CN108103161A - 一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法 - Google Patents

一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，首先通过第一步PCR反应扩增出含有SNP位点的片段，而非单独扩增SNP位点，以提高样品的可操作性以及后续操作的精度；通过SAP对步骤S1得到的扩增产物进行去磷酸化处理，防止DNA分子5'端与3'端连接，在后续步骤准备好之前让DNA分子保持线性状态，从而保证后续实验的准确度；最后通过步骤S3对rs2274223位点进行单碱基延伸，利用变性‑退火内循环使DNA双链充分解螺旋、分离，从而实现不同SNP的精确分型。通过上述方法，可以快速、准确地获得PLCE1基因rs2274223位点的SNP分型信息，操作简便、可靠性强，可以为后续的相关研究提供可靠的参考信息。

Description

一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法
技术领域
本发明属于SNP检测技术领域，特别涉及一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法。
背景技术
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)，主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90％以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。
PLCE1基因是用于表达磷脂酶Cε-1的基因，位于10号染色体上，在心、肾、肾上腺、脑、肝、肺、脾、骨骼肌、前列腺、甲状腺、中性粒细胞和血小板等多个组织器官中均有不同程度的表达。PLCE1的表达异常可能与多种疾病存在相关性，如肿瘤、肾脏疾病、心脏疾病、神经系统疾病等。PLCE1被激活后影响细胞骨架改变、生长、增殖、分化、迁移、凋亡等一系列生理活动，例如可以接到R-Ras的促细胞伪足形成作用，从而促进细胞的延伸，还可以在胶质细胞中起到传导细胞分裂信号的作用；还有研究显示PLCE1能够抑制整合素的亲和力及活性。
PLCE1基因上存在中多SNP位点，每个SNP位点的不同表达形式均可能对上述病症产生不同的影响。其中rs2274223位点的野生型为AA，同时还存在AG和GG两种形式的突变型。目前已有研究表明，AG型患胃癌、食道癌等疾病的风险为AA型的1.5倍，而GG型会将这一风险提高至1.9倍。因此，提供一种高效、准确的SNP检测方法，将会为研究PLCE1对上述疾病的影响机制提供重要的参考信息和理论支持。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法。
本发明具体技术方案如下：
本发明一方面提供了一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测引物组，包括如下引物：
上游引物rs2274223-F：5`-ACGTTGGATGCAAAGCCCATCCATCGAAAC-3`(如SEQ.ID.No.1所示)；
下游引物rs2274223-R：5`-ACGTTGGATGGATTCTCTGAGCAGTTACCG-3`(如SEQ.ID.No.2所示)；
延伸引物rs2274223-E：5`-AGATCTTCGAAGTGAACG-3`(如SEQ.ID.No.3所示)；
PLCE1基因rs2274223位点野生型碱基序列如SEQ.ID.No.4所示。
本发明另一方面提供了一种应用该引物组的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，包括如下步骤：
S1：用上游引物rs2274223-F和下游引物rs2274223-R进行第一轮PCR，对模板DNA进行扩增，得到含有所述rs2274223位点的片段；
S2：对步骤S1得到的片段进行去磷酸化处理，得到脱磷酸片段；
S3：用延伸引物rs2274223-E对所述脱磷酸片段进行单碱基延伸，对不同SNP进行分型；
S4：对步骤S3得到的样品进行脱盐处理，用质谱仪进行检测。
进一步地，步骤S1中，第一轮PCR的反应体系中包括如下组分：
模板DNA 2ng/μl、rs2274223-F引物0.05μM、rs2274223-R引物0.05μM、Mg2+4mM、1×PCR Buffer、dNTP 10μM以及Taq DNA聚合酶1U。
进一步地，步骤S1中，第一轮PCR的反应条件如下：
(1)预变性：95℃ 2min；
(2)扩增：95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s，共45个循环；
(3)延伸：72℃ 5min，4℃ ∞。
步骤S1的目的是扩增出含有SNP位点的片段，而非单独扩增SNP位点，以提高样品的可操作性以及后续操作的精度；“4℃ ∞”即为保持在4℃下，以防止外界温度剧烈变化对扩增产物造成影响。
进一步地，步骤S2中，去磷酸化的反应体系在第一轮PCR扩增产物的基础上还包括如下成分：
0.24×SAP Buffer以及SAP酶0.5U。
进一步地，步骤S2中，去磷酸化的反应条件如下：
(1)去磷酸化：37℃ 40min；
(2)SAP酶灭活：85℃ 5min，4℃ ∞。
步骤S2的目的是通过SAP对步骤S1得到的扩增产物进行去磷酸化处理，防止DNA分子5'端与3'端连接，在后续步骤准备好之前让DNA分子保持线性状态，从而保证后续实验的准确度。
进一步地，步骤S3中，单碱基延伸的反应体系在去磷酸化产物的基础上还包括如下成分：
0.222×iPLEX GOLD Buffer、1×iPLEX Termination mix、iPLEX延伸引物0.15μM以及1×iPLEX Enzyme。
进一步地，步骤S3中，单碱基延伸的反应条件如下：
(1)预变性：94℃ 30s；
(2)扩增内循环：94℃ 5s，52℃ 5s，共5个循环；
(3)扩增外循环：94℃ 5s，52℃ 5s，80℃ 5s，共40个循环；
(4)延伸：72℃ 4min，4℃ ∞。
步骤S3的目的是对rs2274223位点的序列进行单碱基延伸，从而实现不同SNP的分型。
本方案中，在变性-退火-延伸的外循环中间还对变性-退火设置内循环，以便充分将DNA的双链解旋、分离，从而提高DNA单链的分离程度以及单碱基延伸的准确性。
进一步地，所述步骤S4包括如下步骤：
S4.1：在树脂板上铺好洁净树脂待用，每孔6mg树脂，风干10～20分钟；
S4.2：向样本板的样本空内加入待测样品，每个样本孔再加15～20μL ddH2O，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.3：打开覆盖所述样本孔的封口膜，将所述样本板倒扣在所述树脂板上固定，将固定好的样本板和树脂板整体翻转，轻敲树脂板，以使树脂板中的树脂完全落入样本板上相应样本孔，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.4：将样本树脂混合物摇匀，在旋转器上慢速旋转15min后，在4000rpm条件下离心5min，离心后点样上机、用质谱仪对样品进行检测。
步骤S4的目的是去除样品中溶解的盐类，防止盐类对质谱系统造成污染、影响信号的生成，从而保证测量结果的可靠性。
本发明的有益效果如下：本发明提供了一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，首先通过第一步PCR反应扩增出含有SNP位点的片段，而非单独扩增SNP位点，以提高样品的可操作性以及后续操作的精度；通过SAP对步骤S1得到的扩增产物进行去磷酸化处理，防止DNA分子5'端与3'端连接，在后续步骤准备好之前让DNA分子保持线性状态，从而保证后续实验的准确度；最后通过步骤S3对rs2274223位点进行单碱基延伸，利用变性-退火内循环使DNA双链充分解螺旋、分离，从而实现不同SNP的精确分型。通过上述方法，可以快速、准确地获得PLCE1基因rs2274223位点的SNP分型信息，操作简便、可靠性强，可以为后续的相关研究提供可靠的参考信息。
附图说明
图1为实验例1中不同方法的rs2274223位点SNP分型结果比较；
图2为实验例2中所有样品的rs2274223位点SNP分型示意图；
图3为实验例2中样品rs2274223位点的AA纯合型的质谱图；
图4为实验例2中样品rs2274223位点的GA杂合型的质谱图。
具体实施方式
实施例
一种PLCE1基因的rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，包括如下步骤：
S1：用上游引物rs2274223-F和下游引物rs2274223-R进行第一轮PCR，对模板DNA进行扩增，引物的碱基序列如下：
上游引物rs2274223-F：5`-ACGTTGGATGCAAAGCCCATCCATCGAAAC-3`；
下游引物rs2274223-R：5`-ACGTTGGATGGATTCTCTGAGCAGTTACCG-3`；
反应体系如下：
反应条件如下：
(1)预变性：95℃ 2min；
(2)扩增：95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s，共45个循环；
(3)延伸：72℃ 5min，4℃ ∞；
S2：对所述步骤S1得到的扩增产物进行去磷酸化处理，得到脱磷酸片段，去磷酸化操作使用的SAP混合液体系如下：
使用浓度 加入量(μL)
Nanopure Water,Autoclaved N/A 1.53
SAP Buffer 0.24× 0.17
SAP Enzyme(1.7U/μL) 0.5U 0.30
总体积[μL] 2/rnx
将上述SAP混合液加入到步骤S1得到的扩增产物中，并按照如下反应条件进行去磷酸化处理：
(1)去磷酸化：37℃ 40min；
(2)SAP酶灭活：85℃ 5min，4℃ ∞；
S3：用延伸引物rs2274223-E对所述脱磷酸片段进行单碱基延伸，对不同SNP进行分型，延伸引物的碱基序列如下：
rs2274223-E：5`-AGATCTTCGAAGTGAACG-3`；
反应体系如下：
使用浓度 加入量(μL)
Nanopure water N/A 0.619
iPLEX GOLD Buffer 0.222× 0.200
iPLEX Termination mix 1× 0.200
iPLEX延伸引物 0.12 0.940
iPLEX Enzyme 1× 0.041
Volume(μL) 2.000
SAP+PCR reaction 7.000
总体积(μL) 9.000
反应条件如下：
(1)预变性：94℃ 30s；
(2)扩增内循环：94℃ 5s，52℃ 5s，共5个循环；
(3)扩增外循环：94℃ 5s，52℃ 5s，80℃ 5s，共40个循环；
(4)延伸：72℃ 4min，4℃ ∞；
S4：对所述步骤S3得到的样品进行脱盐处理，用质谱仪进行检测，具体包括如下步骤：
S4.1：在树脂板上铺好洁净树脂待用，每孔6mg树脂，风干10～20分钟；
S4.2：向样本板的样本空内加入待测样品，每个样本孔再加15～20μL ddH2O，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.3：打开覆盖所述样本孔的封口膜，将所述样本板倒扣在所述树脂板上固定，将固定好的样本板和树脂板整体翻转，轻敲树脂板，以使树脂板中的树脂完全落入样本板上相应样本孔，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.4：将样本树脂混合物摇匀，在旋转器上慢速旋转15min后，在4000rpm条件下离心5min，离心后点样上机、用质谱仪对样品进行检测。
对照例
一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其中单碱基扩增的反应条件如下：
(1)预变性：94℃ 30s；
(2)扩增内循环：52℃ 5s，80℃ 5s，共5个循环；
(3)扩增外循环：94℃ 5s，52℃ 5s，80℃ 5s，共40个循环；
(4)延伸：72℃ 4min，4℃ ∞；
其余步骤和反应体系均与实验例相同。
实验例1
以本发明提供的方法作为实验组，以专利公开号105238853A公开的方法作为对照组1，以常规的Taqman方法作为对照组2，分别对15ng的PLCE1基因的rs2274223位点标准品(包括5ng GA杂合、5ng GG纯合以及5ng AA纯合)进行检测，并对各组实验的分型定量结果进行比较。
如图1所示，实验组与对照组1的分型结果均好于对照组2，并且实验组的定量结果高于对照组1、更加接近标准品的含量。表明本发明提供的方法对PLCE1基因的rs2274223位点的SNP分型检测较现有方法更加准确、效果更好，同时说明本方法在单碱基延伸过程中设置的变性-退火内循环，比常规的退火-延伸内循环具有更好的SNP分离和延伸效果。
实验例2
随机选取26名健康的成年(18～60周岁)志愿者，分别采集血样并提取全血基因组，按照实施例中提供的方法对26个样品进行rs2274223位点SNP检测，并对上述多个样品的质谱检测结果进行分析。
实验结果如图2～4所示，共有22个样品得到了可分析的结果，其中9个样品为GA杂合，13个样品为AA纯合。表明该SNP位点上AA的纯合子较多，G-A杂合子也有检出。图2中不同基因型的样品点彼此分离、互相无相交，同时图3～4中不同分型的峰型和分离情况良好，表明本发明提供的引物特异性良好、灵敏度高，分型结果准确。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 沃森克里克（北京）生物科技有限公司
<120> 一种 PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 1
acgttggatg caaagcccat ccatcgaaac 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 2
acgttggatg gattctctga gcagttaccg 30
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 3
agatcttcga agtgaacg 18
<210> 4
<211> 201
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
gtcgacgtcc tgggcatgcc tctggacagc tgccatttcc gcacaaagcc catccatcga 60
aacaccctga accccatgtg gaacgagcag tttctgttcc acgttcactt cgaagatctt 120
gtatttcttc gttttgcagt tgtggaaaac aatagttcag cggtaactgc tcagagaatc 180
attccactga aagctttaaa a 201

Claims (9)

1.一种PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测引物组，其特征在于，包括如下引物：
上游引物rs2274223-F：5`-ACGTTGGATGCAAAGCCCATCCATCGAAAC-3`；
下游引物rs2274223-R：5`-ACGTTGGATGGATTCTCTGAGCAGTTACCG-3`；
延伸引物rs2274223-E：5`-AGATCTTCGAAGTGAACG-3`。
2.一种应用权利要求1所述引物组的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：用上游引物rs2274223-F和下游引物rs2274223-R进行第一轮PCR，对模板DNA进行扩增，得到含有所述rs2274223位点的片段；
S2：对步骤S1得到的片段进行去磷酸化处理，得到脱磷酸片段；
S3：用延伸引物rs2274223-E对所述脱磷酸片段进行单碱基延伸，对SNP碱基序列进行扩增，从而实现不同SNP的分型；
S4：对步骤S3得到的样品进行脱盐处理，用质谱仪进行检测。
3.如权利要求2所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S1中，第一轮PCR的反应体系中包括如下组分：
模板DNA 2ng/μl、rs2274223-F引物0.05μM、rs2274223-R引物0.05μM、Mg2+4mM、1×PCRBuffer、dNTP 10μM以及Taq DNA聚合酶1U。
4.如权利要求3所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S1中，第一轮PCR的反应条件如下：
(1)预变性：95℃2min；
(2)扩增：95℃30s，56℃30s，72℃60s，共45个循环；
(3)延伸：72℃5min，4℃∞。
5.如权利要求2所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S2中，去磷酸化的反应体系在第一轮PCR扩增产物的基础上还包括如下成分：
0.24×SAP Buffer以及SAP酶0.5U。
6.如权利要求5所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S2中，去磷酸化的反应条件如下：
(1)去磷酸化：37℃40min；
(2)SAP酶灭活：85℃5min，4℃∞。
7.如权利要求2所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S3中，单碱基延伸的反应体系在去磷酸化产物的基础上还包括如下成分：
0.222×iPLEX GOLD Buffer、1×iPLEX Termination mix、iPLEX延伸引物混合物0.84～1.57μM以及1×iPLEX Enzyme。
8.如权利要求7所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S3中，单碱基延伸的反应条件如下：
(1)预变性：94℃30s；
(2)扩增内循环：94℃5s，52℃5s，共5个循环；
(3)扩增外循环：94℃5s，52℃5s，80℃5s，共40个循环；
(4)延伸：72℃4min，4℃∞。
9.如权利要求2所述的PLCE1基因rs2274223位点SNP核酸质谱检测方法，其特征在于，步骤S4包括如下步骤：
S4.1：在树脂板上铺好洁净树脂待用，每孔6mg树脂，风干10～20分钟；
S4.2：向样本板的样本空内加入待测样品，每个样本孔再加15～20μLddH2O，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.3：打开覆盖所述样本孔的封口膜，将所述样本板倒扣在所述树脂板上固定，将固定好的样本板和树脂板整体翻转，轻敲树脂板，以使树脂板中的树脂完全落入样本板上相应样本孔，用封口膜密封，进行瞬时离心；
S4.4：将样本树脂混合物摇匀，在旋转器上慢速旋转15min后，在4000rpm条件下离心5min，离心后点样上机、用质谱仪对样品进行检测。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040259100A1 (en) * 2003-06-20 2004-12-23 Illumina, Inc. Methods and compositions for whole genome amplification and genotyping
CN106434979A (zh) * 2016-11-24 2017-02-22 深圳市核子基因科技有限公司 一种用于检测胃癌易感性的试剂盒及其snp标志物
CN106591442A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 北京圣谷智汇医学检验所有限公司 用于y染色体微缺失检测的引物组合及试剂盒
CN107405540A (zh) * 2014-10-24 2017-11-28 雅培分子公司 小核酸的富集

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040259100A1 (en) * 2003-06-20 2004-12-23 Illumina, Inc. Methods and compositions for whole genome amplification and genotyping
CN107405540A (zh) * 2014-10-24 2017-11-28 雅培分子公司 小核酸的富集
CN106434979A (zh) * 2016-11-24 2017-02-22 深圳市核子基因科技有限公司 一种用于检测胃癌易感性的试剂盒及其snp标志物
CN106591442A (zh) * 2016-12-02 2017-04-26 北京圣谷智汇医学检验所有限公司 用于y染色体微缺失检测的引物组合及试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张丽娜等: "胃癌中 PLCE1 的研究进展及其与 PTEN 的潜在联系", 《疾病监测与控制杂志》 *
张惠娟等: "食管鳞状细胞癌组织中 PLCE1 蛋白表达与患者生存的关系", 《新乡医学院学报》 *

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