作为无色油的38_3(450mg，粗制的)，其不经纯化直接用于下一步。
步骤3：根据合成母核B描述的相同过程从母核A和化合物38_4制备化合物38_6，在prep-HPLC纯化(TFA条件)后作为黄色油获得。产率：40.3％
LCMS:RT＝0.851min,m/z 331.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.41-8.40(d,J＝5.2Hz,1H),7.92(s,1H),7.10-7.09(d,J＝5.2Hz,1H),4.34-4.33(m,1H),4.03-4.00(m,2H),3.87-3.81(t,J＝10.8Hz,1H),3.51-3.50(m,1H),3.29-3.19(m,2H),2.60(s,3H),2.35(m,1H),2.13(m,1H),1.89-1.85(m,2H),1.06-1.03(m,1H),0.53-0.51(m,2H),0.31(m,2H)。
步骤4：化合物38_7根据方法B中描述的过程合成，prep TLC纯化后作为黄色固体获得。产率：56.1％
LCMS:RT＝0.739min,m/z 363.1[M+H]+
步骤5：化合物A-38根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1，4-二胺(4.0eq)合成，在prep HPLC(碱性条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：40％
LCMS:RT＝1.154min,m/z 397.3[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.18-8.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.86(s,1H),6.70-6.69(d,J＝5.2Hz,1H),4.88-4.86(m,1H),4.32-4.29(m,1H),4.02-4.00(t,J＝5.6Hz,2H),3.86-3.81(m,2H),3.51-3.49(t,J＝3.00Hz,1H),3.27-3.19(m,2H),2.81(s,1H),2.34-2.31(m,1H),2.19-2.16(m,3H),2.00-1.97(m,4H),1.38-1.27(m,4H),1.06(s,1H),0.52-0.50(m,2H),0.28(m,2H)
合成A-n的一般过程
方法E
在160℃下搅动母核C(1.00eq)与胺n(4.00eq)在DMSO(8mL)中的反应混合物3小时。反应混合物冷却到室温，倒入冰-H2O(20mL)中。水层用EA(50mL×3)提取。合并的有机层用盐水洗涤(50mL×3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱层析纯化得到A-n。
方法F
在160℃下搅动母核C(1.00eq)、TBAF(2.00eq)、K2CO3(4.00eq)和胺n(4.00eq)在DMSO中的反应混合物3小时。反应混合物冷却到15℃，倒入H2O(20mL)中。水层用EA(20mL×3)提取。合并的有机层用盐水洗涤(20mL×3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物通过pre-HPLC(HCl条件)纯化得到得到A-n。
方法G
在130℃下在微波下搅动胺n(1.20eq)和母核C(1.00eq)在二氧六环(3mL)中的反应混合物1.5小时。反应混合物倒入H2O(20mL)中。水层用EA(20mL×3)提取。合并的有机层用盐水洗涤(20mL×3)，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。残余物通过Pre-HPLC(碱性条件)纯化得到得到A-n。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己 烷-1,4-二胺(A-14)和(1r，4r)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)-N4,N4-二甲基环己烷-1,4-二胺(A-28)
步骤1：根据方法G中描述的过程制备化合物A-14，作为黄色固体获得。产率：38.4％
LCMS:RT＝2.043min,m/z 327.2[M+H]+。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17(d,J＝5.3Hz,1H),7.83(s,1H),6.70(d,J＝5.3Hz,1H),4.91(s,1H),3.93-3.85(m,4H),3.21(d,J＝6.3Hz,2H),2.74(s,1H),2.16(d,J＝4.0Hz,2H),1.94(d,J＝6.7Hz,2H),1.30-1.25(m,4H),1.11-1.10(m,1H),0.50-0.46(m,1H),0.27-0.24(m,1H)
步骤2：在0℃下在一个部分中向A-14(18.52mg，122.53μmol，1.00eq)在EtOH(μL)中的混合物中添加2,3-二氢苯并三唑-1-基甲醇(18.52mg，122.53μmol，1.00eq)。在15℃下搅动1小时，添加NaBH4(9.27mg，245.06μmol，2.00eq)。产生的混合物在15℃下搅动1小时，倒入H2O(10mL)中。水层用DCM(20mL×3)提取。合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥并浓缩。残余物通过prep HPLC(碱性条件)纯化得到作为白色固体的A-28(5.00mg，14.10μmol，11.5％产率，100％纯度)。
LCMS:RT＝2.535min,m/z 355.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.10(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(s,1H),6.63(d,J＝5.2Hz,1H),4.78(d,J＝3.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.77-3.71(m,1H),3.13(d,J＝6.4Hz,2H),2.27(s,6H),2.17(d,J＝12.4Hz,2H),1.93(d,J＝11.6Hz,2H),1.36-1.31(m,2H),1.23-1.17(m,2H),1.04-1.02(m,1H),0.44-0.39(m,2H),0.20-0.18(m,2H)。
制备8-氨基-1,3-二氮杂螺环[4.5]癸烷-2,4-二酮盐酸(胺-19)
步骤1：NaCN(2.75g，56.02mmol，2.39eq)的H2O(10mL)溶液添加到化合物19_1(5.00g，23.44mmol，1.00eq)和(NH4)2CO3(4.96g，51.57mmol，2.20eq)在EtOH(25mL)和H2O(25mL)中的混合物中。在10℃搅动反应混合物16小时，然后在70℃另外搅动24小时。TLC(PE:EA＝3:1)显示反应物被消耗(Rf＝0.55)，形成主点(Rf＝0.25)。容许反应混合物冷却并过滤。滤饼用H2O(100mL)洗涤并干燥。获得作为白色固体的化合物19_2(4.00g，14.12mmol，60.2％产率)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.51(s,1H),8.48(s,1H),6.70-6.72(d,J＝8.0Hz,1H),3.16(s,1H),1.79-1.76(m,2H),1.65-1.64(d,J＝4.0Hz,2H),1.62-1.52(m,2H),1.60-1.59(m,1H),1.37(s,11H)。
步骤2：在0℃向化合物19_2(1.00g，3.53mmol，1.00eq)在MeOH(10mL)中的混合物中添加HCl/二氧六环(4M，10mL，11.33eq)，在10℃搅动孵育混合物16小时。LCMS显示了反应物消耗。浓缩反应混合物得到作为白色固体的胺-19(700.00mg，3.19mmol，90.3％产率，HCl)
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.52(s,1H),8.21(s,3H),3.06(s,1H),1.96-1.89(m,lH),1.76-1.59(m,6H)。
制备8-((4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-)嘧啶-2-基)氨基)-1,3-二氮 杂螺环[4.5]癸烷-2,4-二酮(A19_4)和(1-氨基-4-((4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)环己基))甲醇(A-19)
步骤1：化合物A19_4根据方法E中描述的过程用胺-19(4eq)和DIEA(4eq)制备，它在prep HPLC(碱性条件)纯化之后为白色固体。产率：72.2％
LCMS:RT＝0.573min,m/z 397.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.22(s,1H),8.14-8.09(m,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),5.19(d,J＝6.8Hz,1H),4.21(s,1H),3.94(s,3H),3.30(d,J＝6.8Hz,2H),2.20(d,J＝6.0Hz,2H),2.09-2.05(t,2H),1.86(d,J＝14.8Hz,2H),1.69-1.65(m,2H),1.25-1.21(m,1H),0.60(d,J＝7.6Hz,2H),0.39-0.35(m,2H)，
步骤2：化合物A19_4(95.00mg，240.23μmol，1.00eq)添加到NaOH/H2O(3M，640.60μL，8.00eq)，在120℃下搅动反应混合物16小时。反应混合物冷却到15℃，倒入H2O(20mL)中。水层用2N HCl溶液调节到pH＝7。浓缩混合物。粗产物与MeOH(50mL×3)碾磨。浓缩滤液得到作为白色固体的19_5(300.00mg，粗制的)。
LCMS:RT＝1.148min,m/z 371.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.15(d,J＝5.2Hz,1H),7.95-7.93(m,1H),6.89-6.85(m,1H),4.03(s,1H),3.91(s,3H),3.28(s,2H),2.32-2.25(m,2H),2.16-2.13(d,J＝9.6Hz,2H),1.99-1.95(d,J＝9.6Hz,2H),1.57-1.54(d,J＝14Hz,2H),1.37(s,1H),0.51-0.48(m,2H),0.31-0.27(m,2H),
步骤3:向19_5(330.00mg，890.81μmol，1.00eq)在THF(500μl)的混合物添加BH3(1M，7.13mL，8.00eq)，在100℃下搅动16小时。反应混合物冷却到15℃，倒入MeOH(20mL)中。浓缩混合物。粗产物通过Pre-HPLC(碱性条件)纯化，得到作为白色固体的A-19(23.00mg，64.52μmol，7.2％产率，100％纯度)。
LCMS:RT＝1.060min,m/z 357.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.12(d,J＝5.6Hz,1H),7.93(s,1H),6.85-6.82(m,1H),3.88-3.80(m,4H),3.28(s,2H),3.39(s,2H),3.27(d,J＝6.4Hz,2H),2.03-1.94(m,3H),1.68-1.58(m,6H),1.13(d,J＝5.2Hz,1H),0.50-0.47(m,2H),0.30-0.28(m,2H)。
制备8-((4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-氧杂- 1-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-酮(A-26)
向A-19(20.00mg，56.11μmol，1.00eq)在THF(500μL)中的混合物中添加CDI(9.1mg，56.11μmol，1.00eq)，反应混合物在25℃下搅动16小时。浓缩反应混合物。粗产物通过prep HPLC(碱性条件)纯化得到作为白色固体的A-26(4.00mg，10.46μmol，18.6％产率，100％纯度)。
LCMS:RT＝2.210min,m/z 383.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.19(s,1H),7..84(s,1H),6.74(s,1H),5.97(s,1H),5.02(s,1H),4.15(s,1H),3.89(s,4H),3.17(s,2H),2.16-2.13(d,J＝12.4Hz,2H),1.98-1.95(d,J＝13.2Hz,2H),1.72-1.68(d,J＝12.8Hz,2H),1.48-1.45(d,J＝10.08Hz,2H),1.10(s,1H),0.49(s,2H),0.24(s,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4-甲 基环己烷-1,4-二胺(A-27)
步骤1：化合物A27_2根据方法E中描述的过程用胺-27(1.0eq)和DIEA(10eq)在160℃下6小时制备，在prep HPLC(TFA)纯化之后作为黄色固体获得。产率：41.1％
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.18(d,J＝5.2Hz,1H),7.83(s,1H),6.71(d,J＝5.6Hz,1H),4.87(s,1H),4.41(s,1H),3.89-3.82(m,4H),3.49(s,1H),3.19(d,J＝6.3Hz,2H),2.19-2.05(m,4H),1.46(s,9H),1.35-1.29(m,7H),1.26(m,2H),1.23(m,2H),0.50-0.46(m,2H),0.26-0.24(m,2H)
步骤2：在0℃下向27_2(100.00mg，234.44μmol，，1.00eq)的THF(4.00mL)溶液中添加LiAlH4(26.69mg，703.32μmol，3.00eq)。在70℃搅动混合物3小时。混合物冷却到0℃，然后用NH4Cl水溶液(3滴)淬灭。产生的溶液在Na2SO4上干燥，然后浓缩。残余物未能通过prep-HPLC纯化。因而A-27(70mg，粗制)将在用Boc基团保护之后纯化。向A-27(粗制的)的THF(1mL)溶液中添加(Boc2)2(200mg，2eq)。在20℃搅动1小时之后，反应混合物通过Prep-TLC(EA)纯化得到27_Boc(30mg，总计29.13％产率)，其直接用于下一步。
步骤3：在0℃在一个部分中向27_Boc(30.00mg，68.09μmol，1.00eq)的DCM(100μL)溶液中添加HCl/二氧六环(4M，85μL，5.00eq)，在15℃下搅动混合物5小时。浓缩反应混合物得到作为淡黄色固体的A-27(12.00，30.88μmol，45.35％产率，97％纯度，HCl)。产率:45.4％
LCMS:RT＝2.558min,m/z 341.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.26(s,1H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.31(d,J＝6.4Hz,1H),4.19-4.12(m,1H),3.95(s,3H),3.71(s,2H),3.17(s,1H),2.76(s,3H),2.31-2.20(m,4H),1.65(m,4H),1.21(s,1H),0.51(s,2H),0.37(d,J＝3.2Hz,2H)。
制备N-((1R,4R)-4-氨基环己基)-2-甲氧基乙酰胺盐酸盐(胺-29)
步骤1：在0℃下向29_1(658.25mg，3.07mmol，1.0eq)和2-甲氧基乙酰氯(500mg，4.61mmol，1.5eq)在DCM(5mL)中的混合物中添加DIEA(310.82mg，3.07mmol，1.00eq)。然后反应混合物在15℃下搅动2小时。反应混合物在真空下浓缩。残余物通过柱层析纯化得到作为白色固体的29_2(490.00mg，1.71mmol，55.7％产率)。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.80(s,1H),3.74-3.67(m,1H),3.40(s,1H),3.33(s,3H),1.97-1.87(m,4H),1.37(s,9H),1.22-1.12(m,3H)
步骤2：化合物29-2以A27的合成的步骤3所示类似方式脱保护，获得作为白色固体的胺-29。产率：91.9％
1H NMR(CD3OD,400MHz)4.05(s,1H),374(s,2H),3.70-3.69(m,1H),3.36(s,3H),3.28-3.27(m,1H),3.09-3.07(m,1H),2.07-2.04(m,2H),1.94-1.92(m,2H),1.56-1.40(m,4H)
制备N-((1R，4R)-4-((4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨 基)环己基)-2-甲氧基乙酰胺(A29_1)
化合物A29_1根据方法E中描述的过程用胺-29(1.0eq)和DIEA(4eq)制造，它在prep HPLC(碱性条件)纯化之后作为淡黄固体获得。产率：27.4％
LCMS:RT＝2.535min,m/z 355.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.20(d,J＝5.2Hz,1H),7.85(s,1H),6.73(d,J＝5.2Hz,1H),6.40(d,J＝8.0Hz,1H),4.92(s,1H),3.91(m,7H),3.45(m,3H),3.27-3.20(m,2H),2.21(s,2H),2.10(s,2H),1.45-1.36(m,4H),1.13-1.12(m,1H),0.53-0.48(m,2H),0.28-0.26(q,J＝4.9Hz,2H)
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4- (2-甲氧基乙基)环己烷-1，4-二胺(A-29)
在15℃下向LAH(40.00mg，1.05mmol，10.50eq)在THF(4mL)中的混合物中添加A29_1(40.00mg，100.38μmol，1.00eq)的THF(1mL)溶液。在70下搅动混合物36小时。冷却反应混合物，倒入H2O(0.1mL)中。添加1N NaOH(0.1mL)并过滤。浓缩滤液。粗产物通过Pre-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-29(4.00mg，9.88μmol，9.8％产率，95.0％纯度)。
LCMS:RT＝2.535min,m/z 355.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ8.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.82(s,1H),6.76-6.69(m,1H),4.88(d,J＝10.4Hz,1H),3.89(s,4H),3.54-3.50(m,2H),3.38(s,3H),3.22(d,J＝8.40Hz,2H)2.84-2.81(m,2H),2.49(s,1H)2.19(s,2H),2.01(s,1H)1.38(s,4H),1.07(s,1H)0.49-0.43(m,2H),0.25-0.20(m,2H)
制备(1R，4R)-4-(哌啶-1-基)环己胺盐酸盐(胺-47)
步骤1：47_1(200.00mg，933.27μmol，1.00eq)、1，5-二碘戊烷(302.32mg，933.27μmol，1.00eq)和K2CO3(515.95mg，3.73mmol，4.00eq)在MeCN(10mL)中的混合物在90℃下搅动16小时。过滤混合物，浓缩滤液得到作为白色固体的47_2(300mg，粗制的)，将其直接用于下一步。
步骤2：粗制的47_2以A27的合成的步骤3所示类似方式脱保护，获得作为白色固体的胺-47。
1H NMR(D2O,400MHz)δ3.55-3.10(m,6H),2.16-2.08(m,4H),1.59-1.41(m,10H)。
制备4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-((1R,4R)-4-(哌啶-1-基)环 己基)嘧啶-2-胺(A-47)
化合物A-47使用胺-47根据方法F中描述的过程制备，通过prep HPLC(HCl条件)纯化后作为白色固体获得。产率：49.3％
LCMS:RT＝1.530min,m/z 395.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.21(s,1H),8.06(d,J＝6.8Hz,1H),7.24-7.21(m,1H),4.10(s,1H),3.88(s,3H),3.49(d,J＝11.2Hz,2H),3.23(s,2H),3.06-3.00(m,4H),2.26(d,J＝10Hz,4H),1.96-1.57(m,10H),1.15(s,1H),0.50(s,2H),0.31-0.30(m,2H)
制备(1R，4R)-4-吗啉代环己胺盐酸盐(胺-48)
粗制的胺-48以胺-47的合成描述的类似方式进行合成，作为黄色固体获得。
1H NMR(D2O,400MHz)δ3.87(s,4H),3.24-3.11(m,6H),2.20-2.12(m,4H),1.59-1.39(m,5H)。
制备4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-((1r,4r)-4-吗啉代环己基) 嘧啶-2-胺(A-48)
化合物A-48用胺-48和TBAF(1.0eq)根据方法F中描述的过程制备，通过prep HPLC(HCl条件)纯化后作为白色固体获得。产率：51.2％
LCMS:RT＝2.095min,m/z 397.3[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.19(s,1H),4.06-3.97(m,3H),3.83-3.78(m,5H),3.51-3.42(m,2H),3.24(s,1H),3.14-3.12(m,1H),2.29-2.19(m,4H),1.69-1.63(m,2H),1.54-1.48(m,2H),1.02(s,1H),0.45(s,2H),0.25(s,2H)。
制备(1R，4R)-4-(吡咯烷-1-基)环己胺盐酸盐(胺-49)
粗制的胺-49以胺-47的合成所描述的类似方式进行合成，作为白色固体获得。
1H NMR(D2O,400MHz)δ3.55-3.53(m,3H),3.13-2.99(m,4H),2.21-2.09(m,2H),2.06-1.99(m,7H),1.49-1.40(m,4H)。
制备4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-((1R，4R)-4-(吡咯烷-1-基) 环己基)嘧啶-2-胺(A-49)
化合物A-49使用胺-49根据方法F中描述的过程制备，通过prep HPLC(HCl条件)纯化后作为白色固体获得。产率：89.3％
LCMS:RT＝2.607min,mlz 381.3[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.16(s,1H),8.01(s,1H),7.19(s,1H),4.06(s,1H),3.83(s,3H),3.08(s,2H),2.26-1.48(m,13H),1.09(s,1H),0.45(s,2H),0.25(s,2H)。
制备(1R，4R)-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己胺盐酸盐(胺-50)
粗制的胺-50以胺-47的合成所描述的类似方式进行合成，作为白色固体获得。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.15-4.08(m,2H),3.65-3.12(m,1H),2.28-2.03(m,6H),1.50-1.42(m,4H),1.26-1.20(m,1H)。
制备N-((1R，4R)-4-(氮杂环丁烷-1-基)环己基)-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(A-50)
化合物A-50使用胺-50根据方法F中描述的过程制备，通过prep HPLC(碱性条件)纯化后作为白色固体获得。产率：16％
LCMS:RT＝2.494min,m/z 367.3[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.88(s,1H),6.70(d,J＝6.8Hz,1H),4.86(d,J＝11.6Hz,1H),3.91(m,4H),3.25-3.20(m,5H),2.31-2.07(m,6H),2.05-2.02(m,2H),1.24-1.10(m,5H),0.47-0.43(m,2H),0.25-0.22(s,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丁基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己 烷-1，4-二胺(A-45)
步骤1：将2-环丁基乙腈(1.00g，10.51mmol，1.00eq)在HCl(6M，10.00mL，5.71eq)中的溶液在120℃下搅动16小时。用水(50mL)稀释混合物并用EA(20mL×2)提取。将合并的有机层用水(40mL)洗涤，干燥并浓缩，得到作为无色液体的45_1(750mg，6.57mmol，62.5％产率)
1H NMR(CDC13,400MHz)δ2.72-2.68(m,1H),2.47-2.45(d,J＝8.0Hz,2H),2.17-2.15(m,2H),1.90-1.88(m,2H),1.75-1.70(m,2H)。
步骤2-4：以与方案1.1中合成母核A所描述的类似的方式合成化合物45_5。
作为无色液体获得化合物45_2。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.68(s,3H),3.16(s,3H),3.75-3.71(m,1H),2.55-2.53(m,2H),2.16-2.13(m,3H),1.89-1.87(m,2H),1.73-1.68(m,2H)。
作为黄色的油获得化合物45_4。
LCMS:RT＝0.795min,m/z 237.1[M+H]+
作为暗褐色固体获得化合物45_5：
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.39-8.38(d,J＝4.8Hz,1H),8.02(s,1H),7.59(s,1H),6.96-6.92(m,1H),2.96(s,3H),2.89(m,5H),2.72-2.68(m,1H),2.57(s,3H),2.10-2.05(m,2H),1.87-1.82(m,4H)。
步骤5-6：以方案1.2中合成母核C所描述的类似方式合成化合物45_7。
在prep HPLC(TFA条件)纯化之后作为黄色油获得化合物45_6。产率：21.2％；
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.41-8.39(d,J＝1.2Hz,1H),7.88(s,1H),7.09-7.07(d,J＝6.8Hz,1H),3.89(s,3H),3.35-3.33(d,J＝9.6Hz,2H),2.72-2.67(m,1H),2.6(s,3H),2.02-1.98(m,2H),1.84-1.76(m,4H)。
在pre-TLC纯化之后作为黄色油获得化合物45_7。产率：86.6％；
LCMS:RT＝0.706min,m/z 307.2[M+H]+
步骤7：化合物A-45根据方法D中描述的过程用反式-环己烷-1，4-二胺(4.0eq)制造，在prep HPLC(碱性条件)纯化后作为黄色固体获得。产率：21.9％；
LCMS:RT＝0.539min,m/z 341.3[M+H]+；
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.18-8.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.82(s,1H),6.69-6.68(d,J＝5.2Hz,1H),4.85-4.83(d,J＝8.0Hz,1H),3.91-3.84(m,4H),3.33-3.31(d,J＝7.6Hz,2H),2.75-2.68(m,2H),2.18-2.17(m,2H),2.00-1.93(m,4H),1.80-1.77(m,4H),1.31-1.26(m,4H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环戊基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己 烷-1,4-二胺(A-46)
按照与合成化合物A-45所描述的类似方式合成化合物A-46。
作为无色油获得化合物46_2。
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ3.64(s,3H),3.14(s,3H),2.41-2.40(t,J＝7.2Hz,2H),2.26-2.25(m,1H),1.82-1.80(m,2H),1.59-1.51(m,4H),1.15-1.13(m,2H)。
作为黄色的油获得化合物46_5。
LCMS:RT＝1.294min,m/z 306.2[M+H]+
在prep TLC纯化之后作为黄色油获得化合物46_6。产率：26.5％
LCMS:RT＝0.866min,m/z 289.1[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.42-8.41(d,J＝5.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.10-7.09(d,J＝5.2Hz,1H),3.90(s,3H),3.26-3.24(d,J＝7.6Hz,2H),2.61-2.60(d,J＝4.8Hz,3H),2.21(m,1H),1.72-1.67(m,4H),1.27-1.26(m,2H),1.25(m,3H)。
在prep TLC纯化之后作为白色固体获得化合物46_7。产率：44.0％
LCMS:RT＝1.219min,m/z 321.2[M+H]+
在prep HPLC(碱性条件)纯化之后作为黄色固体获得化合物A-46。产率：52.7％
LCMS:RT＝2.381min,m/z 355.2[M+H]+
1H NMR(CD3OD,400MHz)δ8.16(s,1H),8.07-8.03(t,J＝8.0Hz,1H),7.20-7.18(d,J＝6.8Hz,1H),4.06-4.02(m,1H),3.88(s,3H),3.31-3.30(m,2H),3.16(s,1H),2.17-2.15(m,5H),1.67(m,4H),1.56(m,6H),1.30-1.25(m,2H)
制备(1R，4R)-N1-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基) 环己烷-1，4-二胺(A-51)
步骤1：在-78℃下向化合物N-甲基吡唑(51_1，8.00g，97.44mmol，1.00eq)的THF(160mL)溶液中滴加n-BuLi(2.5M，46.77mL，1.20eq)。在该温度下搅拌所得混合物1小时后，逐滴加入环丙烷甲醛(8.20g，116.93mmol，1.20eq)的THF(80mL)溶液。然后在20℃下搅动反应混合物16小时。TLC(PE:EA＝2:1)显示反应物1(Rf＝0.3)被消耗，形成产物(Rf＝0.05)。将混合物倒入NH4Cl水溶液(300mL)中并搅动10分钟。水相用乙酸乙酯(100mL×2)提取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物通过柱层析(SiO2，PE:EA＝8:1-0:1)纯化，得到作为无色油的化合物51_3(12.00g，78.85mmol，80.9％产率，100％纯度)。
LCMS:RT＝0.118min,m/z 153.1[M+H]+
步骤2：将化合物51_3(9.00g，59.14mmol，1.00eq)、TFA(40.46g，354.84mmol，26.27mL，6.00eq)和Et3SiH(41.26g，354.84mmol，56.52mL，6.00eq)在DCM(900mL)中的反应混合物在40℃下搅动36小时。混合用NaHCO4水溶液调节到pH＝8，并分离。浓缩有机层，通过prep HPLC(碱性条件)纯化得到作为暗褐色油的化合物51_5(2.10g，15.42mmol，26.1％产率)。
LCMS:RT＝0.565min,m/z 137.1[M+H]+
步骤3：在0℃下向化合物51_5(2.10g，15.42mmol，1.00eq)的DCM(21mL)溶液中加入NBS(3.02g，16.96mmol，1.10eq)。混合物在20℃下搅动2小时。浓缩混合物，通过柱层析(SiO2，PE:EA＝20:1)纯化得到作为黄色油的化合物51_6(3.00g，13.95mmol，90.5％产率)。
LCMS:RT＝0.784min,m/z 217.1[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ7.39(s,1H),3.87(s,3H),2.65-2.63(d,J＝8.8Hz,2H),0.98-0.94(m,1H),0.55-0.51(m,2H),0.29-0.25(m,2H)。
步骤4：在-78℃下向化合物51_6(3.00g，13.95mmol，1.00eq)的THF(60mL)溶液中滴加n-BuLi(2M，10.46mL，1.50eq)。在该温度下搅动0.5小时后，加入THF(6mL)中的2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(5.19g，27.90mmol，2.00eq)的溶液。产生的混合物加热到20℃，搅动0.5小时。TLC(PE：EA＝5：1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(Rf＝0.5)形成。用饱和NH4Cl(50mL)淬灭混合物并用EA(100mL)提取。将有机层浓缩并通过柱层析(SiO2，PE：EA＝20：1-10：1)纯化，得到作为无色油的化合物51_7(3.30g，11.40mmol，81.7％产率，90.5％纯度)。
LCMS:RT＝0.801min,m/z 263.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ1.61(s,1H),3.85(s,3H),2.82-2.81(d,J＝6.8Hz,2H),1.30(s,12H),0.92-0.90(m,1H),0.45-0.42(m,2H),0.29-0.27(m,2H)。
步骤5：在氮气下向化合物51_7(500.00mg，1.91mmol，1.00eq)的DME(10mL)溶液中加入2,4,5-三氯嘧啶(51_8，420.40mg，2.29mmol，1.20eq)、Na2CO3(2M，2.10mL，2.20eq)和催化剂PdCl2(Amphos)2(67.62mg，95.50mol，0.05当量)。在氮气和85℃下将产生的混合物搅动2小时。TLC(PE：EA＝5：1)显示反应物(Rf＝0.4)被消耗，产物(Rf＝0.5)形成。用水(50mL)稀释混合物，用EA(50mL)提取。将有机层浓缩并通过硅胶柱(PE：EA＝5：1)纯化，得到作为黄色油的化合物51_9(350.0mg，1.05mmol，55％产率，85％纯度)。
LCMS:RT＝0.819min,m/z 283.1[M+H]+
步骤6：将化合物51_9(300.00mg，1.06mmol，1.00eq)和反式-环己烷-1,4-二胺(484.17mg，4.24mmol，4.00eq)在二氧六环(4.5mL)中的反应混合物在130℃下微波下搅动2小时。过滤混合物并浓缩。通过prep-HPLC(HCl条件)纯化粗品，得到作为黄色固体的A-51(80.00mg，200.04μmol，产率18.9％，纯度99.3％，HCl)。
LCMS:RT＝2.817min,m/z 361.1[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.37(s,1H),8.29(s,3H),8.08(s,1H),3.86(s,3H),3.70-3.68(m,2H),3.06-3.05(d,J＝6.4Hz,2H),2.96(s,1H),2.03-1.95(m,4H),1.49-1.32(m,4H),0.98(s,1H),0.42-0.40(m,2H),0.16(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基嘧啶-2- 基)环己烷-1,4-二胺(A-52)
步骤1：在氮气下向化合物51_7(500.00mg，1.91mmol，1.00eq)的DME(10mL)溶液中加入化合物52_8(373.60mg，2.29mmol，1.20eq)，Na2CO3(a.q)(2M，2.1mL，2.20eq)和催化剂PdCl2(Amphos)2(67.62mg，95.50μmol，0.05eq)。在氮气和85℃下搅动产生的混合物2小时。TLC(PE：EA＝5：1)显示反应物(Rf＝0.4)被消耗，产物(Rf＝0.25)形成。用水(50mL)稀释混合物，用EA(50mL)提取。将有机层浓缩并通过柱层析(SiO2，PE：EA＝20：1-5：1)纯化，得到作为黄色油的化合物52_9(350.00mg，1.15mmol，60.3％产率，86.5％纯度)。
LCMS:RT＝0.761min,m/z 263.2[M+H]+
步骤2：将化合物52_9(350.00mg，1.33mmol，1.00eq)和反式-环己烷-1,4-二胺(607.49mg，5.32mmol，4.00eq)在二氧六环(5mL)中的反应混合物在130℃在微波下搅动2小时。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(Rf＝0.05)形成。过滤混合物并浓缩。通过prep-HPLC(HCl条件)纯化粗品，然后进行prep-HPLC(碱性条件)得到作为黄色固体的A-52(30.0mg，88.00μmol，6.6％产率，99.8％纯度)。
LCMS:RT＝2.429min,m/z 341.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)8.09(s,1H),7.67(s,1H),4.72-4.70(d,J＝8.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.82-3.80(m,1H),3.02-3.00(d,J＝6.4Hz,2H),2.79-2.76(m,1H),2.22(s,3H),2.14-1.93(m,4H),1.32-1.23(m,4H),0.97(m,lH),0.45-0.42(m,2H),0.12-0.10(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)-4-甲基环己烷-1，4-二胺(A-30_1)和(1R,4S)-N1-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-4-甲基环己烷-1,4-二胺(A-30_2)
步骤1：向DCM(18.00mL)中化合物30_1(900.00mg，3.96mmol，1.00eq)和BnNH2(424.26mg，3.96mmol，432.92μL，1.00eq)的混合物中加入AcOH(237.77mg，3.96mmol，1.00eq)和NaBH(OAc)3(1.68g，7.92mmol，2.00eq)。产生的混合物在20℃搅动2小时。用H2O(50mL)淬灭混合物并分离。浓缩有机层。残余物通过柱层析在Al2O3(DCM:MeOH＝20:1)上纯化，得到作为红色油的化合物30_2(650.00mg，2.03mmol，51.3％产率，99.6％纯度)。
LCMS:RT＝1.520min,m/z 319.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ7.33-7.31(m,5H),4.43-4.35(m,1H),3.81(d,J＝10.8Hz,2H),2.62-2.50(m,1H),2.12-2.09(m,1H),1.82-1.79(m,4H),1.43(s,9H),1.38-1.27(m,7H)。
步骤2：向化合物30_2(350.00mg，1.10mmol，1.00eq)的MeOH(3.5mL)溶液中添加Pd(OH)2(35.00mg)。化合物在H2(16psi)下在20℃搅动16小时。TLC(DCM:MeOH＝10：1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(Rf＝0.3)形成。过滤混合物，浓缩母液得到作为红色油的胺-30(220.00mg，963.5μmol，87.6％产率)。
MS:m/z 229.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ4.43-4.33(m,1H),3.82-2.66(m,1H),2.08(s,1H),1.79-1.66(m,4H),1.43(s,9H),1.33-1.27(m,7H)。
步骤3：向DMSO(4mL)中的胺-30(300.00mg，917.99μmol，1.00eq)和母核D(230.57mg，1.01mmol，1.10eq)的溶液中加入DIEA(480.97μL，2.75mmol，3.00eq)和TBAF(48.00mg，2.75mmol，0.20eq)。混合物在160℃下搅动3小时。在EA(50mL)和H2O(50mL)之间分离混合物。浓缩有机层得到作为红色油的30_3(400.00mg，粗制的)。
LCMS:RT＝1.081min,m/z 475.2[M+H]+
步骤4：在0℃下向30_3(400.00mg，842.05μmol，1.00eq)的DCM(4mL)溶液中添加TFA(800μL)。在20℃下搅动产生的混合物1小时。TLC(PE：EA＝2：1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(Rf＝0.05)形成。浓缩混合物。残余物通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-30_1(55.00mg，127.60μmol，15.1％产率，95.4％纯度，HCl)和A-30_2(40.00mg，95.31μmol，11.3％产率，98.0％纯度，HCl)。
LCMS(A-30_1):RT＝2.495min,m/z 375.2[M+H]+
1H NMR_峰-l(MeOD,400MHz)δ8.49(s,1H),8.45(s,1H),4.10(s,1H),3.96(s,3H),3.23(d,J＝6.4Hz,2H),2.11-2.10(m,2H),2.07-1.94(m,2H),1.84-1.74(m,4H),1.47(s,3H),1.09-1.08(m,1H),0.55-0.51(m,2H),0.28-0.27(m,2H)。
LCMS(A-30_2):RT＝2.527min,m/z 375.2[M+H]+
1H NMR_峰-2(MeOD,400MHz)δ8.47(s,2H),4.19(s,1H),3.96(s,3H),3.19(d,J＝6.4Hz,2H),2.05-2.1.99(m,2H),1.87-1.78(m,2H),1.42(s,H),1.08-1.07(m,1H),0.54-0.52(m,2H),0.30-0.28(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-(环丁基甲基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2基)环己 烷-1，4-二胺(A53)
步骤1：在60℃下向DMSO(240mL)中NaCN(13.81g，281.82mmol，1.40eq)的混合物中滴加53_1(30.00g，201.30mmol，22.56ml，1.00eq)。在75℃下保持混合物16小时。冷却反应混合物，用水(500mL)稀释。溶液用EtOAc(200mL×3)提取。合并的有机层用盐水洗涤(100mL×3)，干燥。浓缩有机层得到作为淡黄液体的53_2(15.00g，157.66mmol，78.3％产率)。
1H NMR(CDC13,400MHz)δ2.64-2.63(m,1H),2.42-2.41(d,J＝6.4Hz,2H),2.20-2.17(m,2H),1.90-1.83(m,4H)。
步骤2：53_2(15.00g，157.66mmol，1.00eq)的HCl(6M，150mL，5.71eq)溶液在120℃下搅动16小时。用水(500mL)稀释混合物并用EtOAc(200mL×2)提取。合并的有机层用水洗涤(400mL)。干燥有机层，浓缩得到作为无色液体的53_3(16.00g，140.18mmol，88.9％产率)。
1H NMR(CDC13,400MHz)δ2.69-2.68(m,1H),2.47-2.45(m,2H),2.17-2.15(m,2H),1.89-1.87(m,2H),1.75-1.70(m,2H)。
步骤3：在0℃在部分中向53_3(16.00g，140.18mmol，1.00eq)和N-methoxymethanamine(20.51g，210.27mmol，1.50eq，HCl)的DCM(160mL)溶液中添加CDI(45.46g，280.36mmol，2.00eq)。在20℃下搅动化合物16小时。用水(50mL)稀释混合物并用DCM(30mL×3)提取。干燥合并的有机层，浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶柱(PE:EA＝50:1-10:1)纯化得到作为无色液体的53_4(12.00g，76.33mmol，54.4％产率)。
1H NMR(CDC13,400MHz)δ3.68-3.67(d,J＝2.4Hz,3H),3.16(s,3H),2.77-2.73(m,1H),2.54-2.53(m,2H),2.16-2.13(m,2H),1.88-1.86(m,2H),1.73-1.72(m,2H),1.70-1.68(m,2H)。
步骤4：在-78℃下向53_4(4.50g，32.09mmol，1.00eq)的THF(225mL)溶液中添加LDA((2M，24.07mL，1.50eq)。搅动1小时后，在-78℃下添加2-环丁基-N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(6.05g，38.51mmol，1.20eq)的THF(120mL)溶液。产生的混合物在-78℃下搅动4小时，用饱和NH4Cl(200mL)淬灭，用乙酸乙酯(200mL×3)提取水相。用盐水(200mL)洗涤合并的层，在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩得到作为黄色油的53_5(10.00g，粗制的)。
LCMS:RT＝0.788min,m/z 237.1[M+H]+
步骤5：53_5(10.00g，42.31mmol，1.00eq)的DMF-DMA(201.68g，1.69mol，224.09mL，40.00eq)在90℃下搅动2小时。浓缩混合物得到粗产物。通过硅胶柱(DCM:MeOH＝1：0-10：1)纯化粗产物，得到作为黑褐色固体的53_6(8.80g，粗制的)。
步骤6：向53_6(800.00mg，2.75mmol，1.00eq)的EtOH(12mL)溶液中添加异丙基肼(364.95mg，3.30mmol 1.20eq，HCl)和TEA(333.93mg，3.30mmol，457.43μL，1.20eq)。在90℃下搅动混合物1小时。浓缩混合物。粗品通过pre-HPLC(TFA)纯化得到作为黄色油的53_7(600.00mg，1.88mmol，68.5％产率，95％纯度)。
LCMS:RT＝0.901min,m/z 303.2[M+H]+
步骤7：在0℃下向53_7(600.00mg，1.98mmol，1.00eq)的DCM(9mL)溶液中添加m-CPBA(1.01g，4.96mmol，85％纯度，2.50eq)。在20℃下搅动混合物3小时。用饱和NaS2O3水溶液(50mL)淬灭反应，用DCM(20mL×2)提取。合并的有机层用NaHCO3水溶液(40mL)洗涤。干燥并浓缩有机层。通过prep-TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化粗品(Rf＝0.6)得到作为黄色油的53_8(500.00mg，1.50mmol，75.5％产率)。
LCMS:RT＝0.803min,m/z 335.1[M+H]+
步骤8：向53_8(500.00mg，1.50mmol，1.00eq)的二氧六环(7.5mL)溶液中添加反式-环己烷-1，4-二胺(685.14mg，6.00mmol，4.00eq)。在微波中在130℃下搅动混合物2小时。过滤混合物并浓缩。粗品通过prepHPLC(碱性)和prep HPLC(HCl)纯化得到作为黄色固体的A-53(250.00mg，615.9μmol，41％产率，99.8％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.57min,m/z 369.2[M+H]+
1H NMR(DMSO,400MHz)δ8.88-8.87(m,1H),8.38-8.25(m,5H),7.30-7.28(m,1H),4.78-4.76(m,1H),3.36-3.34(m,2H),3.05(s,1H),2.61(s,1H),2.05(m,4H),1.92-1.91(m,2H),1.78(m,4H),1.47-1.39(m,10H)。
制备(1R,4R)-N1-(4-(1-甲基-5-((1-甲基环丙基)甲基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)环己烷-1，4-二胺(A56)
步骤1：在0℃分批向1-甲基环丙烷-1-羧酸(4.00g，39.95mmol，1.00eq)和CDI(7.13g，43.95mmol，1.10eq)的DCM(40mL)溶液中添加N-甲氧基甲胺(4.68g，47.94mmol，1.20eq，HCl)。在20℃搅动混合物16小时。用水(50mL)稀释混合物并用DCM(20mL×3)提取。干燥合并的有机层，浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶柱(PE:EA＝30:1-10:1)纯化得到作为无色液体的56_1(3.30g，23.05mmol，57.7％产率)。
1H NMR(CDC13,400MHz)δ3.73(s,3H),3.23(s,3H),1.37(s,3H),1.05-1.03(m,2H),0.58-0.55(m,2H)。
步骤2：在-78℃下向1-甲基吡唑(1.70g，20.71mmol，1.72mL，1.00eq)的THF(35.00mL)溶液中添加n-BuLi(2.5M，9.94mL,1.20eq)。搅动1小时。在-78℃下添加THF(35mL)中的化合物56_1(3.26g，22.78mmol，1.10eq)。在20℃下搅动产生的混合物1小时。用饱和NH4Cl(20mL)淬灭混合物并用EtOAc(20mL×2)提取。将有机层浓缩并通过硅胶柱(PE：EA＝1:0-20:1)纯化，得到作为黄色油的56_2(2.50g，13.41mmol，64.8％产率，88.1％纯度)。
LCMS:RT＝0.609min,m/z 165.1[M+H]+
步骤3：使用Dean-Stark，NH2NH2.H2O(2.57g，48.72mmol，2.49mL，95％纯度，4.00eq)和二甘醇(40mL)中56_2(2.00g，12.18mmol，1.00eq)和KOH(2.73g，48.72mmol，4.00eq)的反应混合物加热到110℃1.5小时，然后在200℃另外1小时。用水(50mL)稀释混合物并用MTBE(50mL×2)提取。浓缩合并的有机层得到作为无色油的56_3(1.10，粗制的)。
LCMS:RT＝0.639min,m/z 151.1[M+H]+
步骤4：在0℃下向56_3(1.10g，7.32mmol，1.00eq)的DCM(11mL)溶液中添加NBS(1.30g，7.32mmol，1.00eq)。在20℃下搅动混合物1小时。浓缩混合物。粗品通过硅胶柱(PE:EA＝1:0-50：1)纯化得到作为无色油的56_4(1.45g，5.65mmol，77.1％产率，89.2％纯度)。
LCMS:RT＝0.835min,m/z 229.0[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ7.39(s,1H),3.85(s,3H),2.73(s,2H),1.05(s,3H),0.44-0.31(m,4H)。
步骤5：在-78℃下向56_4(1.45g，6.33mmol，1.00eq)的THF(29mL)溶液中添加n-BuLi(2M，4.75mL，1.50eq)。30分钟后，添加THF(2.5mL)中的2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼环戊烷(2.36g，12.66mmol，2.59mL，2.00eq)。产生的混合物加热到20℃，搅动0.5小时。用饱和NH4Cl(50mL)淬灭混合物并用EtOAc(100mL)提取。浓缩有机层，通过硅胶柱(PE:EA＝20:1-10:1)纯化得到作为无色油的56_5(1.25g，4.11mmol，64.9％产率，90.7％纯度)。
LCMS:RT＝0.928min,m/z 277.1[M+H]+
步骤6：在氮气下向56_5(500.00mg，1.81mmol，1.00eq)的DME(10mL)溶液中加入4-氯-2-甲基磺酰基-嘧啶(290.79mg，1.81mmol，210.72μL，1.00eq)、NA2CO3(2M，1.99mL，2.20eq)和4-二叔丁基膦基-N，N-二甲基苯胺；二氯化钯(64.09mg，90.50μmol，64.09μL，0.05eq)。在氮气下将产生的混合物在85℃下搅动2小时。用水(50mL)稀释混合物，用EtOAc(50mL)提取。将有机层浓缩并通过硅胶柱(PE：EA＝5：1)纯化，得到作为黄色油的56_6(350.00mg，1.14mmol，63％产率，89％纯度)。
LCMS:RT＝0.829min,m/z 275.1[M+H]+
步骤7：在0℃下向56_6(350.00mg，1.28mmol，1.00eq)的DCM(5.5mL)溶液中添加MCPBA(690.28mg，3.20mmol，80％纯度，2.50eq)。在20℃下搅动混合物2小时。混合物用Na2S2O3水溶液(100mL)淬灭，用DCM(50mL×2)提取。浓缩合并的有机层，通过硅胶柱(PE:EA＝1：1)纯化得到作为黄色固体的56_7(200.00mg，617.72μmol，48.6％产率，94.6％纯度)。
LCMS:RT＝0.653min,m/z 307.1[M+H]+
步骤8：56_7(200.00mg，652.78μmol，1.00eq)和反式-环己烷-1,4-二胺(298.17mg，2.61mmol，4.00eq)在二氧六环(3mL)中的混合物在微波中在130℃下搅动2小时。过滤混合物并浓缩。粗品通过prep-HPLC(碱性)纯化得到作为黄色固体的A-56(50.00mg，144.85μmol，22.2％产率，98.6％纯度)。
LCMS:RT＝1.999min,m/z 341.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.18-8.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.82(s,1H),6.69-6.67(d,J＝5.2Hz,1H),4.87-4.85(d,J＝5.6Hz,1H),3.88(s,3H),3.84(s,1H),3.38(s,2H),2.75-2.73(m,1H),2.17-2.16(m,2H),1.94-1.92(m,2H),1.31-1.27(m,4H),1.08(s,3H),0.31-0.25(m,4H)。
制备(1R,4R)-N1-(4-(1-甲基-5-新戊基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己烷-1,4- 二胺(A57)
按照合成化合物A-56所描述的类似方式合成化合物A-57。
LCMS:RT＝1.558min,m/z 343.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.20-8.13(m,2H),7.29-7.27(d,J＝5.2Hz,1H),4.12-4.09(m,1H),3.92(s,3H),3.34(s,1H),3.21(s,1H),2.20(m,4H),1.63(m,4H),0.98(s,9H)。
制备(4-(2-(((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基)嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基) (环丙基)甲醇(A58)
步骤1到步骤6：按照与合成A-56所描述的类似方式从化合物51_3合成中间物58_6。
LCMS:RT＝0.676min,m/z 457.4[M+H]+
步骤7：在20℃下向58_6(300.00mg，656.89μmol，1.00eq)的THF(300μL)溶液中添加TBAF.3H2O(414.51mg，1.31mmol,2.00eq)。搅动混合物30分钟。过滤并浓缩混合物。粗产物通过prep-HPLC(碱性)纯化，得到作为黄色固体的A-58(27.00mg，76.89μmol，11.7％产率，97.5％纯度)。
LCMS:RT＝2.29min,m/z 343.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.23-8.22(d,J＝5.2Hz,1H),7.86(s,1H),6.81-6.80(d,J＝5.2Hz,1H),5.09(s,1H),4.32-4.30(m,1H),3.89(s,3H),3.81-3.79(m,1H),2.93-2.88(m,1H),2.20-2.06(m,4H),1.52-1.31(m,5H),0.59-0.28(m,4H)。
制备(1R,4R)-N1--(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)环己烷-1，4-二胺(A59)
按照合成化合物A-51所描述的类似方式合成化合物A-59。
LCMS:RT＝2.478min,m/z 389.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.42-8.36(m,2H),4.82-4.75(m,1H),4.00(s,1H),3.21-3.20(s,3H),2.20-2.15(m,4H),1.60-1.56(m,4H),1.51(s,6H),1.05(s,1H),0.55-0.53(m,2H),0.28(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧 啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A60)
步骤1：在氮气保护下在0℃向60_1(2.00g，9.22mmol，1.00eq)的THF(40mL)溶液中添加ZnCl2-Et2O(1M，11.06mL，1.20eq)。混合物在0℃搅动2小时。添加甲基磺酰钠(646.23mg，9.22mmol，587.48μL，1.00eq)。产生的混合物在20℃下搅动16小时。TCL(纯PE)显示反应物1(Rf＝0.5)被消耗，产物(Rf＝0.3)形成。混合物用1M HCl(20mL)淬灭，浓缩。水层用DCM(20mL×3)提取。浓缩合并的有机层，通过硅胶柱(PE:EA＝1：0-50：1)纯化得到作为无色油的60_2(1.00g，1.97mmol，21.4％产率，45.1％纯度)。
LCMS:RT＝0.794min,m/z 228.9[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.67(s,1H),2.62(s,3H)。
步骤2：在氮气下向51_7(574.11mg，2.19mmol，1.00eq)的THF(10mL)溶液中添加60_2(500.00mg，2.19mmol，1.00eq)、K3PO4(1M，4.38mL，2.00eq)和Ad2nBuP.Biphenyl(50.00mg)。产生的混合物在氮气下在85℃搅动2小时。TLC(PE:EA＝1:1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(R＝0.5)形成。浓缩混合物，用H2O(50mL)稀释。水层用EA(20mL×2)提取。浓缩有机层。残余物通过硅胶柱(PE:EA＝20:1-5:1)纯化得到作为黄色固体的60_3(300.00mg，611.96μmol，27.9％产率，66.9％纯度)。
LCMS:RT＝0.927min,m/z 329.0[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.75(s,1H),7.75(s,1H),3.94(s,3H),2.95(d,J＝6.8Hz,2H),2.57(s,3H),0.98-0.94(m,1H),0.48-0.44(m,2H),0.17-0.13(m,2H)。
步骤3：在0℃下向60_3(400.00mg，1.22mmol，1.00eq)的DCM(7mL)溶液中添加m-CPBA(657.92mg，3.05mmol，80％纯度，2.50eq)。在20℃搅动混合物1小时。TLC(DCM:MeOH＝20:1)显示反应物(Rf＝0.6)被消耗，产物(Rf＝0.5)形成。混合物用Na2S2O3水溶液(100mL)淬灭，用DCM(50mL×2)提取。浓缩有机层，通过硅胶柱(PE:EA＝1:1)纯化得到作为黄色固体的60_4(300.00mg,738.23μmol，60.5％产率，88.7％纯度)。
LCMS:RT＝0.72min,m/z 361.0[M+H]+
步骤4：60_4(200.00mg，555.02μmol，1.00eq)和反式-环己烷-1，4-二胺(253.51mg，2.22mmol，4.00eq)在二氧六环(3mL)中的混合物在微波下在130℃搅动2小时。过滤混合物，浓缩滤液。残余物通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-60(80.00mg，185.66μmol，33.5％产率，100％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.417min,m/z 395.2[M+H]+
1H NMR(MeOH,400MHz)δ8.66(s,1H),7.90(s,1H),4.15(s,1H),3.97(s,3H),3.20(s,1H),3.10(s,2H),2.18(s,4H),1.62(s,4H),1.05(s,1H),0.53(s,2H),0.25(s,2H)。
制备N-((1R，4R)-4-(1H-吡唑-1-基)环己基)-5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(A64)
步骤1：在0℃下向64_1(2.00g，9.29mmol，1.00eq)的DCM(20mL)溶液中添加TEA(1.88g，18.58mmol，2.58mL，2.00eq)和甲磺酰氯(1.06g，9.29mmol，719.03μL，1.00eq)。在20℃搅动混合物2小时。用H2O(30mL)稀释混合物，用DCM(20mL×2)提取。干燥合并的有机层，浓缩得到作为白色固体的64_2(2.50g，8.52mmol，91.7％产率)。
1H NMR(CDC13,400MHz)δ4.88(s,1H),4.48(s,1H),3.52(s,1H),3.01(s,3H),2.07-2.03(m,2H),1.83-1.82(m,2H),1.73-1.70(m,2H),1.61-1.55(m,7H),1.448(s,9H)。
步骤2：向1H-吡唑(195.25mg，2.87mmol，1.20eq)的MeCN(7.00mL)溶液中添加Cs2CO3(1.56g，4.78mmol，2.00eq)和64_2(700.00mg，2.39mmol，1.00eq)。在100℃下搅动混合物2小时。混合物用H2O(20mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)提取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤并浓缩。残余物通过pre-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的64_3(200.00mg，732.25μmol，30.6％产率，97.1％纯度)。
MS:m/z RT＝0.888min,266.0[M+H]+
步骤3：在0℃向64_3(180.00mg，678.35μmol，1.00eq)的DCM(2mL)溶液中添加TFA(400.00μL)。在20℃搅动混合物1小时。用H2O(30mL)稀释混合物，用DCM(10mL×2)提取。冻干水层得到作为无色油的胺-64(180.00mg，633.91μmol，93.5％产率，98.3％纯度，TFA)。
LCMS:RT＝0.272min,m/z 166.2[M+H]+
步骤4：向51_9(100.00mg，353.16μmol，1.00eq)的DMSO(1.5mL)溶液中添加胺-64(95.48mg，529.74μmol，1.50eq)和DIEA(182.57mg，1.41mmol，246.71μL，4.00eq)。产生的混合物在160℃下搅动3小时，过滤，浓缩母液。残余物通过pre-HPLC(碱性条件)、然后prep-HPLC(HCl条件)纯化，得到作为黄色固体的A-64(10.00mg，23.42μmol，6.6％产率，100％纯度)。
LCMS:RT＝1.981m/z 412.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.41-8.37(m,2H),7.83(s,1H),7.67(s,1H),6.39(s,1H),4.36(s,1H),4.12-4.08(m,1H),3.95(s,3H),3.25-3.23(d,J＝6.4Hz,2H),2.26-2.23(m,4H),2.05-2.02(m,2H),1.99-1.96(m,2H),1.73-1.67(m,2H),1.09(s,1H),0.55-0.50(m,2H),0.27-0.26(m,2H)。
制备N-((1R，4R)-4-(1H-咪唑-1-基)环己基)-5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基- 1H-咪唑-4-基)嘧啶-2-胺(A-65)
按照合成化合物A-64所描述的类似方式合成化合物A-65，为黄色固体。
LCMS:RT＝1.461min,m/z 412.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ9.10(s,1H),8.42(s,1H),7.81(s,1H),7.62(s,1H),4.55-4.49(m,1H),4.13(s,1H),3.96(s,3H),3.25-3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.36-2.28(m,4H),2.08-1.98(m,2H),1.80-1.74(m,2H),1.09(s,1H),0.53-0.51(m,2H),0.27-0.26(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(5-氯-4-(5-环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-苯基环己 烷-1，4-二胺(A-68)
步骤1：向叔-丁基((1R,4R)-4-氨基环己基)氨基甲酸酯(500.00mg，2.33mmol，1.00eq)和碘代苯(713.01mg，3.49mmol，389.63μL，1.50eq)在THF(15mL)中的溶液中添加t-BuOK(784.35mg,6.99mmol，3.00eq)和RuPhos二氢吲哚(100.00mg)。在氮气下产生的混合物在80℃下搅动12小时。过滤混合物，浓缩母液。残余物通过硅胶柱(PE:EA＝10:1-4:1)纯化，得到作为白色固体的68_1(300.00mg，869.39μmol，37.3％产率，84.1％纯度)。
LCMS:RT＝1.024min,m/z 291.0[M+H]+
步骤2和步骤3：按照合成化合物A-64所描述的类似的方式合成化合物A-68，为黄色固体。
LCMS:RT＝1.194min,m/z 437.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.29(s,1H),8.03(s,1H),7.75-7.34(m,5H),3.86(s,3H),3.05(d,J＝6.4Hz,2H),2.00-1.97(m,4H),1.55(s,2H),1.37-1.29(m,2H),0.97(s,1H),0.39(s,2H),0.14(s,2H)。
制备(5R，8R)-8-((5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基) 氨基)-1-氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮(A-71)
向胺-71(180.00mg,879.34μmol，1.00eq，HCl)和51_9(248.99mg，879.34μmol，1.00eq)在DMSO(2.7mL)中的溶液添加DIEA(614.30μL，3.52mmol，4.00eq)和TBAF(1M，175.87μL，0.20eq)。混合物在160℃下搅动3小时冷却混合物并过滤。固体在室温下用MeOH(10mL)洗涤，然后在50℃下用EtOAc(3mL)洗涤，得到作为白色固体的A-71(40.00mg，90.39μmol，11.4％产率，93.7％纯度)。
LCMS:RT＝2.836min,m/z 415.2[M+H]+
1H NMR(DMSO,400MHz)δ8.26(s,1H),8.00(s,1H),7.72(s,1H),7.20(s,1H),3.85(s,3H),3.70-3.68(m,1H),3.06(d,J＝6.4Hz,2H),2.19-2.15(m,2H),1.86-1.80(m,5H),1.64-1.60(m,3H),1.49-1.41(m,5H),0.97(s,1H),0.40(s,2H),0.13(s,2H)。
制备(1R,4R)-N1-苄基-N4-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧 啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-74)
向A-51(200.00mg，554.20μmol，1.00eq)和苯甲醛(58.81mg，554.20μmol，56.01μL，1.00eq)的溶液中添加AcOH(33.28mg，554.20μmol，31.70μL，1.00eq)和NaBH3CN(69.65mg，1.11mmol，2.00eq)。在15℃下搅动混合物16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um；移动相：[水(0.05％氢氧化铵v/v)-ACN]；B％:55％-85％，12min)纯化，得到作为粉色固体的A-74(100.00mg，217.80μmol，39.3％产率，98.2％纯度)。
LCMS:RT＝2.74min,m/z 451.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.20-8.13(m,2H),7.34-7.33(m,5H),4.87(d,J＝8.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.84(s,3H),3.07-3.06(m,2H),2.58-2.52(m,1H),2.16-2.02(m,4H),1.32-1.22(m,4H),1.01-0.99(m,1H),0.49-0.45(m,2H),0.18-0.16(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-((1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(5-氯-4-(5-环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己烷-1，4，-二胺(A-75)
向A-51(200.00mg，554.20μmol，1.00eq)和1H-吡唑-4-甲醛(53.25mg，554.20μmol，1.00eq)的溶液中添加AcOH(34.86μL，609.62μmol，1.10eq)和NaBEbCN(69.65mg，1.11mmol，2.00eq)。在15℃下搅动混合物16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um；移动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％:39％-39％,12min)纯化，得到作为黄色液体的A-75(4.00mg，9.04μmol，1.6％产率，99.7％纯度)。
LCMS:RT＝2.95min,m/z 441.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ8.21-8.12(m,2H),7.61(s,2H),4.90(d,J＝8.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.85-3.80(m,3H),3.06-3.05(m,2H),2.70(m,1H),2.19-2.07(m,4H),1.42-1.23(m,4H),1.09(m,1H),0.50-0.45(m,2H),0.18-0.14(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-((1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡 唑-4基)嘧啶-2-基)环己烷-1，4-二胺(A76)
向A-51(200.00mg，554.20μmol，1.00eq)和吡啶-3-甲醛(59.36mg，554.20μmol，52.07μL，1.00eq)的溶液中添加AcOH(33.28mg，554.20μmol，31.70μL，1.00eq)和NaBH3CN(69.65mg，1.11mmol，2.00eq)。在15℃下搅动混合物16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um；移动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％:40％-58％，12min)纯化得到作为黄色固体的A-76(100.00mg，219.09μmol，39.5％产率，98.8％纯度)。
LCMS:RT＝2.381min,m/z 452.2[M+H]+
1H NMR(CDC13,400MHz)δ(58.58-8.51(m,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(s,1H),4.87(d,J＝8.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.85-3.81(m,3H),3.07-3.06(m,2H),2.56-2.51(m,1H),2.16-2.01(m,4H),1.30-1.22(m,4H),1.09(m,1H),0.50-0.46(m,2H),0.19-0.16(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-((1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基)环己烷-1，4-二胺(A80)
向A-14(200.00mg，612.67μmol，1.00eq)和1H-吡唑-4-甲醛(58.87mg，612.67μmol，1.00eq)的溶液中添加AcOH(36.79mg，612.67μmol，35.04μL,1.00eq)和NaBH3CN(77.00mg，1.23mmol，2.00eq)。混合物在15℃下搅动16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-80(20.00mg，48.90μmol，8％产率，99.4％纯度)。
LCMS:RT＝2.418min,m/z 407.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.58(s,1H),6.71(d,J＝6.2Hz,1H),4.88(d,J＝7.6Hz,1H),3.89(s,4H),3.81(s,2H),3.21(d,J＝6.0Hz,2H),2.61(s,1H),2.21-2.03(m,4H),1.36-1.25(m,4H),1.09(s,1H),0.48-0.46(m,2H),0.25-0.24(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(4-(5-环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4- ((1-甲基-1H-吡唑-4基)甲基)环己烷-1，4-二胺(A81)
向A-14(200.00mg，612.67μmol，1.00eq)和化合物81_1(67.46mg，612.67μmol，1.00eq)的溶液中添加AcOH(36.79mg，612.67μmol，35.04μL,1.00eq)和NaBH3CN(77.00mg，1.23mmol，2.00eq)。混合物在15℃下搅动16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-81(40.00mg，87.81μmol，14.3％产率，92％纯度)。
LCMS:RT＝2.469min,m/z 421.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.17(d,J＝5.2Hz,1H),7.82(s,1H),7.57(s,1H),7.51(s,1H),6.7(d,J＝6.2Hz,1H),4.84(d,J＝7.6Hz,1H),3.89-3.85(m,8H),3.19(d,J＝6.0Hz,2H),2.73(s,1H),2.25-2.12(m,4H),1.54(m,1H),1.29-1.23(m,2H),1.07(s,1H),0.50-0.46(m,2H),0.26-0.24(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-((1H-吡唑-3-基)甲基)-N4-(5-氯-4-(5-环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2基)环己烷-1，4-二胺(A-82)
向A-51(200.00mg，554.20μmol，1.00eq)和1H-吡唑-4-甲醛(53.25mg，554.20μmol，1.00eq)的溶液中添加AcOH(31.7μL，554.20μmol，1.10eq)和NaBH3CN(69.65mg，1.11mmol，2.00eq)。混合物在15℃下搅动16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-82(35.00mg，79.28μmol，14.3％产率，99.9％纯度)。
LCMS:RT＝2.867min,m/z 441.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.53(s,1H),6.22(s,1H),4.91(d,J＝7.6Hz,1H),3.93(s,2H),3.91(s,3H),3.81(s,1H),3.49(s,1H),3.07(d,J＝5.6Hz,2H),2.56-2.53(m,1H),2.16-2.02(m,4H),1.33-1.32(m,4H),1.05(s,1H),0.48-0.45(m,2H),0.18-0.16(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(1-(1H-吡唑-4-基)乙基)-N4-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己烷-1，4-二胺(A83)
向A-51(100.00mg，251.67μmol，1.00eq，HCl)、化合物83_1(27.71mg 251.67μmol，1.00eq)的溶液中添加TEA(503.34μmol，69.77μL，2.00eq)和Ti(i-PrO)4(149μL，503.34μmol，2.00eq)。化合物在80℃下搅动12小时。然后添加NaBH3CN(39.54mg，629.18μmol，2.50eq)。产生的混合物在15℃下搅动小时。混合物用NaHCO3水溶液(50mL)淬灭，用DCM(50mL×2)提取。浓缩有机层，通过prep-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-83(20.00mg，43.96μmol，17.5％产率)。
LCMS:RT＝1.897m/z 455.2[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.19(s,1H),8.12(s,1H),7.52(s,2H),4.90(d,J＝7.6Hz,1H),4.05-4.00(m,1H),3.91(s,3H),3.78-3.76(m,1H),3.06(d,J＝5.6Hz,2H),2.49-2.46(m,1H),2.11-2.08(m,4H),1.40-1.38(m,3H),1.25-1.19(m,4H),1.05(s,1H),0.47-0.44(m,2H),0.16-0.15(m,2H)。
制备N-((1R,4R)-4-((5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-L-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)氨基)环己基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(A87)
在0℃下向化合物87_1(46.59mg，415.65μmol，1.00eq)的DCM(4mL)溶液中添加DIEA(181.5μL，1.04mmol，2.50eq)、EDCI(95.62mg，498.78μmol，1.20eq)和HOBt(11.23mg，83.13μmol，0.20eq)。反应混合物在0℃下搅动0.5小时。添加A-51(150.00mg，415.65μmol，1.00eq)的DCM(4.5mL)溶液产生的混合物在20℃下搅动16小时。用H2O(50mL)稀释混合物，用DCM(40mL×3)提取。浓缩有机层，通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-87(80.00mg，160.61μmol，38.6％产率，98.6％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.391m/z 455.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.48(s,1H),8.39(s,1H),8.16(s,2H),4.04(s,1H),3.96(s,3H),3.93-3.90(m,1H),3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.18-2.04(m,4H),1.67-1.53(m,4H),1.18(s,1H),0.57-0.55(m,2H),0.30-0.29(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)-N4-((5-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1,4-二胺(A-91)
向A-51(150.00mg，415.65μmol，1.00eq)和5-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(54.92mg，498.78μmol，1.20eq)的MeOH(1.5mL)溶液中添加AcOH(23.77μL，415.65μmol，1.00eq)和NaBH3CN(78.36mg，1.25mmol，3.00eq)。在15℃下搅动混合物16小时。混合物用NaHCO3水溶液(10mL)淬灭，用EA(20mL×2)提取。浓缩合并的有机层，通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为白色固体的A-91(20.00mg，36.22μmol，8.7％产率，89％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.425m/z 455.2[M+H]+
1HNMR(MeOD,400MHz)δ8.44-8.41(m,2H),8.23(s,1H),4.26(s,2H),4.13-4.06(m,1H),3.95(s,3H),3.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.51(s,3H),2.40-2.24(m,4H),1.76-1.61(m,4H),1.09(s,1H),0.54-0.53(m,2H),0.28-0.27(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2- 基)-N4-(2，2，2-三氟乙基)环己烷-1，4-二胺(A94)
向A-51(150.00mg，415.65μmol，1.00eq)的THF(4.5mL)溶液中添加TEA(144.04μL,1.04mmol，2.50eq)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(115.77mg，498.78μmol，1.20eq)。混合物在50℃下搅动16小时。浓缩混合物，通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-94(80.00mg，163.38μmol，39.3％产率，97.9％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.137min,m/z 443.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.45(m,2H),4.15-4.09(m,2H),4.09(s,1H),3.95(s,3H),3.39-3.36(m,1H),3.22-3.21(m,2H),2.33-2.25(m,4H),1.71-1.56(m,4H),1.09(s,1H),0.54-0.52(m,2H),0.28-0.27(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-((1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2，2，2-三氟乙基)环己烷-1，4-二胺(A95)
向A-75(150.00mg，340.16μmol，1.00eq)的MeCN(4.5mL)溶液中添加CS2CO3(221.66mg，680.32μmol，2.00eq)和2,2,2三氟乙基三氟甲磺酸酯(118.43mg，510.24μmol，1.50eq)。混合物在70℃下搅动16小时。过滤混合物，浓缩滤液，通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为白色固体的A-95(20.00mg，35.7μmol，10.5％产率，100％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.285m/z 523.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.41-8.39(m,2H),8.02(s,1H),7.76(s,1H),5.03-4.97(m,2H),4.23(s,2H),4.12-4.04(m,1H),3.95(s,3H),3.21(d,J＝6.4Hz,3H),2.34-2.23(m,4H),1.65-1.53(m,4H),1.09(s,1H),0.54-0.52(m,2H),0.27-0.26(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1,N1-双((1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(5-氯-4-(5-(环丙基甲基)-1- 甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)环己烷-1，4-二胺(A-96)
向A-75(50.00mg，113.4μmol，1.00eq)和化合物1H-吡唑-4-甲醛(32.69mg，340.17μmol，3.00eq)的溶液中添加TEA(31.44μL，226.78μmol，2.00eq)和Ti(Oi-Pr)4(67.1μL，226.78μmol，2.00eq)。混合物在80℃下搅动12小时。添加NaBH3CN(21.38mg，340.17μmol，3.00eq)，产生的混合物在15℃下搅动4小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭反应并过滤。通过prep-HPLC(TFA然后碱性条件)纯化得到作为白色固体的A-96(7.00mg，13.10μmol，11.6％产率，97.5％纯度)。
LCMS:RT＝2.382m/z 521.3[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.23(m,2H),8.03(s,1H),7.78(s,4H),4.47-4.29(m,4H),3.91-3.87(m,4H),3.12(d,J＝6.4Hz,2H),2.27-2.22(m,4H),1.94-1.85(m,2H),1.46-1.36(m,2H),1.01-1.00(m,1H),0.45-0.44(m,2H),0.14-0.13(m,2H)。
制备(1R,4R)-N1-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基) 环己烷-1,4-二胺(A-86)
步骤1：在氮气下向化合物51_7(800mg，3.05mmol，1.00eq)的DME(16mL)溶液中添加化合物2(509.54mg，3.05mmol，1.00eq)、Na2CO3(2M，4.6mL，3.00eq)和4-二叔丁基膦基-N，N-二甲基-苯胺；二氯化钯(108.04mg，152.50μl，108μL，0.05eq)。在氮气下将产生的混合物在85℃下搅动2小时。用H2O(50mL)稀释混合物，用EA(50mL)提取。浓缩有机层得到作为黄色油的化合物86_1(1.20g，粗制的)。
LCMS:RT＝1.819min,m/z 267.1[M+H]+
步骤2：将化合物86_1(1.10g，4.12mmol，1.00eq)和化合物4(1.88g，16.48mmol，4.00eq)在二氧六环(16mL)中的混合物在微波下在130℃搅动8小时。过滤混合物并浓缩。残余物通过pre-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-86(1.30g，粗制的)。A-86(300mg)再次通过prep-HPLC(HCl条件)纯化得到作为黄色固体的A-86(20.00mg，52.51μmol，12.1％产率，100％纯度，HCl)。
LCMS:RT＝2.321min,m/z 345.2[M+H]+
1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.37-8.36(m,1H),8.23-8.22(m,1H),4.07-4.03(m,1H),3.96(s,3H),3.21(d,J＝6.4Hz,2H),2.24-2.18(m,4H),1.68-1.57(m,2H),1.19(s,1H),0.57-0.55(m,2H),0.38-0.34(m,2H)。
制备(1R，4R)-N1-(1H-吡唑-4-基)甲基)-N4-(4-(5-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吡 唑-4-基)-5-氟嘧啶-2-基)环己烷-1,4-二胺(A-85)
向A-86(300.00mg，783.90μmol，1.00eq)和1H-吡唑-4-甲醛(82.86mg，862.29μmol，1.10eq)的MeOH(3mL)溶液中加入AcOH(49.31μL，862.29μmol，1.10eq)和NaBH3CN(98.52mg，1.57μmol，2.00当量)。混合物在15℃下搅动16小时。用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭混合物，浓缩。残余物通过prep-HPLC(碱性条件)纯化得到作为黄色固体的A-85(50.00mg，111.53μmol，14.2％产率，94.7％纯度)。
LCMS:RT＝2.472min,m/z 425.3[M+H]+
1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.10-8.09(m,1H),8.02-8.01(m,1H),7.60(s,1H),4.80(d,J＝8.4Hz,1H),3.91(s,3H),3.84(m,3H),3.22-3.21(m,2H),2.68(s,1H),2.21-2.06(m,4H),1.41-1.35(m,2H),1.30-1.24(m,3H),1.10-1.09(m,1H),0.49-0.45(m,2H),0.24-0.22(m,2H)。
生物学实验过程
RKO细胞上具有典型CKIα抑制活性的化合物的初步筛选(β-连环蛋白和p53稳定化和组蛋白H2AX磷酸化；参见Elyada et al,Nature 2011Feb 17；470(7334):409-13；Pribluda et al,Cancer Cell 2013Aug 12；24(2):242-56)。RKO结肠直肠细胞与10μM每种化合物在37℃下孵育16小时。细胞用PBS洗涤，细胞团与冰冷的蛋白裂解缓冲液孵育，所述缓冲液含有蛋白酶抑制混合物(1/200，Calbiochem)和磷酸酶抑制物(20mM p-硝基苯基磷酸酯(PNPP)、20mM p-甘油磷酸酯和300nM冈田酸)。通过标准技术进行分析Western印迹分析。将印迹与检测β-连环蛋白(1/2,500；BD Transduction)，p53(DO-1&1801杂交瘤混合物；每种的上清液1:20稀释度)，CK1α(C-19；1/1,000；Santa Cruz Biotechnology)和磷酸化组蛋白H2AX(S139；1/1,000；Millipore)的抗体孵育。二抗是HRP连接的山羊抗小鼠、山羊抗兔和兔抗山羊抗体(全部为1/10,000；Jackson)。使用ECL(GE Healthcare)显现印迹。
最有活性的化合物的剂量反应分析。在剂量-反应实验中进一步分析活性化合物(附图1A和1B)。类似于初步筛选，RKO细胞在37℃下与浓度递减的每种活性化合物孵育。细胞提取分离和Western印迹分析类似于初步筛选。
产生CML胚细胞危象的小鼠模型和这个模型中的抑制物研究。为了产生BCR-ABL可诱导的慢性粒细胞性白血病(CML)模型，从10周野生型小鼠提取骨髓(BM)细胞，富集表达cKit的细胞(EasySep#18757)，在补充有15％FCS、L－谷氨酰胺、Pen/Strep(BiologicalIndustries,Israel)和干细胞因子(SCF)、IL-3、IL-6和TPO(Peprotech)的RPMI生长培养基中37℃孵育过夜。培养物然后用含有p210BCR-ABL-IRES-GFP逆转录病毒构建体的上清培养基感染4小时，添加生长培养基，感染的细胞在37℃下孵育另外24小时。然后将培养物I.V.注射到亚致死照射(500rad)的小鼠中。在观察到接种的小鼠的外周血中表达GFP的细胞快速稳定提高(通过FACS)和白细胞与未成熟细胞数量上升(通过Wright-Giemsa染色的血膜检测)时，处死小鼠，将它们的BM细胞转移到新的亚致死照射的WT宿主中；每次这样的转移称为疾病世代。到第四次转移时，在疾病转移前宿主不再进行亚致死照射。通过外周血(PB)中高度异常的胚细胞数量、超过30％的白细胞(WBC)以及转移之间的短的时间间隔，可以容易地检测胚细胞危象发展。在晚世代疾病上进行CKI抑制物研究，在其中可以容易地检测PB细胞，没有宿主辐射，以及短的世代时间(达到12天)。每天监视小鼠的恶病质、体重损失、昏睡和领毛，垂死的小鼠在垂死时处死。
对于评估CKIα对CML的抑制作用，选择性的CKIα抑制物(A14)通过口服填喂法以10mg/kg的剂量每天一次施用，从BM移植(BMT)之后24小时开始(附图3A)。抑制物溶于具有0.1％吐温80和0.2％聚乙二醇的1％甲基纤维素(溶媒)中。对照小鼠仅用溶媒治疗。
离体抑制物作用(附图2A和13A-E)。从带有AML(13A-E)或CML胚细胞危象(2A)的小鼠新分离的BM在补充有15％FCS、L－谷氨酰胺、Pen/Strep、Hepes、丙酮酸钠和非必需氨基酸(Biological Industries,Israel)的RPMI中生长。CKI抑制物(A14、A51、A75或A86)溶于DMSO中，以标明的浓度添加到组织培养基中；对照培养物仅用DMSO处理。处理后几小时(如每个实验中标明的)，收获细胞，使用照相机和标准的倒置光学显微镜人工地计数。使用锥石蓝(Sigma)排除死细胞。根据厂家的推荐通过FACS评估AnnexinV-PE(MBL)、7AAD(Tonbo)和PD-L1(BioLegend)染色。
急性骨髓性白血病(AML)小鼠模型的产生(附图6)和用CKIα抑制物A14(附图7、8和9)或A51(附图11和12)治疗。为了产生MLL-AF9急性骨髓性白血病(AML)模型，从10周龄野生型小鼠提取骨髓(BM)细胞，富集表达cKit的细胞(EasySep#18757)，在补充有15％FCS、L－谷氨酰胺、Pen/Strep(Biological Industries,Israel)和干细胞因子(SCF)、IL-3、IL-6和TPO(Peprotech)的RPMI中孵育过夜。培养物用含有MSCV-MLL-AF9-IRES-GFP逆转录病毒构建体的上清培养基感染4小时，然后添加生长培养基，感染的细胞在37℃下另外孵育24小时。.然后将培养物I.V.注射到亚致死照射(500rad)的小鼠中。在小鼠外周血中表达GFP的细胞可检测稳定提高(通过FACS分析检查)和白细胞数量与未成熟细胞上升(通过Wright-Giemsa染色的血膜检测)时，处死小鼠，将它们的BM转移(第一次BMT)到亚致死照射的WT宿主中。在AML疾病发生时处死小鼠，将50,000个BM细胞移植(第二次BMT)到WT宿主小鼠中。监视外周血中表达GFP的细胞，在BP中检测到>10％GFP+时(BMT后第11天)，小鼠用A14抑制物治疗(附图7A)。通过口服填喂以20mg/kg的剂量每天一次施用A14持续3天，随后是10mg/kg/天持续另外6天。抑制物溶于具有0.1％吐温80和0.2％聚乙二醇的1％甲基纤维素(溶媒)中。对照小鼠仅用溶媒治疗。每天监视小鼠的恶病质、昏睡和领毛，处死垂死的小鼠。对于单次剂量实验(附图11A)，通过口服填喂法以20mg/kg的单次剂量施用A51，在治疗后16小时处死小鼠。
FACS分析。所有的分析在BD的设备上进行，FACS calibre，FACS ARIA分选仪或LSRII机器。对于免疫染色，细胞悬浮在具有5μM EDTA的1％BSA/PBS缓冲液中。然后使用Annexin V PE Apootosis检测试剂盒(eBioscience)、7-AAD(TONBO biosciences)和PE抗小鼠CD274(B7-H1，PD-L1)抗体(克隆10F.9G2,BioLegend)分析细胞；根据厂家的说明进行分析。特异于CD16和CD32的单克隆抗体(Miltenyi Biotec)用于在染色之前阻断Fc受体。
全血计数。使用标准技术从小鼠面静脉获得外周静脉血，使用自动血液分析仪BC-2800(Mindray)根据厂家的说明进行分析。
表1提供了本发明的化合物在p53和DNA损伤反应(DDR)的活化，作为Wnt途径活化指标的β-连环蛋白稳定性方面的定量信息。p53活化根据几个Western印迹分析中蛋白质稳定的程度来确定(Western印迹实例在附图1A和1B中显示)。例如，A43在6μM下稳定化p53，显著超过未处理对照，在2μM下没有活性(附图1A，右下画面)，因而对于p53活化得到+的平均值。相比之下，A35在0.2μM下开始稳定化p53，在1μM下达到最大稳定(附图1A，右上画面)，因而对于p53活化得到+++的平均值。A19-4既不稳定化p53，也不诱导γH2AX(一种DNA损伤反应[DDR]指标)，但是在2μM下稳定化β-连环蛋白，类似于最好的β-连环蛋白稳定化合物(附图1A，左下画面)，因而对于β-连环蛋白/Wnt活化得到+++的值。
表1：本发明的化合物的p53、DNA损伤反应和Wnt/β连环蛋白活化
+表示在6μM化合物浓度下低的、然而显著的活化；+++表示在>2μM下最大的β-连环蛋白或p53稳定化；++++表示在>0.5μM下最大的p53和DDR活化，+++++表示在>0.1μM下最大的p53和DDA活化。
本发明的化合物的IRAK1抑制。RKO细胞在37℃下与标明浓度的本发明的化合物A51(1μM)和A14(2μM)孵育16小时(附图10)。在标明的时间点，用TNFα(100单位/ml)处理RKO。收获细胞并通过Western印迹进行分析。印迹与以下抗体孵育：Phospho-IRAKl(Thr209)、(A1074,Assay Biothechnology；1/1,000)、Phospho-IKKa/β(Ser176/180)(16A6,Cell Signaling；1/1,000)、IKKα(2682,cell signaling；1/1,1000)、IKKβ(2370,cell signaling；1/1,1000)、Phospho-c-Jun(Ser 63)(9261,cell signaling；1/1,1000)、p53(DO-1&1801杂交瘤混合物；每一种的上清液的1：20稀释度)、CKIα(C-19；1/1,000；SantaCruz Biotechnology)和磷酸化组蛋白H2AX(S139；1/1,000；Millipore)。二抗是HRP连接的山羊抗小鼠、山羊抗兔和兔抗山羊抗体(全部1/10,000；Jackson)。使用ECL(GEHealthcare)显现印迹。附图10显示了IARK1以及Phospho-IKKα/β和Phospho-c-Jun的磷酸化的抑制，指示了IRAK1激酶抑制。还显示的是p53稳定化和DNA损伤的标志物H2AX的磷酸化(γH2AX)，指示了CKIα激酶抑制。CKIα蛋白质水平充当加载对照。
A51的Kinome亲和力扫描(WXL5846，参见下文表2)显示，A51的关键靶点包括整个CKI家族成员和IRAK1，和几种对照激酶。KINOMEscanTM基于竞争结合分析，其定量地测量化合物与固定的针对活性位点的配体竞争的能力。通过组合三种成分进行分析：DNA标签化的激酶；固定的配体；以及测试化合物。测试化合物与固定的配体竞争的能力通过DNA标签的定量PCR来测量；％Ctrl＝0(零)表明1μM抑制物的浓度对所测试激酶的完全抑制(Fabian,M.A.et al.A small molecule-kinase interaction map for clinical kinaseinhibitors.Nat.Biotechnol.23,329-336(2005)以及Karaman,M.W.et al.Aquantitative analysis of kinase inhibitor selectivity.Nat.Biotechnol.26,127-132(2008))。
表2:A51的Kinome亲和力扫描(WXL5846)
表3显示了A14(WXL-4085)和A51(WXL-5846)与IRAK1的相互作用的Kd测量
表3：A14(WXL-4085)和A51(WXL-5846)与IRAK1的Kd
结论。IRAK1作为kinome扫描中的优越靶点显示了在存在抑制物的情况下与IRAK1它的靶点的零结合。本发明的吡唑嘧啶化合物A51和A14显示了对IRAK1的极好的结合Kd。化合物还显示了在RKO细胞中IRAK1活化的抑制以及IRAK1靶点IKK(Ikappa B激酶)活化的抑制(Western印迹分析)。要注意的是，化合物A51显示了在RKO细胞系中在1μM的浓度下对磷酸-(活性)IRAK1的完全(100％)抑制。作为比较，Garrett W.Rhyasen等人显示了，MDS和乳腺癌的治疗中使用的Amgen的IRAK1-4抑制物在10μM下仅抑制细胞系中70％的IRAK1/4(Garrett W.Rhyasen et al,2013,Cancer Cell 24,90-104，特别是参见其中的附图2)。因而，本发明的化合物，例如，A51被发现是IRAK1的极好的抑制物，IRAK1是NF-κB途径的重要上游调节物，其在血液恶性肿瘤中起到重要作用(尤其是包括多发性骨髓瘤、MDS、白血病和淋巴瘤、头颈癌和乳腺癌)。
AML小鼠中CKI抑制物的单剂量治疗效果和PD-L1表达。通过向C57/BL6小鼠接种MLL-AF9癌基因转导的骨髓细胞来制备AML小鼠。MLL-AF9融合代表了染色体易位诱导的不良预后的人类AML之一。白血病接种之后30天，接受者小鼠具有高的白细胞(WBC)计数(×10倍高于正常小鼠)，骨髓中带有>95％的白血病胚细胞，这些小鼠中50％的外周WBC是AML胚细胞。这些小鼠患有脾肿大，由于急性白血病，它们的骨骼是苍白和脆弱的(附图12)。用A51(20mg/Kg)口服治疗16小时引起了血液中总白血病细胞的大量降低(附图11B)，白血病脾脏的缩小(附图11C和附图12A)，骨髓和血液中白血病胚细胞(GFP+细胞)比例分别50％和>90％的降低(附图11D和附图11E)。在单次剂量治疗之后不透明的骨转变为标准颜色(附图12B)。
CKI抑制物对分离自白血病小鼠骨髓的AML细胞的体外治疗效果。显示的是在10或100nM抑制物治疗之后，在治疗后6小时和9小时死细胞(7AAD+)的百分比(附图13B和13D)。在9小时时DMSO治疗产生<10％死细胞。并且，显示的是，通过流式细胞计分析，抑制物对于主要免疫检查点蛋白PD-L1的白血病表达的影响：在5小时时平均荧光强度(MFI)降低，在6小时和9小时，与DMSO治疗的细胞相比，在抑制物治疗后PD-L1阳性白血病细胞的部分降低(降低表示为DMSO对照的％)(附图13A、13C和13E)。

Claims (53)

1.具有通式(I)的化合物，包括其任何立体异构体或盐：
其中
R1和R2各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C1-C5烷氧基、直链或支链C1-C5酰基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基，它们各自任选地被卤素、羟基、酯、醚、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基和酰胺的至少一个取代；或
R1和R2与它们连接的氮原子一起形成可任选地包含N、O、NH、C＝N、C＝O或SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、卤素和氰基中的至少一个取代；
R3和R4各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基，它们任选地被卤素、羟基、烷氧基、C1-C15芳基，C3-C7杂芳基、酯和酰胺中的至少一个取代；或
R1或R2与R3以及它们各自连接的碳原子和氮原子一起形成可任选地包含N、NH、O、C＝N、C＝O、SO2中的至少一个的4-7元饱和、不饱和或芳族环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、羰基和卤素中的至少一个取代；
R5和R8各自独立地选自H、卤素、直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；任选地被至少一个卤素取代；
R6选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基、C5-C10环烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基；任选地被直链或支链C1-C8烷基、C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤中的至少一个取代；
R7选自直链或支链C1-C8烷基、直链或支链C2-C8烯基、直链或支链C2-C8炔基；被C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤的至少一个取代。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2各自独立地选自H、直链或支链C1-C8烷基，它们任选地被卤素、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、羟基、酯、醚和酰胺的至少一个取代。
3.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2各自独立地选自H、直链或支链C1-C5烷氧基，它们任选地被卤素、羟基、酯和酰胺的至少一个取代。
4.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2各自独立地选自H、C1-C5酰基，它们任选地被卤素、羟基、酯、醚和酰胺的至少一个取代。
5.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2各自独立地选自H、C5-C15芳基，它们任选地被卤素、羟基、酯、醚和酰胺的至少一个取代。
6.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R4是H。
7.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R3和R4是H。
8.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R5选自H、Cl和直链或支链C1-C4烷基。
9.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R5是H。
10.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R8选自H、Cl和直链或支链C1-C4烷基。
11.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R8是H。
12.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R5或R8之一是H。
13.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1和R2的至少一个是H。
14.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R6选自直链或支链C1-C8烷基、C5-C10环烷基、饱和或不饱和的4-6元杂环基；以及R7选自直链或支链C1-C8烷基，被C3-C7环烷基、4-6元杂环基、C5-C15芳基、C3-C7杂芳基、卤素、羟基、C1-C5烷基卤的至少一个取代。
15.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R6选自直链或支链C1-C8烷基、C5-C10环烷基、4-6元饱和的杂环基。
16.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R7是被C3-C7环烷基和羟基的至少一个取代的直链或支链C1-C8烷基。
17.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R6选自直链或支链C1-C8烷基、饱和、不饱和或芳族的4-6元杂环基，它们各自任选地被直链或支链C1-C8烷基、C3-C7环烷基、卤素、羟基、CF3的至少一个取代。
18.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R7是被至少一个C3-C7环烷基取代的直链或支链C1-C8烷基。
19.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1和R2与它们连接的氮原子一起形成任选地包含N、O、NH、C＝N、C＝O或SO2中的至少一个的4-7元饱和的环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、羟基、卤素和氰基的至少一个取代。
20.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1和R2与它们连接的氮原子一起形成4-7元饱和的环。
21.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1和R2与它们连接的氮原子一起形成包括N或O的至少一个的4-7元饱和的环。
22.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1和R2与它们连接的氮原子一起形成任选地包括N或O的至少一个的4-7元芳族环。
23.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R3和R4是H。
24.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1或R2与R3和它们连接的碳原子和氮原子一起形成任选地包含N、NH、O、C＝O、SO2的至少一个的4-7元饱和的环，并且可以任选地被直链或支链C1-C5烷基、羟基、羰基和卤素的至少一个取代。
25.根据前述权利要求的任一项的化合物，其中R1或R2与R3和它们连接的碳原子和氮原子一起形成包含NH、O、C＝O的至少一个的4-7元饱和的环。
26.根据前述权利要求的任一项的化合物，其选自：
27.包含根据权利要求1到26的任一项的至少一种化合物的组合物。
28.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于治疗。
29.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于抑制酪蛋白激酶I(CKI)和白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)的至少一种。
30.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于抑制酪蛋白激酶I(CKI)。
31.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于抑制白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)。
32.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于诱导抗肿瘤反应。
33.根据权利要求32的用途的化合物，其中所述抗肿瘤反应包括癌症免疫治疗反应。
34.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于治疗与恶性状况相关的状况、症状或疾病。
35.根据权利要求34的用途的化合物，其中所述恶性状况是癌症。
36.根据权利要求34的用途的化合物，其中所述恶性状况选自血液恶性肿瘤(多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症(MDS)、急性骨髓性白血病(AML)、黑素瘤和ER-阴性乳腺癌、弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性粒性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、头颈癌以及其任何组合。
37.根据权利要求35的用途的化合物，其中所述癌症具有WT p53。
38.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于治疗具有WT p53的癌症，其中所述WTp53是所述化合物效力的生物标志物。
39.根据权利要求35的用途的化合物，其中所述癌症选自多发性骨髓瘤、白血病、恶性黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌以及其任何组合。
40.根据权利要求34到39的任一项的用途的化合物，进一步包括诱导癌症免疫治疗反应。
41.根据权利要求1到26的任一项的化合物，用于治疗炎症和免疫相关失调，包括与之相关的状况、症状或疾病。
42.在有需要的对象中抑制酪蛋白激酶I(CKI)和白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)的至少一种的方法，包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
43.在有需要的对象中抑制酪蛋白激酶I(CKI)的方法，包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
44.在有需要的对象中抑制白细胞介素-1受体-相关激酶1(IRAK1)的方法，包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
45.一种在有需要的对象中治疗与恶性状况相关的状况、症状或疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
46.根据权利要求45的方法，其中所述恶性状况是癌症。
47.根据权利要求46的方法，其中所述癌症具有WT p53。
48.在有需要的对象中治疗具有WT p53的癌症的方法，其中所述WT p53是所述化合物效力的生物标志物。
49.根据权利要求46的方法，其中所述癌症选自白血病、多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和结肠直肠癌。
50.根据权利要求45的方法，其中所述恶性状况选自血液恶性肿瘤(多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症(MDS)、急性骨髓性白血病(AML)、黑素瘤和ER-阴性乳腺癌、弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性粒性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、头颈癌以及其任何组合。
51.根据权利要求42到50的任一项的方法，进一步包括在所述对象中诱导癌症免疫治疗反应。
52.在有需要的对象中诱导免疫治疗反应的方法，所述方法包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
53.在有需要的对象中治疗炎症和免疫相关失调，包括与之相关的状况、症状或疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用至少一种根据权利要求1到26的任一项的化合物的步骤。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10376511B2 (en) * 2015-08-04 2019-08-13 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Pyrazole pyrimidine derivative and uses thereof
TW201837027A (zh) * 2017-02-01 2018-10-16 以色列商以色列耶路撒冷希伯來大學伊索研究發展有限公司 吡唑衍生物及其用途
JOP20180011A1 (ar) 2017-02-16 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مشتقات بيرولو [1، 2-b]بيريدازين
US20200383984A1 (en) * 2018-02-08 2020-12-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Heteroaryl compounds, pharmaceutical compositions thereof, and their therapeutic use
TWI842978B (zh) 2018-07-13 2024-05-21 美商基利科學股份有限公司 衍生物
US11066404B2 (en) 2018-10-11 2021-07-20 Incyte Corporation Dihydropyrido[2,3-d]pyrimidinone compounds as CDK2 inhibitors
WO2020168197A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Incyte Corporation Pyrrolo[2,3-d]pyrimidinone compounds as cdk2 inhibitors
US11472791B2 (en) 2019-03-05 2022-10-18 Incyte Corporation Pyrazolyl pyrimidinylamine compounds as CDK2 inhibitors
WO2020205560A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Incyte Corporation Sulfonylamide compounds as cdk2 inhibitors
WO2020223469A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Incyte Corporation N-(1-(methylsulfonyl)piperidin-4-yl)-4,5-di hydro-1h-imidazo[4,5-h]quinazolin-8-amine derivatives and related compounds as cyclin-dependent kinase 2 (cdk2) inhibitors for treating cancer
US11447494B2 (en) 2019-05-01 2022-09-20 Incyte Corporation Tricyclic amine compounds as CDK2 inhibitors
WO2021030537A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Incyte Corporation Imidazolyl pyrimidinylamine compounds as cdk2 inhibitors
PE20221905A1 (es) 2019-10-11 2022-12-23 Incyte Corp Aminas biciclicas como inhibidoras de la cdk2
TW202140460A (zh) * 2020-01-13 2021-11-01 美商拜歐斯瑞克斯公司 吡唑基嘧啶及其用途
WO2021155050A1 (en) * 2020-01-29 2021-08-05 Biotheryx, Inc. Kinase modulators, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications
AU2022242818A1 (en) * 2021-03-24 2023-10-05 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Pyrazolylpyrimidines for treating malignant solid tumor
US11981671B2 (en) 2021-06-21 2024-05-14 Incyte Corporation Bicyclic pyrazolyl amines as CDK2 inhibitors
US11752151B2 (en) * 2021-07-12 2023-09-12 Buddhist Tzu Chi Medical Foundation Method for enhancing hair growth
US20230053307A1 (en) * 2021-07-19 2023-02-16 Buddhist Tzu Chi Medical Foundation Method for preventing or treating skin disorders and conditions
US11976073B2 (en) 2021-12-10 2024-05-07 Incyte Corporation Bicyclic amines as CDK2 inhibitors

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002092573A2 (en) * 2001-05-16 2002-11-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclic substituted pyrazoles as inhibitors of src and other protein kinases
WO2007129195A2 (en) * 2006-05-04 2007-11-15 Pfizer Products Inc. 4-pyrimidine-5-amino-pyrazole compounds
WO2015058140A1 (en) * 2013-10-18 2015-04-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2002228783A1 (en) 2000-12-05 2002-06-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of c-jun n-terminal kinases (jnk) and other protein kinases
GB0215844D0 (en) 2002-07-09 2002-08-14 Novartis Ag Organic compounds
US20090036448A1 (en) * 2004-03-30 2009-02-05 Taisho Pharmecutical Co., Ltd. Pyrimidine derivatives and methods of treatment related to the use thereof
JP2007145819A (ja) 2005-10-28 2007-06-14 Tanabe Seiyaku Co Ltd 医薬組成物
EP2029578A1 (en) 2006-05-26 2009-03-04 AstraZeneca AB 2-carbocycloamino-4-imidaz0lylpyrimidines as agents for the inhbition of cell proliferation
ES2374480T3 (es) 2007-12-07 2012-02-17 Novartis Ag Derivados pirazol y uso de los mismos como inhibidores de quinasas dependientes de ciclina.
MX347191B (es) * 2011-11-04 2017-04-19 Jasco Pharmaceuticals Llc Inhibidores de aminopirimidina cinasa.
US9518065B2 (en) * 2013-09-27 2016-12-13 Nimbus Iris, Inc. IRAK inhibitors and uses thereof
US10376511B2 (en) 2015-08-04 2019-08-13 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Pyrazole pyrimidine derivative and uses thereof
US20200383984A1 (en) 2018-02-08 2020-12-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Heteroaryl compounds, pharmaceutical compositions thereof, and their therapeutic use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002092573A2 (en) * 2001-05-16 2002-11-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclic substituted pyrazoles as inhibitors of src and other protein kinases
WO2007129195A2 (en) * 2006-05-04 2007-11-15 Pfizer Products Inc. 4-pyrimidine-5-amino-pyrazole compounds
WO2015058140A1 (en) * 2013-10-18 2015-04-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114423752A (zh) * 2019-06-03 2022-04-29 拜欧斯瑞克斯公司 吡唑化合物的非吸湿性结晶盐和其药物组合物与用途
WO2021000957A1 (zh) * 2019-07-04 2021-01-07 北京国鸿生物医药科技有限公司 一种杂环化合物、其药物组合物及用途
CN114127058A (zh) * 2019-07-04 2022-03-01 北京国鸿生物医药科技有限公司 一种杂环化合物、其药物组合物及用途
CN114127058B (zh) * 2019-07-04 2024-06-25 深圳国顺康医药科技有限公司 一种杂环化合物、其药物组合物及用途

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