CN108135978A - IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的组合 - Google Patents

IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的组合 Download PDF

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Abstract

在本发明的一个或多个实施例中，提供了一种方法，该方法包括向癌症患者给予以下的步骤：(a)IL‑2Rβ活化量的长效IL‑2Rβ选择性激动剂；以及(b)IL‑15R活化量的长效IL‑15部分。在本发明的一个或多个实施例中，提供了一种组合物，该组合物包含：IL‑2Rβ活化量的长效IL‑2Rβ选择性激动剂；以及IL‑15R活化量的长效IL‑15部分。在本发明的一个或多个实施例中，提供了一种试剂盒，该试剂盒包含：IL‑2Rβ活化量的长效IL‑2Rβ选择性激动剂；IL‑15R活化量的长效IL‑15部分；以及该IL‑2Rβ选择性激动剂和该长效IL‑15部分的使用说明书。

Description

IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的组合
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年10月08日提交的标题为“COMBINATION OF AN IL-2RBETA-SELECTIVE AGONIST AND A LONG-ACTING IL-15 AGONIST[IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的组合]”的美国临时专利申请号62/239,207的优先权和权益，该专利申请的内容通过引用结合在此。
技术领域
本发明涉及(除其他方面之外)癌症免疫治疗领域并且涉及通过向患有癌症的个体给予长效IL-2Rβ选择性激动剂与另一种药理活性剂的组合来治疗该患者。
背景技术
在药理学干预的背景下，在患有癌症的患者的治疗中，组合疗法可具有许多益处。例如，组合疗法可减少药物抗性的发展。另外，组合疗法可比单药剂疗法更有效(包括引起总体存活增加)。另外，当更有效时，组合治疗可引起总体治疗减少，从而使得治疗成本更低。
与组合疗法相关的挑战之一是鉴别预期有利的组合。
已提出给予IL-2Rβ选择性激动剂有利于患有某些癌症的患者，因为这样做预期降低调节性T细胞的免疫抑制作用，同时增加CD8+记忆T细胞，由此募集患者自身的免疫系统来消除癌细胞。参见Charych等人，AACR2013，摘要#482。
在癌症治疗中经由给予IL-2Rβ选择性激动剂(其可直接免疫活化)来募集癌症患者的免疫系统可以通过给予其他药剂来进一步增强。
作为细胞因子，IL-15具有对先天免疫系统和适应性免疫系统二者的影响。DiSabitino等人(2011)Cytokine Growth Factor Rev.[细胞因子与生长因子评论]22:19-33。由于它刺激可以抵抗对于宿主表现为外来物(或“非自体”)的细胞的在免疫系统内的许多细胞的增殖和维护，已经提出IL-15在患有癌症的个体的治疗中使用。
因此，本发明寻求(除其他方面之外)鉴别涉及IL-2Rβ选择性激动剂(在此也称为偏向于(biased)IL-2Rβ的激动剂)和IL-15激动剂的有利组合疗法。
本发明解决了本领域中的该需要以及其他需要。在此描述了许多方面和实施例。这样，除非相反地叙述，否则在此描述的特性和实施例中的每一个即使未明确陈述，也意指可适用于(但不需要适用于)任何其他方面、实施例或特性或多个特性的组合。
发明内容
在一个或多个方面，提供一种方法，该方法包括向癌症患者给予以下的步骤：(a)IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂；以及(b)IL-15R活化量的长效IL-15部分。为清楚起见，关于根据该方法的步骤的顺序，除非另外指明，否则该方法不限于上述步骤顺序并且步骤(a)可以在执行步骤(b)之前、之后或同时执行。在一个或多个实施例中，步骤(a)在步骤(b)之前执行。
在一个或多个另外的方面，提供一种组合物，该组合物包含IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分。
在另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包含长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15部分，随附使用说明书。通常，该试剂盒包含IL-2Rβ活化量的IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分。该IL-2Rβ选择性激动剂和该长效IL-15部分可提供在单一组合物中，或者可替代地，可提供在具有适当使用说明书的单独容器中，例如由诊断患有癌症的患者使用。
本发明的另外方面和相关实施例在以下说明和权利要求书中进行阐述。
附图说明
图1A、图1B和图1C提供了示出在小鼠结肠癌模型中用不同干预治疗的小鼠的存活百分比和存活天数的图表，该模型和研究在实例1中进一步描述。图1A提供了研究组A、C、D、F、G以及H的图表。图1B提供了研究组A、C、E、I、J以及K的图表。图1C提供了研究组A、B、C、L、M以及N的图表。研究组的细节描述于表1中。
图2A、图2B和图2C提供了示出在小鼠转移性黑素瘤模型中用不同干预治疗的小鼠的存活百分比和存活天数的图表，该模型和研究在实例1中进一步描述。图2A提供了研究组A、C、D、F、G以及H的图表。图2B提供了研究组A、C、E、I、J以及K的图表。图2C提供了研究组A、B、C、L、M以及N的图表。研究组的细节描述于表1中。
详细说明
如在本说明书中所使用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“该”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
在描述和要求本发明时，将依据以下所描述的定义使用以下术语。
“水溶性的、非-肽聚合物”是指一种聚合物，该聚合物在室温下是至少35％(按重量计)可溶于水中的、优选地大于70％(按重量计)、以及更优选地大于95％(按重量计)可溶于水中的。典型地，“水溶性”聚合物的未过滤的水性制剂传输相同溶液在过滤后传输的光的量的至少75％，更优选至少95％。然而，最优选的是该水溶性聚合物是至少95％(按重量计)可溶于水的或完全可溶于水的。关于为“非肽的”，一种聚合物当具有少于35％(按重量计)的氨基酸残基时是非肽的。
术语“单体”、“单体亚单元”和“单体单元”在此可互换使用并且指的是一种聚合物的基本结构单元之一。在均聚物的情况下，单一的重复结构单元形成该聚合物。在共聚物的情况下，两个或更多个结构单元重复出现--以一种模式或随机地--以形成该聚合物。与本发明相结合使用的优选聚合物是均-聚物。该水溶性的、非-肽的聚合物包含串联连接以形成单体链的一个或多个单体。
如在此使用的“PEG”和“聚乙二醇”意指包括任何水溶性的聚(环氧乙烷)。除非另外指明，“PEG聚合物”或聚乙二醇是这样一种物质，其中基本上所有的(优选所有的)单体亚单元是环氧乙烷亚单元，但是该聚合物可以包含不同的封端部分或官能团，例如用于反应或共轭。用于在本发明中使用的PEG聚合物将包括两种以下结构之一：“-(CH2CH2O)n-”或“-(CH2CH2O)n-1CH2CH2-”，这取决于末端的一个或多个氧是否被置换(例如在合成转化期间)。如上所述，对于这些PEG聚合物，该变量(n)的范围是从约3到4000(除非另外指示)，并且整个PEG的末端基团和架构可以变化。
关于聚合物的几何学或整体结构而言的“分支的”指的是具有从分支点伸出的两个或更多个聚合物“臂”的聚合物。
“生理学上可切割的”或“可水解的”或“可降解的”键是与水在生理学条件下进行反应(即，被水解)的相对不稳定的键。键在水中水解的趋势可能不仅取决于在给定分子之内连接两个原子的连接键的一般类型，而且取决于连接至这些原子上的取代基。适当的水解不稳定的或弱的连接键包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酸酐、缩醛、缩酮、酰氧基烷基醚、亚胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯以及碳酸酯。
“酶可降解连接键”意指经受一种或多种酶降解的连接键。
“稳定的”连接键或键指的是在水中基本稳定的化学键，也就是说在生理条件下经一段延长的时间没有经受任何明显程度的水解。水解稳定的连接键的实例包括但不限于以下：碳-碳键(例如在脂肪链中)、醚、酰胺、聚氨酯、胺等。大体上，稳定的连接键是在生理条件下展示小于约1％-2％的每日水解率的连接键。代表性化学键的水解速率可以在大多数标准化学教科书中发现。
“基本上”或“实质上”表示几乎全部的或完全的，例如一些给定的数量的95％或更大、更优选97％或更大、仍更优选98％或更大、甚至更优选99％或更大、还又更优选99.9％或更大，最优选99.99％或更大。即，“基本上”或“实质上”意指一些给定数量的至少95％或更大。
“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”是指可以包含在本文提供的药物组合物中并且对于患者不会引起显著的不良毒理学效应的组分。
术语“患者”是指患有或易患有可通过给予如在此描述的一种化合物或多种化合物的组合、或组合物来预防或治疗的病症的活生物体，并且包括人类和动物两者。
本披露至少部分基于特别有利的治疗组合的发现，该治疗组合包含长效IL-2R激动剂，并且更确切地说包含IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂。有趣的是，已发现如所附实例中列举的以上免疫治疗组合在两种不同鼠类肿瘤模型中在增加中值存活方面比单个长效药剂显著更有效并且也比长效IL-2Rβ激动剂和天然IL-15(即，非长效IL-15激动剂)的组合更有效。值得注意的是，长效IL-15激动剂的共同给予似乎不会减弱或抑制长效IL-2Rβ选择性激动剂的免疫系统活化功能，而是似乎例如通过刺激CD8+T细胞的产生来增强其反抗癌症的能力，并且提供增加的CD8:调节性T细胞比率。参见例如本文实例中提供的支持数据。
现在转向如以上所指示的本发明方法、组合物、试剂盒以及相关实施例，在一个或多个方面，在此提供了(除其他方面之外)一种治疗患有癌症的患者的方法。该方法包括以下步骤：(a)向该患者给予IL-2Rβ-活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂；以及(b)向该患者给予IL-15R活化量的长效IL-15激动剂。关于给予步骤(a)和(b)，这些给予步骤可以按任一顺序(以及同时地)执行并且该方法不在此方面进行限制。在一个或多个相关实施例中，给予步骤(a)在给予步骤(b)之前进行。在一个或多个替代性实施例中，给予步骤(b)在给予步骤(a)之前进行。在一个或多个另外的实施例中，两个给予步骤(a)和(b)同时进行。在该方法涉及同时给予长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的情况下，该给予可以是多个单独的组合物，各组合物包含治疗量即IL-2Rβ-活化量(即治疗量)的长效IL-2Rβ选择性激动剂或IL-15R活化量(即治疗量)的长效IL-15激动剂，或者可以是单个组合物，该组合物包含各自为如上所述的治疗有效量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂二者。此外，在一个或多个实施例中，步骤(a)和/或(b)将在治疗过程中重复给予。可替代地，在一个或多个实施例中，步骤(a)和(b)将仅进行一次。长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂当单独给予时可以但不必要根据相同给予(即给药)方案给予。即，一个治疗周期可包括给予一次或多次长效IL-2Rβ选择性激动剂，而治疗有效剂量的长效IL-15激动剂可比长效IL-2Rβ选择性激动剂更频繁或更不频繁地给予。在一些实施例中，优选在长效IL-15激动剂之前给予长效IL-2Rβ选择性激动剂。
在此描述的治疗方法通常可以持续长达监督患者的护理的临床医生认为该治疗方法有效(即该患者响应于治疗)的时间。指示治疗方法有效的非限制性参数可包括以下一种或多种：肿瘤收缩(在重量和/或体积和/或视觉外观方面)；个别肿瘤集落数目的减小；肿瘤消除；无进展性存活；通过适合肿瘤标记物(如果适用的话)、增加的NK(自然杀伤)细胞数目、增加的记忆T细胞数目以及增加的中枢记忆T细胞数目的适当应答。
与根据要求保护的方法的治疗过程相关的示例性时间长度包括：约一周；约两周；约三周；约四周；约五周；约六周；约七周；约八周；约九周；约十周；约十一周；约十二周；约十三周；约十四周；约十五周；约十六周；约十七周；约十八周；约十九周；约二十周；约二十一周；约二十二周；约二十三周；约二十四周；约七个月；约八个月；约九个月；约十个月；约十一个月；约十二个月；约十三个月；约十四个月；约十五个月；约十六个月；约十七个月；约十八个月；约十九个月；约二十个月；约二十一个月；约二十二个月；约二十三个月；约二十四个月；约三十个月；约三年；约四年；约五年；永久的(例如，持续性维持治疗)。以上持续时间可与一个或多个治疗循环/周期相关。
关于给予该长效IL-2Rβ选择性激动剂的频率，本领域普通技术人员将能够确定适当的频率。例如，临床医生可以决定相对不频繁地(例如，每两周一次)给予该长效IL-2Rβ选择性激动剂并且逐渐缩短如由患者耐受的给药之间的周期。关于给予该长效IL-15激动剂的频率，可以按类似的方式来确定这些药剂的频率。此外，因为关于长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的详细信息已知(并且在一些情况下，来源于临床测试中的特定激动剂的使用)，所以还可能的是参考文献来获得适当的给药频率(记住鉴于处理方案的组合作用，一些调整可能是必要的)。
在一个或多个另外的方面，提供一种组合物，该组合物包含IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分，该组合物的特性将在下文中更详细描述。
另外，在此提供一种试剂盒，该试剂盒包含：IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂；IL-15R活化量的长效IL-15部分；以及该IL-2Rβ选择性激动剂和该长效IL-15部分例如用于治疗癌症的使用说明书。在一个实施例中，这些说明书描述了给予IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分，如在此描述的。在至少一个治疗循环或周期内，给予IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15部分。例如，在一个实施例中，该试剂盒包含一种组合物，该组合物包含IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分，如在此描述的。在一个或多个相关实施例中，该组合物或组合包含仅作为活性组分的长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂。在一个或多个另外的实施例中，该组合物或组合包含一种或多种另外的活性剂。该试剂盒还可含有单独容器中的长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂，以作为单独和不同的组合物给予。例如，IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂各自可包含在药学上可接受的组合物内，该组合物例如包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，其中每种单独和不同的组合物容纳于适合使用的容器中。在某些实施例中，每种长效白介素均以适用于重构并随后根据所附说明书给予的固体形式提供。
在此描述的方法、组合物和试剂盒涉及长效IL-2Rβ-选择性激动剂。关于这一点，本发明不限于任何特异性长效IL-2Rβ-选择性激动剂，只要该激动剂表现出的对IL-2Rβ的结合亲和力与对IL-2Rαβ的结合亲和力的比率比由IL-2表现出的比率大至少5倍(更优选地大至少10倍)。作为举例，有可能测量针对IL-2的结合亲和力作为一种标准。例如，示例性长效IL-2Rβ-选择性激动剂RSAIL-2与IL-2Rα和IL-2Rβ的结合亲和力通过表面等离子体共振(Biacore T-100)直接测量并且将其与临床上可用的IL-2(阿地白介素)的结合亲和力相比较。更确切地说，抗人类抗体(英杰公司(Invitrogen))使用EDC/NHS化学偶合至CM-5传感器芯片的表面。然后，将人类IL-2Rα-Fc或IL-2Rβ-Fc融合蛋白用作此表面上捕获的配体。以乙酸盐缓冲液pH 4.5制备RSAIL-2的系列稀释液，以5mM开始。然后允许这些稀释液结合至配体5分钟，并且然后针对浓度对结合的反应单位(RU)作图以测定EC50值。然后将每种同种型对每种IL-2受体亚型的亲和力计算为相对于IL-2的亲和力的变化倍数。
关于这一点，PCT国际专利申请公开号WO 2015/125159的实例1中提及的RSLAIL-2表现出对IL-2Rαβ的亲和力相对于IL-2约60倍的降低，但对IL-2Rβ的亲和力相对于IL-2的仅约5倍降低，从而指示其对IL-2β受体的选择性或偏向性。
长效IL-2Rβ-选择性激动剂的非限制性实例描述于PCT国际专利申请公开号WO2012/065086和WO 2015/125159。示例性长效IL-2Rβ-选择性激动剂是PCT国际专利申请公开号WO 2015/125159的实例1中提及的RSLAIL-2。在此方面，RSLAIL-2是一种包含由以下化学式所涵盖的化合物的组合物：
其中IL-2是IL-2的残基，并且“n”是从约3至约4000的整数；以及其药学上可接受的盐。在一个或多个实施例中，该组合物包含不超过25％(基于摩尔量)、优选不超过10％(基于摩尔量)、或更优选地不超过5％(基于摩尔量)的由以下化学式所涵盖的化合物
其中IL-2是IL-2的残基，“n”是从约3至约4000的整数，“n'”是选自下组的整数，该组由以下组成：1、2、3、7和>7；以及其药学上可接受的盐。RSLAIL-2的另外的示例性组合物包含根据以上式的化合物，其中该分子的聚合物部分(包括两个聚乙二醇臂)具有从约250道尔顿至约90,000道尔顿范围内的重均分子量。另外适合的范围包括选自约1,000道尔顿至约60,000道尔顿的范围、从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿范围、约10,000道尔顿至约55,000道尔顿范围、从约15,000道尔顿至约50,000道尔顿范围、以及从约20,000道尔顿至约50,000道尔顿范围的重均分子量。
聚乙二醇部分的另外的说明性重-均分子量包括约200道尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道尔顿、约700道尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000道尔顿、约1,500道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、约3,000道尔顿、约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、以及约75,000道尔顿。
长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15部分可以是呈药学上可接受的盐的形式。通常，此类盐通过与药学上可接受的酸或酸等效物反应来形成。术语“药学上可接受的盐”在此方面将通常是指相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在给予媒介物或剂型制造过程中原位制备，或通过将如在此描述的长效白介素与适合有机酸或无机酸单独反应并分离因此形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、环烷酸盐(napthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、以及月桂基磺酸盐等。(参见例如，Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts[药用盐]”，J.Pharm.Sci.[药学科学杂志]66:1-19)。因此，如所述盐可来源于无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、磺酸、磷酸、硝酸等；或由有机酸诸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、草率、衣康酸等制备。
关于以上IL-2Rβ选择性激动剂，如在此所用的术语“IL-2”是指具有人类IL-2活性的部分。在IL-2残基的背景下，术语‘残基’意指IL-2分子在一个或多个共价连接点处共价连接至聚合试剂诸如聚乙二醇之后保留的部分，如以上式所示。应了解的是，当未修饰IL-2连接至聚合物(如聚乙二醇)时，由于存在与这种或这些聚合物键合有关的一个或多个共价键而使IL-2轻微改变。将这种连接至另一个分子的IL-2的轻微改变形式称为IL-2的“残基”。
例如，具有对应于国际专利公开号WO 2012/065086所述的SEQ ID NO:1至4中任一种的氨基酸序列的蛋白质是示例性IL-2蛋白质，如与其基本上同源的任何蛋白质或多肽一样。术语基本上同源意指特定主题序列(例如突变序列)因一个或多个取代、缺失或添加而不同于参考序列，其净效应不导致在该参考序列与主题序列之间不利的官能差异。为了在此的目的，具有大于95百分比的同源性、等效的生物活性(不过不必需是等效强度的生物活性)、以及等效的表达特征的序列被认为是基本上同源的。出于确定同源性的目的，应当忽略成熟序列的截短。如在此所使用，术语“IL-2”包括例如通过位点定向诱变而有意修饰或通过突变而偶然修饰的此类蛋白质。这些术语还包括具有从1至6个额外糖基化位点的类似物、在蛋白质的羧基末端处具有至少一个额外氨基酸(其中所述额外氨基酸包括至少一个糖基化位点)的类似物以及具有包括至少一个糖基化位点的氨基酸序列的类似物。该术语包括天然部分和重组产生的部分。另外，IL-2可以来源于人类来源、动物来源以及植物来源。一种示例性IL-2是称为阿地白介素的重组IL-2。
在此描述的方法、组合物和试剂盒另外包含长效IL-15激动剂。关于这一点，本发明不限于任何特异性长效IL-15激动剂，只要在给予患者之后该激动剂表现出体内IL-15激动性，持续的时间量比给予IL-15的情况更长。
在PCT国际专利申请公开号WO 2015/153753中描述了长效IL-15激动剂的非限制性实例。此类实例包括以下：
其中对于每种结构，每种IL-15是IL-15的残基，每种(n)是从约3至约4000的整数；以及其药学上可接受的盐。另外，尽管此段落中的每种以上结构以单聚乙二醇化形式描绘，但是示例性长效IL-15激动剂包括相应二聚乙二醇化、三聚乙二醇化、四聚乙二醇化，并且更高级聚乙二醇化形式也包括在内。另外的示例性长效IL-15激动剂包括根据以上式的化合物，其中该分子的聚合物部分(包括两个聚乙二醇臂)具有从约250道尔顿至约90,000道尔顿范围内的重均分子量。另外适合的范围包括选自约1,000道尔顿至约60,000道尔顿的范围、从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿范围、约10,000道尔顿至约55,000道尔顿范围、从约15,000道尔顿至约50,000道尔顿范围、以及从约20,000道尔顿至约50,000道尔顿范围的重均分子量。
长效IL-15激动剂的聚乙二醇聚合物部分的另外的示例性重-均分子量包括约200道尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道尔顿、约700道尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000道尔顿、约1,500道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、约3,000道尔顿、约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、以及约75,000道尔顿。
关于长效IL-15部分，如在此所用的术语“IL-15”是指具有人类IL-15活性的肽或蛋白质部分。本领域的普通技术人员可以确定任何给定部分是否具有IL-15活性。包含对应于国际专利公开号WO 2015/153753所提供的SEQ ID NO:1至3中任一种的氨基酸序列的代表性蛋白质是示例性IL-15蛋白质，如根据以上提供的描述与其基本上同源的任何蛋白质或多肽一样。如在此所使用，术语“IL-15”包括例如通过位点定向诱变而有意修饰或通过突变而偶然修饰的此类肽和蛋白质。此术语还包括具有从1至6个额外糖基化位点的类似物、在肽或蛋白质的羧基末端处具有至少一个额外氨基酸(其中所述额外氨基酸包括至少一个糖基化位点)的类似物以及具有包括至少一个糖基化位点的氨基酸序列的类似物。该术语包括天然地、重组地和合成地产生的部分。
用于确定给定的化合物是否可以充当IL-15激动剂的测定可以由本领域普通技术人员通过常规实验来确定。本领域中描述了用于确定体外IL-15激动剂活性的不同方法。示例性方法是基于pSTAT测定。简言之，如果将IL-15依赖性CTLL-2细胞暴露于具有IL-15活性的测试物品，可以定量地测量导致包括STAT5在酪氨酸残基694(Tyr694)处的磷酸化的信号级联的开始。测定方案和试剂盒是已知的并且包括例如MSD磷酸(Tyr694)/总STATa,b全细胞溶解产物试剂盒(马里兰州盖瑟斯堡的Meso Scal Diagnostics公司(Meso ScalDiagnostics,LLC,Gaithersburg,MD))。对于在此的使用，持续5分钟或10分钟中的至少一个呈现出小于约300ng/mL(更优选小于约150ng/mL)的pSTAT5EC50值的所提出的IL-15部分被认为是与本发明有关的“IL-15激动剂”。优选的是，然而，在本发明中使用的IL-15激动剂是更有效的(例如，具有在至少5分钟或10分钟之一中小于150ng/mL的pSTAT5EC50值，诸如小于约1ng/mL，并且甚至更优选在5分钟或10分钟中的至少一个中小于约0.5ng/mL)。在一个或多个实施例中，优选长效IL-15激动剂保留IL-15Rα依赖性。
提出为长效IL-15激动剂的化合物将根据本发明确定为长效的，只要在给予患者之后该激动剂表现出体内IL-15激动性，持续的时间量比给予IL-15的情况更长。体内给予化合物并测定其清除率的常规方法(诸如涉及放射性标记化合物的那些方法)可用于确定提出为长效IL-15激动剂的化合物是否是“长效”的(即，具有的清除率长于在相同体内系统中给予的IL-15的清除率)。出于在此的目的，长效IL-15激动剂的长效性质或IL-2Rβ选择性激动剂的长效性质通常使用流式细胞术来测定以测量在给予有待在小鼠中评估的激动剂之后的不同时间点在淋巴细胞中的STAT5磷酸化。作为参考，信号在IL-15或IL-2的情况下丢失约24小时，但是持续时间段大于长效IL-15或IL-2Rβ选择性激动剂的时间。作为说明，对于RSAIL-2和LAIL-15版本1和版本2组合物二者，信号持续若干天。
根据在此描述的方法、组合物和试剂盒，该长效IL-2Rβ选择性激动剂以IL-2Rβ活化量给予至患者。本领域的普通技术人员可以确定多少给定的长效IL-2Rβ选择性激动剂足以提供在IL-2Rβ处的临床相关的激动活性。例如，本领域的普通技术人员可以参考文献和/或给予一系列增加量的长效IL-2Rβ选择性激动剂并且确定哪个或哪些量提供IL-2Rβ的临床上有效的激动活性。可替代地，长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂二者的活化量可使用以上所述的体内STAT5磷酸化测定来确定(在给予之后体内测定)，其中足以在大于10％NK细胞的峰值下诱导STAT5磷酸化的量被视为活化量。
然而，在一种或多种情况下，IL-2Rβ活化量是由以蛋白质的量表示的以下范围中的一个或多个涵盖的量：从约0.01mg/kg至1mg/kg；从约0.01mg/kg至约0.1mg/kg；从约1mg/kg至约1000mg/kg；从约2mg/kg至约900mg/kg；从约3mg/kg至约800mg/kg；从约4mg/kg至约700mg/kg；从约5mg/kg至约600mg/kg；从约6mg/kg至约550mg/kg；从约7mg/kg至约500mg/kg；从约8mg/kg至约450mg/kg；从约9mg/kg至约400mg/kg；从约5mg/kg至约200mg/kg；从约2mg/kg至约150mg/kg；从约5mg/kg至约100mg/kg；从约10mg/kg至约100mg/kg；以及从约10mg/kg至约60mg/kg。
根据在此描述的方法、组合物和试剂盒，提供IL-15R活化量的长效IL-15激动剂。本领域的普通技术人员可以确定长效IL-15激动剂足以提供IL-15受体(“IL-15R”)处的临床相关的激动活性的量。
然而，在一种或多种情况下，IL-15R活化量是由以下范围(基于Il-15含量的量)中的一个或多个涵盖的量：从约0.001mg/kg至约1000mg/kg；从约0.01mg/kg至约1000mg/kg；从约0.1mg/kg至约1000mg/kg；从约1mg/kg至约1000mg/kg；从约2mg/kg至约900mg/kg；从约3mg/kg至约800mg/kg；从约4mg/kg至约700mg/kg；从约5mg/kg至约600mg/kg；从约6mg/kg至约550mg/kg；从约7mg/kg至约500mg/kg；从约8mg/kg至约450mg/kg；从约9mg/kg至约400mg/kg；从约5mg/kg至约200mg/kg；从约2mg/kg至约150mg/kg；从约5mg/kg至约100mg/kg；从约10mg/kg至约100mg/kg；以及从约10mg/kg至约60mg/kg。
为了确认，如在此对于长效IL-15激动剂的IL-15R活化量所用，该活化的量和程度可以广泛变化并且与该长效IL-2Rβ选择性激动剂的组合仍可以是有效的。例如，长效IL-15激动剂的仅微量活化IL-15R的量可以仍是如在此所用的活化量，只要在此描述的方法、组合物和试剂盒能够产生临床上有意义的应答。因此，长效IL-2Rβ选择性激动剂的仅展现在IL-2Rβ处的最小激动活性持续足够延长的时间段的量仍可以是长效IL-2Rβ选择性激动剂，只要在此描述的方法、组合物和试剂盒产生临床上有意义的应答。在一些情况下，由于(例如)协同应答，可能仅在该长效IL-2Rβ选择性激动剂存在下需要该IL-15R途径的最小活化。仍在其他情况下，由于(例如)协同应答，可能仅在IL-15R活化存在下需要IL-2Rβ的最小激动活性。
在此描述的方法、组合物和试剂盒中提供的实际剂量可以改变，这取决于受试者的年龄、体重和总体病症，以及有待治疗的病症的严重程度、健康护理专家的判断、以及这些方法、组合物和试剂盒的化合物。
支持本发明组合的数据以及其相关方法、组合物、试剂盒等提供在实例1中。实例1描述了长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15激动剂的示例性和某些优选组合在结肠癌和转移性黑素瘤的小鼠肿瘤模型中的评估。更确切地说，在CT-26小鼠结肠癌模型和小鼠B16F10转移性黑素瘤模型中评估RSAIL-2与LAIL-15版本1或LAIL-15版本2的组合。检查不同给予方式，其中变量包括给予方式、两种长效细胞因子组合物的给予顺序、以及所采用的特定长效IL-15激动剂组合物。表1提供了不同研究组和治疗时间表的汇总。表2提供携带皮下结肠癌肿瘤并根据表1所述的组合和方案治疗的每个研究组小鼠的中值存活汇总。图1A、图1B和图1C是示出每个说明性研究组随着时间推移的存活百分比的图表。正如可见，组G相对于将RSAIL-2与天然(非长效)IL-15组合的相应组(组M)表现出显著延长的中值存活，这表明RSAIL-2和LAIL-15版本1的说明性组合在治疗癌症诸如结肠癌方面有特别显著且有利的效果。在两种模型中，单个长效IL-2Rβ选择性激动剂RSAIL-2似乎在抑制肿瘤生长方面比单独给予的任一LAIL-15版本(作为对照)更有效，然而在某些组合中，LAIL-15似乎特别有效于增强RSAIL-2的抗肿瘤作用。因此，除了抑制RSAIL-2的免疫刺激抗癌作用之外，添加LAIL-15似乎补充了RSAIL-2，这可能是由于两种长效细胞因子的互补免疫活化机制。类似结果可见于如表3所提供的黑素瘤小鼠模型中。正如可见，若干个治疗组F、G、I和J当与组合中采用的作为单个药剂给予的每种长效白介素相比时并且当与RSAIL-2和天然(或非长效)IL-15的相应组合相比时，表现出显著延长的存活时间。还参见图2A、图2B和图2C。这些结果有力地表明说明性长效IL-2Rβ选择性激动剂RSAIL-2与由LAIL-15版本1和2举例的长效IL-15激动剂之间的协同相互作用，这指出主题免疫治疗组合用于治疗癌症的惊人功效。
本披露提供适用于(除其他方面之外)治疗患有对使用组合中的化合物的治疗有应答的病症的患者的方法、组合物和试剂盒。例如，患者可以对单独的单个药剂以及药剂的组合有应答，但是对药剂的组合应答更强。作为进一步举例，患者可能对单个药剂之一无应答，但是对药剂的组合有应答。作为仍然进一步举例，患者可能对单独的单个药剂中的任一种无应答，但是对药剂的组合有应答。
在某些实施例中，在此描述的方法、组合物和试剂盒适用于经由注射来递送治疗有效量的活性剂。还考虑了其他给药方式，诸如经肺、经鼻、经颊、经直肠、经舌下、以及经皮给药。如在此所使用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、动脉内、腹腔内、心脏内、鞘内、以及肌内注射，连同输注注射。该方法的每种药理学组分可以分开给予。可替代地，如果希望同时给予两种药理学组分--并且这两种药理学组分是一起且在给定配制品中相容的--那么该同时给予可以经由给予单一剂型/配制品(例如，静脉内给予包含两种药理活性剂的静脉内配制品)来实现。例如，给予患者可经由注射包含IL-2Rβ选择性激动剂和稀释剂的组合物来实现。另外，给予患者可经由注射包含长效IL-15激动剂和稀释剂的组合物来实现。例如，给药可经由注射包含IL-2Rβ选择性激动剂、长效IL-15激动剂和稀释剂的组合物来实现。关于可能的稀释剂，该稀释剂可以选自下组，该组由以下组成：抑菌注射用水、5％葡萄糖水溶液、磷酸盐-缓冲盐水、林格氏溶液、乳酸化林格氏溶液、盐水、无菌水、去离子水、以及其组合。本领域的普通技术人员可以通过常规测试确定两种给定药理学组分是否一起在给定配制品中相容。
当前描述的方法、组合物和试剂盒可以用来治疗患有可以通过这些方法、组合物和试剂盒补救或预防的任何病症的患者。示例性的病症是癌症，诸如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯氏肿瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑素瘤(包括例如葡萄膜黑素瘤、黏膜黑素瘤和软脑膜黑素瘤)、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤和白血病。
在此引用的所有文章、书籍、专利、专利公开及其他的公开物通过引用以其全部内容结合。倘若本说明书的传授内容和通过引用结合的本领域之间不一致，以本说明书中的传授内容和定义的含义为准(特别是关于在此处所附的权利要求书中使用的术语)。例如，当本申请和通过引用结合的公开物不同地定义了相同术语，该术语的定义将保留在该定义位于的文件的教导之内。
实例
应当理解的是虽然本发明已结合某些优选的和具体的实施例进行了描述，但前述的描述以及以下的实例旨在说明而非限制本发明的范围。本发明范围内的其他方面、优点和修饰对本发明所属领域的技术人员而言将是显然的。
以下材料与在此提供的实例结合使用。
“RSLAIL-2”是指根据PCT国际专利申请公开号WO 2015/125159的实例1的程序可获得的组合物，并且通常是包含多聚乙二醇化形式的IL-2的组合物，其中用于形成共轭物的PEG试剂的连接是在给药之后的可释放连接。RSLAIL-2制备如下。将1.44mg/ml的纯化的rIL-2(106.4mL)装入第一容器中，接着添加53.6mL的配制缓冲液(10mM乙酸钠(pH 4.5)，5％海藻糖)。测量pH为4.62，测量温度为21.2℃。将PEG试剂C2-PEG2-FMOC-NHS-20K(如在WO2006/138572中所描述可供使用的)(13.1g)装入第二容器中，接着添加73.3mL的2mM HCl。将所得溶液手动涡旋25分钟。将硼酸钠(0.5M，pH 9.8)添加至该第一容器以便使pH升高至约9.1，并且接着将含有该PEG试剂的第二容器经1至2分钟添加至该第一容器。接着通过将8.1mL的2mM HCl装入该第二容器并且添加至该第一容器来执行冲洗步骤。在共轭反应中，最终rIL-2浓度是0.6mg/mL，硼酸钠浓度是120mM，pH是9.1+/-0.2，温度是20℃-22℃，并且PEG试剂与rIL-2的摩尔比在针对该试剂的活性调整之后(取代水平)是35:1。使该共轭反应进行30分钟并且接着使用75mL的2N乙酸(其中pH下降至4.01)通过酸化使反应终止。将该反应的产物用水稀释并且使用0.2微米过滤器过滤所稀释的聚乙二醇化rIL-2溶液并且将所过滤的产物放置于无菌容器中。
通过将稀释的聚乙二醇化rIL-2溶液负载到填充有SP琼脂糖凝胶FF树脂(通用电气医疗集团(GE Healthcare))的色谱柱上来纯化该溶液。在洗涤步骤之后，使用氯化钠梯度来洗脱该聚乙二醇化的rIL-2。消除含有1聚体、2聚体或3聚体的级分，同时合并含有4聚体、5聚体、6聚体、7-聚体和任何更高程度的聚乙二醇化的级分，由此产生主要具有4聚体、5-聚体和6-聚体的组合物(其中8聚体和更高程度的聚乙二醇化据发现在与色谱法相关的洗涤步骤期间被去除)。此所得组合物是“RSLAIL-2”。
“LAIL-15版本1”是指根据PCT国际专利申请公开号WO 2015/153753的实例3的程序可获得的组合物，并且通常是包含多聚乙二醇化形式的IL-15的组合物，其中用于形成共轭物的PEG试剂的连接是在给药之后的可释放连接。呈单聚乙二醇化形式的“LAIL-15版本1”的结构描绘如下：
其中IL-15是天然IL-15的残基并且每个“n”是具有一个值的整数，使得用于形成共轭物的聚合试剂的重均分子量是约20,000道尔顿。更确切地说，“LAIL-15版本1”制备如下。将在-80℃，在氩气中保存的mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS(在共轭至IL-15之前的～O-N-羟基琥珀酰亚胺酯反应物)在氮气吹扫下升温至环境温度。在2mM HCl中制备mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS的储备溶液(200mg/mL)，并且将mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS以范围从5:1至100:1的mPEG2-C2-fmoc-20K-NHS与rIL-15的摩尔比添加至rIL-15中。混合物中rIL-15的终浓度是0.5mg/mL(0.031mM)。将碳酸氢钠缓冲液(1M，pH 8.0)添加到混合物中以达到100mM终浓度，并且允许缀合进行三十分钟以提供[mPEG2-C2-fmoc-20K]-[rIL-15]缀合物。三十分钟后，通过添加1M甘氨酸(pH 6.0)至反应混合物以使终浓度达到100mM来实现猝灭。然后在柱色谱法纯化和表征之前，使用冰醋酸将猝灭的反应混合物的pH调节到4.0。
“LAIL-15版本2”是指根据PCT国际专利申请公开号WO 2015/153753的实例4的程序可获得的组合物，并且通常是包含多聚乙二醇化形式的IL-15的组合物，其中用于形成共轭物的PEG试剂的连接是在给药之后的可释放连接。呈单聚乙二醇化形式的“LAIL-15版本2”的结构描绘如下：
其中IL-15是天然IL-15的残基并且每个“n”是具有一个值的整数，使得用于形成共轭物的聚合试剂的重均分子量是约20,000道尔顿。更确切地说，“LAIL-15版本2”制备如下。将在-80℃，在氩气中保存的mPEG2-CAC-fmoc-20K-NHS(在共轭至IL-15之前的～O-N-羟基琥珀酰亚胺酯反应物)在氮气吹扫下升温至环境温度。在2mM HCl中制备mPEG2-CAC-fmoc-20K-NHS的储备溶液(200mg/mL)，并且将mPEG2-CAC-fmoc-20K-NHS以范围从5:1至100:1的mPEG2-CAC-fmoc-20K-NHS与rIL-15的摩尔比添加至rIL-15中。混合物中rIL-15的终浓度是0.5mg/mL(0.031mM)。将碳酸氢钠缓冲液(1M，pH 8.0)添加至混合物以达到100mM的终浓度，并且允许缀合进行三十分钟以提供[mPEG2-CAC-fmoc-20K]-[rIL-15]缀合物。三十分钟后，通过添加1M甘氨酸(pH 6.0)至反应混合物以使终浓度达到100mM来实现猝灭。然后在柱色谱法纯化和表征之前，使用冰醋酸将猝灭的反应混合物的pH调节到4.0。
实例1
分别在Balb/C和C57BL/6小鼠的CT26诱导的和B16F10诱导的皮下肿瘤模型中评估RSLAIL-2与LAIL-15版本1和版本2中每一种的组合的抗肿瘤活性
在6至8周大的雌性Balb/C或C57BL/6小鼠中诱导基因型肿瘤。将小鼠结肠癌细胞或转移性黑素瘤细胞以100μL体积的无血清细胞培养基分别以2或1×106个细胞mL-1的密度皮下注射到腹侧后腹部区域。小鼠对于CT26肿瘤在8至9天发展大约200mm3的肿瘤，并且对于B16F10肿瘤中6至7天发展100mm3的肿瘤。将小鼠(具有单独的CT26或B16F10肿瘤的Balb/C和C57BL/6小鼠)分成十四组；每组由十只动物组成。每组分配如下一种干预：媒介物(组A)；单独的天然IL-15(组B)；单独的RSLAIL-2(组C)；单独的LAIL-15版本1(组D)；单独的LAIL-15版本2(组E)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本1：同时(组F)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本1：敏化后(组G)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本1：敏化前(组H)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本2：同时(组I)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本2：敏化后(组J)；RSLAIL-2敏化和LAIL-15版本1：敏化前(组K)；RSLAIL-2敏化和天然IL-15：同时(组L)；RSLAIL-2敏化和天然IL-15：敏化后(组M)；以及RSLAIL-2敏化和天然IL-15：敏化前(组N)。表1提供了用于两种模型中每一种的研究组和治疗时间表的汇总。
表1-用于使用所测试的干预治疗小鼠结肠癌(CT-26)或转移黑素瘤(B16F10)的研究组和治疗时间表
在给予干预之后，在适当时通过数显卡尺测量小鼠的皮下结肠癌或转移性黑素瘤肿瘤的生长变化，一周三次。还监测了每日临床征象。
在携带皮下结肠癌-的小鼠中，如图1A、图1B和图1C所示，媒介物对照在第9天达到研究终点，而所有其他组继续。
另外，如表2所示，发现所有治疗组与媒介物相比的中值存活经由对数秩(Mantel-Cox)检验是统计上显著的。具体地说，在对于“组G”描述的方法中RSAIL-2与LAIL-15版本1的组合相对于单独的RSAIL-2表现出显著的中值存活，这表明了协同效应。
表2-携带CT-26皮下肿瘤的小鼠的干预组的中值存活
对数秩(Mantel-Cox)检验；相对于媒介物，***＝p<0.001和****＝p<0.0001；相对于使用RSLAIL-2的单独治疗，$＝p<0.05和$$＝p<0.01。
此外，所有药学活性干预组均是良好耐受的，其中小鼠没有显示体重的显著降低或有害临床体征。
在携带皮下转移性黑素瘤的小鼠中，如图2A、图2B和图2C所示，媒介物对照在第10天达到研究终点，而所有其他组继续。
另外，如表3所示，发现所有治疗组与媒介物相比的中值存活经由对数秩(Mantel-Cox)检验是统计上显著的。
表3-携带转移性黑素瘤(B16F10)皮下肿瘤的小鼠的干预组的中值存活
对数秩(Mantel-Cox检验)；相对于媒介物，*p＝0.05和****＝p<0.0001；相对于单独的天然IL-15，^＝p<0.045；相对于LAIL-15版本2的单独治疗，#＝p<0.05、####＝p<0.0001。
使用天然IL-15、LAIL-15版本1、LAIL-15版本2以及RSLAIL-2治疗的小鼠没有显示体重的显著降低，也没有显示有害的临床体征。然而，给予RSLAIL-2和LAIL-15版本1的组合(敏化前和同时敏化)在第5天表现出平均体重约10％的降低。降低的体重在第7天重新增加，这指示可逆性质。
实例2
在小鼠替代性皮下肿瘤模型中评估RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合的抗肿瘤活性
在不同于实例1的肿瘤模型的小鼠肿瘤模型中评估RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合。评估RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合针对新的和已建立的肿瘤的功效。对于新的和已建立的肿瘤，RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合有效于减小肿瘤大小。
在新的和已建立的小鼠肿瘤模型中在给予RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合之后某些免疫系统细胞的数目和相关比率有所增加。
这些结果表明RSLAIL-2和LAIL-15版本2的组合是有前景的潜在免疫肿瘤学治疗。

Claims (18)

1.一种治疗患有癌症的患者的方法，该方法包括以下步骤：(a)向该患者给予IL-2Rβ-活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂；以及(b)给予IL-15活化量的长效IL-15激动剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中该患者是人类。
3.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其中该癌症是实体癌。
4.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其中该实体癌选自下组，该组由以下组成：乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胃癌、恶性黑素瘤、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、肾癌、胆管癌、脑癌、宫颈癌、上颌窦癌、膀胱癌、食管癌、何杰金氏病以及肾上腺皮质癌。
5.如权利要求3所述的方法，其中该癌症是结肠癌。
6.如权利要求3所述的方法，其中该癌症是乳腺癌。
7.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其中步骤(a)在进行步骤(b)之前进行。
8.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其中(a)在进行步骤(b)之后进行。
9.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其中步骤(a)和(b)同时进行。
10.一种组合物，该组合物包含IL-2Rβ活化量的长效IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分。
11.一种试剂盒，该试剂盒包含长效IL-2Rβ选择性激动剂和长效IL-15部分，随附用于治疗患有癌症的受试者的使用说明书。
12.如权利要求11所述的试剂盒，该试剂盒包含IL-2Rβ活化量的IL-2Rβ选择性激动剂和IL-15R活化量的长效IL-15部分。
13.如权利要求11或权利要求12所述的试剂盒，其中该IL-2Rβ选择性激动剂和该长效IL-15部分包含在单一组合物中。
14.如权利要求13所述的试剂盒，其中该单一组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂。
15.如权利要求11或权利要求12所述的试剂盒，其中该IL-2Rβ选择性激动剂和该长效IL-15部分提供在单独的容器中。
16.如权利要求11-15中任一项所述的试剂盒，其中这些说明书指示用于在人类受试者中进行使用。
17.如权利要求11-15中任一项所述的试剂盒，其中这些说明书指示用于治疗患有癌症的人类受试者的使用，其中该癌症是实体癌。
18.如权利要求11-15中任一项所述的方法，其中这些说明书指示用于治疗患有选自下组的癌症的人类受试者的使用，该组由以下组成：乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胃癌、恶性黑素瘤、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、肾癌、胆管癌、脑癌、宫颈癌、上颌窦癌、膀胱癌、食管癌、何杰金氏病以及肾上腺皮质癌。
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