CN108125989A - 溶瘤作用中的禽偏肺病毒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及溶瘤作用中的禽偏肺病毒。具体地，本发明涉及用于癌症治疗的活禽偏肺病毒(AMPV)和用于癌症治疗的包含细胞毒性量的活禽偏肺病毒(AMPV)和药学上可接受的载体的药物组合物。

Description

溶瘤作用中的禽偏肺病毒

本申请是申请日为2012年4月11日的中国专利申请201280017841.2 “ 溶瘤作用中的禽偏肺病毒”的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于治疗的禽偏肺病毒(AMPV)和用于治疗的包含禽偏肺病毒(AMPV)的药物组合物。

背景技术

已知某些病毒可以根除肿瘤已有几十年。通常已知此类病毒为溶瘤病毒。尽管可溶瘤的肿瘤数相对低，但在几种病毒属中发现了它们。尤其是以下属的溶瘤成员是已知的：腺病毒、疱疹病毒、多瘤病毒、痘病毒、细小病毒、呼肠孤病毒、正黏液病毒、副黏液病毒、弹状病毒、冠状病毒、小核糖核酸病毒、披膜病毒和逆转录病毒。Vaha-Koskela, M.等近期的小综述给出了溶瘤病毒在癌症治疗中的概述(Cancer Letters 254: 178-216 (2007))。

所有溶瘤病毒均要面对的问题是在第一次剂量施用后，针对所用病毒的免疫开始建立。而且，考虑到肿瘤细胞中不可预知的分化和去分化途径，很可能某一肿瘤块的某些个别肿瘤细胞对癌症治疗中所用的溶瘤病毒变得具有抗性。例如，这可能是由于此类肿瘤细胞丧失了对该溶瘤病毒的受体这一事实。

如果仅由于这些原因，则存在对新溶瘤病毒的需要，其可以在开始癌症治疗时使用或当其他溶瘤病毒在癌症治疗中没有效果时用作替代物。

目前令人惊奇地发现，活禽病毒(火鸡鼻气管炎病毒，目前也已知为禽偏肺病毒(AMPV))出人意料地在哺乳动物细胞中具有溶瘤作用。

火鸡鼻气管炎(TRT)病毒或禽偏肺病毒是副黏液病毒科病毒科中偏肺病毒属的成员。偏肺病毒具有反义极性的单链非分段RNA基因组。

在副黏液病毒科中，直至目前，已知四个属的病毒包括一种溶瘤成员：禽腮腺炎病毒属中的一个成员(新城疫病毒)、麻疹病毒属中的一个(具体麻疹毒株)、呼吸道病毒属中的一个(仙台病毒)和德国麻疹病毒属中的一个(腮腺炎病毒)。

直至目前，仍不知道或者怀疑副黏液病毒科的偏肺病毒属具有显示出溶瘤特性的成员。

偏肺病毒属具有两个成员，其中之一是上述的AMPV，另一个成员是人偏肺病毒(HMPV)。两种病毒均导致呼吸道疾病；在人中为HMPV以及在家禽中为AMPV。

正是偏肺病毒的融合蛋白(F)负责向性中的差异。De Graaf等已经令人信服地显示HMPV不能感染家禽。并且反之亦然，从未报道AMPV在哺乳动物中导致疾病或甚至任何临床症状。(De Graaf M.,等, J. Gen. Virol. 90:1408-1416 (2009))。

此外，无论是HMPV或AMPV，均未描述任何抗肿瘤作用。

发明内容

在同样剂量下，活AMPV选择性杀死哺乳动物肿瘤细胞而非哺乳动物正常分化细胞和哺乳动物正常增殖细胞。选择性杀死哺乳动物肿瘤细胞这一特征将进一步称为抗肿瘤作用。

抗肿瘤作用表示无论作用方式如何，肿瘤的个别细胞由病毒杀死。例如，由于病毒裂解这些细胞，因此它们可以对细胞具有抗肿瘤作用：认为裂解病毒株破坏受感染细胞的质膜。抗肿瘤作用的另一形式例如见于非裂解病毒；它们似乎干扰细胞的代谢并且由于该作用方式而导致细胞死亡。

AMPV的抗肿瘤作用使病毒非常适合用于癌症治疗。

因此，本发明的第一个实施方案涉及用于哺乳动物中癌症治疗的活禽偏肺病毒(AMPV)。

优选地，AMPV用于针对乳腺癌、肺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、纤维肉瘤、卵巢癌、子宫颈癌、膀胱癌或结肠癌、或针对黑素瘤的癌症治疗。

更优选地，AMPV用于针对结肠癌的癌症治疗。

为了具有抗肿瘤作用，AMP病毒必须以对肿瘤细胞具有细胞毒性的量来施用。该量称为细胞毒性量。因此，AMPV的细胞毒性量是诱导肿瘤细胞死亡所必需的病毒的量。

理论上说，一个AMPV可以感染并杀死一个肿瘤细胞。因此对于诱导肿瘤细胞死亡所必需的AMPV的细胞毒性量将为每个细胞一个病毒。

然而，在实际环境中，技术人员将施用是待感染的肿瘤细胞数的多倍的量。

尽管如此，将需要非常少量的病毒以诱导抗肿瘤作用。每剂量10³个蚀斑形成单位(pfu)的病毒数已经足以攻击少量的肿瘤细胞。因此，对于许多实践目的，低至10³ pfu个病毒的数目已经能够认为是细胞毒性量。

然而，将清楚的是，如果施用的病毒量太少以致于仅少量肿瘤细胞被感染，则在第一轮感染已经产生了能够感染进一步的肿瘤细胞的新的子代病毒之前，会过去一些时间。对于后续的复制轮次同样是这样，并且同时将建立针对病毒的免疫应答并干扰病毒。因此，优选一次施用更高数量的病毒。在那种情况下，许多肿瘤细胞将同时获得感染，并且因此许多肿瘤细胞将在建立针对病毒的免疫之前获得感染。

病毒对哺乳动物中非肿瘤细胞非常轻微的或甚至不存在的作用允许施用此类相对高的剂量。所以，尽管在10³-10¹² pfu的宽范围内剂量将是可接受的剂量，但在10⁶-10¹²pfu范围内的剂量对于会从大量病毒中获益的大部分应用而言将是优选剂量。在10⁹-10¹²pfu范围内的剂量将是更优选的。

本发明的另一实施方案涉及用于哺乳动物中癌症治疗的药物组合物，其特征在于所述药物组合物包含细胞毒性量的活禽偏肺病毒(AMPV)和药学上可接受的载体。

“药学上可接受的载体”的概念在别处解释(见下文)。

尤其是当肿瘤为已达到几个细胞层厚度的巨大肿瘤时，内层可能不会直接暴露于病毒攻击下。对于具有低水平的血管形成的肿瘤而言尤其是这样的。因此，重要的是，在上面的细胞层被杀死后，来源于杀死的肿瘤细胞的子代病毒或新施用的病毒能够感染肿瘤内更深的细胞层。

为此原因，并且考虑到迟早将会建立针对AMPV的免疫应答，在用AMPV治疗之前和/或期间，向患者施用免疫抑制剂可能是有利的。这将推迟或抑制针对病毒的免疫应答，从而后续轮次的感染可以发生直至杀死所有易感的肿瘤细胞。免疫抑制剂在本领域是广泛知晓的。此类免疫抑制剂的实例尤其为：抑制编码白细胞介素和TNF-γ的基因的糖皮质激素；细胞抑制剂诸如甲氨蝶呤和硫唑嘌呤；针对CD25和CD3的抗体诸如放线菌素D；作用于抑免蛋白的药物诸如环孢素和他克莫司；和其他药物诸如干扰素类、阿片类物质、TNF结合蛋白、霉酚酸酯以及小生物制剂诸如芬戈莫德(Fingolimod)和多球壳菌素。此类免疫抑制剂的使用将由这些试剂的销售者说明。

因此，本实施方案的优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述组合物还包含免疫抑制剂。

免疫抑制剂可以施用一次，但例如为了保持免疫抑制作用一段时间，它们还可以在更长时期内以重复剂量施用。

因此，无论它是否包含免疫抑制剂，本发明的药物组合物优选向接受用免疫抑制剂治疗的哺乳动物施用。

如上所述，不施用免疫抑制剂，迟早将建立针对AMPV的免疫应答，其对感染在第一轮感染中没有被病毒感染的细胞的可能性具有负面结果。这一问题可以通过施用具有抗肿瘤作用的另一种(现在是非AMP)病毒(例如，见上文)以可选方法来避免。此类病毒将不会被针对AMPV的免疫应答所阻断。

优选地，施用AMPV和非AMPV(或非AMPV和AMPV，见下文)之间的时间间隔将为2-56周。第一种和第二种病毒施用之间的2-56周的时期按照如下原理：某些肿瘤为快速生长的，而其他肿瘤或者甚至转移的肿瘤细胞可能为缓慢生长的或甚至“休眠”相当一段时间。因此，根据肿瘤的特征，在时间上或早或晚给予第二种病毒可能是有利的。在许多情况下，第一种和第二种病毒施用之间的时期会更短，这是由于“休眠”时间少于56周。并且此外，技术人员可能想要避免细胞更早向外生长的风险。因此，优选时期将为2-28周，更优选2-20、2-16、2-12或者甚至2-8周，这是优先的顺序。

因此，本实施方案的另一形式涉及本发明的用于哺乳动物中癌症治疗的药物组合物，其特征在于所述癌症治疗包括向所述哺乳动物施用细胞毒性量的活AMPV的步骤，随后在所述施用细胞毒性量的活AMPV的2-56周内向所述哺乳动物施用细胞毒性量的非AMPV的步骤。

清楚的是，在癌症治疗中的该用途能够通过改动还应用于更早已用非AMPV治疗过的动物中。此类用途将应用于包括在施用细胞毒性量的非AMPV后2-56周内施用细胞毒性量的活AMPV的步骤的治疗中。

因此，本实施方案的又另一形式涉及本发明的用于哺乳动物中癌症治疗的药物组合物，其特征在于所述癌症治疗包括在向所述哺乳动物施用细胞毒性量的非AMPV的步骤后2-56周内向所述哺乳动物施用细胞毒性量的活AMPV的步骤。

上述的溶瘤非AMP病毒中，最常用于癌症治疗中的病毒是另一种细胞毒性副黏液病毒(新城疫病毒(NDV))。使用NDV的充分指导在下文中给出。

因此在优选的实施方案中，非AMPV为NDV。

除了在使用AMPV之前或邻近使用AMPV时使用免疫抑制剂并使用其他细胞毒性(非AMPV)病毒，还存在几种方法来增强向肿瘤细胞的病毒递送。一种方法是用化合物诸如蛋白水解酶例如透明质酸酶和胶原酶预先处理肿瘤组织。(McKee, T.D. 等, Cancer Res.66:2509-2513 (2006), Cairns, R. 等, Mol.Cancer Res.4:61-70 (2006), Minchinton,A.I. 等, Nat. Rev. Cancer 6:583-592 (2006))。

另一种提高血液-肿瘤透性的方法是通过施用血管活性或血管正常化化合物，诸如bradikynin、紫杉醇或白细胞三烯(leukotrines)。

此类化合物的使用将由这些化合物的销售者说明。

此类治疗促进病毒侵入并因此促进病毒向肿瘤细胞的递送。此类化合物还称作增强病毒递送的化合物。

因此，本实施方案的另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述组合物还包含增强病毒递送的化合物。

而且，已经提出了依赖于增强病毒递送的物理方法的方法(例如通过提高肿瘤的氧合)作为提高血液-肿瘤透性的方法。此类方法例如依赖于吸入含氧量高的气体或局部体温过高。此类方法还称作增强病毒递送的方法。

增强病毒递送的化合物可以施用一次，但例如为了保持作用一段时间，它们还可以在更长时期内以重复剂量施用。

因此，无论它是否包含增强病毒递送的化合物，本发明的药物组合物优选向接受用增强病毒递送的化合物治疗的哺乳动物施用。

同样，增强病毒递送的方法可以向动物应用延长的时期。

因此，无论它是否包含增强病毒递送的化合物，本发明的药物组合物优选向接受用增强病毒递送的方法治疗的哺乳动物施用。

能够成功与本发明的AMPV治疗组合应用的另一方法是使用细胞抑制化合物的更经典方法。此类化合物在本领域是熟知的，并且它们包括烷化剂诸如苯丁酸氮芥和异环磷酰胺、抗代谢物诸如巯嘌呤、植物生物碱和萜类化合物诸如长春新碱、鬼臼毒素和单宁(tannanes)、和拓扑异构酶抑制剂诸如伊立替康和安吖啶。并且如同对于上述的免疫抑制剂、酶和化合物一样，此类酶或化合物的使用将由细胞抑制化合物的销售者说明。

因此，本实施方案的又另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述组合物还包含细胞抑制化合物。

细胞抑制剂可以施用一次，但例如为了保持细胞抑制作用一段时间，它们还可以在更长时期内以重复剂量施用。

因此，无论它是否包含细胞抑制剂，本发明的药物组合物优选向接受用细胞抑制化合物治疗的哺乳动物施用。

关于哺乳动物的性质，可以提及以下内容：无需说明本发明用于癌症治疗的用途非常适合于人。由于经济原因，在非人哺乳动物即兽医应用中的用途将尤其适用于伴侣动物，诸如马、犬或猫物种。

因此，另一优选实施方案涉及本发明的药物组合物，其特征在于哺乳动物属于人、马、犬或猫物种。

关于施用的途径或部位，原则上，病毒可以口服、经吸入和通过全身应用来施用。全身应用包括肌内、腹膜内、皮下、静脉内和肿瘤内或肿瘤周围施用。

对于呼吸道中的肿瘤，静脉内途径和吸入途径将是优选途径。

对于大部分其他肿瘤，静脉内和/或肿瘤内和/或肿瘤周围施用将是选择的优选方法。

因此，本实施方案的另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的施用部位为肿瘤内的。肿瘤内施用为向肿瘤块内的施用。

本实施方案的又另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的施用部位为肿瘤周围的。肿瘤周围施用为在肿瘤块周围的施用。

而且，本实施方案的另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的施用部位为静脉内的。

本实施方案的还另一优选形式涉及本发明的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的施用途径为经吸入。

本领域中存在的关于施用另一种细胞毒性副黏液病毒(新城疫病毒(NDV))的大量知识还应给予技术人员大量指导。仅仅作为本领域的实例，提供以下概述：

如同Schirrmacher V., Griesbach A., Ahlert T., Int. J. Oncol. 18: 945-52,2001中综述，在动物研究中，NDV感染已经通过尤其是肿瘤内途径、腹膜内途径和静脉内途径来完成。经肌内或皮下途径的NDV感染已经由尤其是Heicappell R., Schirrmacher V.,von Hoegen P.,等, Int. J. Cancer 37: 569-577 (1986)综述。

在人研究中，在其中患者已经被NDV的裂解株感染的情况下，已经使用肿瘤内、静脉内或肌内注射(Cassel W.A., Garrett R.E., Cancer 18:863-868 (1965), CsataryL.K., Moss R.W., Beuth J., 等Anticancer Res.19:635-638 (1999), Pecora A.L.,Rizvi N., Cohen G.I., 等, J. Clin.Oncol.20:2251-2266 (2002), Csatary L.K.,Bakács T., JAMA 281:1588-1589 (1999), Wheelock E.F., Dingle J.H., N. Engl. J.Med.271:645-651 (1964), Csatary L.K., Lancet 2 (7728):825 (1971)。还使用以下途径：吸入和向结肠内直接注射(即，经结肠造口术开口)。(Csatary L.K., Moss R.W.,Beuth J., 等Anticancer Res.19:635-638 (1999), Csatary L.K., Eckhardt S.,Bukosza I., 等, Cancer Detect.Prev.17:619-27 (1993))。

为了允许AMPV的施用，本发明的药物组合物原则上应包含在药学上可接受的载体中的AMPV。

“药学上可接受的载体”旨在帮助化合物的有效施用，而不对它施用的动物的健康产生(严重的)副作用。药学上可接受的载体例如可以是无菌水或无菌的生理盐溶液。在更复杂的形式中，载体例如可以是缓冲液，其可以包含其它的添加剂，诸如稳定剂或防腐剂。载体的性质尤其依赖于施用途径。如果施用途径为经吸入，则载体可以简单为无菌水、生理盐溶液或缓冲液。如果注射为优选途径，则载体应该优选为等渗的并且具有使其适合于注射的pH限制。然而，此类载体在本领域是广泛知晓的。

细节和实例例如描述于众所周知的手册，例如：诸如：“Remington: the scienceand practice of pharmacy” (2000, Lippincot, USA, ISBN:683306472)。

用于本发明的药学上可接受的载体的实例包括稳定剂诸如SPGA、碳水化合物(例如山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖)、蛋白诸如白蛋白或酪蛋白、含蛋白的试剂诸如牛血清或脱脂牛奶和缓冲液(例如磷酸盐缓冲液)。优选地，稳定剂无动物来源的化合物，或者甚至为化学确定的，如公开于WO 2006/094,974中。尤其是当此类稳定剂加入到药物组合物中时，药物组合物非常适合于冷冻干燥。冷冻干燥是阻止AMPV灭活的非常适合的方法。因此，在更优选的形式中，本发明的药物组合物为冷冻干燥形式。

附图说明

图1：用TRT感染后细胞裂解的表现

细胞群的代表性图像。

图片a-c:CIPp细胞，在感染后7天拍摄的图片。

图片d-f:HMPOS细胞，在感染后3天拍摄的图片。

图片g-i:Mel-T4细胞，在感染后3天拍摄的图片。

在a、d、g中的细胞为模拟感染的，在b、e、h中的细胞为用0.1的感染复数(MOI)感染的，在c、f、I中的细胞为用1的MOI感染的。

具体实施方式

实施例1.

细胞培养：

具有ATCC序号CL188的人结肠癌细胞系LS 174T按照由ATCC提供的说明书生长直至半汇合。

病毒的预处理：

用在细胞培养基中的TRT病毒悬浮液进行感染，其用胰蛋白酶如下预处理：将10 USPTU/ml胰蛋白酶加入到病毒悬浮液中，并将混合物孵育30分钟。为了抑制胰蛋白酶活性，将10% FBS (Biochrome AG)加入到病毒悬浮液中。

人结肠癌细胞系LS 174T的感染：

从CL188细胞中去除培养基，并以感染复数(MOI)0.1和MOI 0.01加入1 ml病毒悬浮液。在组织培养条件(37℃, 5% CO₂)下1小时孵育后，加入含有10％胎牛血清、如通常用于细胞培养中的标准量的新霉素、匹马霉素(pymafusin)和泰乐菌素以及2ug/ml两性霉素B(Gibco)的4 ml完全组织培养基，并将细胞在组织培养条件下保持3天。随后，收集细胞上清液，并贮存于-70℃。将新鲜的完全组织培养基加入到细胞中，并在感染后7天，收集细胞上清液。随后，将1 ml PBS-红加入到细胞中，随后将其刮下以将它们从细胞培养表面分离。最后，测定接种物、细胞上清液收集物和收集的细胞的病毒滴度(Log10 TCID50/ml)。

结果

表1显示了接种物、在接种后3天和7天的细胞上清液和收集的细胞的TRT滴度(Log10TCID50/ml)。

表1：TRT病毒滴度。

随后用病毒滴度来确定在感染过程中是否已经发生病毒复制。为了该目的，计算存在于接种物、细胞上清液和细胞收集物中的病毒的绝对量。对于细胞上清液，将该量对上清液的体积(5ml)进行校正。将感染后3天和7天的细胞上清液中病毒量的总数加到感染后7天的细胞中病毒量中。将该总病毒量除以接种物中的病毒量。>1的复制因子说明病毒扩增已经发生(表2)。

表2：TRT复制

结论

用TRT以0.01的MOI感染CL188人结肠癌细胞导致病毒复制。以0.1的MOI的感染不允许病毒复制。

实施例2.

为了研究火鸡鼻气管炎病毒(TRT)对犬肿瘤细胞的细胞裂解作用，以两种感染复数(MOIs)用TRT感染三种细胞系。将未感染的细胞作为阴性对照。从感染后3天开始连续5天用显微镜监测细胞裂解的发生并评分。

材料

细胞系：

CIPp:犬乳腺癌细胞，来源于原发病灶，保持于添加有10%胎牛血清(FBS)、丙酮酸钠和L-谷氨酰胺的DMEM/F12中。来源：Nobuo Sasaki教授, Laboratory of VeterinarySurgery, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, University ofTokyo, Japan。

HMPOS:高度转移的犬骨肉瘤细胞，保持于添加有10% FBS和丙酮酸钠的RPMI1640中。来源：Jolle Kirpensteijn博士教授, Faculty of Veterinary Medicine,University of Utrecht, The Netherlands

Mel-T4:犬黑素瘤细胞，保持于添加有10% FBS和丙酮酸钠的M199/F10中。来源：MSDAnimal Health, Boxmeer, The Netherlands。

病毒：火鸡鼻气管炎病毒(TRT), 毒株1194

5.86 ¹⁰log TCID₅₀ /小瓶。

方法

将细胞以6000细胞/孔(CIPp)或15000细胞/孔(HMPOS, Mel-T4)接种于96孔组织培养板中。允许细胞附着于组织培养板上，并随后用在PBS中稀释的TRT以MOI 1或MOI 0.1感染。将未感染的细胞作为阴性对照。30分钟后，向所有孔中加入培养基(添加有4% FCS)，产生2％的FCS的终浓度。将细胞在37℃, 5% CO₂下孵育。从感染后3天，使用Olympus CKX41倒置相差显微镜连续5天目视检查细胞中细胞裂解的发生。

结果

尽管有多种表现和程度，但可以在所有感染的细胞系中观察到细胞裂解。在感染的CIPp群中，观察到圆形的细胞。感染的HMPOS细胞成簇生长，在单细胞层中产生了裂隙。单个细胞变圆。在感染的Mel-T4群中也观察到了优先的成簇生长和单细胞层的大量瓦解(图1)。

观察到细胞裂解的程度及其开始的时机依赖于细胞系和MOI两者。细胞裂解的程度随时间而增加。如表1中所示，CIPp细胞对用TRT感染有最大抗性。在第5天(MOI 1)或第6天(MOI 0.1)，细胞裂解的最初征兆变得可见。以MOI 1时TRT对HMPOS细胞的溶瘤作用在感染后3天已经变得明显。相反，以MOI 0.1的感染不导致细胞裂解。Mel-T4细胞对于用TRT感染是最敏感的。以MOI 1时，早至感染后3天即观察到细胞裂解。对于用MOI 0.1感染的细胞，该作用延迟一天。

表1：在用TRT感染的犬肿瘤细胞中细胞裂解的逐步增加

-:无细胞裂解，+/-:较小异常(一些圆形细胞，少量细胞簇)，+:轻微细胞裂解，++:实质性细胞裂解， +++ : 重度细胞裂解。

结论

TRT对犬肿瘤细胞系CIPp、HMPOS和Mel-T4具有明显的细胞裂解作用。细胞裂解的程度和时机受相关的细胞系和施用的MOI的作用。

Claims (15)

1.活的禽偏肺病毒(AMPV)在制备用于治疗的药物中的用途，所述治疗杀死哺乳动物中的哺乳动物肿瘤细胞。

2.药物组合物在制备用于治疗的药物中的用途，所述治疗杀死哺乳动物中的哺乳动物肿瘤细胞，其特征在于所述组合物包含细胞毒性量的活的禽偏肺病毒(AMPV)和药学上可接受的载体。

3.权利要求2的用途，其特征在于所述组合物还包含免疫抑制剂。

4.权利要求1或2的用途，其特征在于所述哺乳动物接受用免疫抑制剂的治疗。

5.权利要求2的用途，其特征在于所述组合物还包含细胞抑制化合物。

6.权利要求1或2的用途，其特征在于所述哺乳动物接受用细胞抑制化合物的治疗。

7.权利要求2的用途，其特征在于所述组合物还包含增强病毒递送的化合物。

8.权利要求1或2的用途，其特征在于所述哺乳动物接受用增强病毒递送的化合物和/或方法的治疗。

9.权利要求1或2的用途，其特征在于所述治疗包括向所述哺乳动物施用细胞毒性量的活的AMPV的步骤，随后是在所述施用细胞毒性量的AMPV的2-56周内向所述哺乳动物施用细胞毒性量的活的非AMPV的步骤。

10.权利要求1或2的用途，其特征在于所述治疗包括在向所述哺乳动物施用细胞毒性量的非AMPV步骤后的2-56周内向所述哺乳动物施用细胞毒性量的活的AMPV的步骤。

11.权利要求1或2的任一项的用途，其特征在于所述哺乳动物属于人、马、犬或猫物种。

12.权利要求1或2的任一项的用途，其特征在于所述药物是肿瘤内施用。

13.权利要求1或2的任一项的用途，其特征在于所述药物在肿瘤周围部位施用。

14.权利要求1或2的任一项的用途，其特征在于所述药物是静脉内施用。

15.权利要求1或2的任一项的用途，其特征在于所述药物经吸入施用。