CN108114320A - 组织修复用补片、主体及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种组织修复用补片、主体及制备方法，属于组织修复技术领域，其中，主体的制备包括如下步骤：获取动物小肠黏膜下层，将所述的小肠黏膜下层经复合、压制、叠加、干燥、缝合得到主体；所述的缝合采用不可吸收缝线；所述的缝线为聚酯和/或聚丙烯材质，所述的干燥选用冻干或真空干燥。本发明方法制备的补片主体具有异物感低，力学性能好和防止组织粘连的优点。

Description

组织修复用补片、主体及制备方法

技术领域

本发明涉及组织修补技术领域，具体涉及一种组织修复用补片、主体及制备方法。

背景技术

本发明对于背景技术的描述属于与本发明相关的相关技术，仅仅是用于说明和便于理解本发明的内容，不应理解为申请人明确认为或推定申请人认为是本发明在首次提出申请的申请日的现有技术。

组织创伤或缺损是临床上常见的病症，如体内手术引起的创伤、器官组织部分缺损，疝气、体表皮肤损伤等，其严重影响病人的生活质量，是医学上必须面对和亟待解决的难题。

目前市场上用于组织修复的补片因为采用可吸收的缝线，并将非生物材料接触待修复组织，存在着力学性能差，异物感强和容易产生组织粘连的缺点。

发明内容

本发明的实施例的目的是提供一种组织修复用补片、主体及制备方法，本发明实施例提供的补片具有异物感低，力学性能好和防止组织粘连的优点。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明实施例提供了一种组织修复用补片主体的制备方法，包括如下步骤：

获取动物小肠黏膜下层，

将所述的小肠黏膜下层经复合、压制、叠加、干燥、缝合得到主体；所述的缝合采用不可吸收缝线；所述的缝线为聚酯和/或聚丙烯材质，所述的干燥选用冻干或真空干燥。

进一步的，所述的动物小肠黏膜下层由动物小肠的膜状或片状组织进行消毒、脱脂、脱细胞、去病毒处理得到，采用酸碱交替处理。

进一步的，所述脱细胞采用溶质质量百分含量为0.05-0.5％胰糜蛋白酶溶液。

进一步的，所述的动物小肠黏膜下层包括靠近黏膜层的第一面和靠近浆膜层的第二面，所述的叠加为按照动物小肠黏膜下层的第二面朝向待修复组织进行叠加。

进一步的，所述的消毒的方式如下：

将动物小肠的膜状或片状组织用第一溶液浸泡5-90mi n，所述的第一溶液为过氧乙酸的质量百分含量为0.01-1％，乙醇的质量百分含量为1-10％的混合水溶液；

或：将动物小肠的膜状或片状组织用摩尔浓度为0.01-0.05M的乙二胺四乙酸二钠溶液浸泡1-6h；

或：将动物小肠的膜状或片状组织用质量百分含量为0.01-1％氢氧化钠溶液浸泡2-12h。

进一步的，所述的脱脂采用溶质质量分数为1％-5％碱性溶液，所述的溶质为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。

进一步的，所述的脱脂通过超声作用的辅助。

进一步的，所述的脱细胞为室温下将所述的小肠黏膜下层在脱细胞溶液浸泡处理0.5-4h，采用溶质质量百分含量为1-3％的氢氧化钠终止酶反应。

进一步的，所述的去病毒为采用质量百分含量为0.2％-2％过氧乙酸和乙醇混合溶液、质量百分含量为1％-3％的氢氧化钠溶液中的一种或两种结合的方式分别进行处理1h-3h。

第二方面，本发明实施例提供了一种组织修复用补片主体，所述的主体由上述的任一种制备方法制备而得。

第三方面，本发明实施例提供了一种组织修复用补片的制备方法，包括如下步骤：

采用上述的任一种制备方法制备组织修复用补片主体，

将所述的主体与接触层进行复合、压制、干燥得到所述的组织修复用补片，所述的接触层为动物小肠黏膜下层。

第四方面，本发明实施例还提供了一种组织修复用补片，所述的组织修复用补片由上述制备方法制备而得。

借由上述方案，本发明方案至少具有如下优点：

本发明方法中采用可吸收的生物材料，通过冻干结合不可吸收缝线的方式，不同形式的多层叠加，不同种类的缝合方式，针对不同需求采用不同干燥方式，交替处理。叠加冻干缝合叠加方式，降低异物感和粘连，增加持久力学强度。

本发明实施例提供的补片采用小肠黏膜下层与待修复组织相接触，不但可以防止组织粘连，而且降低了补片的异物感；采用不可吸收缝线缝合，提高了补片的力学性能。

附图说明

为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍：

图1为本发明实施例中组织修复用补片的结构示意图；

图2为本发明实施例中大鼠皮下植入补片7天后的效果图；

图3为本发明实施例中大鼠皮下植入补片7天后的另一种效果图；

图4为本发明实施例中大鼠皮下植入补片6个月后的效果图；

图5为本发明实施例中大鼠腹部植入补片3个月的效果图；

图6为本发明实施例中大鼠腹部植入补片后修复效果图；

图7为本发明实施例中大鼠腹部植入补片后另一修复效果图；

图8为本发明实施例中大鼠腹部植入现有的非生物补片一个月后效果图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的详细介绍，应当理解，附图和实施例是为了本领域技术人员更容易理解本发明的技术方案，而不能作为本发明保护范围的限定。

在下述介绍中，术语“第一”、“第二”仅为用于描述的目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。下述介绍提供了本发明的多个实施例，不同实施例之间可以替换或者合并组合，因此本发明也可认为包含所记载的相同和/ 或不同实施例的所有可能组合。因而，如果一个实施例包含特征A、B、C，另一个实施例包含特征B、D，那么本发明也应视为包括含有A、B、C、D 的一个或多个所有其他可能的组合的实施例，尽管该实施例可能并未在以下内容中有明确的文字记载。

申请人研究发现：在组织修复补片中，聚丙稀、聚酯等高分子合成材料因其都是细菌良好的粘附载体，细菌粘附于其上后即可产生使其免受宿主免疫防御机制和抗生素作用的生物被膜，从而得以在局部长期成活并可导致伤口的慢性感染；且将此类材料植入腹腔内，极易引起粘连，异物感极强；申请人还发现：生物组织衍生材料，由人的异体或哺乳类动物的膜状或片状组织经理化处理而成的具有三维空间框架结构的细胞外基质构成，其组织相容性、稳定性上均经受住了考验，但临床效果不理想。原因是其天然的成分在组织内的降解吸收不可控，从而远期力学性能不稳定，易引起复发，因而，需要一种便于应用的全新的组织修复补片来满足临床的需求。

本发明实施例提供了一种组织修复用补片主体的制备方法，包括如下步骤：

获取动物小肠黏膜下层，

将所述的小肠黏膜下层经复合、压制、叠加、干燥、缝合得到主体；所述的缝合采用不可吸收缝线；所述的缝线为聚酯和/或聚丙烯材质，所述的干燥选用冻干或真空干燥。

本发明实施例提供了一种组织修复用补片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取动物小肠黏膜下层，

将所述的小肠黏膜下层经复合、压制、叠加、干燥、缝合得到主体；所述的缝合采用不可吸收缝线；所述的缝线为聚酯和/或聚丙烯材质，所述的干燥选用冻干或真空干燥；

将所述的主体与接触层进行复合、压制、干燥得到所述的组织修复用补片，所述的接触层为动物小肠黏膜下层；所述的干燥选用冻干或真空干燥。

这里要说明的是：采用不可吸收的缝线可以大大提高补片的力学性能；冻干或真空干燥结合不可吸收缝线，降低异物感和粘连，增加持久力学强度；在本发明的一些实施例中冷冻干燥过程采取-60-80℃速冻的方式，将样品预冻1-6小时，同时调节真空条件，梯度低温冷冻干燥，保证产品表面平整均一。

以上方案已经可以实现本发明的目的，下面在此基础上给出优选方案：

对于小肠黏膜下层的获取和处理方式，本发明不作具体限定，作为优选方案，在本发明的一些实施例中，所述的动物小肠黏膜下层由动物小肠的膜状或片状组织进行消毒、脱脂、脱细胞、去病毒处理得到，采用酸碱交替处理；这里要说明的是：本发明方法中免疫原性的处理程度控制，采用酸碱相结合的交替处理，结合脱脂脱细胞处理，确保原材料的免疫原性达到可接受水平。

在本发明的一些实施例中，所述脱细胞采用溶质质量百分含量包括 0.05-0.5％胰糜蛋白酶溶液；这里要说明的是：采用胰糜蛋白酶脱细胞，确保无细胞残留同时不破坏胶原结构；采用胰糜蛋白酶进行脱细胞处理，主要是对细胞间质中的粘连蛋白的酶解作用，作用于胶原非螺旋区的蛋白酶有胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶。而胶原中氨基酸主要是羟脯氨酸、脯氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸。胰糜蛋白酶对这几种氨基酸作用微弱，故不破坏胶原结构。。

动物小肠黏膜下层包括靠近黏膜层的第一面和靠近浆膜层的第二面，在本发明的一些实施例中，所述的叠加为按照动物小肠黏膜下层的第二面朝向待修复组织进行叠加。这里要说明的是：小肠黏膜下层浆膜面一侧相对黏膜一面较粗糙，组织间空隙较大，其利于细胞贴附生长。

在本发明的一些实施例中，消毒方式为：将动物小肠的膜状或片状组织用第一溶液浸泡5-90min，所述的第一溶液为过氧乙酸的质量百分含量为 0.01-1％，乙醇的质量百分含量为1-10％的的混合水溶液；

在本发明的另一些实施例中，消毒方式为：将动物小肠的膜状或片状组织用摩尔浓度为0.01-0.05M的乙二胺四乙酸二钠溶液浸泡1-6h；

在本发明的另一些实施例中，消毒方式为：将动物小肠的膜状或片状组织用质量百分含量为0.01-1％氢氧化钠溶液浸泡2-12h。

在本发明的一些实施例中所述的脱脂采用溶质质量分数为1％-5％碱性溶液，溶质为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种，这里要说明的是，本发明对碱性溶质的种类不做限定，只要可以满足脱脂的要求即可。

在本发明的一些实施例中，所述的脱脂通过超声作用的辅助，超声作用的辅助可以保证充分脱脂。

在本发明的一些实施例中，所述的脱细胞为室温下将所述的小肠黏膜下层在脱细胞溶液浸泡处理0.5-4h，采用溶质质量百分含量为1％-3％的氢氧化钠终止酶反应。

这里要说明的是，所述的消毒处理为在常温下采用消毒液对小肠黏膜下层进行浸泡处理，SIS长度与消毒液的体积比为1：1-20cm/ml。

在本发明的一些实施例中，所述的去病毒为采用质量百分含量为 0.2％-2％过氧乙酸和乙醇混合溶液、质量百分含量为1％-3％的氢氧化钠溶液中的一种或两种结合的方式分别进行处理1h-3h。

本发明对缝合的具体步骤不做限定，优选采用不可吸收缝线聚酯、聚丙烯、聚四氟乙烯等缝线缝合并通过生物胶和/或物理加压方式复合小肠黏膜下层制备而成。

在本发明的一些实施例中，所述的干燥选用冻干或真空干燥。

本发明方法有效的解决了处理工艺的免疫原问题和过度处理问题，并在应用上大大改善了单一生物补片的远期力学性能下降导致复发的问题，并且产品整体性良好，无复合过程带来的手术问题，并明显改善单一高分子材料补片或复合高分子材料补片及生物材料复合高分子材料补片给患者带来的异物感，降低粘连和感染发生的风险。

缝线包括已上市的一种或多种缝线，聚酯和/或聚丙烯材料为主，其他不可吸收缝线材质为辅缝线，这里对缝线的结构不做具体限定，可以根据选用单股或多股缝线等。

高分子不可以吸收补片易产生粘连等，与手术中制备的生物与高分子结合的补片相比降低手术中制作的困难节省时间，增强补片的力学性能同时，避免交联的生物补片组织诱导能力差或未交联补片很快被组织液酶解失效的情况。

脱细胞采用酶法包括胰糜蛋白酶、Dispase或高渗盐水脱细胞中的一种或几种组合方式，并采用曲拉通\SDS中的一种或两种去除细胞碎片。

图1为本发明组织修复用补片结构示意图，如图1所示，本发明实施例提供了一种组织修复用补片主体，包括：

多层小肠黏膜下层材料补片，所述小肠黏膜下层材料补片为动物小肠组织处理后的动物小肠黏膜下层材料，多层所述的小肠黏膜下层材料补片缝补固定。

本实施例采用不可吸收缝线缝合，大大提高了补片主体的力学性能。

所述产品经特制模具压制成型处理是将样品表面多层交替叠加，置于特殊结构的模具中，联合冷冻干燥机条件的调节，将产品压制成孔状、横纵交错的网格状、成簇集成的圆锥形式、编带形式等满足组织修复要求的特殊形状。

本发明的小肠黏膜下层(SIS)在处理前，可以先对小肠进行表面灭菌与消毒处理，比如用过氧乙酸、新洁尔灭和/或酒精等其中的一种或几种交替进行浸泡处理。

在本发明的消毒、脱脂、脱细胞和去病毒处理过程中，还可适当加入磷酸盐、氯化钠、碳酸氢钠等缓冲溶液来调节工艺处理中的溶液体系平衡。摩尔浓度为0.01-0.05mol/L的PBS缓冲液，控制PH7.3-7.5。

将小肠粘膜下层逐层平铺于特制模具上，并控制铺膜尺寸大小，首先完成第一层铺膜，每层中相邻两片SIS之间的铺膜时需要部分重叠，这里对铺膜具体每层的方向和顺序不作具体要求，在铺膜的过程中应注意保证每个方向的力学性能均满足要求即可。

本发明实施例提供了一种组织修复用补片主体，包括：

多层小肠黏膜下层材料补片，所述小肠黏膜下层材料补片为动物小肠组织处理后的动物小肠黏膜下层材料，多层所述的小肠黏膜下层材料补片缝补固定。

本发明的另一些实施例提供了一种组织修复用补片，包括：

主体(1)，所述的主体(1)为上述的实施例中的组织修复用补片主体；

接触层(2)，与所述的主体(1)贴合固定，所述的接触层(2)用于与待修复组织接触，所述的接触层为小肠黏膜下层材料。

本发明实施例提供的补片采用小肠黏膜下层与待修复组织相接触，不但可以防止组织粘连，而且降低了补片的异物感；采用不可吸收缝线缝合，提高了补片的力学性能。

在本发明的一些实施例中，小肠黏膜下层材料补片可以包括多个补片单片，相邻的所述补片单片之间部分重叠贴合，多个补片单片之间部分重叠可以保证补片的有效性；这里要说明的是：本发明对补片单片的数量及补片单片之间重叠的面积大小不作具体限定，本领域技术人员可以根据需求选择适当的补片单片数量(比如每层包括两个，三个，五个补片单片等等)，本领域技术人员根据修复的具体需求可以调整补片单片之间重叠面积，只要能保证补片的有效性即可。

在本发明的一些实施例中动物小肠组织为片状或膜状，片状和膜状容易与待修复组织的缝合，也有利于组织的修复；这里要说明的是，本发明对小肠组织的具体形状不作具体限定，只要能完成组织修复即可。

在本发明的一些实施例中组织修复用补片的形状为孔状、网状或锥状，这里要说明的是：本发明对补片的具体形状不作具体限定，在具体修复中，根据待修复组织的形状来设计补片的形状，实现补片形状与待修复组织的形状匹配契合即可，有利于组织的修复。

在本发明的一些实施例中，缝补固定采用不可吸收缝线，不可吸收缝线 (如聚酯和/或聚丙烯材质)可以大大提高补片的力学性能，可有效防止由于力学性能问题对组织修复造成的不良影响。

本发明对主体(1)中小肠黏膜下层材料补片的层数不作具体限定，只要可以保证补片的修复效果即可，在本发明的一些实施例中，层数为2-16 层，本领域技术人员可以根据需要选择合适的层数来保证修复效果。

在本发明的一些实施例中，小肠黏膜下层的处理包括干燥步骤，对于干燥方式，本发明不作具体限定，优选冻干或真空干燥。

这里要说明的是：动物小肠黏膜下层包括靠近黏膜层的第一面和靠近浆膜层的第二面，在本发明的一些实施例中，所述的组织修复用补片中动物小肠黏膜下层的第一面朝向待修复组织，小肠黏膜下层浆膜面一侧相对黏膜一面较粗糙，组织间空隙较大，其利于细胞贴附生长，浆膜层与粘膜层交替的方式叠加，同时保证浆膜层面向外侧，根据产品不同用途可以分为双层、四层、六层、八层、十层等；对于小肠黏膜下层的叠加方式，本发明不作限定，只要可以保证组织修复中细胞的生长即可。

这里要说明的是：本发明对接触层的层数和接触层与主体的位置关系不做具体限定，比如接触层可以在主体层的一侧或两侧等。只要满足在增强补片力学性能的基础上防止组织粘连即可。

下面给出本发明的一些具体优选实施例：

实施例1

一种组织修复用补片主体的制备方法，包括如下步骤：

制备补片单片：将小肠黏膜下层材料以任意顺序进行清洗、消毒处理、脱脂处理、脱细胞处理、去病毒，最后经冷冻干燥或真空干燥而成。

其中，所述的消毒处理为在常温下采用消毒液对小肠黏膜下层进行浸泡处理，SIS长度与消毒液的体积比为1：1cm/ml；

具体的消毒方式为：用溶质质量百分含量1％的过氧乙酸和10％的乙醇的混合水溶液浸泡45分钟；

消毒处理完后用纯化水彻底超声清洗，根据需要清洗时可换纯化水进行多次清洗，一般清洗1-8次；

脱脂，所述溶剂为溶质质量百分含量为5％的氢氧化钠和碳酸氢钠的混合的溶液。每次要换新鲜溶液，为保证充分脱脂，处理过程可通过超声作用的辅助处理；处理完后用纯化水1-8次超声清洗；

脱细胞，室温下将SIS与脱细胞溶液所述脱细胞溶液一般为酶溶液，溶质质量百分含量为0.5％胰糜蛋白酶溶液(pH7.0-8.0)和3U/ml RNA酶溶液中的混合溶液进行浸泡处理0.5-4小时。并采用溶质质量百分含量为3％氢氧化钠终止酶反应，上述的脱细胞处理可以达到很好的处理效果并保证生物相容性。处理体积比为1：20cm/ml(SIS长度与处理液的体积比)脱细胞处理完后用纯化水和PBS交替清洗，根据需要可多次更换纯化水进行清洗，一般分别清洗1-8次；

去病毒，采用溶质质量百分含量为2％过氧乙酸乙醇混合物、溶质质量百分含量为3％氢氧化钠中的一种或两种结合的方式分别进行处理1.5h，然后清洗1-8遍，起到去病毒的作用；

经模具压制成型处理是将样品表面多层交替叠加，置于模具中，联合冷冻干燥机条件的调节，将产品压制成成簇集成的圆锥形式。

实施例2

一种组织修复用补片主体的制备方法，包括如下步骤：

制备补片单片：将小肠黏膜下层材料以任意顺序进行清洗、消毒处理、脱脂处理、脱细胞处理、去病毒，最后经冷冻干燥或真空干燥而成。

其中，所述的消毒处理为在常温下采用消毒液对小肠黏膜下层进行浸泡处理，SIS长度与消毒液的体积比为1：18cm/ml。

具体的消毒方式为：摩尔浓度为0.03M的乙二胺四乙酸二钠溶液浸泡5 小时；

消毒处理完后用纯化水彻底超声清洗，根据需要清洗时可换纯化水进行多次清洗，一般清洗1-8次。

脱脂，所述溶剂为溶质质量百分含量为3％的氢氧化钠碱性溶液。每次要换新鲜溶液，为保证充分脱脂，处理过程可通过超声作用的辅助处理；处理完后用纯化水1-8次超声清洗。

脱细胞，室温下将SIS与脱细胞溶液所述脱细胞溶液一般为酶溶液，溶质质量百分含量为0.5％胰糜蛋白酶溶液(pH7.0-8.0)和50U/ml DNA酶、混合溶液进行浸泡处理3小时。并采用溶质质量百分含量为2％氢氧化钠终止酶反应，上述的脱细胞处理可以达到很好的处理效果并保证生物相容性。处理体积比为1：10cm/ml(SIS长度与处理液的体积比)脱细胞处理完后用纯化水和PBS交替清洗，根据需要可多次更换纯化水进行清洗，一般分别清洗1-8次。

去病毒，采用溶质质量百分含量为3％氢氧化钠进行处理3h，然后清洗 1-8遍，起到去病毒的作用。

经模具压制成型处理是将样品表面多层交替叠加，置于特殊结构的模具中，联合冷冻干燥机条件的调节，将产品压制成编带形式。

实施例3

制备补片单片：将小肠黏膜下层材料以任意顺序进行清洗、消毒处理、脱脂处理、脱细胞处理、去病毒，最后经冷冻干燥或真空干燥而成。

其中，所述的消毒处理为在常温下采用消毒液对小肠黏膜下层进行浸泡处理，SIS长度与消毒液的体积比为1：15cm/ml。

具体的消毒方式为：用质量百分含量为1％氢氧化钠溶液浸泡8小时。

消毒处理完后用纯化水彻底超声清洗，根据需要清洗时可换纯化水进行多次清洗，一般清洗1-8次。

脱脂，所述溶剂为溶质质量百分含量为4％的氢氧化钠和碳酸氢钠等碱性溶液混合的溶液。每次要换新鲜溶液，为保证充分脱脂，处理过程可通过超声作用的辅助处理；处理完后用纯化水1-8次超声清洗。

脱细胞，室温下将SIS与脱细胞溶液所述脱细胞溶液一般为酶溶液，溶质质量百分含量为0.3％胰糜蛋白酶溶液(pH7.0-8.0)进行浸泡处理3小时。并采用溶质质量百分含量为2％氢氧化钠终止酶反应，上述的脱细胞处理可以达到很好的处理效果并保证生物相容性。处理体积比为1：2cm/ml(SIS 长度与处理液的体积比)脱细胞处理完后用纯化水和PBS交替清洗，根据需要可多次更换纯化水进行清洗，一般分别清洗1-8次。

去病毒，采用溶质质量百分含量为0.2％过氧乙酸乙醇混合物处理1h-3h，然后清洗1-8遍，起到去病毒的作用。

经模具压制成型处理是将样品表面多层交替叠加，置于特殊结构的模具中，联合冷冻干燥机条件的调节，将产品压制成片状。

实施例4

一种组织修复用补片的制备方法，包括如下步骤：

将实施例1-3任一实施例制备的主体与接触层进行复合、压制、干燥得到所述的组织修复用补片，所述的接触层为动物小肠黏膜下层。

本发明制备的补片应用实例及与现有补片的对比如下：

采用3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(0.9ml/只)，麻醉称重后将大鼠仰卧固定在模具木板上，具体手术方法如下：先采用剃毛器将大鼠背部绒毛清理干净，再用碘伏消毒，在手术部位铺上已灭菌术巾，用镊子将背部表皮夹起，采用手术刀获取背部正中切口，沿皮下向两侧锐性分离,暴露肌层, 将事先准备好的经过生理盐水浸泡的补片平整植入皮下，左右各一片，缝合线将其固定，后缝合筋膜和背部皮肤。酒精擦拭消毒，再用纱布包扎。避免术后环境因素引起的感染。分别在7、30、60、90、180天处死，观察补片形态变化和周围组织生长情况。

结果显示：术后大鼠生长情况较好，病理切片结果显示，补片具有较好的生物相容性，，同时促进血管再生和周围正常组织细胞粘附、生长、增值。表现出较好的修补效果。如图2和图3所示，大鼠皮下植入7天，已经有大量纤维细胞生长及血管生成；如图4所示，皮下植入6个月后，补片表面大量血管生成。

采用3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(0.9ml/只)，麻醉称重后将大鼠仰卧固定，将大鼠腹部绒毛清理干净，用碘伏消毒，铺已灭菌术巾，行腹部正中切口，沿皮下向两侧锐性分离,暴露肌层,以腹正中线为对称轴将1.5cm ×2cm大小肌肉连同腹膜整块切除,暴露腹腔肠管组织，制成腹壁缺损试验动物模型。将准备好的经生理盐水浸泡的大于切口创伤面的补片平整覆盖于创伤切口表面采用连续缝合将其固定，再缝合筋膜和腹壁皮肤。酒精擦拭消毒。避免术后环境因素引起的感染。如图5所示，三个月补片与组织良好的融合；如图6所示，创伤修补，组织长入良好，略见补片形态；如图7所示，创伤一个月结果，无粘连形成。图8为相同条件下采用非生物补片的结果：非生物补片，粘连较严重。

本产品经中国国家认证认可监督管理委员会资质认定(计量认证 CMA)、实验室资质认定(2015002491K)、中国合格评定国家认可委员会认可(CNAS L3940)、国家食品药品监督管理总局医疗器械检测机构资格认可 (食药监科【2014】51号)的医疗器械生物材料检验评价机构检测，各项指标均合格。

依据GB/T16886.1-2011中表A.1和表A.1(续)要考虑的评价试验内容，对材料需进行细胞毒性、热原、皮内反应、致敏、急性全身毒性、Ames试验、TK基因突变试验、染色体畸变试验、亚慢性毒性试验、植入试验、溶血等检测，结果均合格。同时，依据GB/T16886.17(ISO10993-17)等标准的要求，我们也对疝修补补片的生物化学残留物及物理性能进行了测试，确保其在临床使用时不会产生相关方面的生物学危害，保证产品的安全有效性。

通过脱细胞、去病毒等工艺对病毒灭活和清除(或降低)动物源性材料免疫原性进行控制，采用特殊的酶处理方式确保DNA残留控制在可接受范围、无细胞残留。同时选择中国食品药品检定研究院进行病毒灭活验证，效果符合要求。

选择经中国国家认证认可监督管理委员会资质认定(计量认证CMA)、实验室资质认定(2015002491K)、中国合格评定国家认可委员会认可(CNAS L3940)、国家食品药品监督管理总局医疗器械检测机构资格认可(食药监科【2014】51号)的医疗器械生物材料检验评价机构进行本补片特异性和非特异性免疫应答等相关检测，与同类产品相关性能对比结果如下：

表1

表2

表3

表1-表3为本发明产品与国内外同类产品物理性能，生长因子和内毒素含量比较结果，由表1-表3可以看出，本发明产品在各方面都明显优于国内外同类产品。

对于本发明中未限定的部分均为可采用本领域常用技术手段可以实现的，比如缝合时如何打孔，孔径大小及孔的密度等，本领域技术人员可以根据具体的需要来选择合适的常用手段来完成组织的修复，对于各种常用手段在此不再赘述。

以上介绍仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取动物小肠黏膜下层，

将所述的小肠黏膜下层经复合、压制、叠加、干燥、缝合得到主体；所述的缝合采用不可吸收缝线；所述的缝线为聚酯和/或聚丙烯材质，所述的干燥选用冻干或真空干燥。

2.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的动物小肠黏膜下层由动物小肠的膜状或片状组织进行消毒、脱脂、脱细胞、去病毒处理得到，采用酸碱交替处理。

3.根据权利要求2所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述脱细胞采用溶质质量百分含量为0.05-0.5％胰糜蛋白酶溶液。

4.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的动物小肠黏膜下层包括靠近黏膜层的第一面和靠近浆膜层的第二面，所述的叠加为按照动物小肠黏膜下层的第二面朝向待修复组织进行叠加。

5.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的消毒的方式如下：

将动物小肠的膜状或片状组织用第一溶液浸泡5-90min，所述的第一溶液为过氧乙酸的质量百分含量为0.01-1％，乙醇的质量百分含量为1-10％的混合水溶液；

或：将动物小肠的膜状或片状组织用摩尔浓度为0.01-0.05M的乙二胺四乙酸二钠溶液浸泡1-6h；

或：将动物小肠的膜状或片状组织用质量百分含量为0.01-1％氢氧化钠溶液浸泡2-12h。

6.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的脱脂采用溶质质量分数为1％-5％碱性溶液，所述的溶质为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的脱脂通过超声作用的辅助。

8.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的脱细胞为室温下将所述的小肠黏膜下层在脱细胞溶液浸泡处理0.5-4h，采用溶质质量百分含量为1-3％的氢氧化钠终止酶反应。

9.根据权利要求1所述的组织修复用补片主体的制备方法，其特征在于，所述的去病毒为采用质量百分含量为0.2％-2％过氧乙酸和乙醇混合溶液、质量百分含量为1％-3％的氢氧化钠溶液中的一种或两种结合的方式分别进行处理1h-3h。

10.一种组织修复用补片主体，其特征在于，所述的主体由权利要求1-9任一项的制备方法制备而得。

11.一种组织修复用补片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用权利要求1-9任一项所述的制备方法制备组织修复用补片主体，

将所述的主体与接触层进行复合、压制、干燥得到所述的组织修复用补片，所述的接触层为动物小肠黏膜下层。

12.一种组织修复用补片，其特征在于，所述的组织修复用补片由权利要求11所述的制备方法制备而得。