CN108124773A - 一种利用苹果茎段进行组织培养的方法 - Google Patents

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蔡小军
蔡军利
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor

Abstract

本发明涉及一种利用苹果茎段进行组织培养的方法，诱导生根步骤，诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500‑2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm‑1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。本发明采用无性繁殖方式，使母本的优良性状完整保留，并通过茎尖脱毒技术使继代比母本更加优良。并突破了木本组培苗生根质量差的难题，组培苗根系发达，完整，成活率高，无须炼苗。

Description

一种利用苹果茎段进行组织培养的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种利用苹果茎段进行组织培养的方法。
背景技术
苹果，落叶乔木，叶子是椭圆形，有锯齿，花白色带有红晕。果实圆形，味道甜或略酸，是常见水果，具有丰富营养成分，有食疗、辅助治疗功能，是世界四大水果之一。
苹果为多年生木本植物,在遗传上都是杂合体，由于对控制性状的基因了解较少，使得通过常规杂交育种来培育新品种有一定困难,特别是改良现有品种的某一两个不良性状更显棘手。本世纪50～60年代开展的植物组织培养技术和70年代后期在植物分子生物学和组织培养基础上发展起来的植物基因工程，为解决这些困难开辟了新的途径。
用组织培养的方法加速繁殖新引或培育的品种，可不受季节的限制和影响，可以很容易将一些病原脱除，获得无病毒植株。传统苹果都采用田间种植来保存种质，占地面积大，管理成本高，并容易受炭虫危害，引种或种质交换过程容易携带病虫原，采用组织培养物作为保存物，不仅节省土地、管理方便、也便于国内外种质交流，通过组培技术能够从体细胞和组织再生完整植株。苹果诱变选种多年来一直存在嵌合体现象，利用苹果体细胞胚技术进行突变体选择，将会使突变育种效率提高，同时体细胞胚技术也为研制苹果人工种子奠定了基础。
但是现有的组织培养的方法中，存在很多缺点，特别是在生根阶段都是需要含糖培养基，但是糖是污染源，容易增大生根阶段的污染率，而且，传统方法生根时只能获得一定数量主根，而且没根毛，需后期炼苗培养。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种利用苹果茎段进行组织培养的方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：
1、采集苹果新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2、继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3、诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入专用生根设备里面的基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4、把苹果完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
本发明采用无性繁殖方式，使母本的优良性状完整保留，并通过茎尖脱毒技术使继代比母本更加优良。并突破了木本组培苗生根质量差的难题，组培苗根系发达，完整，成活率高，无须炼苗。
附图说明：
图1：实施例3的立体结构示意图；
图2：实施例3的剖面结构示意图；
图3：实施例3所述根床的俯视结构示意图。
具体实施方式
以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
实施例1
以烟富10号茎段作为组培材料，使用本发明的方法进行组织培养。
1、采集苹果新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2、继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3、诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入专用生根设备(实施例3)里面的基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4、把苹果完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
实施例2
以烟富10号茎段作为组培材料，使用不同的方法进行组织培养。
实验组：使用本发明实施例1的方法；
对照1组：诱导生根步骤所采用的培养基为：1/2MS+0.5mg·L-1IBA+1.5mg·L-1IAA+20g·L-1蔗糖+6g·L-1琼脂粉(琼脂粉凝胶强度为1300g/cm2)+0.2g·L-1活性炭，其他与实验组相同。
对照2组：诱导生根步骤所采用的培养基为：MS+0.34mg/LIBA+0.5mg/LNAA，其他与实验组相同。
对照3组：诱导生根步骤所采用的光照时间10h，温度25±2℃，湿度85％，其他与实验组相同。
对照4组：诱导生根步骤所采用的二氧化碳浓度1200ppm，其他与实验组相同。
实施例3
一种组织培养专用生根设备，如图1至图3所示，包括：盒体1、盒盖2和根床3，所述盒盖2通过合页26与盒体1相连接，可相对盒体1翻转；所述根床3由若干相互垂直的隔板组成，所述根床3具有若干个相互独立的井字形的用于容置培养基的根床区域30，所述盒盖2的底面上设置有LED灯20，所述盒体1的侧壁面上开设有若干通风孔10，所述通风孔10所处位置高于根床3的顶面。通过根床3可以将猕猴桃苗生长的根都分隔，避免了培苗完成后，它们的根系缠绕于一起，将它们分离时费时费力且易损伤根系。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (3)

1.一种利用苹果茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，
把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
2.根据权利要求1所述的利用苹果茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
3.根据权利要求1所述的利用苹果茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，具体的方法为：
1)采集苹果新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2)继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3)诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株；
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4)把苹果完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
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