CN108135933B - 含有活动精子结构域的蛋白质2和癌症 - Google Patents

含有活动精子结构域的蛋白质2和癌症 Download PDF

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Abstract

本文公开了治疗癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动、减少癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的发生率或者预防癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的方法，治疗癌细胞的迁移或转移、减少癌细胞的迁移或转移的发生率或预防癌细胞的迁移或转移的方法，通过减少肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)或其迁移来治疗癌症、减少癌症的发生率或预防癌症的方法，以及例如使用含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)的抑制剂治疗癌症(包括转移癌)、减少癌症(包括转移癌)的发生率或预防癌症(包括转移癌)的方法。还公开了MOSPD2的抑制剂(例如，抗‑MOSPD2抗体或其抗原结合片段)和含有MOSPD2抑制剂的药物组合物。还公开了用于预测、诊断或预后受试者中的癌症、癌症转移、肿瘤进展或肿瘤侵袭的方法。

Description

含有活动精子结构域的蛋白质2和癌症
发明领域
本发明涉及治疗、预防癌症和转移瘤或者减少癌症和转移瘤的发生率，例如治疗、预防癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动或者减少癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的发生率的方法，治疗、预防癌细胞的迁移或转移或减少癌细胞的迁移或转移的发生率的方法，通过调节肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)的迁移来治疗、预防癌症或减少癌症的发生率的方法，以及使用含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)治疗、预防癌症(包括转移癌)或减少癌症(包括转移癌)的发生率的方法。本发明还涉及包含一种或多种MOSPD2的抑制剂的药物组合物并且涉及MOSPD2的多肽抑制剂诸如抗体或其抗原结合片段。本发明还涉及用于预测、诊断或预后受试者中的癌症、癌症转移、肿瘤进展或肿瘤侵袭的方法。
发明背景
转移是癌细胞从其原始组织扩散到其它器官，是涉及许多分子的多步骤过程。有证据表明趋化因子和趋化因子受体在肿瘤转移中起到重要的作用。趋化因子是通过与其同源受体相互作用来诱导定向细胞迁移的小分子。趋化因子与趋化因子受体的结合活化了信号传导途径，诸如MAPK/ERK和PI3K/AKT途径，从而分别引起ERK和AKT的磷酸化。
含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)是在人类与小鼠之间具有90％同源性的、长518个氨基酸的高度保守性蛋白质。生物信息学分析指示MOSPD2含有CRAL-TRIO区域，这是以细胞视黄醛结合蛋白(CRALBP)和TRIO蛋白命名。MOSPD2还含有与线虫类主要精子蛋白在结构上相关的区域和一个跨膜区域。尚未描述MOSPD2的生物功能。如本文所详述的，发明人已发现MOSPD2为某些细胞(例如，单核细胞和各种癌细胞)朝向不同趋化因子(例如，表皮生长因子(EGF))迁移所必需的。
发明概述
本发明在一些实施方案中涉及使用含有活动精子结构域的蛋白质2(MOSPD2)治疗、预防癌细胞的转移或减少所述癌细胞的转移的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括使所述癌细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。在其它实施方案中，MOSPD2由癌细胞表达。
在其它实施方案中，本发明涉及使用MOSPD2的抑制剂抑制或预防癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括使所述癌细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。在一些实施方案中，MOSPD2由癌细胞表达。在其它实施方案中，所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、表皮生长因子(EGF)受体磷酸化、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化、蛋白激酶B(AKT)磷酸化以及粘着斑激酶(FAK)磷酸化。
在其它实施方案中，本发明涉及使用MOSPD2的抑制剂治疗、预防癌症或减少所述癌症的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括使循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触，以减少癌症团块附近或内部的肿瘤相关性巨噬细胞的数目和/或调节肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。在一些实施方案中，MOSPD2由循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞表达。在一些实施方案中，施用MOSPD2的抑制剂减少了癌症团块附近或内部的肿瘤相关性巨噬细胞的数目和/或调节了肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。在其它实施方案中，施用MOSPD2的抑制剂将肿瘤相关性巨噬细胞的数目或迁移减少至少10％或更多。在一些实施方案中，所述方法包括使所述癌细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。在一些实施方案中，MOSPD2由癌细胞表达。
在其它实施方案中，本发明涉及使用MOSPD2的抑制剂治疗、预防转移癌或减少转移癌的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法包括使所述转移癌细胞与有效量的MOSPD2的抑制剂接触。在一些实施方案中，MOSPD2由转移癌细胞表达。
在其它实施方案中，本文所述的治疗、预防或减少发生率的方法包括施用治疗有效量的另一种抗癌药物和MOSPD2的抑制剂。
在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂为小分子，诸如氧化磷脂。在一个优选的实施方案中，MOSPD2的抑制剂为VB-201。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂为非氧化磷脂的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂为非VB-201的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂结合至细胞表面(例如，癌细胞表面)上表达的MOSPD2。
在其它实施方案中，本发明还涉及抑制由癌细胞表达的MOSPD2的多肽和含有抑制由癌细胞表达的MOSPD2的多肽的药物组合物。在其它实施方案中，所述多肽是抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明涉及一种特异性结合至MOSPD2的经分离的抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段结合至MOSPD2，其平衡解离常数(KD)为约10-6M至约10-12M。在其它实施方案中，MOSPD2为人类MOSPD2。在其它实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约50、约462至474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约431以及约497至约517。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至根据SEQ ID NO:1编号的人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个：约505至约515、约500至约515、约230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约15至约30、约80至约95、约40至约50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约430以及约495至约515。
在其它实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其包含抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
在其它实施方案中，本发明涉及治疗、预防癌细胞转移或减少癌细胞转移的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。在其它实施方案中，本发明涉及抑制或预防癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，其中所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化以及FAK磷酸化。在其它实施方案中，本发明涉及治疗、预防癌症或减少癌症的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。在其它实施方案中，本发明涉及治疗、预防转移癌或减少转移癌的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
在其它实施方案中，本发明涉及用于预测、诊断或预后受试者中的癌症、癌症转移、肿瘤进展或肿瘤侵袭的方法。
附图简述
在此参考附图，仅通过举例来描述本发明的一些实施方案。现在详细地具体参考附图，应当强调的是通过举例并且出于本发明的实施方案的说明性讨论的目的显示细节。
图1呈现示出在跨孔迁移测定中使用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒的癌细胞朝向10％胎牛血清(FCS)和EGF(200ng/ml)的测试结果的图像。使用sh-MOSPD2慢病毒颗粒沉默由人类MDA-231乳腺癌和A2058黑素瘤细胞系进行的MOSPD2表达。图1中的蛋白质印迹显示用sh-MOSPD2转导的癌细胞系中的减少的MOSPD2蛋白表达。图1显示MOSPD2促进转移乳腺癌和黑素瘤细胞系迁移。
图2呈现示出用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞的细胞增殖速率的图表。如所述地接种MDA-231细胞并且每24小时收集并计数，持续三个连续天。结果表示为三次重复的平均值±标准偏差。这些结果证实MOSPD2的沉默不会影响MDA-231细胞的细胞活力或增殖。
图3A-3C示出在MOSPD2沉默或未沉默的情况下MDA-231乳腺癌细胞的转移的体内测试结果。在图3A中，在SCID小鼠(n＝10/组)的尾静脉中注射(106)用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞。在第28天处死小鼠，收获其肺以用于H&E染色，并且确定肿瘤区域。在图3A中示出的结果表示为所测量的转移瘤尺寸的平均值±标准偏差(*p<0.05)。
在图3B和3C中，在SCID小鼠的乳房脂垫中注射(5x106)用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒(分别为n＝13和n＝8)转导的MDA-231乳腺癌细胞。在第56天将小鼠处死。切下同侧腹股沟淋巴结(图3B)，收获肺以用于H&E染色并且确定肿瘤区域(图3C)。在图3C中示出的结果表示为所测量的转移瘤尺寸的平均值±标准偏差：sh-对照转导的细胞的肿瘤区域为1376.9±752.6(n＝13)，相比之下sh-MOSPD2转导的细胞为550.0±326.2(n＝8)。
图3A-3C显示MOSPD2促进MDA-231乳腺癌细胞在体内转移。
图4A-4E示出比较各种人类癌组织的MOSPD2表达水平与其相应正常组织相对物的表达水平的图像。用对照或抗-MOSPD2抗体染色含有各种人类正常组织和癌组织的载玻片。示出对于MOSPD2呈阳性染色的癌组织。图4A-4E显示MOSPD2在各种人类癌组织中表达。
图5A和图5B示出在跨孔迁移测定中测试的用对照MOSPD2CRISPR-CAS9慢病毒颗粒转导的癌细胞的结果，在所述测定中细胞被接种在上隔室处并且被吸引至使用补充有10％FCS和EGF(200ng/ml)的培养基的下隔室。在图5A中示出的图表通过荧光活化细胞分选(FACS)来确定，其中结果表示为三次重复的平均值±标准偏差。在图5B中示出的图像是来自视觉记录。在图5A和图5B中，使用具有含有对照或MOSPD2CRISPR-CAS9系统的质粒的慢病毒颗粒转导MDA-231乳腺癌细胞。蛋白质印迹显示减少的MOSPD2蛋白质表达(插图)。图5A和图5B显示CRISPR-CAS9驱动的MOSPD2基因编辑抑制了乳腺癌细胞迁移。
图5C呈现示出由CRISPR-CAS9驱动的基因编辑进行的MOSPD2沉默对与细胞迁移相关的磷酸化事件的作用的蛋白质印迹。将用对照或MOSPD2 CRISPR-CAS9慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞用10％FCS和EGF(400ng/ml)孵育10分钟。通过蛋白质印迹确定ERK、AKT和FAK的磷酸化。将HSP90用于加样对照。图5C显示由CRISPR-CAS9驱动的基因编辑进行的MOSPD2沉默抑制与细胞迁移相关的磷酸化事件。
图5D示出用对照或MOSPD2 CRISPR-CAS9慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞转移的体内测试结果。在图5D中，将106个CRISPR-对照或CRISPR-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞注射到8周龄雌性SCID小鼠(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid,Harlan Israel)的尾静脉中。在3周后处死小鼠并且切下其肺以用于组织病理学检查。图5D显示由CRISPR-CAS9系统沉默MOSPD2将肺中的转移乳腺癌细胞的存在显著抑制超过95％(转移面积)，其中p值为0.002。
图6呈现示出在MDA-231癌细胞中VB-201在抑制AKT的EGF诱导的磷酸化方面的作用的蛋白质印迹图像。如图6所示，10μg/ml的VB-201几乎完全抑制AKT的EGF诱导的磷酸化，其中在5μg/ml下观察到显著的抑制。将HSP90用于加样对照。
图7列出17种抗-MOSPD2 F(ab')2单克隆抗体，所述单克隆抗体在初步筛选以用于结合至过度表达MOSPD2的细胞之后鉴定。使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对用于MOSPD2结合的克隆进行进一步分析鉴定了光密度(O.D.)值大于相对于背景的5倍(*在图7中)的12种克隆。
图8A-8B示出两种代表性抗-MOSPD2 F(ab')2单克隆抗体(mAb)克隆与过度表达MOSPD2的细胞的结合。
图9示出代表性抗-MOSPD2 F(ab')2mAb与由MDA-231乳腺癌细胞表达的MOSPD2的结合。
图10A-10B显示抗-MOSPD2 F(ab')2mAb结合至MDA-231细胞(图10A)，但并未结合至MOSPD2-沉默的MDA-231细胞(图10B)。
图11A-11B显示抗-MOSPD2 F(ab')2mAb结合至A2058黑素瘤和HepG2肝癌细胞系上的MOSPD2。
图12显示使用抗-MOSPD2 F(ab')2mAb孵育MDA-231细胞抑制了EGF受体(p-EGF-R)、AKT(p-AKT)和ERK1/2(p-ERK1/2)的磷酸化。
图13显示抗-MOSPD2 F(ab')2mAb显著抑制了MDA-231细胞的EGF-诱导的跨孔迁移。
图14A-14D示出MOSPD2的细胞表达特异性和定位。
图15A-15C显示MOSPD2在已浸润到发炎组织中的单核细胞上表达。
图16A-16E显示MOSPD2促进单核细胞迁移。图16A示出在用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞中MOSPD2的mRNA和蛋白质表达。示出至少三个实验之一。图16B示出用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞朝向RANTES(100ng/ml)的三小时跨孔迁移。呈现sh-MOSPD2转导的细胞相对于sh-对照转导的迁移细胞的百分比。示出三个实验之一。图16C显示将用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞用RANTES孵育指定时间(min)，并且评价ERK1/2(p-ERK1/2)和AKT(p-AKT)的磷酸化。将HSP90用作加样对照。图16D示出用sh-对照(sh-cont)或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞朝向MCP-3(100ng/ml)、MCP-1(100ng/ml)、RANTES(100ng/ml)和SDF-1(25ng/ml)的三小时跨孔迁移。呈现sh-MOSPD2相对于sh-对照转导的迁移细胞的百分比。示出三个实验之一。图16E显示将用sh-对照(sh-cont)或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞用MCP-3(100ng/ml)、MCP-1(100ng/ml)、RANTES(100ng/ml)和SDF-1(25ng/ml)孵育指定时间(min)，并且评价ERK1/2(p-ERK1/2)和AKT(p-AKT)的磷酸化。将微管蛋白用作加样对照。
图17A-17B显示MOSPD2不会分别影响STAT1(p-Stat1)的IFN-γ-诱导的磷酸化或ERK1/2(p-ERK1/2)的PMA-介导的磷酸化，这支持上述MOSPD2活动的特异性。
图18A-18F示出来自不同病理阶段或来自与肿瘤相邻的正常组织(正常相邻组织；NAT)的人类乳腺癌样品的组织学图像。用抗-MOSPD2抗体染色载玻片。图18A-18F显示MOSPD2表达与乳腺癌细胞从局部受限的肿瘤到侵袭性和转移性肿瘤的转变相关。
图19示出在来自不同乳腺癌阶段或正常相邻组织(NAT)的样品中的MOSPD2表达强度的评分(在0-3的标度内，其中0是没有表达并且3是非常高的表达)(*p<0.001)。
图20A-20D示出比较从结肠(图20A-20B)或肝(图20C-20D)中收集的各种人类正常组织和癌组织中的MOSPD2表达水平的图像。MOSPD2在67％的结肠腺癌和45％的肝细胞癌样品中表达，而在正常结肠和肝组织中没有检测到表达。
图21A-21E示出比较从人类肝中收集的正常组织、NAT和不同级别的癌组织的MOSPD2表达水平的图像。图21C-21E显示MOSPD2染色强度随着肝细胞癌的肿瘤级别增加而增加。
图22A-22B示出从肝细胞癌中收集的样品中的MOSPD2表达强度的MOSPD2评分。图22A显示MOSPD2表达在从恶性肝细胞癌收集的样品中与正常和NAT样品相比显著增加(p≤0.001)。图22B显示MOSPD2染色强度与肝细胞癌的进展相关地显著增加。
图23呈现显示VB-201结合至来自人类CD14单核细胞的细胞裂解物的MOSPD2的蛋白质印迹图像。将标记的VB-201或VB-221(OB201或OB221)添加到细胞裂解物中并且使蛋白质沉淀。在凝胶上运行样品并且针对TLR2和MOSPD2进行印迹分析。
图24呈现显示MOSPD2促进乳腺癌细胞中的EGF-诱导的信号传导事件的蛋白质印迹图像。
发明详述
在详细地解释本发明的实施方案之前，应理解本发明并不限于其在以下描述中所阐述的或通过实施例所列举的细节方面的应用。本发明能够具有其它实施方案或能够以各种方式实践或执行。此外，应理解本文中采用的措辞和术语是出于描述的目的并且不应视为具有限制性。
一般定义
术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包含(includes)”、“包含(including)”、“具有(having)”以及其动词变化意指“包括但不限于”。
术语“由......组成”意指“包括并限于”。
术语“基本上由...组成”意指组合物的指定材料或方法的指定步骤以及并不实质地影响材料或方法的基本特性的那些另外的材料或步骤。
词语“示例性”在本文中用于意指“充当一个实例、例子或说明”。描述为“示例性”的任何实施方案不一定被解释为是比其它实施方案优选的或者有利的，和/或排除来自其它实施方案的特征的并入。
词语“任选地”在本文中用于意指“被提供在一些实施方案中而未被提供在其它实施方案中”。本发明的任何特定实施方案可以包括多个“任选的”特征，除非此类特征冲突。
除非上下文另外清楚地指示，否则如在此所使用的单数形式“一个/种(a/an)”和“该”包括复数个指示物。例如，术语“化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
如本文所用，修饰与本发明相关的量的术语“约”是指例如通过常规测试和处理；通过此类测试和处理中的粗心误差；通过制造的差异、来源或用于本发明中的成分纯度；以及类似情况可能发生的数值量的变化。无论是否由术语“约”修饰，权利要求都包括所引述量的等效值。在一个实施方案中，术语“约”意指在所报告的数值的10％内。在另一个实施方案中，术语“约”意指在所报告的数值的5％内。
贯穿本申请，本发明的各种实施方案可以范围形式来呈现。应当了解，呈范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应理解为对本发明范围的硬性限制。因此，范围的描述应被认为具有确切公开的所有可能的子范围以及所述范围内的单独数值。例如，范围(诸如从1至6)的描述应当被认为是具有确切公开的子范围，如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等，以及该范围内的单独数字，例如1、2、3、4、5和6。不管范围有多宽，这都适用。
如在此使用，术语“方法”指用于完成给定任务的方式、手段、技术以及程序，包括但不限于由化学、药理学、生物学、生物化学以及医学领域从业者已知或易于从已知方式、手段、技术以及程序开发的那些方式、手段、技术以及程序。
如在此使用，术语“治疗(treating)”包括消除、基本上抑制、减缓或逆转病状进展、基本上改善病状的临床或美学症状或基本上防止病状的临床或美学症状的出现。
如本文所用，“MOSPD2”是指被分类为含有活动精子结构域的蛋白质2的任何多肽。MOSPD2的实例包括但不限于SEQ ID NO:1-4的多肽或其任何变体(例如，具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)。MOSPD2的其它实例包括但不限于由SEQ ID NO:5-8中任一个的多核苷酸或其任何变体(例如，具有与SEQ ID NO:5-8中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列)编码的多肽。编码MOSPD2的多核苷酸序列可进行密码子优化以通过本领域已知的方法在特定生物体中表达。MOSPD2的其它实例可以通过搜索如本领域技术人员已熟知的公共数据库(例如，BLAST)来鉴定。
在任何本文所述的实施方案中，MOSPD2可以是由癌细胞(例如，人类癌细胞)表达的MOSPD2。而且，在任何本文所述的实施方案中，MOSPD2可以是哺乳动物MOSPD2或人类MOSPD2。癌细胞的类型的非穷举性列表包括以下细胞：膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、造血细胞癌、间充质源型癌、中枢或外周神经系统癌、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤以及恶性腹水。在一些实施方案中，癌症是小细胞肺癌或非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症是皮肤癌，例如鳞状细胞癌、基底细胞癌、黑素瘤、隆突性皮纤维肉瘤、梅克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、角化棘皮瘤、梭形细胞肿瘤、皮脂腺癌、微囊肿性附属器癌、乳腺佩吉特氏病(Paget's disease)、非典型纤维黄色瘤、平滑肌肉瘤或血管肉瘤。在一些实施方案中，癌症是淋巴系造血细胞癌，例如白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤或伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。在一些实施方案中，癌症是髓系造血细胞癌，例如纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤或骨肉瘤。在一些实施方案中，癌症是中枢或外周神经系统癌症，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤或神经鞘瘤。在一些实施方案中，癌症是肛门癌、骨癌、胃肠道间质癌(gastrointestinal stomal cancer)、妊娠性滋养层细胞病、霍奇金氏淋巴瘤、卡波西肉瘤、角化棘皮瘤、恶性间皮瘤、多中心卡斯特莱曼病(multicentric castleman disease)、多发性骨髓瘤和其它浆细胞赘生物、骨髓增生性赘生物、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌、阴茎癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、精原细胞瘤、软组织肉瘤、胃(胃部)癌、睾丸癌、畸胎癌、甲状腺滤泡癌、阴道癌、外阴癌、威尔姆氏瘤(Wilms tumor)和其它儿童肾癌以及着色性干皮病。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
如本文所用，“MOSPD2的活性”或“MOSPD2活性”包括含有活动精子结构域的蛋白质2的任何已知或本文所述的功能。此类活性包括例如调节细胞迁移(例如，白细胞、单核细胞或癌细胞迁移)、肿瘤相关性巨噬细胞的存在、趋化性、趋化因子诱导的白细胞迁移、趋化因子受体信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化、FAK磷酸化或炎症。
如本文所用，“趋化性”是指细胞响应于化学刺激而移动。趋化性包括但不限于癌细胞向趋化因子(例如，EGF)移动。
如本文所用，“MOSPD2的抑制剂”和“MOSPD2抑制剂”是指下调MOSPD2的活性的任何化合物。所述抑制剂可以是例如多肽、DNA或RNA。MOSPD2的抑制也可以例如通过经由感染异位过度表达MOSPD2来发生，并且预期MOSPD2的抑制剂或MOSPD2抑制剂涵盖这种类型的抑制。抑制剂也可以是例如特异性结合至MOSPD2多肽的分子、特异性结合至MOSPD2多肽的配体的分子、针对MOSPD2多肽产生的抗血清、可溶性MOSPD2多肽或者包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由所述结构域组成或由所述结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。抑制剂也可以是例如特异性结合至MOSPD2多肽的抗体或特异性结合至MOSPD2多肽的抗体抗原结合片段。抑制剂也可以是例如RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合，所述抑制剂与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交。抑制剂也可以是成簇有规律间隔的短回文重复CRISPR-CAS9系统。CRISPR-CAS9系统已在文献中描述并且可以包含例如CAS9和指导RNA。其它基因编辑技术也已描述于文献中并且也可以使用。抑制剂也可以是下调MOSPD2的活性的小分子化学化合物。
“抗体”或抗体的“抗原结合片段”包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如Fab、Fab'和F(ab')2、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫化物连接的Fv(sdFv)、轻链可变区(VL)或重链可变区(VH)结构域、包含VL或VH结构域的片段以及由Fab表达文库产生的片段。抗体或抗体抗原结合片段可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子类别。用于制备抗体抗原结合片段的方法是已知的并且包括例如对抗体进行化学或蛋白酶消化。
抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。
术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可发生改变，但是人类IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226的氨基酸残基或从Pro230到其羧基末端的片段。Fc区中残基的编号是Kabat中的EU索引的编号。Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定结构域CH2和CH3。
“特异性结合”通常意指抗体或其片段、变体或衍生物通过其抗原结合结构域结合至表位，并且结合需要在抗原结合结构域与表位之间有一些互补。根据这个定义，当抗体或其片段、变体或衍生物经由其抗原结合结构域结合至表位比它结合至随机、不相关的表位更容易时，认为所述抗体或其片段、变体或衍生物“特异性结合”至该表位。
如本文所用，术语“表位”是指抗体可以特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或相邻表位)或者表位可以例如一起来自一种或多种多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续或非连续表位)。在某些实施方案中，抗体特异性结合的表位可以通过文献中和本文中所述的方法来确定，所述方法例如NMR光谱学、X-射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱分析(例如，MALDI质谱分析)相联接的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)。
如本领域中已知的术语“同一性百分比”是指两个或更多个多肽序列或者两个或更多个多核苷酸序列之间的关系，如通过比较所述序列来确定的。在本领域中，“同一性”和“同一性百分比”还意指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关程度，这视情况而定，如通过此类序列串之间的匹配所确定的。“同一性”和“相似性”可以容易通过已知方法和公众可获得资源来计算，所述方法和资源包括但不限于以下所述的那些：(1)ComputationalMolecular Biology(Lesk,A.M.编辑)Oxford University:NY(1988)；(2)Biocomputing:Informatics and Genome Projects(Smith,D.W.编辑)Academic:NY(1993)；(3)ComputerAnalysis of Sequence Data,Part I(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑)Humania:NJ(1994)；(4)Sequence Analysis in Molecular Biology(von Heinje,G.编辑)Academic(1987)；以及(5)Sequence Analysis Primer(Gribskov,M.和Devereux,J.编辑)Stockton:NY(1991)。
当核酸片段的单链形式可以在适当的温度和溶液离子强度的条件下退火至其它核酸片段时，多核苷酸可以与另一个多核苷酸“杂交”。杂交和洗涤条件是已熟知的并且例如在以下各项中举例说明：Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory:Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)，特别是其中的第11章和表11.1(以引用的方式整体并入本文)。温度和离子强度的条件决定杂交的“严格性”。严格条件可以进行调节以筛选适度类似的片段(诸如来自远缘生物的同源序列)至高度类似的片段(诸如复制来自远缘生物的功能酶的基因)。杂交后洗涤决定严格条件。一组示例性严格条件使用一系列洗涤，在室温下以6xSSC、0.5％SDS开始，持续15min，然后在45℃下用2xSSC、0.5％SDS重复30min，并且然后在50℃下用0.2xSSC、0.5％SDS重复两次，持续30min。另一组示例性严格条件使用更高的温度，其中洗涤与以上那些相同，除了最后两次30min在0.2xSSC、0.5％SDS中洗涤的温度增加至60℃。此组严格条件通过增加在65℃下以0.1xSSC、0.1％SDS进行的两次最终洗涤来修改成“高严格条件”。另一组示例性严格条件包括例如在0.1xSSC、0.1％SDS、65℃下的杂交和使用2xSSC、0.1％SDS接着用0.1xSSC、0.1％SDS进行的洗涤。
杂交要求两个核酸含有互补序列，虽然根据杂交的严格性，碱基之间有可能存在错配。用于使核酸杂交的适当严格性取决于核酸的长度和互补的程度、本领域中熟知的变量。两个核苷酸序列之间的类似性或同源性程度越大，对于具有那些序列的核酸的杂交体的Tm的值越大。核酸杂交的相对稳定性(对应于较高的Tm)以以下顺序降低：RNA:RNA、DNA:RNA、DNA:DNA。对于长度大于100个核苷酸的杂交体，已推导出用于计算Tm的等式(参见Sambrook等人,9.50-9.51)。对于使用较短核酸(即寡核苷酸)的杂交，错配的位置变得更加重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(参见Sambrook等人，同上,11.7-11.8)。在一个实施方案中，可杂交核酸的长度为至少约10个核苷酸。在其它实施方案中，可杂交核酸的最小长度为至少约15个核苷酸或至少约20个核苷酸。
如本文全文所用，术语“烷基”是指饱和脂肪烃类，包括直链和支链基团。在一些实施方案中，烷基具有1至20个碳原子。无论本文中陈叙数值范围；例如“1-20”时，其暗示在此情况下烷基可以含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等、高达并包含20个碳原子。在一些实施方案中，烷基是具有1至10个碳原子的中等尺寸烷基。在一些实施方案中，烷基是具有1至4个碳原子的低级烷基。所述烷基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
“环烷基”基团是指所有碳单环或稠合环(即，共享一对相邻的碳原子的环)基团，其中一个或多个环不具有完全共轭的π电子体系。环烷基基团的非限制性实例是环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、环庚烷、环庚三烯以及金刚烷。环烷基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
“烯基”基团是指由至少两个碳原子和至少一个碳碳双键组成的烷基基团。
“炔基”基团是指由至少两个碳原子和至少一个碳碳三键组成的烷基基团。
“芳基”基团是指所有碳单环或稠合环多环(即，共享几对相邻的碳原子的环)基团，其具有完全共轭的π电子体系。芳基基团的非限制性实例是苯基、萘基和蒽基。所述芳基可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
“杂芳基”基团是指单环或稠合环(即，共享一对原子的环)基团，其在环中具有一个或多个原子，例如像氮、氧和硫，并且另外具有完全共轭的π电子体系。杂芳基基团的非限制性实例包括吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉以及嘌呤。所述杂芳基基团可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代基基团可以例如是烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。
“杂脂环”基团是指在环中具有一个或多个原子诸如氮、氧和硫的单环或稠合环基团。所述环也可以具有一个或多个双键。然而，所述环不具有完全共轭的π电子体系。所述杂脂环可以是取代的或未取代的。当是取代的时，取代的基团可以例如是孤对电子、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、卤代基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、亚磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、叠氮基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺基、膦酰基、氧膦基、氧代基、羰基、硫代羰基、脲、硫脲、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-胺基、N-胺基、C-羧基、O-羧基、磺酰氨基以及氨基，这些术语在本文中定义。代表性实例是哌啶、哌嗪、四氢呋喃、四氢吡喃、吗啉代以及类似基团。
“烷氧基”基团是指如本文所定义的-O-烷基和-O-环烷基基团。
“芳氧基”基团是指如本文所定义的-O-芳基和-O-杂芳基基团。
“硫代烷氧基”基团是指如本文所定义的-S-烷基和-S-环烷基基团。
“硫代芳氧基”基团是指如本文所定义的-S-芳基和-S-杂芳基基团。
“羰基”基团是指-C(＝O)-R基团，其中R是如本文所定义的氢、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)或杂脂环(通过环碳键合)。
“醛”基团是指羰基，其中R是氢。
“硫代羰基”基团是指-C(＝S)-R基团，其中R是如本文所定义的。
“C-羧基”基团是指-C(＝O)-O-R基团，其中R是如本文所定义的。
“O-羧基”基团是指RC(＝O)-O-基团，其中R是如本文定义的。
“氧代基”基团是指＝O基团。
“羧酸”基团是指C-羧基基团，其中R是氢。
“卤代基”基团是指氟、氯、溴或碘。
“三卤代甲基”基团是指-CX3基团,其中X是如本文所定义的卤代基基团。
“亚磺酰基”基团是指-S(＝O)-R基团，其中R是如本文所定义的。
“磺酰基”基团是指-S(＝O)2-R基团，其中R是如本文所定义的。
“S-磺酰氨基”基团是指-S(＝O)2-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“N-磺酰氨基”基团是指RS(＝O)2-NR基团，其中每个R是如本文所定义的。
“O-氨基甲酰基”基团是指-OC(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“N-氨基甲酰基”基团是指ROC(＝O)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
“O-硫代氨基甲酰基”基团是指-OC(＝S)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“N-硫代氨基甲酰基”基团是指ROC(＝S)NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
“氨基”基团是指–NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“C-酰氨基”基团是指-C(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“N-酰氨基”基团是指RC(＝O)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
“脲”基团是指-NRC(＝O)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“胍基”基团是指-RNC(＝N)-NR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“脒基”基团是指R2NC(＝N)-基团，其中每个R是如本文所定义的。
术语“膦酰基”或“膦酸根”描述-P(＝O)(OR)2基团，其中每个R是如本文所定义的。
术语“磷酸根”描述-O-P(＝O)(OR)2基团，其中每个R是如本文所定义的。
“磷酸”是磷酸根基团，其中每个R是氢。
术语“氧膦基”描述-PR2基团，其中每个R是如本文所定义的。
术语“硫脲”描述-NR-C(＝S)-NR-基团，其中每个R是如本文所定义的。
术语“糖类”是指一种或多种糖单元，无论是开链糖单元或环状糖单元(例如，基于吡喃糖或呋喃糖的单元)，并且除非另外指示，否则涵盖任何单糖、二糖和寡糖。
术语“盐”包括内盐或外盐二者。在一些实施方案中，所述盐是内盐，即两性离子结构。在一些实施方案中，所述盐是外盐。在一些实施方案中，所述外盐是具有适合的抗衡离子的药学上可接受的盐。用于药学用途的适合的抗衡离子是本领域中已知的。
术语“VB-201”是指1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。根据本发明的实施方案，VB-201可以是1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱的手性对映体，即(R)-对映体((R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)或(S)-对映体((S)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)或其混合物(例如，外消旋物)。根据示例性实施方案，VB-201是(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。如本领域技术人员所理解的，将VB-201指示为(R)-对映体或(S)-对映体不需要100％对映体纯度，而是指基本上富集的呈R或S异构体形式的单个对映体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)。在一些实施方案中，VB-201是具有至少90％对映体过量的(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。
术语“VB-221”是指1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。根据本发明的实施方案，VB-221可以是(1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱)的手性对映体，即(R)-对映体或(S)-对映体或其任何混合物(例如，外消旋物)。根据示例性实施方案，VB-221是(R)-1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。类似地，如本领域技术人员所理解的，将VB-221指示为(R)-对映体或(S)-对映体不需要100％对映体纯度，而是指基本上富集的呈R或S异构体形式的单个对映体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)。在一些实施方案中，VB-221是具有至少90％对映体过量的(R)-1-(2'-辛基)十二烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。
应理解，出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本发明的某些特征也可在单个实施方案中组合提供。相反地，为简便起见，为了简洁而在单个实施方案的背景下描述的本发明的不同特征也可以单独地或以任何适合的子组合提供或者在适当情况下提供于本发明的任何其它描述的实施方案中。在不同实施方案的上下文中描述的某些特征不认为是那些实施方案的必需特征，除非实施方案在没有那些要素的情况下是无效的。
MOSPD2和MOSPD2的抑制剂
已发现抑制MOSPD2会抑制癌细胞和单核细胞朝向不同趋化因子(例如，EGF)迁移并且阻断趋化因子受体信号传导途径的活化。这些结果指示MOSPD2对于癌细胞迁移和转移而言是关键的并且阻断其活性例如在治疗、预防癌细胞迁移或减少所述癌细胞迁移的发生率方面具有治疗益处。
本发明的实施方案涉及MOSPD2(例如，由癌细胞表达的MOSPD2)的抑制剂，或者涉及包含MOSPD2(例如，由癌细胞表达的MOSPD2)的抑制剂的方法和组合物。在一些实施方案中，MOSPD2是哺乳动物MOSPD2。在其它实施方案中，MOSPD2是人类MOSPD2。在一些实施方案中，抑制剂是抑制MOSPD2的经分离的结合分子。在其它实施方案中，抑制剂是多肽、DNA或RNA。在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2的多肽。在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2的抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，抑制剂是RNA沉默剂。
在本发明的另外的实施方案中，MOSPD2的抑制和MOSPD2活性的下调可以在基因组和/或转录水平上使用干扰转录和/或翻译的各种分子[例如，RNA沉默剂(例如，反义、siRNA、shRNA、微小-RNA)、核糖酶和DNA酶]来实现或者在蛋白质水平上使用例如拮抗剂、裂解蛋白质的酶、干扰蛋白质活性的小分子(例如，竞争性配体)以及类似分子来实现。
以下是能够下调靶标诸如MOSPD2的表达水平和/或活性的药剂的示例性列表。
MOSPD2的抑制可以例如通过经由感染异位过度表达MOSPD2来发生，并且预期MOSPD2的抑制剂或MOSPD2抑制剂涵盖这种类型的抑制。
MOSPD2的下调也可以通过基因编辑来实现。基因编辑可以例如使用成簇有规律间隔的短回文重复CRISPR-CAS9系统来进行。CRISPR-CAS9系统已在文献中描述并且可以包含例如CAS9和指导RNA。其它基因编辑技术也已描述于文献中并且也可以使用。
MOSPD2的下调也可以通过RNA沉默来实现。如本文所用，短语“RNA沉默”是指由RNA分子介导的一组调节性机制[例如，RNA干扰(RNAi)、转录基因沉默(TGS)、转录后基因沉默(PTGS)、基因压制、共同抑制以及翻译阻遏]，所述机制使得对应蛋白质编码基因的表达受到抑制或“沉默”。已在许多类型的生物体中观察到RNA沉默，所述生物体包括植物、动物和真菌。
如本文所用，术语“RNA沉默剂”是指能够特异性“抑制”或“沉默”靶基因的表达的RNA。在一些实施方案中，RNA沉默剂能够通过转录后沉默机制来预防mRNA分子的完全加工(例如，完全翻译和/或表达)。RNA沉默剂包括非编码RNA分子，例如包含成对链的RNA双链体以及可以生成此类小非编码RNA的前体RNA。示例性RNA沉默剂包括dsRNA，诸如siRNA、miRNA和shRNA。在一个实施方案中，RNA沉默剂能够诱导RNA干扰。在另一个实施方案中，RNA沉默剂能够介导翻译阻遏。
RNA干扰是指在动物体内由短干扰RNA(siRNA)介导的序列特异性转录后基因沉默的过程。植物中的对应过程通常称为转录后基因沉默或RNA沉默并且在真菌中也称为基因压制。转录后基因沉默过程被认为是用于防止外来基因表达的进化保守性细胞防御机制并且通常是不同植物区系和门所共有的。免遭外来基因表达的所述保护可能已响应于源于病毒性感染或转位子元件通过特异性破坏同源单链RNA或病毒基因组RNA的细胞反应随机整合至宿主基因组中的双链RNA(dsRNA)产生而进化。
本发明的一些实施方案涵盖使用dsRNA下调来自mRNA的蛋白质表达。
术语“siRNA”是指诱导RNA干扰(RNAi)途径的小抑制性RNA双链体(通常在18-30个碱基对之间)。通常，siRNA被化学合成为具有中心19bp双链体区域和末端上的对称2-碱基3'-突出端的21聚体，虽然最近已描述长度为25-30个碱基的化学合成的RNA双链体与21聚体的相同位置相比可以具有多达100倍的效力增加。使用较长RNA获得的在触发RNAi方面观察到的增加的效力在理论上通过提供具有底物(27聚体)而非产物(21聚体)的Dicer来产生并且这改进了siRNA双链体进入RISC的速率或效率。
双链干扰RNA(例如，siRNA)的链可以连接来形成发夹或茎-环结构(例如，shRNA或sh-RNA)。因此，正如所提及的，本发明的一些实施方案的RNA沉默剂也可以是短发夹RNA(shRNA)。
如本文所用，术语“shRNA”或“sh-RNA”是指具有茎-环结构的RNA药剂，其包含互补序列的第一区域和第二区域，互补程度和区域的取向是足够的以使得在所述区域之间发生碱基配对，所述第一区域和所述第二区域由环区域连接，所述环由于环区域内的核苷酸(或核苷酸类似物)之间缺乏碱基配对而产生。所述环中的核苷酸的编号是在3至23、或5至15、或7至13、或4至9、或9至11之间(并包括在内)的编号。环中的一些核苷酸可能参与和环中的其它核苷酸的碱基对相互作用。
将了解的是，本发明的一些实施方案的RNA沉默剂不需要局限于仅含有RNA的那些分子，而是进一步涵盖化学修饰的核苷酸和非核苷酸。
在一些实施方案中，本文所提供的RNA沉默剂可能在功能上与穿膜肽相关联。如本文所用，“穿膜肽”是包含短(约12-30个残基)氨基酸序列或功能基序的肽，所述肽赋予与膜可渗透复合物穿过细胞的细胞质和/或核膜的转运相关联的能量独立性(即，非内吞)易位特性。
根据另一个实施方案，RNA沉默剂可以是miRNA或其模拟物。
术语“微小RNA”、“miRNA”和“miR”是同义词并且是指长度为约19-28个核苷酸的、调节基因表达的非编码单链RNA分子的集合。miRNA可见于广泛范围的生物体中并且已显示在发育、体内平衡和疾病病因学中起作用。
术语“微小RNA模拟物”是指能够进入RNAi途径并且调节基因表达的合成的非编码RNA。miRNA模拟物模拟内源性微小RNA(miRNA)的功能并且可以被称为称述的双链分子或模拟物前体(例如，或前体-miRNA)。miRNA模拟物可以包括修饰或未修饰的RNA、DNA、RNA-DNA杂交体或替代性核酸化学物(例如，LNA或2'-O,4'-C-乙烯-桥连核酸(ENA))。对于成熟的双链miRNA模拟物，双链体区域的肠道可以在13-33、18-24或21-23个核苷酸之间变化。miRNA也可以包含总计至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个核苷酸。miRNA的序列可以是前体-miRNA的前13-33个核苷酸。miRNA的序列也可以是前体-miRNA的最后13-33个核苷酸。
能够下调靶标的另一种药剂是能够特异性裂解靶标的mRNA转录物或DNA序列的DNA酶分子。DNA酶是能够裂解单链和双链靶序列的单链多核苷酸。(Breaker等人，Chemistry and Biology 1995；2:655；Santoro等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997；943:4262。)已提出DNA酶的一般模型(“10-23”模型)。“10-23”DNA酶具有15个脱氧核糖核苷酸的催化结构域，其侧接各自七至九个脱氧核糖核苷酸的两个底物识别结构域。这种类型的DNA酶可以有效地在嘌呤:嘧啶接合部处裂解底物RNA。(Santoro等人，；Khachigian,Curr.Opin.Mol.Ther.2002；4:119-121。)
靶标的下调也可以通过使用能够与编码所述靶标的mRNA转录物特异性杂交的反义多核苷酸来实现。
能够下调靶标的另一种药剂是能够特异性裂解编码靶标的mRNA转录物的核糖酶分子。核糖酶逐渐增加地用于通过裂解编码感兴趣蛋白质的mRNA来对基因表达进行序列特异性抑制。(Welch等人，Curr.Opin.Biotechnol.1998；9:486-96。)
能够下调靶标的另一种药剂是结合至所述靶标和/或裂解所述靶标的任何分子。此类分子可以是靶标的拮抗剂或靶标的抑制性肽。
将了解的是，靶标的至少一个催化或结合部分的非功能类似物也可以用作下调靶标的药剂。
可以连同本发明的下调靶标的一些实施方案一起使用的另一种药剂是预防靶标活化或底物结合的分子。
在一些实施方案中，给定蛋白质靶标的抑制剂通过结合至所述蛋白质、通过结合至一种化合物(所述化合物结合至所述蛋白质(例如，底物、调节性蛋白质))和/或通过结合至编码所述蛋白质的寡核苷酸(例如，mRNA)来抑制蛋白质。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是小分子(例如，其特征在于小于800Da的分子量)。在一些实施方案中，小分子MOSPD2抑制剂是生育酚或其衍生物(例如，α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚)、三萜(例如，角鲨烯)、维生素A或其衍生物(例如，视黄醛)、磷脂酰甘油(例如，磷脂酰肌醇)或磷脂(例如，磷脂酰胆碱、氧化的磷脂)。
在一些实施方案中，小分子MOSPD2抑制剂是具有根据以下式I的结构的氧化磷脂：
Figure BDA0001562455230000281
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
其中:
n是1至6的整数，其中当n是1时，Cn、Bn、Rn和Y是不存在的，并且C1连接至R'n；
B1、B2、……Bn-1和Bn各自独立地选自由氧、硫、氮、磷以及硅组成的组，由此所述氮、磷和硅中的每一个任选地被选自由以下组成的组的一个取代基取代：烷基、卤代基、环烷基、芳基、羟基、巯基、烷氧基、芳氧基、硫代芳氧基、硫代烷氧基以及氧代基；
A1、A2、……An-1和An中的每一个独立地选自由CR”R”'、C＝O和C＝S组成的组，
Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-二膦酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
Figure BDA0001562455230000291
其中:
B'和B”各自独立地选自由硫和氧组成的组；并且
D'和D”各自独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基取代的烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根；并且
X1、X2、……Xn-1的每一个独立地是具有以下通式II的饱和或不饱和烃：
Figure BDA0001562455230000292
其中m是1至26的整数；并且
Z选自由以下组成的组：
H、
Figure BDA0001562455230000301
以及–OR”，
其中W选自由氧和硫组成的组；
其中X1、X2、……Xn-1中的至少一个包含除氢之外的Z，
并且其中：
R1、R'1、R2、…Rn-1、Rn、R'n中的每一个、R”和R”'中的每一个以及Ra、R'a、Rb、R'b、…Rm-1、R'm-1、Rm和R'm中的每一个独立地选自由以下组成的组：键、氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧膦基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，或者可替代地，R1、R'1、R2、……Rn-1、Rn以及R'n中的至少两个和/或Ra、R'a、Rb、R'b、……Rm-1、R'm-1、Rm以及R'm中的至少两个形成至少一个四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环或者其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。在任何本文所述的实施方案中，氧化磷脂可以任何比率的立体异构混合物的形式，例如以基本上富集的单个对映体诸如R或S异构体(例如，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的对映体过量)的形式或者以两种对映体的混合物(例如，外消旋混合物)的形式；和/或以基本上富集的单个非对映体(例如具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更高的非对映体过量)的形式或者以两种或更多种非对映体的混合物的形式存在。
在一个实施方案中，适用于本发明的任何方法中的氧化磷脂具有根据以下式III的结构：
Figure BDA0001562455230000311
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
在式III中，n是选自1至4的整数。
在式III中，B1、每个B2和B3独立地选自由氧、硫和NR4组成的组，其中R4选自氢、烷基、环烷基、芳基以及酰基。
在式III中，A1和每个A2独立地选自由CReRee、CRe＝CRee、C＝O和C＝S组成的组，其中Re和Ree独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油以及具有以下通式的部分：
Figure BDA0001562455230000321
其中:
B和Ba各自独立地选自由硫和氧组成的组；并且
D和Da独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、氨基烷基、环烷基、膦酸根以及硫代膦酸根。
在式III中，X1和每个X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被选自由以下组成的组的氧化部分Z取代：
Figure BDA0001562455230000322
以及
Figure BDA0001562455230000323
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
在一个实施方案中，在式III中，X1和每个X2独立地具有以下通式IV：
Figure BDA0001562455230000324
在式IV中，m是选自1至26的整数。
在式IV中，Z选自由以下组成的组：
H、
Figure BDA0001562455230000331
以及OH，
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，
其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z。
在式III和式IV中，R1、R1a、每个R2、R3、R3a、Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸酯、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环，并且其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
在一个实施方案中，在式III中，n是1或2。在另一个实施方案中，在式III中，n是1。
在一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
在另一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
在另一个实施方案中，在式III中，Y选自由以下组成的组：磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
在一个实施方案中，在式III中，Y是磷酰基胆碱。
在一个实施方案中，在式III中，Z是
Figure BDA0001562455230000341
在另一个实施方案中，在式III中，Z是羧酸基团。
在另一个实施方案中，在式III中，n是1并且Y是磷酰基胆碱。
在另一个实施方案中，在式III中，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
在另一个实施方案中，在式III中，n是1，Y是磷酰基胆碱，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
在一个实施方案中，适用于本发明的任何方法中的氧化磷脂具有根据以下式IIIa的结构：
Figure BDA0001562455230000351
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
在式IIIa中，B1、B2和B3独立地选自氧和硫。
在式IIIa中，A1和A2独立地选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH、C＝O以及C＝S。
在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
在式IIIa中，R1、R1a、R2、R3以及R3a独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中R1、R1a、R2、R3以及R3a中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环，并且其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环；
在式IIIa中，X1和X2独立地是饱和或不饱和的直链或支链烃，其中X1和X2中的至少一个被具有选自以下的式的氧化部分Z取代：
Figure BDA0001562455230000361
以及
Figure BDA0001562455230000362
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基。
在一个实施方案中，在式IIIa中，X1和X2独立地具有根据以下式IVa的结构：
Figure BDA0001562455230000363
在式IVa中，m是选自1至26的整数。
在式IVa中，Ra、Raa、每个Rb、每个Rbb、Rc以及Rcc独立地选自由以下组成的组：氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、卤代基、三卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、硫代烷氧基、硫代芳氧基、膦酸根、磷酸根、氧磷基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰胺、酰胺、羰基、硫羰基、C-羧基、O-羧基、C-氨基甲酸根、N-氨基甲酸根、C-硫代羧基、S-硫代羧基以及氨基，其中Ra、Raa、Rb、Rbb、Rc以及Rcc中的至少两个任选地连接以形成四元、五元或六元芳环、杂芳环、脂环或杂脂环。
在式IVa中，Z选自由以下组成的组：
H、
Figure BDA0001562455230000371
以及ORd，
其中W是氧或硫；并且Rd和Rdd独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基以及杂芳基，其中X1和X2中的至少一个包含除氢之外的Z。
在一个实施方案中，在式IIIa中，Z是
Figure BDA0001562455230000372
在另一个实施方案中，在式IIIa中，Z是羧酸基团。
在一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、酰基、烷基、芳基、环烷基、羧基、糖、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺–N-戊二酸、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺以及磷酸甘油。
在一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：氢、磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
在另一个实施方案中，在式IIIa中，Y选自由以下组成的组：磷酰基胆碱和磷酰基乙醇胺。
在一个实施方案中，在式IIIa中，Y是磷酰基胆碱。
在另一个实施方案中，在式IIIa中，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
在另一个实施方案中，在式IIIa中，Y是磷酰基胆碱，B1、B2和B3中的每一个均是氧。
在一个实施方案中，在式IIIa中，氧化磷脂独立地具有根据以下式V的结构：
Figure BDA0001562455230000381
其中B1、B2、B3、A1、A2、X1、X2以及Y是如对于式IIIa所定义的。
在一个实施方案中，式V中的B1、B2、B3是氧并且氧化磷脂具有根据以下式VI的结构：
Figure BDA0001562455230000382
在式VI中，A1选自由以下组成的组：CH2、CH＝CH和C＝O。在一个实例中，在式VI中A1是CH2。
在式VI中，A2是不存在的或者是CH2。
在式VI中，X1是具有1至30个碳原子的烷基。
在式VI中，X2是
Figure BDA0001562455230000391
其中
E是不存在的或者是具有1至24个碳原子的烷基链；
F选自由以下组成的组：氢、羟基、烷基、烷氧基、卤化物、乙酰氧基以及芳基；并且
Z选自由以下组成的组：
Figure BDA0001562455230000392
以及-ORd，
其中Rd选自H、烷基和芳基。
在式VI中，Y选自由以下组成的组：氢、烷基、芳基、磷酸、磷酰基胆碱、磷酰基乙醇胺、磷酰基丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰心磷脂、磷脂酰肌醇、磷酰基心磷脂、磷酰基肌醇、乙基磷酸胆碱、磷酰基甲醇、磷酰基乙醇、磷酰基丙醇、磷酰基丁醇、磷酰基乙醇胺-N-乳糖、磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(丙二醇)]、磷酸肌醇-4-磷酸、磷酸肌醇-4,5-双磷酸、焦磷酸酯、磷酸乙醇胺-二乙烯三胺-五乙酸、二硝基苯基-磷酸乙醇胺、磷酸甘油。
在一个实施方案中，在式VI中，X1是具有10至30个碳原子或8至30个碳原子的烷基。
在一个实施方案中，在式VI中，E是具有1至10个碳原子或1至4个碳原子的烷基。
在一个实施方案中，在式VI中，Y是磷酰基胆碱。
在式I、II、III、IIIa、V以及VI中的每个碳原子是手性或非手性碳原子，其中每个手性碳原子可以具有S-构型或R-构型。
在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-甘油-3-磷酸胆碱。在另一个优选的实施方案中，氧化磷脂是(R)-1-十六烷基-2-(4'-羧基)丁基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。
在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是
Figure BDA0001562455230000401
或其药学上可接受的盐。
在一个优选的实施方案中，氧化磷脂是
Figure BDA0001562455230000402
或其药学上可接受的盐。
本文所述的小分子MOSPD2抑制剂可以在本文所述的任何方法中单独用作单一药剂或者其可以与另一种药剂(例如，另一种MOSPD2抑制剂或抗癌药)组合使用。
VB-201抑制人类体外单核细胞趋化性和在趋化因子受体下游活化的信号传导途径。相反，VB-201的衍生物VB-221不会抑制人类单核细胞中的趋化因子诱导的信号传导和迁移。还发现卵清蛋白标记的VB-201结合来自人类CD14单核细胞的细胞裂解物的MOSPD2并且使其沉淀。另外，用血球凝集素(HA)-标记的人类MOSPD2转染并且对于HA染色呈阳性的HEK293细胞与卵清蛋白标记的VB-201具有强结合，但与卵清蛋白标记的VB-221并不具有强结合。这些实验和其它实验表明，1)VB-201结合MOSPD2；2)Vb-201抑制细胞趋化性和趋化性介导的下游途径；并且3)添加VB-201会产生与MOSPD2的沉默相同的信号传导作用。
在任何本文所述的实施方案中，有用的小分子MOSPD2抑制剂包括当与VB-221相比时更强效的MOSPD2(例如，单核细胞或癌细胞的细胞表面上的人类MOSPD2)的抑制剂，例如具有与VB-221相比更低的IC50值的那些。更优选地，有用的小分子MOSPD2抑制剂包括当与VB-201相比时同等强效或更强效的MOSPD2(例如，单核细胞或癌细胞的细胞表面上的人类MOSPD2)的抑制剂，例如具有与VB-201相比更低的IC50值的那些。如本领域技术人员所理解的，IC50值指示特定药物或其它物质(抑制剂)将给定生物过程(或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制成一半的量。用于测定IC50值的方法是本领域中已知的。
当向受试者施用单独作为单一药剂的药物组合物中的小分子MOSPD2抑制剂(如本文所述的)或其与另一种药剂的组合时，小分子MOSPD2抑制剂(例如，VB-201)以一定量存在，以使得施用引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用小分子MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一个方面，施用小分子MOSPD2抑制剂引起MOSPD2的一种或多种活动(例如，调节癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、肿瘤相关性巨噬细胞的存在、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制。优选地，小分子MOSPD2抑制剂是VB-201。
在一些实施方案中，给定蛋白质的抑制剂通过结合至蛋白质和/或编码所述蛋白质的寡核苷酸(例如，mRNA)来抑制蛋白质。
在其它实施方案中，MOSPD2抑制剂是(i)特异性结合至MOSPD2多肽的经分离的结合分子、(ii)特异性结合至MOSPD2多肽的配体的经分离的结合分子、(iii)针对MOSPD2多肽产生的抗血清、(iv)可溶性MOSPD2多肽或者(v)包含MOSPD2多肽的细胞外结构域、基本上由所述结构域组成或由所述结构域组成的可溶性MOSPD2多肽。
在另一些其他实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2多肽的抗体。在其它实施方案中，抑制剂是特异性结合至MOSPD2多肽的抗体抗原结合片段。在其它实施方案中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、鼠抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体。在其它实施方案中，抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
在一些实施方案中，本文所述的特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段包括VH、VL或VH和VL。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。
在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一些实施方案中，VH包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含CDR1、CDR2、CDR3或其任何组合。
在一些实施方案中，VH、VL或VH和VL包含一个或多个框架区(FR)。在一些实施方案中，VH包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。在一些实施方案中，VL包含FR1、FR2、FR3、FR4或其任何组合。
在一个具体实施方案中，本文所述的特异性结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段包含含有CDR1、CDR2和CDR3的VH和含有CDR1、CDR2和CDR3的VL。
在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含恒定区。在一些实施方案中，轻链的恒定区包含人类κ轻链恒定区或人类λ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链的恒定区包含人类γ重链恒定区的氨基酸序列。已描述了人类恒定区序列的非限制性实例，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat,EA等人，(1991)。在一些实施方案中，已修饰恒定区氨基酸序列(例如，一个、两个或更多个氨基酸取代)，以使得其与天然人类序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。在另一个方面，本文提供识别或结合至MOSPD2的表位(例如，人类MOSPD2的表位)的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，本文提供识别或结合至与本文所述的抗体(例如，实施例1或8所述的抗体)相同的MOSPD2(例如，人类MOSPD2)表位或重叠表位的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，抗体或其抗原结合片段识别MOSPD2的超过一个表位(例如，两个、三个、四个、五个或六个表位)。
在某些实施方案中，MOSPD2的表位可以通过文献中所述的一种或多种方法来确定，所述方法例如NMR光谱学、X-射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱分析(例如，MALDI质谱分析)相联接的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)。对于X-射线晶体学，结晶可以使用文献中所述的方法来实现(例如，GiegéR等人，(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可以使用已熟知的X-射线衍射技术进行研究并且可以使用计算机软件精炼，所述软件诸如X-PLOR(Yale University,1992,由Molecular Simulations,Inc.分销；参见例如Meth Enzymol(1985)第114和115卷，WyckoffHW等人编辑；美国专利申请号2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)ActaCrystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1):37-60；Bricogne G(1997)Meth Enzymol276A:361-423，Carter CW编辑；Roversi P等人，(2000)Acta Crystallogr D BiolCrystallogr 56(Pt 10):1316-1323)。诱变作图研究可以使用文献中所述的方法来实现。关于诱变技术的描述，参见例如，Champe M等人，(1995)同上和Cunningham BC&Wells JA(1989)同上，所述诱变技术包括丙氨酸扫描诱变技术。在一个特定实施方案中，抗体或其抗原结合片段的表位使用丙氨酸扫描诱变研究来确定。抗体的表位表征也可以通过以下文献中提高的方法来确定：Ravn等人，Journal of Biological Chemistry 288:19760-19772(2013)。
另外，识别或结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的相同或重叠表位的抗体或其抗原结合片段可使用常规技术(诸如免疫测定)，例如通过显示一种抗体阻断另一抗体与靶抗原结合的能力(即竞争性结合测定)来鉴定。在某一测定中可以测定竞争性结合，其中所测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原(诸如MOSPD2)特异性结合。已描述了许多类型的竞争结合测定，例如：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli C等人，(1983)Methods Enzymol 9:242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland TN等人，(1986)J Immunol 137:3614-9)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow E&Lane D,(1988)Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel GA等人，(1988)Mol Immunol 25(1):7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung RC等人，(1990)Virology 176:546-52)；以及直接标记RIA(Moldenhauer G等人，(1990)Scand J Immunol 32:77-82)。通常，所述测定涉及使用结合至固体表面的纯化抗原(例如MOSPD2，诸如人类MOSPD2)，或带有这些未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白中任一者的细胞。竞争性抑制可以通过测定在测试免疫球蛋白存在下结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争性抗体过量存在时，其将使参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少50％-55％、55％-60％、60％-65％、65％-70％、70％-75％或更多。竞争结合测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以大量不同的格式配置。在此测定的常见版本中，将抗原固定至96孔板上。然后使用放射性标记或酶标记测量标记的抗体阻断标记的抗体与抗原的结合的能力。关于进一步细节，参见例如Wagener C等人，(1983)J Immunol 130:2308-2315；Wagener C等人，(1984)J ImmunolMethods 68:269-274；Kuroki M等人，(1990)Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M等人，(1992)Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M等人，(1992)Hybridoma 11:391-407以及Antibodies:A Laboratory Manual,Ed Harlow E&Lane D编辑，同上，第386-389页。
在一个实施方案中，竞争测定使用表面等离振子共振
Figure BDA0001562455230000451
例如通过“串联方法”，诸如Abdiche YN等人，(2009)Analytical Biochem 386:172-180所述的方法来进行，从而使MOSPD2抗原固定在芯片表面上，例如CM5传感器芯片，并且然后所述芯片上运行抗-MOSPD2抗体。为了确定抗体或其抗原结合片段是否与本文所述的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段竞争，首先在芯片表面上运行抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段以实现饱和并且然后添加潜在的竞争性抗体。然后可以测定竞争性抗体的结合并且将其相对于非竞争性对照来定量。
在某些方面，竞争结合测定可以用于确定抗体或其抗原结合片段是否例如以剂量依赖性方式被另一种抗体竞争性阻断，例如当两种抗体在竞争结合测定诸如竞争性ELISA测定中识别相同或空间上重叠的表位时，一种抗体基本上结合与参考抗体相同的表位或重叠表位，所述测定可以使用标记的抗原或标记的抗体以所有数目的不同形式配置。在一个具体实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以在竞争结合测定中使用本文所述的抗体(例如，实施例1或8中的那些)、或其嵌合抗体或Fab抗体、或包含本文所述的抗体的VH CDR和VLCDR的抗体(例如，实施例1或8中的那些)进行测试。
因此，在某一方面，本文提供与本文所述的抗体(例如，实施例1或8)竞争(例如，以剂量依赖性方式)结合至MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的抗体或其抗原结合片段，如使用本领域技术人员已知的或本文所述的测定(例如，ELISA竞争测定、表面等离振子共振或斯卡查德(Scatchard)分析)来确定的。
在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：508-517、501-514、233-241、509-517、212-221、13-24、505-517、505-514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及497-517。
在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约508至约517、约501至约514、约233至约241、约509至约517、约212至约221、约13至约24、约505至约517、约505至约514、约89至约100、约506至约517、约233至约245、约504至约514、约128至约136、约218至约226、约15至约24、约83至约96、约42至约50、约462至约474、约340至约351、约504至约517、约462至约470、约327至约337、约21至约32、约217至约226、约510至约517、约178至约190、约497至约509、约504至约516、约64至约77、约504至约515、约147至约159、约503至约515、约88至约97、约208至约218、约178至约191、约502至约515、约503至约516、约497至约505、约500至约509、约189至约202、约189至约197、约505至约516、约1至约63、约82至约239、约93至约234、约327至约445、约327至约431以及约497至约517。
在一些实施方案中，本发明的抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至MOSPD2的以下氨基酸区域(表位)中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：约505至约515、约500至约515、约230至约240、约510至约520、约210至约220、约15至约25、约505至约520、约505至约515、约90至约100、约505至约525、约230至约245、约505至约510、约130至约140、约220至约230、约15至约30、约80至约95、约40至约50、约460至约475、约340至约350、约500至约515、约460至约470、约325至约335、约20至约35、约215至约225、约510至约520、约175至约190、约500至约510、约505至约530、约60至约75、约500至约520、约145至约160、约502至约515、约85至约100、约205至约220、约175至约190、约500至约505、约500至约525、约495至约505、约495至约510、约190至约200、约190至约198、约502至约515、约1至约60、约80至约240、约90至约235、约330至约445、约330至约430以及约495至约515。
在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段以以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)结合至MOSPD2：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10- 8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10- 11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约1031/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约1051/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
在另一些其他实施方案中，MOSPD2的抑制剂是RNAi、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA、诱饵分子、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA、双链RNA、能够生成RNA干扰的分子或其组合。在一些实施方案中，抑制剂与编码MOSPD2多肽的核苷酸序列杂交。在一些实施方案中，杂交是在严格条件下或在高度严格条件下。
在一些实施方案中，抑制剂是成簇有规律地间隔的短回文重复CRISPR-CAS9体系。
在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID NO:1-4中的任一个约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ ID No:1-4中的任一个有75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在其它实施方案中，MOSPD2多肽具有与SEQ IDNO:1-4中的任一个有约75％至100％同一性或其值的任何范围，例如与SEQ ID NO:1-4中的任一个有约80％至100％同一性、约85％至100％同一性、约90％至100％同一性、约95％至100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的序列。
在本发明的其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID No:1-4中的任一个75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多核苷酸序列编码。在其它实施方案中，MOSPD2多肽由与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约75％至100％同一性或其值的任何范围，例如与SEQ ID NO:5-8中的任一个具有约80％至100％同一性、约85％至100％同一性、约90％至100％同一性、约95％至100％同一性、约96％至100％同一性、约97％至100％同一性、约98％至100％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约99％同一性、约80％至约99％同一性、约85％至约99％同一性、约90％至约99％同一性、约95％至约99％同一性、约96％至约99％同一性、约97％至约99％同一性、约98％至约99％同一性、约99％至约100％同一性、约75％至约95％同一性、约80％至约95％同一性、约85％至约95％同一性或约90％至约95％同一性的多核苷酸序列编码。
在任何本文所述的实施方案中，MOSPD2的抑制剂可以是由癌细胞(例如，人类癌细胞)表达的MOSPD2的抑制剂。癌细胞的类型的非穷举性列表包括以下细胞：膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、造血细胞癌、间充质源型癌、中枢或外周神经系统癌、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤以及恶性腹水。在一些实施方案中，癌症是小细胞肺癌或非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症是皮肤癌，例如鳞状细胞癌、基底细胞癌、黑素瘤、隆突性皮纤维肉瘤、梅克尔细胞癌(Merkel cell carcinoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、角化棘皮瘤、梭形细胞肿瘤、皮脂腺癌、微囊肿性附属器癌、乳腺佩吉特氏病(Paget'sdisease)、非典型纤维黄色瘤、平滑肌肉瘤或血管肉瘤。在一些实施方案中，癌症是淋巴系造血细胞癌，例如白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、多毛细胞淋巴瘤或伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)。在一些实施方案中，癌症是髓系造血细胞癌，例如纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤或骨肉瘤。在一些实施方案中，癌症是中枢或外周神经系统癌症，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤或神经鞘瘤。在一些实施方案中，癌症是肛门癌、骨癌、胃肠道间质癌(gastrointestinalstomal cancer)、妊娠性滋养层细胞病、霍奇金氏淋巴瘤、卡波西肉瘤、角化棘皮瘤、恶性间皮瘤、多中心卡斯特莱曼病(multicentric castleman disease)、多发性骨髓瘤和其它浆细胞赘生物、骨髓增生性赘生物、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌、阴茎癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、精原细胞瘤、软组织肉瘤、胃(胃部)癌、睾丸癌、畸胎癌、甲状腺滤泡癌、阴道癌、外阴癌、威尔姆氏瘤(Wilms tumor)和其它儿童肾癌以及着色性干皮病。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
药物组合物
本发明的其它实施方案涉及一种包含MOSPD2(例如，由癌细胞表达的MOSPD2)的抑制剂的药物组合物。在其它实施方案中，药物组合物包含MOSPD2(例如，由癌细胞表达的MOSPD2)的抑制剂和药学上可接受的载体。在其它实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的MOSPD2(例如，由癌细胞表达的MOSPD2)抑制剂。本文描述了示例性MOSPD2的抑制剂。本文还描述了适合类型的癌症。
在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml、或约10μg/ml。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)以一定量存在，以使得MOSPD2抑制剂的施用引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2，例如由人类癌细胞表达的MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。在一些实施方案中，向人类受试者施用MOSPD2抑制剂引起人类MOSPD2(例如，由人类癌细胞表达的MOSPD2)的一种或多种活动的至少10％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或更高)抑制。
在另一个方面，施用MOSPD2抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2的一种或多种活动(例如，调节癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、肿瘤相关性巨噬细胞的存在、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制。
如本文所用，“药物组合物”是指如本文所述的一种或多种药剂(例如，MOSPD2抑制剂或MOSPD2抑制剂和本文所述的一种或多种其它药剂)或其生理学上可接受的盐或前药与其它化学组分的制备物，所述化学组分包括但不限于药学上可接受的载体、赋形剂、润滑剂、缓冲剂、抗菌剂、填充剂(例如，甘露糖醇)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸或亚硫酸氢钠)以及类似组分。药物组合物的目的是有利于向受试者施用药剂。
如本文所用，向受试者“施用(administration/administering)”包括但不限于为受试者开出本发明的药物组合物处方的医生或其它医学专家的作用。施用可以是局部施用，例如肿瘤内施用。
在本文中，短语“药学上可接受的载体”是指不会对受试者引起显著刺激并且不会消除本文所述的药剂的生物活性和特性的载体或稀释剂。
如本文所用，术语“载体”是指使用其来施用治疗剂的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
在本文中，术语“赋形剂”是指添加到药物组合物中以进一步有利于活性成分的施用的惰性物质。
在一些实施方案中，包含MOSPD2抑制剂的药物组合物还包含一种或多种另外的活性剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的活性剂是抗癌药。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的活性剂是抗增殖剂。
在任何本文所述的实施方案中，有用的抗癌药包括本领域已知的那些，例如由管理机构诸如美国食品药品管理局(US FDA)批准使用的那些抗癌药或类似抗癌药。一些有用的抗癌药由美国国家癌症研究所在http://www.cancer.gov/about-cancer/treatment/ drugs处列出。示例性有用的抗癌药包括批准(例如，由US FDA)用于以下各项的那些：肛门癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃肠道间质癌、妊娠性滋养层细胞病、头颈癌、霍奇金氏淋巴瘤、卡波西肉瘤、肾(肾细胞)癌、白血病、肝癌、肺癌、恶性间皮瘤、黑素瘤、多中心卡斯特莱曼病、多发性骨髓瘤和其它浆细胞赘生物、骨髓增生性赘生物、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌、胰腺癌、阴茎癌、前列腺癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、胃(胃部)癌、睾丸癌、甲状腺癌、阴道癌、外阴癌以及威尔姆氏瘤和其它儿童肾癌。
在任何本文所述的实施方案中，抗癌药可以选自由以下组成的组：乙酸阿比特龙、必除癌(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(色瑞替尼(Brentuximab Vedotin))、ADE、Ado-曲妥珠单抗美坦辛(Trastuzumab Emtansine)、阿霉素(盐酸多柔比星)、Adrucil(氟尿嘧啶)、二马来酸阿法替尼、癌伏妥(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛司琼)、艾特乐(咪喹莫特)、阿地白介素、阿仑单抗、力比泰(培美曲塞二钠)、阿乐喜(盐酸帕洛司琼)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨基酮戊酸、阿那曲唑、阿瑞吡坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、阿伦(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、菊欧文氏菌天冬酰胺酶、阿瓦斯丁(贝伐单抗)、阿西替尼、阿扎胞苷、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司、BEP、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和I 131碘托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博莱霉素、博纳吐单抗、Blincyto(博纳吐单抗)、波替单抗、Bosulif(伯舒替尼)、伯舒替尼、色瑞替尼、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、卡博替尼-S-苹果酸、CAF、坎帕斯(Campath)(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、卡铂、卡铂-他克唑、卡非佐米(Carfilzomib)、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士德(比卡鲁胺)、CeeNU(洛莫司汀)、色瑞替尼、司比定(Cerubidine)(盐酸柔红霉素)、卉妍康(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-脱氢可的松、CHOP、顺铂、Clafen(环磷酰胺)、克罗拉滨、CMF、Cometriq(卡博替尼-S-苹果酸)、COPP、COPP-ABV、可美净(更生霉素)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、脂质体阿糖胞苷、Cytosar-U(阿糖胞苷)、癌得星(环磷酰胺)、达拉菲尼、达卡巴嗪、达克金(地西他滨)、更生霉素、达沙替尼、盐酸柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼白介素(DenileukinDiftitox)、地诺单抗、DepoCyt(脂质体阿糖胞苷)、DepoFoam(脂质体阿糖胞苷)、盐酸右雷佐生、地图努西单抗(Dinutuximab)、多西他赛、Doxil(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、Efudex(氟尿嘧啶)、埃立特(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、乐沙定(奥沙利铂)、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、Emend(阿瑞吡坦)、恩扎鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、艾比特思(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉(Vismodegib))、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(菊欧文氏菌天冬酰胺酶)、凡毕复(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、依西美坦、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、Faslodex(氟维司群)、FEC、弗隆(来曲唑)、非格司亭、福达华(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、Folex(甲氨蝶呤)、Folex PFS(甲氨蝶呤)、Folfiri、Folfiri-贝伐单抗、Folfiri-西妥昔单抗、Folfirinox、Folflox、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、加德西(重组HPV四价疫苗)、加德西9(重组HPV九价疫苗)、Gazyva(奥滨尤妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥唑米星、健择(盐酸吉西他滨)、吉泰瑞(二马来酸阿法替尼)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel晶片(卡莫司汀植入物)、羧肽酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、贺癌平(曲妥珠单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、美新(盐酸拓扑替康)、Hyper-CVAD、爱博新(帕布昔利布)、替伊莫单抗(Ibritumomab Tiuxetan)、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸普纳替尼)、埃得霉素(Idamycin)(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、艾代拉里斯(Idelalisib)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、咪喹莫特、Inlyta(阿西替尼)、Intron A(重组干扰素α-2b)、碘131托西莫单抗和托西莫单抗、易普利单抗(Ipilimumab)、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸依立替康、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(Ado-曲妥珠单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、Keytruda(派姆单抗)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、留可然(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、左聚糖(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、脂质体阿糖胞苷、洛莫司汀、Lupron(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-Ped(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-3Month(醋酸亮丙瑞林)、Lupron Depot-4Month(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、Matulane(盐酸甲基苄肼)、盐酸氮芥、美可治(Megace)(醋酸甲地孕酮)、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、巯嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、Mutamycin(丝裂霉素C)、马勒兰(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、米罗他(吉妥珠单抗奥唑米星)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白-稳定化纳米颗粒制剂)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、奈妥吡坦和盐酸帕洛司琼、Neupogen(非格司亭)、Nexavar(甲苯磺酸索拉非尼)、尼罗替尼、纳武单抗(Nivolumab)、诺瓦得士(柠檬酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥滨尤妥珠单抗(Obinutuzumab)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、高三尖杉酯碱(OmacetaxineMepesuccinate)、Oncaspar(培门冬酶)、Ontak(地尼白介素(Denileukin Diftitox))、Opdivo(纳武单抗)、OPPA、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定化纳米颗粒制剂、PAD、帕布昔利布、帕利夫明、盐酸帕洛司琼、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、伯尔定(卡铂)、盐酸帕左潘尼、培门冬酶、聚乙二醇干扰素α-2b、佩乐能(PEG-Intron)(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(培妥珠单抗)、培妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸帕纳替尼、普拉曲沙、脱氢可的松、盐酸甲基苄肼、Proleukin(阿地白介素)、Prolia(地诺单抗)、Promacta(艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、Provenge(西普鲁塞-T(Sipuleucel-T))、Purinethol(巯嘌呤)、Purixan(巯嘌呤)、镭223二氯化物、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人类乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人类乳头瘤病毒(HPV)九价疫苗、重组人类乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、R-EPOCH、瑞复美(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、美罗华(利妥昔单抗)、利妥昔单抗、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸柔红霉素)、磷酸鲁索替尼、Sclerosol胸膜内气溶胶(滑石)、司妥昔单抗、西普鲁塞-T、索马杜林贮库(醋酸兰瑞肽)、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石)、Steritalc(滑石)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、Sutent(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、昔诺韦(沙利度胺)、Synribo(高三尖杉酯碱)、TAC、Tafinlar(达拉菲尼)、滑石、柠檬酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼罗替尼)、他克唑(紫杉醇)、泰素帝(多西他赛)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、反应停(沙利度胺)、噻替派、拓扑杀(依托泊苷)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、Torisel(替西罗莫司)、托西莫单抗和I 131碘托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、曲美替尼、曲妥珠单抗、Treanda(盐酸苯达莫司)、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(地努图西单抗)、凡德他尼、VAMP、Vectibix(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春花碱)、万珂(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春花碱)、维罗非尼、VePesid(依托泊苷)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春花碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、维莫德吉、Voraxaze(羧肽酶)、伏立诺他、福退癌(盐酸帕左潘尼)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、Xofigo(镭223二氯化物)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(易普利单抗)、Zaltrap(Ziv-阿柏西普)、泽波拉夫(Zelboraf)(维罗非尼)、泽娃灵(Zevalin)(替伊莫单抗(Ibritumomab Tiuxetan))、Zinecard(盐酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、诺雷德(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、Zometa(唑来膦酸)、Zydelig(艾代拉里斯)、Zykadia(色瑞替尼)以及Zytiga(醋酸阿比特龙)。
当施用呈药物组合物形式的两种或更多种药剂时，每种药剂可以任选地以单独组合物施用和/或经由不同施用路径施用。每种药剂可能的施用路径独立地包括但不限于胃肠外施用、经粘膜施用、经直肠施用、经颊施用和/或吸入(例如，如本文所述的)。
在一些实施方案中，药物组合物适用于全身或局部施用。在其它实施方案中，药物组合物适用于经鼻、经口或腹膜内施用。在其它实施方案中，药物组合物适用于静脉内施用、肌肉内施用或皮下施用。在其它实施方案中，药物组合物适用于肿瘤内施用。
癌症和转移瘤中的使用方法
在一些实施方案中，本发明涉及以下发现：癌细胞中的MOSPD2表达与其非癌对应物相比上调。如实施例部分所示的，MOSPD2表达已在各种类型的癌细胞中阳性鉴定到，这些类型例如膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)以及肝癌(例如，肝细胞癌)，但在配对的正常非癌细胞中并未鉴定到。另外，通过沉默MOSPD2表达或在各种类型的癌细胞中施用抗-MOSPD2F(ab')2mAb来抑制MOSPD2，抑制了癌细胞在体外和体内的迁移和转移。
本发明的实施方案涉及用于使用MOSPD2的抑制剂治疗、预防癌细胞转移或减少所述癌细胞转移的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2的抑制剂。在其它实施方案中，MOSPD2由癌细胞表达。示例性MOSPD2抑制剂包括本文所述的那些。本文还描述了适合类型的癌症。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
本发明的实施方案还涉及使用MOSPD2的抑制剂治疗、预防癌症或减少所述癌症的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂。在其它实施方案中，MOSPD2由癌细胞表达。在一些实施方案中，所述方法还包括施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂和另一种抗癌药。示例性MOSPD2抑制剂和抗癌药包括本文所述的那些。本文还描述了适合类型的癌症。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
本发明的实施方案还涉及使用MOSPD2的抑制剂治疗、预防转移癌或减少所述转移癌的发生率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂和另一种抗癌药。在一些实施方案中，施用是局部的，例如肿瘤内施用。在一些实施方案中，MOSPD2由转移癌细胞表达。示例性MOSPD2抑制剂和抗癌药包括本文所述的那些。本文还描述了适合类型的癌症。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、脑癌(例如，脑星形细胞瘤)、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠腺癌)、食道癌(例如，食道腺癌)、肺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤)、舌癌(例如，头颈(舌)细胞癌)、肾癌(例如，肾透明细胞癌)或肝癌(例如，肝细胞癌)。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是例如具有以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)的本文所述的抗体或抗体抗原结合片段：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约1031/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约1051/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物或人。在其它实施方案中，MOSPD2是哺乳动物MOSPD2或人类MOSPD2。
抑制或预防癌细胞中的或癌细胞的一种或多种活动的方法
本发明的实施方案还涉及抑制或预防癌细胞中的或者癌细胞的一种或多种活动的方法，其包括施用MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括向有需要的受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂。在一些实施方案中，施用是局部施用，例如肿瘤内施用。示例性MOSPD2抑制剂包括本文所述的那些。本文还描述了适合类型的癌症。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是例如具有以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)的本文所述的抗体或抗体抗原结合片段：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约1031/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约1051/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的至少约10％(例如，至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或更高)抑制。在其它实施方案中，施用MOSPD2抑制剂(例如，抗体或其抗原结合片段)引起MOSPD2(例如，人类MOSPD2)的一种或多种活动(例如，MOSPD2表达、调节癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化)的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制。在一个方面，施用MOSPD2抗体或其抗原结合片段引起癌细胞迁移(例如，EGF-诱导的迁移)的约10％至100％、约10％至约99％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约70％、约20％至约99％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约30％至约95％、约30％至约90％、约30％至约85％、约30％至约80％、约40％至约95％、约40％至约90％、约40％至约85％、约40％至约80％、约50％至约95％、约50％至约90％、约50％至约85％、约50％至约80％、约60％至约95％、约60％至约90％、约60％至约85％或约60％至约80％抑制。
在一些实施方案中，所述一种或多种活动是以下中的一种或多种：MOSPD2表达、癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化。在一些实施方案中，抑制了至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种或所有这些活动。
在一些实施方案中，抑制了至少癌细胞迁移和趋化因子信号传导途径。在其它实施方案中，抑制趋化因子信号传导途径或生长因子信号传导途径是抑制EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化和/或FAK磷酸化。在其它实施方案中，癌细胞迁移或与肿瘤生长相关的单核细胞迁移(例如，肿瘤相关性巨噬细胞的存在)通过超过一种趋化因子或生长因子(例如，EGF)或趋化因子受体或生长因子受体(例如，EGFR)来诱导。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物或人。在其它实施方案中，MOSPD2是哺乳动物MOSPD2或人类MOSPD2。
诱导肿瘤相关性巨噬细胞或肿瘤相关性巨噬细胞迁移的方法
肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)通常可见于肿瘤团块附近或内部。TAM被认为是对于肿瘤生长十分重要的。TAM大部分来源于循环单核细胞并且其募集到肿瘤是由肿瘤来源的趋化因子驱动的。TAM通过分泌广泛范围的生长因子和促血管生成因子来促进肿瘤细胞增殖和转移。因此，具有高数目的TAM的许多肿瘤具有增加的肿瘤生长速率、局部增殖和远距离转移。实际上，TAM浸润的程度已用作乳腺癌、头颈癌、前列腺癌和子宫癌的逆预后预测因素(R.D.Leek、R.Landers、S.B.Fox、F.Ng、A.L.Harris、C.E.Lewis，British journal ofcancer 1998,77,2246；M.R.Young、M.A.Wright、Y.Lozano、M.M.Prechel、J.Benefield、J.P.Leonetti、S.L.Collins、G.J.Petruzzelli，International Journal of Cancer1997,74,69；I.F.Lissbrant、P.Stattin、P.Wikstrom、J.E.Damber、L.Egevad、A.Bergh，International journal of oncology 2000,17,445；H.B.Salvesen、L.A.Akslen，International Journal of Cancer 1999,84,538)。TAM在肿瘤组织中也是显著的，在乳腺癌中占细胞团块的多至80％。
本发明的一些实施方案涉及用于治疗癌症、减少癌症发生率或预防癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2(例如，由循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞表达的MOSPD2)抑制剂，以减少癌症团块附近或内部的肿瘤相关性巨噬细胞的数目或减少肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。本发明的一些实施方案涉及用于治疗、预防癌症转移或减少癌症转移的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的MOSPD2(例如，由循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞表达的MOSPD2)抑制剂，以减少癌症团块附近或内部的肿瘤相关性巨噬细胞的数目或减少肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。在一些实施方案中，施用是局部施用，例如肿瘤内施用。在一些实施方案中，与基线相比，所述施用有效于将肿瘤相关性巨噬细胞的数目或迁移减少至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％或上述百分比之间的任何数值。
在一些实施方案中，与基线相比，所述施用有效于将肿瘤相关性巨噬细胞的数目或迁移减少约5％、约10％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或100％或上述百分比之间的任何数值。
在其它实施方案中，与基线相比，所述施用有效于将肿瘤相关性巨噬细胞的数目或迁移减少约5％至100％或约5％至约95％、约5％至约90％、约5％至约80％、约5％至约70％、约5％至约60％、约5％至约50％、约5％至约40％、约5％至约30％、约10％至100％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约20％至100％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约80％、约20％至约70％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％或本文所述值的任何其它范围。
本领域已知的任何测定可以用于测量肿瘤相关性巨噬细胞密度或数目，诸如使用特异性检测巨噬细胞的抗体对肿瘤切片进行的免疫组织化学染色。参见，例如美国专利公布号2007/0218116和2011/0311616。示例性MOSPD2抑制剂包括本文所述的那些。本文还描述了适合类型的癌症。在一些实施方案中，所述癌症为乳腺癌、头颈癌、前列腺癌或子宫癌。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是例如具有以下抗体-抗原平衡解离常数(KD)的本文所述的抗体或抗体抗原结合片段：约10-6M至约10-12M或其值的任何范围(例如，约10-7M至约10-12、10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M、约10-11M至约10-12M、约10-6M至约10-11M、约10-7M至约10-11M、约10-8M至约10-11M、约10-9M至约10-11M、约10-10M至约10-11M、约10-6M至约10-10M、约10-7M至约10-10M、约10-8M至约10-10M、约10-9M至约10-10M、约10-6M至约10-9M、约10-7M至约10-9M、约10-8M至约10-9M、约10-6M至约10-8M或约10-7M至约10-8)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有的KD为约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M或约10-12M。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至MOSPD2上的一个或多个表位。在一些实施方案中，KD通过斯卡查德分析、表面等离振子共振或本文所述的其他方法来测定，在一些实施方案中是在37℃下测定。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Kon结合至MOSPD2：约1031/Ms至约106 1/Ms或其值的任何范围(例如，约103 1/Ms至约105 1/Ms、约104 1/Ms至约1051/Ms、约104 1/Ms至约106 1/Ms、约105 1/Ms至约106 1/Ms或约103 1/Ms至约104 1/Ms)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Kon为约103 1/Ms、约104 1/Ms、约105 1/Ms或约106 1/Ms。
在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段以以下Koff结合至MOSPD2：约10-3 1/s至约10-6 1/s或其值的任何范围(例如，约10-3 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-5 1/s、约10-4 1/s至约10-6 1/s、约10-5 1/s至约10-6 1/s或约10-3 1/s至约10-4 1/s)。在其它实施方案中，抗体或抗原结合片段具有的Koff为约10-3 1/s、约10-4 1/s、约10-5 1/s或约10-6 1/s。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml至约10μg/ml或其值的任何范围(例如，约2μg/ml至约10μg/ml、约3μg/ml至约10μg/ml、约4μg/ml至约10μg/ml、约5μg/ml至约10μg/ml、约6μg/ml至约10μg/ml、约7μg/ml至约10μg/ml、约8μg/ml至约10μg/ml、约9μg/ml至约10μg/ml、约1μg/ml至约9μg/ml、约2μg/ml至约9μg/ml、约3μg/ml至约9μg/ml、约4μg/ml至约9μg/ml、约5μg/ml至约9μg/ml、约6μg/ml至约9μg/ml、约7μg/ml至约9μg/ml、约8μg/ml至约9μg/ml、约1μg/ml至约8μg/ml、约2μg/ml至约8μg/ml、约3μg/ml至约8μg/ml、约4μg/ml至约8μg/ml、约5μg/ml至约8μg/ml、约6μg/ml至约8μg/ml、约7μg/ml至约8μg/ml、约1μg/ml至约7μg/ml、约2μg/ml至约7μg/ml、约3μg/ml至约7μg/ml、约4μg/ml至约7μg/ml、约5μg/ml至约7μg/ml、约6μg/ml至约7μg/ml、约1μg/ml至约6μg/ml、约2μg/ml至约6μg/ml、约3μg/ml至约6μg/ml、约4μg/ml至约6μg/ml、约5μg/ml至约6μg/ml、约1μg/ml至约5μg/ml、约2μg/ml至约5μg/ml、约3μg/ml至约5μg/ml、约4μg/ml至约5μg/ml、约1μg/ml至约4μg/ml、约2μg/ml至约4μg/ml、约3μg/ml至约4μg/ml、约1μg/ml至约3μg/ml、约2μg/ml至约3μg/ml或约1μg/ml至约2μg/ml)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约1μg/ml、约2μg/ml、约3μg/ml、约4μg/ml、约5μg/ml、约6μg/ml、约7μg/ml、约8μg/ml、约9μg/ml或约10μg/ml。
在一些实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg至约40mg/kg或其值的任何范围(例如，约15mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约25mg/kg至约40mg/kg、约30mg/kg至约40mg/kg、约35mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约35mg/kg、约15mg/kg至约35mg/kg、约20mg/kg至约35mg/kg、约25mg/kg至约35mg/kg、约30mg/kg至约35mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约15mg/kg至约30mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg、约25mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约25mg/kg、约15mg/kg至约25mg/kg、约20mg/kg至约25mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约15mg/kg至约20mg/kg或约10mg/kg至约15mg/kg)。在其它实施方案中，MOSPD2的抑制剂是抗体或抗体抗原结合片段，并且治疗有效量是约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物或人。在其它实施方案中，MOSPD2是哺乳动物MOSPD2或人类MOSPD2。
诊断方法
发明人已发现MOSPD2在不同类型的癌细胞和肿瘤的表面上并且在已浸润到发炎组织中或与肿瘤相关的炎性细胞上表达。发明人还已发现MOSPD2表达与不同类型的肿瘤的肿瘤级别相关地增加。因此，在一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症或癌症转移(例如，乳腺癌、结肠癌、肝癌、黑素瘤或本文所述的其它类型的癌症)的方法，其包括测定受试者样品中的MOSPD2表达水平。在另一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的肿瘤进展或侵袭的方法，其包括测定受试者样品中的MOSPD2表达水平。在这些方法的一个实施方案中，MOSPD2的表达水平是MOSPD2基因表达水平。在另一个实施方案中，MOSPD2的表达水平是MOSPD2蛋白质表达水平。
在一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症(例如，乳腺癌、结肠癌、肝癌、黑素瘤或本文所述的其它类型的癌症)的体外方法，其包括测定或定量受试者样品中的MOSPD2表达水平。在另一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症(例如，乳腺癌、结肠癌、肝癌、黑素瘤或本文所述的其它类型的癌症)的体外方法，其包括(i)测定或定量受试者样品中的MOSPD2表达水平并且(ii)将步骤(i)中获得的表达水平与对照或参考值相比较，其中MOSPD2的表达水平相对于对照或参考值增加指示癌症或增加的发展癌症的风险。在一些实施方案中，如果MOSPD2表达存在于受试者的样品中，那么受试者患有癌症或者具有增加的癌症风险。在其它实施方案中，如果MOSPD2表达以大于MOSPD2表达的对照或参考值的量存在于受试者的样品中，那么受试者患有癌症或者具有增加的癌症风险。
在一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症转移(例如，乳腺癌、结肠癌、肝癌、黑素瘤或本文所述的其它类型的癌症)的体外方法，其包括测定或定量受试者样品中的MOSPD2表达水平。在另一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症转移(例如，乳腺癌、结肠癌、肝癌、黑素瘤或本文所述的其它类型的癌症)的体外方法，其包括(i)测定或定量受试者样品中的MOSPD2表达水平并且(ii)将步骤(i)中获得的表达水平与对照或参考值相比较，其中MOSPD2的表达水平相对于对照或参考值增加指示癌症转移或增加的癌症转移的风险。在一些实施方案中，如果MOSPD2表达存在于受试者的样品中，那么受试者患有癌症转移或者具有增加的癌症转移风险。在其它实施方案中，如果MOSPD2表达以大于MOSPD2表达的对照或参考值的量存在于受试者的样品中，那么受试者患有癌症转移或者具有增加的癌症转移风险。
在一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的肿瘤进展(例如，增加的肿瘤级别)或侵袭的体外方法，其包括测定或定量受试者样品中的MOSPD2表达水平。在另一个方面，本发明涉及一种用于预测、诊断或预后受试者中的癌症进展(例如，增加的肿瘤级别)或侵袭的体外方法，其包括(i)测定或定量受试者样品中的MOSPD2的表达水平并且(ii)将步骤(i)中获得的表达水平与对照或参考值相比较，其中MOSPD2的表达水平相对于对照或参考值增加指示肿瘤进展(例如，增加的肿瘤级别)或侵袭或者增加的肿瘤进展或侵袭的风险。在一些实施方案中，如果MOSPD2表达存在于受试者的样品中，那么受试者具有肿瘤进展或侵袭或者具有增加的肿瘤进展或侵袭风险。在其它实施方案中，如果MOSPD2表达以大于对照或参考值的MOSPD2表达的量存在于受试者的样品中，那么受试者具有肿瘤进展或肿瘤侵袭或者具有增加的肿瘤进展或侵袭风险。
在一些实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤中的一个或多个：指导实验室定量样品中的MOSPD2表达水平；从实验室获得样品中的MOSPD2表达水平的报告；和/或向受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)。
在一些实施方案中，样品是来自受试者的组织活检物、肿瘤活检物或血液样品。
在一些实施方案中，对照或参考值是正常组织(例如，正常相邻组织(NAT))中的MOSPD2表达水平。在其它实施方案中，对照或参考值是不可检测的MOSDP2表达或不显著的MOSPD2表达。
用于测定MOSPD2表达水平的方法是文献中已知的并是在本文中描述的。
在一些实施方案后中，本发明涉及一种用于治疗受试者中响应于MOSPD2的抑制剂的癌症或癌症转移的方法，其包括(i)测定受试者中的MOSPD2表达水平，并且当确定表达水平大于对照或参考值的表达水平时，(ii)向受试者施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)。
在一些实施方案中，本发明涉及一种用于治疗受试者中表达MOSPD2的肿瘤的方法，其包括施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)。在其它实施方案中，本发明涉及一种用于治疗受试者的方法，其包括施用治疗有效量的MOSPD2的抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)，其中所述受试者患有表达MOSPD2的肿瘤。
在一些实施方案中，本发明涉及一种MOSPD2的抑制剂(例如，抗-MOSPD2抗体或其抗原结合片段)，其用于治疗具有表达MOSPD2的癌细胞或肿瘤的患者中的癌症或癌症转移。
实施例
现在提及以下实施例，其连同以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施方案。
材料和方法
MOSPD2沉默
人类乳腺癌细胞系MDA-MB-231(在下文中为MDA-231)(HTB-26)和人类恶性黑素瘤细胞系A2058(CRL-11147)购自美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection)(ATCC)。将细胞(2x106个，于2ml中)放置在15ml管中。将表达对照短发夹RNA(sh-RNA)(2x105个病毒颗粒)或人类MOSPD2sh-RNA(2x106个病毒颗粒)的慢病毒颗粒施加至细胞，在室温下在8μg/ml聚凝胺(Sigma,Israel)存在下将细胞以2000rpm旋转60min。然后将细胞接种在6孔板中。在72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml Sigma,Israel)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。对于CRISPR-CAS9介导的沉默，用如上所述的CRISPR-CAS9非靶标对照或CRISPR-CAS9人类MOSPD2慢病毒颗粒转导MDA-231细胞。对转导的细胞进行单细胞克隆，以分离具有沉默的MOSPD2蛋白质表达和受损的迁移的细胞。
蛋白质印迹
洗涤sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒转导的A2058或MDA-231细胞或者对照或MOSPD2CRISPR-CAS9慢病毒颗粒转导的MDA-231细胞(106)，并且将其重悬于含有1:100二硫苏糖醇(DTT)、磷酸酶和蛋白酶抑制剂(Thermo Scientific)的裂解缓冲液中。将样品加样到预制Criterion TGX凝胶(Bio-Rad,Hemel Hempstead,UK)上并且将其转移到硝基纤维素膜上。将印迹用Tris缓冲盐中的5％乳或牛血清白蛋白(BSA)和Tween 20(TBST)封闭1小时，之后用一级抗体和二级抗体孵育。使用ECL试剂盒(Thermo Scientific)对膜进行显影。将以下抗体用于免疫印迹：
一级抗体：通过Vascular Biogenics Ltd生成的兔抗-MOSPD2(1:5000)。磷酸细胞外调节激酶(p-ERK1/2)(Thr 183和Tyr 185，1:4000)购自Sigma(Israel)。磷酸-AKT(Ser473,1:1000)购自Cell Signaling。磷酸-FAK(1:2000)购自Abcam(Cambridge,UK)。热休克蛋白(HSP)90(1:1000)购自Santa Cruz Biotechnology(Dallas,TX)。
二级抗体：辣根过氧化物酶(HRP)驴抗兔(1:5000)抗体和HRP山羊抗小鼠(1:5000)抗体购自Jackson ImmunoResearch(West Grove,PA)。
Q-PCR
为了测定沉默功效，使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen,ValenVBa,CA)将RNA从sh-对照和sh-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞中提取。对于cDNA制备，将2μg RNA与qScript反应混合物和qScript逆转录酶(Quanta Bioscience,Gaithersburg,MD)合并。将反应物放置在热循环器(BioRad,Hercules,CA)中并且根据制造商说明书设定运行程序。在AppliedBiosystems 7300实时PCR系统(Grand Island,NY)上使用多组人类MOSPD2的引物28S进行实时PCR反应，以将RNA水平(BIOSEARCH TECHNOLOGIES,Petaluma,CA)和SYBR Green PCRMaster Mix(Applied Biosystems,Warrington,UK)归一化。
免疫组织化学染色
为了评估癌组织中的MOSPD2表达水平，使用兔抗-MOSPD2抗体或对照兔IgG(R&DSystems Cat#AB-105-C)对乳腺癌(T088B和BR2028a)、肝癌(BC03116a)和多器官肿瘤(MC6163)的Biomax阵列(US Biomax Rockville,MD)进行染色，接着用抗兔HRP(目录号0399DAKO,Denmark)孵育。
实施例1
抗MOSPD2抗体
根据以下方法生成抗-MOSPD2多克隆抗体。
材料和方法
血球凝集素(HA)-标记的重组人类MOSPD2(HA-rhMOSPD2)的产生和纯化
使用EcoRI和XbaI限制性位点将全长人类MOSPD2cDNA插入到慢病毒质粒载体pLVX-EF1α-IRES-Puro(Clonetech,CA)中。使用EcoRI限制性位点将编码HA-标签的寡核苷酸(YPYDVPDYA；SEQ ID NO:15)插入到MOSPD2的N-末端区域。对于转导，在室温下在8μg/ml聚凝胺(Sigma,Israel)和含有表达HA-rhMOSPD2的载体的慢病毒颗粒存在下将A2058黑素瘤细胞(ATCC CRL-11147,VA)以2000rpm旋转60分钟。然后将细胞接种在6孔板中。在72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml Sigma,Israel)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。为了纯化HA-rhMOSPD2，使用M-PER哺乳动物蛋白质提取试剂(Thermo Scientific)裂解A2058转导的细胞并且使其穿过抗-HA琼脂糖珠粒(Thermo Scientific)。将甘氨酸或硫氰酸钠用于从所述珠粒中洗脱HA-rhMOSPD2，接着针对PBS彻底透析。
α-MOSPD2多克隆抗体的生成和分离
用大约0.5mg于完全费氏佐剂中乳化的HA-rhMOSPD2免疫兔，接着每三周用大约0.25mg于不完全费氏佐剂乳化的HA-rhMOSPD2进行三次加强。在每次加强后一周收集血清以评估抗体免疫原性和滴度。使用蛋白质A/G珠粒(SantaCruz,CA)将α-MOSPD2抗体从血清中分离。
结果
兔多克隆α-MOSPD2抗体检测内源性人类MOSPD2并使其沉淀
评价经分离的α-MOSPD2多克隆抗体检测内源性MOSPD2并使其沉淀的能力。将细胞裂解物由用对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的U937细胞制备。通过蛋白质印迹使用经分离的α-MOSPD2抗体(稀释1:5000)分析样品。还将HSP90的表达确定为加样对照。还使用经分离的α-MOSPD2抗体或兔IgG(10μg)作为对照来进行U397细胞裂解物的免疫沉淀。通过使用经分离的α-MOSPD2抗体进行免疫印迹来分析所得沉淀，接着用山羊抗兔抗体-HRP(1:5000)孵育。结果显示经分离的α-MOSPD2抗体容易检测U937细胞中内源性表达的MOSPD2并且使其免疫沉淀。
实施例2
MOSPD2和转移细胞系的迁移
为了评估MOSPD2在癌细胞迁移中的作用，使用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒沉默两种黑素瘤细胞系A2058黑素瘤和MDA-231乳腺癌中的MOSPD2表达。
具体地，将先前已在0.5％FBS/RPMI-1640中饥饿3小时的sh-对照或sh-MOSPD2转导的A2058或MDA-231细胞(3x105)接种在QCM 24孔5μm孔迁移测定板(Corning-Costar,Corning,NY)的上部腔室中，接着在下部腔室中在10％FBS/RPMI-1640和EGF(200ng/ml,Peprotech Israel)存在下孵育24小时。随后，用结晶紫对迁移到下部腔室的细胞染色，之后获取图像。
图1证实sh-MOSPD2慢病毒颗粒具有显著降低的蛋白质表位并且在体外抑制细胞迁移。
实施例3
MOSPD2和细胞增殖
为了确定在MOSPD2沉默之后对细胞迁移的抑制作用是否继发于基本细胞功能诸如增殖，对sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞的增殖进行测试，持续3天的时间段。
具体地说，将sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞接种在6孔板(104个/孔)中。通过FACS计数细胞，每24小时一次，重复三次，持续连续3天。
在图2中示出的数据指示MOSPD2并非这些细胞增殖所必需的，这表明MODPD2特定地在迁移中的调节作用。
实施例4
MOSPD2和细胞转移
为了评估MOSPD2在将癌细胞传播到癌症初始位置之外的器官中的作用，将sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞的肺转移程度过继转移到免疫缺陷型小鼠中。在乳腺中出现初始位点的另一种模型中，用sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒颗粒转导的MDA-231乳腺癌细胞接种免疫缺陷型小鼠的乳腺脂肪垫。
病理检查：将组织学载玻片用苏木精/曙红(H&E)进行染色。将福尔马林固定的组织脱水、嵌入在石蜡中并且切片成4μm厚度。在Leica染色模块上校准H&E染色。将载玻片升温至90℃，持续7分钟，然后根据完全自动化方案进行加工。在对切片进行脱蜡和脱水之后，将切片在吉尔氏苏木精3号(Gill's Hematoxylin No.3)(Surgipath)中染色7分钟，将其洗涤，浸渍在酸性醇中，并且洗涤。在70％乙醇和96％乙醇中短暂浸渍之后，将载玻片在曙红(Sigma)中染色4分钟，并且在96％乙醇中脱水并且在100％乙醇中脱水两次，每次1分钟。在完成自动化染色器上的运行之后，在二甲苯中清洁切片10秒并且使用Entellan封固。平均肿瘤面积包括对每只小鼠测量的最大肺肿瘤面积。
全身性：将106个sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞注射到8周龄雌性SCID小鼠(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid,Harlan Israel)的尾静脉中。在4周后处死小鼠。切割肺部以用于组织病理学检查。图3A中的结果显示沉默MOSPD2表达将肺中的转移乳腺癌细胞的存在显著(p＝0.023)抑制超过50％(转移面积)。
原位：将5x106个sh-对照或sh-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞注射到8周龄雌性SCID小鼠(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid,Harlan Israel)的乳腺脂肪垫中。在10周后处死小鼠。切下同侧腹股沟淋巴结和肺以用于检查。宏观检查显示绝大部分从用sh-对照细胞转移的小鼠切下的淋巴结压倒性地大于来自用sh-MOSPD2处理的细胞转移的小鼠的那些(图3B)。此外，在用sh-MOSPD2处理的细胞转移的小鼠肺中测量的平均转移面积与对照相比减少超过50％(图3C)。
在sh-MOSPD2注射的细胞中MOSPD2mRNA沉默的比率是～80％，如通过材料和方法中所述的Q-PCR测定的。
这些结果证实MOSPD2在乳腺癌转移中起到主要的作用。
实施例5
在各种类型的癌症中的MOSPD2表达
为了确定MOSPD2表达是否与癌变从正常至癌变的转变相关，使用如材料和方法部分中所述的抗-MOSPD2抗体筛选携带正常组织和癌组织的载玻片。
图4A示出正常乳腺组织和癌性乳腺组织的代表性染色。虽然用对照IgG抗体对正常乳腺组织和癌性乳腺组织进行阴性染色，抗-MOSPD2抗体仅不同地染色癌组织。类似地，MOSPD2在正常膀胱、大脑、结肠、食道、舌、肾以及肝组织中未表达，但是当这些组织变成癌性时会上调(图4B-图4E)。这些结果表明在各种组织中MOSPD2表达与正常组织到癌组织的转变相关。
实施例6
MOSPD2基因敲低和癌细胞迁移
体外：为了实现可持续的MOSPD2敲低，用含有如材料和方法部分所述的CRISPR-CAS9基因编辑系统的慢病毒颗粒转导MDA-231乳腺癌细胞。与实施例2所述的方法类似地，测试对照或MOSPD2 CRISPR-CAS9慢病毒转导的MDA-231细胞的迁移。将对照或MOSPD2CRISPR-CAS9慢病毒颗粒转导的MDA-231细胞(3x105)接种在上部腔室中，接着孵育2-4小时。随后，通过FACS确定迁移到下部腔室中的细胞数目。
图5A和图5B显示在MDA-231癌细胞中引入MOSPD2的CRISPR-CAS9系统会消除蛋白质表达并且随后在跨孔测定中显著抑制细胞的迁移。
为了测试通过CRISPR-CAS9进行的MOSPD2沉默对趋化因子受体驱动的信号传导事件的作用，如材料和方法中所述研究ERK、AKT和FAK的磷酸化水平。根据迁移测定结果，通过CRISPR-CAS9系统沉默MOSPD2与对照相比在暴露于EGF的细胞中完全预防了AKT的磷酸化并且不同地抑制了ERK和FAK的磷酸化(参见图5C中的蛋白质印迹)。
体内：将106个CRISPR-对照或CRISPR-MOSPD2慢病毒转导的MDA-231细胞注射到8周龄雌性SCID小鼠(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid,Harlan Israel)的尾静脉中。然后在3周后处死小鼠。与实施例4所述的方法类似地，切下肺以用于组织病理学检查。图5D显示由CRISPR-CAS9系统沉默MOSPD2将肺中的转移乳腺癌细胞的存在显著抑制超过95％(转移面积)。
实施例7
VB-201和EGF信号传导途径
体外：为了测试VB-201对上皮生长因子(EGF)-诱导的磷酸化的作用，将MDA-231乳腺癌细胞(106)在0.5％FCS培养基中饥饿3小时，接着用不同浓度的VB-201(1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml)或溶剂对照孵育20分钟。然后将MDA-231细胞用EGF(200ng/ml)活化10min。然后通过蛋白质印迹分析AKT的磷酸化。将HSP90用于加样对照。
如图6所示，10μg/ml的VB-201几乎完全抑制AKT的EGF诱导的磷酸化，其中在5μg/ml下观察到显著的抑制。
实施例8
抗-MOSPD2(Fab')2单克隆抗体的生成
使用含有噬菌体展示的人类Fab的选择的HuCAL
Figure BDA0001562455230000822
Platform(Bio-Rad AbD Serotec,GmnH)来获得抗-MOSPD2(Fab')2单克隆抗体(mAb)。
简言之，将融合至人类Fc的MOSPD2的细胞外区域的重组蛋白固定至固体支撑物上。用固定抗原孵育噬菌体颗粒上呈递的
Figure BDA0001562455230000821
文库。通过充分洗涤来去除非特异性抗体并且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
图7列出17种抗-MOSPD2F(ab')2单克隆抗体，所述单克隆抗体在初步筛选以用于结合至过度表达MOSPD2的细胞之后鉴定。使用ELISA对用于MOSPD2结合的克隆进行进一步分析鉴定了O.D.值相对于背景大于5倍(*在图7中)的12种克隆。
实施例9
抗-MOSPD2F(ab')2mAb结合细胞上过度表达的人类MOSPD2
用HA-标记的人类MOSPD2转染A2058黑素瘤细胞，以生成过度表达MOSPD2的细胞。
使用流式细胞术使用这些细胞测试在实施例8中鉴定的12种抗体克隆与MOSPD2的结合。特别地，在4℃下在100μl FACS缓冲液(PBS+2％FCS+0.02％叠氮化钠)中将105个细胞用2.5μg F(ab')2mAb孵育1h。然后洗涤细胞，将其重悬于FACS缓冲液中并且在4℃下使用Alexa-Fluor 647-缀合的(Fab')2山羊抗人类IgG F(ab')2 1:200(目录号109-606-097,Jackson Immunoresearch,PA)染色30min。洗涤细胞，将其重悬于FACS缓冲液中并且在FACS-Calibur装置上分析。
所有克隆均阳性染色细胞。2个克隆的代表性染色示出在图8A-图8B中。将在实施例8中使用ELISA未鉴定为阳性克隆的克隆用作阴性对照。
实施例10
抗-MOSPD2F(ab')2mAb特异性结合人类乳腺癌细胞上的内源性MOSPD2
测试抗-MOSPD2 F(ab')2mAb与MDA-231乳腺癌细胞上的表面表达的内源性MOSPD2的结合。用如实施例9所述的抗-MOSPD2 F(ab')2mAb染色细胞。使用2种不同克隆进行的染色示出在图9中。将实施例9所述的ELISA阴性克隆用作阴性对照。图9显示抗-MOSPD2 F(ab')2mAb特异性结合人类乳腺癌细胞上的内源性MOSPD2。
为了进一步证实抗原结合特异性，在MDA-231细胞中使用CRISP-CAS9慢病毒颗粒沉默MOSPD2基因表达。将MOSPD2-沉默的细胞和非沉默的细胞与抗-MOSPD2(Fab')2mAb或阴性对照合并并且使用FACS进行分析。图10A-10B显示抗-MOSPD2 F(ab')2mAb结合至MDA-231细胞(图10A)，但并未结合至MOSPD2-沉默的MDA-231细胞(图10B)。
实施例11
抗-MOSPD2 F(ab')2mAb特异性结合黑素瘤和肝癌细胞上的内源性MOSPD2
测试抗-MOSPD2F(ab')2mAb与A2058黑素瘤和HepG2肝癌细胞系上的表面表达的内源性MOSPD2的结合。用抗-MOSPD2F(ab')2mAb染色细胞并且测试其与MOSPD2的结合，如实施例9和10所述的。图11A-图11B显示抗-MOSPD2F(ab')2mAb特异性结合黑素瘤和肝癌细胞上的内源性MOSPD2。
实施例12
抗-MOSPD2 F(ab')2mAb抑制MDA-231癌细胞中的EGF-诱导的信号传导
使用蛋白质印迹分析抗-MOSPD2 F(ab')2mAb对MDA-231癌细胞中的EGF-诱导的信号传导的作用。特别地，将MDA-231细胞用含有0.5％FCS的培养基饥饿处理过夜并且然后用抗-MOSPD2(Fab')2mAb孵育1h，之后添加EGF(100ng/ml)，持续5min。将细胞洗涤并且重悬于裂解缓冲液中，加样到预制Criterion TGX凝胶(Bio-Rad,Hemel Hempstead,UK)上并且将其转移到硝基纤维素膜上。将所述膜用Tris缓冲盐水和Tween 20(TBST)中的5％乳或BSA封闭1h，并且然后用一级抗体和二级抗体孵育。使用ECL试剂盒(Thermo Scientific)对膜进行显影。将未用抗-MOSPD2F(ab')2mAb(unt)处理的细胞作为阴性对照进行分析。还将热休克蛋白(HSP)-90蛋白质水平作为蛋白质加样对照进行分析。
使用以下抗体：
一级抗体：来自Sigma(Israel)的p-ERK1/2(目录号M8159；1:10,000)；来自CellSignaling的磷酸-AKT(目录号9271；Ser 473，1:1000)和磷酸-EGF受体(目录号2236 1:1000)；以及来自Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz,CA)的HSP-90(目录号13119；1:500)。
二级抗体：来自Jackson ImmunoResearch(West Grove,PA,USA)的HRP驴抗兔(1:5000)抗体和HRP山羊抗小鼠(1:3000)抗体。
如图12所示，用抗-MOSPD2(Fab')2mAb孵育MDA-231细胞抑制了EGF受体的磷酸化(pEGF-R)以及AKT和ERK的磷酸化，所述AKT和ERK是与细胞迁移相关的下游信号传导途径的介导物(分别为p-AKT和p-ERK1/2)。
实施例13
抗-MOSPD2F(ab')2mAb抑制MDA-231癌细胞的EGF-诱导的迁移
使用如实施例2所解释的跨孔迁移分析抗-MOSPD2F(ab')2mAb对MDA-231癌细胞的EGF-诱导的迁移的作用。将MDA-231乳腺癌细胞(3x105)在含有0.5％FCS的RPMI培养基中饥饿4-5小时并且然后用抗-MOSPD2F(ab')2mAb孵育1h。溶解EGF并且将其放置在QCM 24-孔迁移测定板(8μm孔)(Corning-Costar,Corning,NY)的下部腔室(400ng/ml)中，所述下部腔室含有具有10％FCS的RPMI培养基。将细胞接种在上部腔室，接着过夜孵育，之后通过FACS测定迁移到下部腔室的细胞数目。
如图13所示，F(ab')2mAb显著抑制了MDA-231乳腺癌细胞的EGF-诱导的跨孔迁移。
实施例14
限定MOSPD2的细胞表达特异性和定位
不同免疫细胞子群的分析指示MOSPD2相对于T和B淋巴细胞主要在CD14+单核细胞中表达(图14A)。为了确定MOSPD2mRNA表达水平，使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen,ValenVBa,CA)从细胞中提取RNA。对于cDNA制备，将2μg RNA与qScript反应混合物和qScript逆转录酶(Quanta Bioscience,Gaithersburg,MD)合并。将反应物放置在热循环器(BioRad,Hercules,CA)中并且根据制造商说明书编程运行。在Applied Biosystems 7300实时PCR系统(Grand Island,NY)上使用多组人类MOSPD2的引物28S进行实时PCR反应，以将RNA水平(BIOSEARCH TECHNOLOGIES,Petaluma,CA)和SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems,Warrington,UK)归一化。
预测MOSPD2是具有一个跨膜区域和一个残基长度的细胞内尾的质膜蛋白。细胞区室的分级和人类单核细胞的免疫荧光染色以及对转染来过度表达HA-标记的MOSPD2的HEK293细胞进行的流式细胞术(根据上文所述的方法进行)揭示MOSPD2是在人类单核细胞的质膜上表达的细胞表面蛋白(分别为图14B-14D)。
实施例15
MOSPD2在浸润到发炎组织的单核细胞上表达
将福尔马林固定的组织脱水、嵌入在石蜡中并且切片成4μm。在Benchmark XT染色模块(Ventana Medical Systems)上完全校准免疫染色。在将切片脱蜡并脱水之后，分别以1:80和1:100稀释抗-CD163(Cell Marque,Rocklin,USA,MRQ-26)或抗-MOSPD2，静止添加40分钟。使用UltraView通用碱性磷酸酶红色检测试剂盒(Ventana Medical Systems,760-501)检测抗-CD163染色并且使用UltraView通用DAB检测试剂盒(Ventana MedicalSystems,760-500)检测抗-MOSPD2染色。当施加双重染色时，首先进行MOSPD2染色，接着进行CD163染色。用苏木精(Ventana Medical Systems)复染载玻片。在完成自动化染色器上的运行之后，将载玻片连续地在70％乙醇、95％乙醇和100％乙醇中脱水，每次10秒。在盖滑动之前，在二甲苯中清洁切片10秒并且使用Entellan封固。使用Olympus BX51显微镜查看MOSPD2和CD163染色的载玻片。使用Nikon数字视觉照相机和NIS元素成像软件获取图像。
如图15A-15C所示，MOSPD2在浸润到许多发炎组织中的单核细胞上表达。图15A示出来自类风湿性关节炎患者的滑膜的CD163、MOSPD2或CD163和MOSPD2二者的染色。图15B示出颈动脉粥样硬化组织的CD163、MOSPD2或CD163和MOSPD2二者的染色。图15C示出侵袭性导管癌乳腺组织的MOSPD2的染色。黑色箭头指示肿瘤细胞的阳性染色。淡色箭头指示侵袭性单核细胞的染色。
实施例16
MOSPD2促进单核细胞迁移
用如上文所述的sh-慢对照或sh-慢MOSPD2病毒颗粒转导U937单核细胞系。图16A示出sh-慢MOSPD2的沉默功效，如通过Q-PCR和蛋白质印迹评估的。当针对迁移进行测试时，MOSPD2-沉默的细胞在体外朝向RANTES(CCL5)迁移的能力严重受损(图16B)。认为对于单核细胞迁移是重要的两种主要信号传导途径是MEK-ERK和PI3K-AKT途径(Di Lorenzo等人，2009；Wain等人，2002)。图16C显示在RANTES存在下ERK和AKT的磷酸化在MOSPD2-沉默的细胞中完全受体抑制。
为了确定所观察到的作用是否局限于仅一个趋化因子，使用通过不同趋化因子受体诱导迁移和磷酸化的配体活化sh-对照和sh-MOSPD2沉默的U937细胞。沉默MOSPD2损害单核细胞迁移和ERK和AKT磷酸化，无论使用哪种趋化因子(分别为图16D和16E)。
实施例17
MOSPD2不会影响IFN-γ-诱导的活化或PKC-介导的活化
靶向MOSPD2不会损害单核细胞除迁移之外的生物功能。用如上文所述的sh-慢对照或sh-慢MOSPD2病毒颗粒转导U937单核细胞系并且用IFN-γ或PMA处理。处理的细胞的蛋白质印迹分析显示沉默MOSPD2不会改变IFN-γ或PMA对下游信号传导标记的磷酸化(分别是图17A和17B)。这些结果表明MOSPD2特异性地促进单核细胞迁移。
实施例18
抗-MOSPD2抗体的表位作图
为了确定抗-MOSPD2抗体在人类MOSPD2上可以特异性结合的一个或多个表位，测量与不同人类MOSPD2片段的结合亲和力，如本文所述的，通过经由SA芯片上预先固定的链霉亲和素(SA)来捕获N-末端生物素化MOSPD2片段并测量跨过MOSPD2表面滴定的抗-MOSPD2抗体
Figure BDA0001562455230000881
3000TM表面等离振子共振(SPR)系统，Biacore,Inc.,Piscataway NJ)的结合动力学来测量。在HBS-EP运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、3mM EDTA、0.005％v/v聚山梨酸酯P20)中进行BIAcore测定。通过将N-生物素化MOSPD2稀释到HBS-EP缓冲液中至小于0.001mg/mL的浓度并且使用可变接触时间将其注射穿过SA传感器芯片来制备MOSPD2表面。与捕获水平<50个响应单位(RU)对应的低容量表面用于高分辨率动力学研究，而高容量表面(约800RU的捕获的MOSPD2)用于浓度研究、筛选和溶液亲和力测定。
通过将抗体G1Fab以两倍或三倍增量连续稀释至跨越1μM-0.1nM的浓度(目标在于0.1-10倍评估的KD)来获得动力学数据。通常将样品以100μL/min注入1分钟并且允许至少10分钟的解离时间。在每次结合循环之后，用25％v/v乙醇中的25mM NaOH再生表面，所述NaOH在数以百计的循环中耐受。使用BIA评价程序将整个滴定系列(通常重复生成)整体拟合至1:1Langmuir结合模型。这对每个结合相互作用返回了一对独特的缔合和解离动力学速率常数(分别为Kon和Koff)，其比率得到平衡解离常数(KD＝Koff/Kon)。
抗-MOSPD2抗体可以结合至人类MOSPD2的以下氨基酸区域中的一个或多个，所述氨基酸区域根据SEQ ID NO:1(氨基酸残基1-518)来编号：508-517、501-514、233-241、509-517、212-221、13-24、505-517、505-514、89-100、506-517、233-245、504-514、128-136、218-226、15-24、83-96、42-50、462-474、340-351、504-517、462-470、327-337、21-32、217-226、510-517、178-190、497-509、504-516、64-77、504-515、147-159、503-315、88-97、208-218、178-191、502-515、503-516、497-505、500-509、189-202、189-197、505-516、1-63、82-239、93-234、327-445、327-431以及497-517。
实施例19
另外的抗MOSPD2抗体
根据实施例1(多克隆抗体)或实施例8(单克隆抗体)所述的方法生成识别一个或多个MOSPD2表位的另外的抗-MOSPD2抗体。
简言之，在将实施例18中鉴定为MOSPD2表位的MOSPD2部分融合至人类Fc并且将其固定在固体支撑体上。用固定的抗原孵育噬菌体颗粒上呈递的
Figure BDA0001562455230000891
文库(HuCAL
Figure BDA0001562455230000892
平台；Bio-Rad AbD Serotec,GmnH)。通过充分洗涤来去除非特异性抗体并且通过添加还原剂来稀释特异性抗体噬菌体。将抗体DNA以汇集物的形式分离并且将其亚克隆到大肠杆菌表达载体中以生成二价F(ab')2mAb。挑出菌落并且使其在微量滴定板中生长。使培养物裂解以释放抗体分子并且通过ELISA和FACS筛选特异性抗原结合。表达独特抗体并且使用一步亲和力色谱法纯化，并且接着再次通过ELISA和FACS测试特异性。
实施例20
MOSPD2表达与各种类型的癌症的肿瘤级别相关地增加
为了确定MOSPD2表达是否与肿瘤进展相关，使用如材料和方法部分中所述的抗-MOSPD2抗体筛选携带正常组织和不同肿瘤级别的癌组织的载玻片。根据0至3标度的染色强度对MOSPD2丰度进行评分。在观察到单个核心内的异质内染色的情况下，分配具有最高覆盖度的面积评分。
图18A-18F示出乳腺癌和对照组织中的代表性MOSPD2染色。正常相邻组织(NAT)充当阴性对照，并且逐步上升的肿瘤阶段包括小叶原位癌(LCIS)、导管内原位癌(IDIS)、侵袭性导管癌(IDC)、侵袭性小叶癌(ILC)以及转移性侵袭性导管癌(MIDC)。虽然代表性NAT、LCIS和IDIS染色对于MOSPD2、IDC、ILC和MIDC呈阴性染色，代表性染色证实强阳性MOSPD2染色。
图19证实侵袭性乳腺癌和转移性乳腺癌中增加的MOSPD2染色强度。在NAT内，仅18％百分比(2/11)的样品显示染色强度1，而21％(4/19)的原位癌样品(IDIS+LCIS)被评分为1或2。然而，侵袭性组织和转移性组织的分析证实与NAT和原位癌(IDIS+LCIS)相比在评分2中的频率更高并且高达3的评分中染色强度增加。因此，ILC、IDC和MIDC的组合评分2和3的百分比分别为63％(12/19)、77％(50/65)和81％(25/31)。
MOSPD2表达也与结肠和肾组织中细胞从正常到癌变的转变相关。图20A-20D证实在所测试的67％结肠癌样品和45％肝细胞癌样品中，存在阳性MOSPD2染色。在所测试的正常结肠或肝组织中未检测到MOSPD2染色(0％)。
MOSPD2表达还与恶性肿瘤相关。图21A-21E示出肝细胞癌中随着肿瘤级别而增加的强MOSPD2染色，而正常样品和NAT样品对于MOSPD2染色呈阴性。
图22A-22B汇总了来自图21A-21E的恶性肿瘤肝组织或对照中的MOSPD2染色强度。在恶性肿瘤样品中与正常和NAT相比，MOSPD2染色强度分别显著增加3.2倍或4倍(p≤0.001)。图22B示出在肝细胞癌的不同阶段中的MOSPD2染色强度的增加。
实施例21
VB-201抑制MOSPD2
VB-201和VB-221的标记
用生物素如下标记VB-201和VB-221。将VB-201、VB-221和卵清蛋白(OVA,Sigma,Israel)溶解在0.1M MES缓冲液(Thermo Scientific,Rockford,IL)中并且使用EDC[1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺HCL](Thermo Scientific)以摩尔比率100(VB-201/VB-221):1(OVA):240(EDC)在室温下缀合2-3h。此后，将样品转移到10kDa透析盒(ThermoScientific)并且针对PBS透析过夜。然后使用EDC将卵清蛋白结合的VB-201(OB201)和VB-221(OB221)与胺-PEG2-生物素(在0.1M MES缓冲液中)以摩尔比1(OB201/OB221):100(胺-PEG2-生物素):700(EDC)缀合。使反应在室温下进行2-3小时，之后再次将样品转移至10kDa透析盒中并且针对PBS透析过夜。
沉淀
使用含有1:100蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1％NP-40裂解缓冲液裂解细胞，并且之后在冰上孵育20min并以最大速度离心15min。在旋转器中将样品在4℃下用溶剂、OB201或OB221孵育过夜。添加链霉亲和素琼脂糖珠粒(Sigma,Israel)，持续2小时。使用没有DTT的裂解缓冲液进行蛋白质洗脱，在室温下持续10min。如上所述地进行样品加样、转移和免疫印迹。
结果
VB-201结合MOSPD2
先前已显示VB-201抑制单核细胞在体外和体内的迁移。然而，VB-201的衍生物VB-221不抑制人类单核细胞中的趋化因子诱导的信号传导和迁移。使用标记的VB-201和VB-221，使得来自人类单核细胞的蛋白质沉淀并且研究通过质谱获得的差别显示。质谱结果显示MOSPD2与VB-201具有强结合而与VB-221没有。
为了进一步验证这些结果，将标记的VB-201和VB-221应用于来自人类CD14单核细胞的细胞裂解物上。然后用抗MOSPD2和TLR2探测样品。然而VB-201和VB-221以相当的强度沉淀TLR2，VB-201比VB-221显著更强地沉淀MOSPD2(图23)。这些结果还指示VB-201结合MOSPD2。
实施例22
MOSPD2促进乳腺癌细胞中的EGF-诱导的信号传导事件
MDA-231乳腺癌细胞中的MOSPD2沉默
EGF与EGF受体(EGF-R)的连接诱导了参与受体下游的磷酸化的信号传导级联。研究MOSPD2是否影响由EGF诱导的信号传导级联。人类乳腺癌细胞系MDA-MB-231(在下文中为MDA-231)(HTB-26)购自ATCC。将细胞(2x106个，2ml)放置在15ml管中。将表达CRISPR非靶标对照(CRISPR-对照)或CRISPR人类MOSPD2(CRISPR-MOSPD2)的慢病毒颗粒施加至细胞，然后在8μg/ml聚凝胺(Sigma,Israel)存在下在室温下以2000rpm旋转60min。然后将细胞接种在6孔板中。在72小时之后，添加含有嘌呤霉素(4μg/ml Sigma,Israel)的新鲜培养基，以用于选择转导的细胞。对CRISPR转导的细胞进行单细胞克隆，以分离具有沉默的MOSPD2蛋白质表达和受损的迁移的细胞。
当CRISPR-对照MDA-231细胞用EGF活化时，EGF-R和下游信号传导分子变得磷酸化。然而，在CRISPR-MOSPD2沉默的细胞中，观察到EGF-R磷酸化和下游分子的显著抑制(图24)。这些结果指示MOSPD2调节乳腺癌细胞中的EGF-诱导的信号传导途径。
本申请中所提及的所有公布、专利和专利申请在本文中以引用的方式整体并入本说明书中，达到如同每个单独的公布、专利或专利申请被专门地并且单独地指示以引用的方式并入本文的相同程度。此外，本申请中任何参考文献的引用或标明不应解释为承认可获得所述参考文献作为本发明的现有技术。就使用段落标题方面而言，它们不应认为是必要地进行限制。
序列表
<110> VASCULAR BIOGENICS LTD
<120> 含有活动精子结构域的蛋白质2和癌症
<130> IIC180051
<141> 2016-07-29
<150> 62/199,571
<151> 2015-07-31
<160> 15
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<223> 含有活动精子结构域的2，转录变体1，mRNA，编码区125-1678
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gcaatgacat gagtttgttt tctcattaat atgaccagtt tgggtctatg ttggttcaca 3000
tgtacatcta ctttatatga aagaaaaaac agttgtctgc ctgtaaaatg ttgagtttcg 3060
attgagccat gtttggagat tttattacta ttctgaaggg tagtgttgtt ggttttcatc 3120
ttcaagaagt tgattccaaa actgagttat gaagaatgat ataacagttc cttcaaaatt 3180
ggcctaggaa ataaaacctt aaaaggacaa aaaaaaaaa 3219
<210> 6
<211> 3183
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 含有活动精子结构域的2，转录变体2，mRNA，编码区278-1642
<400> 6
agtcacaata ataggtactt aaaaacatgt catatgatag gaaactagaa taacacacct 60
ctaaataatc catggattac caacttctca gcaatggtgt aaattcttct gctaaataac 120
ccgtgggtta aagaggacat cacattggaa attccagagt acttaaaata agtcagataa 180
atatgatgca cgtgatgttg aaaggctaca acaagatgat aactgggttg aaagttactt 240
atcttggaga cataatattg tagatgaaac actgaagatg ctcgatgaga gttttcagtg 300
gaggaaagaa atttctgtca atgaccttaa tgaatcctcc attcccagat ggttattgga 360
aattggtgtt atttatctcc atggttatga caaagaaggt aacaaattgt tctggatcag 420
ggtgaagtat catgtaaaag accagaaaac catattggac aaaaagaagc tcatagcatt 480
ctggttggaa cgttatgcta agagggaaaa tgggaaacct gtaacagtga tgtttgacct 540
gtcagaaact ggaataaata gcattgacat ggactttgta cgctttatca tcaactgctt 600
taaggtttat taccctaaat acctctcaaa aatagtgatc tttgatatgc cttggttaat 660
gaatgctgct ttcaaaattg tgaaaacctg gcttggtcca gaagcagtga gcttgttgaa 720
gtttacaagc aaaaatgaag tccaggacta tgtcagtgta gaatacctgc ctccccacat 780
gggtggaact gatcctttca agtatagcta tccaccacta gtagatgatg acttccagac 840
cccactgtgt gagaatgggc ctattaccag tgaggatgaa acttcaagta aagaagacat 900
agaaagtgat ggcaaagaaa cattggaaac aatttctaat gaagaacaaa cacctcttct 960
taaaaagatt aacccaaccg aatctacttc caaagcagaa gaaaatgaaa aagttgattc 1020
aaaagtgaaa gctttcaaga aaccattgag tgtatttaaa ggccccttac tacacatcag 1080
cccagcagaa gaactgtact ttggaagtac agaatccgga gagaagaaaa ccttaatagt 1140
gttgacaaat gtaactaaaa atatagtggc atttaaggtg agaacaacag ctccagaaaa 1200
atacagagtc aagccaagca atagcagctg tgacccgggt gcatcagtgg atatagttgt 1260
gtctccccat gggggtttaa cagtctctgc ccaagaccgt tttctgataa tggctgcaga 1320
aatggaacag tcatctggca caggcccagc agaattaact cagttttgga aagaagttcc 1380
cagaaacaaa gtgatggaac ataggttaag atgccatact gttgaaagca gtaaaccaaa 1440
cactcttacg ttaaaagaca atgctttcaa tatgtcagat aaaaccagtg aagatatatg 1500
tctacaactc agtcgtttac tagaaagcaa taggaagctt gaagaccaag ttcagcgttg 1560
tatctggttc cagcagctgc tgctttcctt aacaatgctc ttgcttgctt ttgtcacctc 1620
tttcttctat ttattgtaca gttaaagaag tggtgccggg taggaaccac ggttccttcg 1680
tccattagtt ggaaaaagta acagacctaa aactctacca agctactaaa aacattgcac 1740
atctgtgctt cctaaaagga aatatgcagc acgtggaggg gaacacatac atgtcttgaa 1800
aataaactgc tagaataaag aaatgctgga gaaattgatt ataagagact atagctattt 1860
agtaaagtaa gtaaaggcat atccattgtg taaattaata gtttaaatat aatttatttt 1920
ttccttttga tctgaatact tttaaagctt aagttttatc gtgtaaatac attagctaaa 1980
ctgaaaagta taagtaacat gctttgttgc agccaaaaaa tgtaatctgc ttttttatga 2040
cagaattatt atagctgagc tgacttacta gcttttctat actatgtata tagaagaaca 2100
tgtatattga gaaagaaaac atacttatat agaggaattt atgtaaccat gactttgtaa 2160
ttttgagaat tcctcccagt gatggtcagt attcttttgg aatgtaaacc gatttaatgc 2220
caaaccacct taacctttgt ttctcagtgt tccttaacag cctgcctttt attaatctca 2280
ggctttttta tgaacactct catttcagta gaatttggaa aactaagcgt ggttggaatt 2340
tctttgaatt ctgttagtaa tgcccaaaag aaaagtctca agcagtcccc ctatccagtc 2400
atttttatgg agtttcatgt tgtccactat agctggacac tgaacctttt gcctaattta 2460
ttataaaggc ctgaccctct attgtcccat cttcaccccc attccagagc agaggagtct 2520
ctgtggacca tgaattgcac tgtctccctc ctcatttcta aatgaaaggt attagatata 2580
aatttttttg aaaggttagt tgtttgagat gctaagcagg ataataaatt tagattttaa 2640
aatgttccct gtaaaagtca gcccatgaca aggaaattta caaaatacta gagtatctag 2700
aagggtgaaa acaaaaaaaa ataaaaagaa acacagacgc ccaggtgtca gctctccgtt 2760
taaagaatga aaaatgtaac tcatgatgat ctgtgaaacc ttcaaactag gaccaattga 2820
cttacttgat attctgcctt tgatatggta gtacccaccc ggtattccta aaatcctaaa 2880
aagatacacc ttgcagtagc agaggcaatg acatgagttt gttttctcat taatatgacc 2940
agtttgggtc tatgttggtt cacatgtaca tctactttat atgaaagaaa aaacagttgt 3000
ctgcctgtaa aatgttgagt ttcgattgag ccatgtttgg agattttatt actattctga 3060
agggtagtgt tgttggtttt catcttcaag aagttgattc caaaactgag ttatgaagaa 3120
tgatataaca gttccttcaa aattggccta ggaaataaaa ccttaaaagg acaaaaaaaa 3180
aaa 3183
<210> 7
<211> 2330
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 含有活动精子结构域的2，转录变体X1，mRNA，编码区125-1582
<400> 7
accgcctccc cctcccaccc ttctctgtct acctctgggc gggactgccg ggtgatgaga 60
tactcggtcg gcgacggtag aacgggcgac ggcgacaacc gcaatcacat ccacgacggt 120
gatcatggca gagaatcacg cccagaataa agccaagctc atctctgaga cccggaggag 180
gttcgaagct gagtatgtga cagataagtc agataaatat gatgcacgtg atgttgaaag 240
gctacaacaa gatgataact gggttgaaag ttacttatct tggagacata atattgtaga 300
tgaaacactg aagatgctcg atgagagttt tcagtggagg aaagaaattt ctgtcaatga 360
ccttaatgaa tcctccattc ccagatggtt attggaaatt ggtgttattt atctccatgg 420
ttatgacaaa gaaggtaaca aattgttctg gatcagggtg aagtatcatg taaaagacca 480
gaaaaccata ttggacaaaa agaagctcat agcattctgg ttggaacgtt atgctaagag 540
ggaaaatggg aaacctgtaa cagtgatgtt tgacctgtca gaaactggaa taaatagcat 600
tgacatggac tttgtacgct ttatcatcaa ctgctttaag gtttattacc ctaaatacct 660
ctcaaaaata gtgatctttg atatgccttg gttaatgaat gctgctttca aaattgtgaa 720
aacctggctt ggtccagaag cagtgagctt gttgaagttt acaagcaaaa atgaagtcca 780
ggactatgtc agtgtagaat acctgcctcc ccacatgggt ggaactgatc ctttcaagta 840
tagctatcca ccactagtag atgatgactt ccagacccca ctgtgtgaga atgggcctat 900
taccagtgag gatgaaactt caagtaaaga agacatagaa agtgatggca aagaaacatt 960
ggaaacaatt tctaatgaag aacaaacacc tcttcttaaa aagattaacc caaccgaatc 1020
tacttccaaa gcagaagaaa atgaaaaagt tgattcaaaa gtgaaagctt tcaagaaacc 1080
attgagtgta tttaaaggcc ccttactaca catcagccca gcagaagaac tgtactttgg 1140
aagtacagaa tccggagaga agaaaacctt aatagtgttg acaaatgtaa ctaaaaatat 1200
agtggcattt aaggtgagaa caacagctcc agaaaaatac agagtcaagc caagcaatag 1260
cagctgtgac ccgggtgcat cagtggatat agttgtgtct ccccatgggg gtttaacagt 1320
ctctgcccaa gaccgttttc tgataatggc tgcagaaatg gaacagtcat ctggcacagg 1380
cccagcagaa ttaactcagt tttggaaaga agttcccaga aacaaagtga tggaacatag 1440
gttaagatgc catactgttg aaagcagtaa accaaacact cttacgttaa aagacaatgc 1500
tttcaatatg tcagataaaa ccagtgaaga tatatgtcta caatttgcca cctccagctg 1560
tgaaatggac tgcagtccac cctaagtact gtgcacagta tctccctgtg tgtgtgcaca 1620
gtggcttccc cttacatggt agatttttgg ccttaatata atctaatccc aaagtagttg 1680
tgtatgtttt ctgttccttg gcaaataaat gaagaaataa ttagccaaga ttgaaaatgt 1740
attgtcctaa cggtgtccct ttaatgtttc atatgaaaaa ttatgttgac ccactaaaat 1800
atccttgctc aatgtctggt cagttgaatt taataacata tcttgttaat gtttgtgtgt 1860
ctattaaatg tgactaagca ggattactga aaattcacta taaaatcaaa ggcatctaaa 1920
cgtttgtact tgtcttgatt aatcatatat ttacacttga tttttttctg tcttcatttg 1980
tttttattta atcataattg catgattttt ttggtactct aatcagtaat tttattttta 2040
atcatgtcat tacctattca tgaccaaatt accaaggaac caacatttag atttagatat 2100
ttgttttcac ttaggaatgg aaattaatag attttccatg aaagcattag tgaaatatca 2160
ttaccttgat ctgcaagtag cctaaaaatg cgattgctgg taaacctggc ctcaaatttc 2220
atactaccat aactgttttt atatattgcc actaattttg actggattta atagcacttt 2280
attgtacaac tacaaaaaaa aatatattcc tagaattgtt gccagtgtaa 2330
<210> 8
<211> 3909
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 含有活动精子结构域的2，转录变体X2，mRNA，编码区125-1549
<400> 8
accgcctccc cctcccaccc ttctctgtct acctctgggc gggactgccg ggtgatgaga 60
tactcggtcg gcgacggtag aacgggcgac ggcgacaacc gcaatcacat ccacgacggt 120
gatcatggca gagaatcacg cccagaataa agccaagctc atctctgaga cccggaggag 180
gttcgaagct gagtatgtga cagataagtc agataaatat gatgcacgtg atgttgaaag 240
gctacaacaa gatgataact gggttgaaag ttacttatct tggagacata atattgtaga 300
tgaaacactg aagatgctcg atgagagttt tcagtggagg aaagaaattt ctgtcaatga 360
ccttaatgaa tcctccattc ccagatggtt attggaaatt ggtgttattt atctccatgg 420
ttatgacaaa gaaggtaaca aattgttctg gatcagggtg aagtatcatg taaaagacca 480
gaaaaccata ttggacaaaa agaagctcat agcattctgg ttggaacgtt atgctaagag 540
ggaaaatggg aaacctgtaa cagtgatgtt tgacctgtca gaaactggaa taaatagcat 600
tgacatggac tttgtacgct ttatcatcaa ctgctttaag gtttattacc ctaaatacct 660
ctcaaaaata gtgatctttg atatgccttg gttaatgaat gctgctttca aaattgtgaa 720
aacctggctt ggtccagaag cagtgagctt gttgaagttt acaagcaaaa atgaagtcca 780
ggactatgtc agtgtagaat acctgcctcc ccacatgggt ggaactgatc ctttcaagta 840
tagctatcca ccactagtag atgatgactt ccagacccca ctgtgtgaga atgggcctat 900
taccagtgag gatgaaactt caagtaaaga agacatagaa agtgatggca aagaaacatt 960
ggaaacaatt tctaatgaag aacaaacacc tcttcttaaa aagattaacc caaccgaatc 1020
tacttccaaa gcagaagaaa atgaaaaagt tgattcaaaa gtgaaagctt tcaagaaacc 1080
attgagtgta tttaaaggcc ccttactaca catcagccca gcagaagaac tgtactttgg 1140
aagtacagaa tccggagaga agaaaacctt aatagtgttg acaaatgtaa ctaaaaatat 1200
agtggcattt aaggtgagaa caacagctcc agaaaaatac agagtcaagc caagcaatag 1260
cagctgtgac ccgggtgcat cagtggatat agttgtgtct ccccatgggg gtttaacagt 1320
ctctgcccaa gaccgttttc tgataatggc tgcagaaatg gaacagtcat ctggcacagg 1380
cccagcagaa ttaactcagt tttggaaaga agttcccaga aacaaagtga tggaacatag 1440
gttaagatgc catactgttg aaagcagtaa accaaacact cttacgttaa aagacaatgc 1500
tttcaatatg tcagataaaa ccagtgaaga tatatgtcta caatacagtt aaagaagtgg 1560
tgccgggtag gaaccacggt tccttcgtcc attagttgga aaaagtaaca gacctaaaac 1620
tctaccaagc tactaaaaac attgcacatc tgtgcttcct aaaaggaaat atgcagcacg 1680
tggaggggaa cacatacatg tcttgaaaat aaactgctag aataaagaaa tgctggagaa 1740
attgattata agagactata gctatttagt aaagtaagta aaggcatatc cattgtgtaa 1800
attaatagtt taaatataat ttattttttc cttttgatct gaatactttt aaagcttaag 1860
ttttatcgtg taaatacatt agctaaactg aaaagtataa gtaacatgct ttgttgcagc 1920
caaaaaatgt aatctgcttt tttatgacag aattattata gctgagctga cttactagct 1980
tttctatact atgtatatag aagaacatgt atattgagaa agaaaacata cttatataga 2040
ggaatttatg taaccatgac tttgtaattt tgagaattcc tcccagtgat ggtcagtatt 2100
cttttggaat gtaaaccgat ttaatgccaa accaccttaa cctttgtttc tcagtgttcc 2160
ttaacagcct gccttttatt aatctcaggc ttttttatga acactctcat ttcagtagaa 2220
tttggaaaac taagcgtggt tggaatttct ttgaattctg ttagtaatgc ccaaaagaaa 2280
agtctcaagc agtcccccta tccagtcatt tttatggagt ttcatgttgt ccactatagc 2340
tggacactga accttttgcc taatttatta taaaggcctg accctctatt gtcccatctt 2400
cacccccatt ccagagcaga ggagtctctg tggaccatga attgcactgt ctccctcctc 2460
atttctaaat gaaaggtatt agatataaat ttttttgaaa ggttagttgt ttgagatgct 2520
aagcaggata ataaatttag attttaaaat gttccctgta aaagtcagcc catgacaagg 2580
aaatttacaa aatactagag tatctagaag ggtgaaaaca aaaaaaaata aaaagaaaca 2640
cagacgccca ggtgtcagct ctccgtttaa agaatgaaaa atgtaactca tgatgatctg 2700
tgaaaccttc aaactaggac caattgactt acttgatatt ctgcctttga tatggtagta 2760
cccacccggt attcctaaaa tcctaaaaag atacaccttg cagtagcaga ggcaatgaca 2820
tgagtttgtt ttctcattaa tatgaccagt ttgggtctat gttggttcac atgtacatct 2880
actttatatg aaagaaaaaa cagttgtctg cctgtaaaat gttgagtttc gattgagcca 2940
tgtttggaga ttttattact attctgaagg gtagtgttgt tggttttcat cttcaagaag 3000
ttgattccaa aactgagtta tgaagaatga tataacagtt ccttcaaaat tggcctagga 3060
aataaaacct taaaaggaca ctggtgtgct actttgtctt aatttgggct tttctgtttc 3120
agtttgccac ctccagctgt gaaatggact gcagtccacc ctaagtactg tgcacagtat 3180
ctccctgtgt gtgtgcacag tggcttcccc ttacatggta gatttttggc cttaatataa 3240
tctaatccca aagtagttgt gtatgttttc tgttccttgg caaataaatg aagaaataat 3300
tagccaagat tgaaaatgta ttgtcctaac ggtgtccctt taatgtttca tatgaaaaat 3360
tatgttgacc cactaaaata tccttgctca atgtctggtc agttgaattt aataacatat 3420
cttgttaatg tttgtgtgtc tattaaatgt gactaagcag gattactgaa aattcactat 3480
aaaatcaaag gcatctaaac gtttgtactt gtcttgatta atcatatatt tacacttgat 3540
ttttttctgt cttcatttgt ttttatttaa tcataattgc atgatttttt tggtactcta 3600
atcagtaatt ttatttttaa tcatgtcatt acctattcat gaccaaatta ccaaggaacc 3660
aacatttaga tttagatatt tgttttcact taggaatgga aattaataga ttttccatga 3720
aagcattagt gaaatatcat taccttgatc tgcaagtagc ctaaaaatgc gattgctggt 3780
aaacctggcc tcaaatttca tactaccata actgttttta tatattgcca ctaattttga 3840
ctggatttaa tagcacttta ttgtacaact acaaaaaaaa atatattcct agaattgttg 3900
ccagtgtaa 3909
<210> 9
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MOSPD2的shRNA发夹序列编号1
<400> 9
ccggcccaga tggttattgg aaattctcga gatttccaat aaccatctgg gttttttg 58
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> shRNA发夹序列编号1的MOSPD2上的靶序列
<400> 10
cccagatggt tattggaaat t 21
<210> 11
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MOSPD2的shRNA发夹序列编号2
<400> 11
ccgggccata ctgttgaaag cagtactcga gtactgcttt caacagtatg gcttttttg 59
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> shRNA发夹序列编号2的MOSPD2靶序列
<400> 12
gccatactgt tgaaagcagt a 21
<210> 13
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MOSPD2的shRNA发夹序列编号3
<400> 13
ccggccctcc tcatttctaa atgaactcga gttcatttag aaatgaggag ggttttttg 59
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> shRNA发夹序列编号3的MOSPD2靶序列
<400> 14
ccctcctcat ttctaaatga a 21
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MOSPD2的血球凝集素标签
<400> 15
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
1 5

Claims (22)

1.抗MOSPD2抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗癌症或癌症转移的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体是单克隆抗体。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体是人类抗体或人源化抗体。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、sdFv片段、VH结构域或VL结构域。
5.如权利要求1所述的用途，其中所述抗MOSPD2抗体或其抗原结合片段特异性结合至具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的序列的多肽。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至MOSPD2，其结合亲和力(KD)为10-6M至10-12M。
7.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化或FAK磷酸化。
8.如权利要求1所述的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段减少癌症团块附近或内部的循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞的数目或肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。
9.MOSPD2的抑制剂在制备用于治疗癌症或癌症转移的药物中的用途，其中所述抑制剂是多肽、DNA或RNA。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述抑制剂是反义DNA、诱饵DNA、双链DNA、单链DNA、复合的DNA、封装的DNA、病毒DNA、质粒DNA、miRNA、siRNA、shRNA、反义RNA、裸RNA、封装的RNA、病毒RNA或双链RNA。
11.如权利要求10所述的用途，其中所述抑制剂是CRISPR-CAS9系统。
12.如权利要求9所述的用途，其中所述抑制剂抑制癌细胞迁移、与肿瘤生长相关的单核细胞迁移、趋化因子信号传导途径、生长因子信号传导途径、EGF受体磷酸化、ERK磷酸化、AKT磷酸化或FAK磷酸化。
13.如权利要求9所述的用途，其中所述抑制剂减少癌症团块附近或内部的循环单核细胞或肿瘤相关性巨噬细胞的数目或肿瘤相关性巨噬细胞的迁移。
14.MOSPD2的抑制剂在制备用于治疗癌症或癌症转移的药物中的用途，其中所述抑制剂是小分子MOSPD2抑制剂。
15.如权利要求1-14中任一项所述的用途，其中所述癌症是膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、间充质源型癌、中枢或外周神经系统癌、子宫内膜癌、头颈癌、成胶质细胞瘤或恶性腹水。
16.如权利要求15所述的用途，其中所述肺癌是小细胞肺癌或非小细胞肺癌。
17.如权利要求15所述的用途，其中所述皮肤癌是鳞状细胞癌、基底细胞癌、黑素瘤、隆突性皮纤维肉瘤、梅克尔细胞癌、卡波西氏肉瘤、角化棘皮瘤、梭形细胞肿瘤、皮脂腺癌、微囊肿性附属器癌、乳腺佩吉特氏病、非典型纤维黄色瘤、平滑肌肉瘤或血管肉瘤。
18.如权利要求15所述的用途，其中所述间充质源型癌是纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤或骨肉瘤。
19.如权利要求15所述的用途，其中所述中枢或外周神经系统癌症是星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤或神经鞘瘤。
20.如权利要求1-14中任一项所述的用途，其中所述癌症是肛门癌、骨癌、胃肠道间质癌、角化棘皮瘤、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨肉瘤、卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌、阴茎癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、精原细胞瘤、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、畸胎癌、甲状腺滤泡癌、阴道癌、外阴癌、威尔姆氏瘤和其它儿童肾癌。
21.如权利要求1-14中任一项所述的用途，其中所述癌症或癌症转移是人类的癌症或癌症转移。
22.抗MOSPD2抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗受试者的癌症或癌症转移的药物中的用途；其中所述受试者为人类；其中所述抗体是单克隆抗体；并且其中所述抗体或其抗原结合片段结合至MOSPD2，其结合亲和力(KD)为10-6M至10-12M。
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