CN108096427A - 一种芦荟提取液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种芦荟提取液的制备方法。该方法包括如下步骤：对新鲜采摘的芦荟叶，清洗沥干，去皮，切成小块，再经高温(水浴或蒸气)处理，如果采用蒸气处理的话，则可以考虑用少许水淋洗，将物料过滤处理收集液体部分即可。本发明提取方法针对芦荟叶中多糖等水溶性活性成分，在保证提取率的前提下有效缩短提取时间，节省用水，不使用有机溶剂，环保又高效。所得芦荟多糖提取液具有良好的保湿性能，并具有一定的抗氧化活性以及促细胞增殖活性、有效减少具有潜在皮肤刺激性的蒽醌类物质。本发明制备得到的芦荟提取液可以作为医药或化妆品原料、食品添加剂等。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取液的制备方法，特别涉及一种芦荟提取液的制备方法。
背景技术
芦荟为百合科耐旱性多年生肉质草本植物，种类繁多，其中具有药用价值的品种有库拉索芦荟、木立芦荟、中华芦荟等。芦荟已有几千年的药用历史，广泛应用于医药、食品、日用和美容等领域，被称为“万能良药”。芦荟有500多个品种，药用的就达50余种。我国适宜种植芦荟的地域辽阔，资源相当丰富。现代研究证明芦荟多糖是其主要有效成分之一，具有杀菌消炎、抗病毒、抗胃溃疡、降血糖、抗肿瘤和免疫调节等作用。
芦荟多糖的提取方法有很多，目前主要为三种微波提取法、超声波提取法和传统的水提醇沉法。由于知识储备和实验条件的关系，选择了传统且经典的水提醇沉法。和其他两个方法相比较，程序上虽有些繁琐，但提取的效率和简单的操作是其成为经典多糖提取方法的重要原因，这也一种合适于本科生学习和探讨的提取方法。不同的料液比和稀释到不同的乙醇浓度都对提取效果有一定的影响，通过文献比对和初步的预实验。发现料液比1:4和稀释的醇浓度80％都能有不错的提取效率，也体现了乙醇量的控制在实验中有着至关重要的作用。
芦荟多糖的测定：利用组成多糖的单糖的性质进行测定，其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多。这些方法简单、快速，无需多糖纯品和高级仪器，因而被广泛采用，如比色法、滴定法。目前使用的比色法有：蒽酮—硫酸法和苯酚—硫酸法。其原理为多糖在浓硫酸作用下水解生成单糖，单糖可与强酸共热产生糠醛或糠醛衍生物，然后通过显色剂缩合成有色络合物，比色定量，间接求出多糖的含量。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种芦荟提取液的制备方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种芦荟提取液的制备方法，包括如下步骤：
(1)对新鲜采摘的芦荟叶，如有必要，首先进行水洗去除表面泥沙、沥干后去皮(去除叶片两侧的刺及上下表皮)，保留“果肉”部分；
(2)对去皮后的“果肉”进行切块处理，切成小丁，所述小丁的长、宽、高不超过3cm；
(3)对切成小丁的芦荟果肉进行高温处理，这里所指的高温处理方式为水浴或高温蒸气处理；
(4)如果采用高温水浴的话，则水洗步骤可以省略，过滤后即获得芦荟提取液；如果采用高温蒸气处理则用少量的水洗涤芦荟果肉丁，合并收集洗涤液及蒸气冷凝液即获得芦荟提取液。
优选的，步骤(1)中所述芦荟叶为健康2年以上的芦荟叶；更优选为健康3年以上的芦荟叶。
优选的，步骤(2)中所述小丁的长、宽、高不超过1cm，更优选为0.5～1.0cm。
优选的，步骤(3)中所述高温处理的过程中可以不断对物料进行搅拌，待高温水浴处理后对物料进行初过滤处理(纱布或滤布或筛网处理)，滤液还可以进一步做无菌过滤处理(0.22μm或0.20μm滤膜过滤处理)或低温保存或通过添加防腐剂的方式保存制备的芦荟提取液。
优选的，步骤(3)中所述水浴的温度不低于50℃(更优选50～90℃)；料液比不低于1：5(更优选1：5～1：2)；提取时间可依据对芦荟果肉的用途不同而采用的时间不同，可以短至1秒钟至几个小时不等，优选为30min。
优选的，步骤(3)中所述高温蒸气处理的温度不低于90℃；更优选不低于100℃。
优选的，如果高温处理的方式采用蒸气处理的话，则采用100℃以上的高温蒸气对芦荟果肉进行处理几秒钟至数小时(优选为20min)，蒸气处理后再用少量的水进行洗涤芦荟果肉，收集料液，然后进行过滤处理(处理方式与高温水浴后的处理方式相同)。
一种芦荟提取液，通过上述制备方法制备得到。
所述的芦荟提取液在医药或化妆品原料、食品添加剂等中的应用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明提取方法针对芦荟叶中多糖等水溶性活性成分，在保证提取率的前提下有效缩短提取时间，节省用水，不使用有机溶剂，环保又高效。所得芦荟多糖提取液具有良好的保湿性能，并具有一定的抗氧化活性以及促细胞增殖活性、有效减少具有潜在皮肤刺激性的蒽醌类物质。
芦荟提取液的用途：可以作为医药或化妆品原料、食品添加剂等。
附图说明
图1是葡萄糖的标准曲线。
图2是DPPH自由基清除实验结果。
图3是MTT法测定提取液对3T3细胞促增殖作用。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干调整和改进，这些都属于本发明的保护范围。
本发明涉及一种简便、快速、环保提取芦荟鲜叶中多糖类等水溶性成分的方法，包括：去皮、切块、高温处理、水洗。
提取工艺的确定：
对新鲜采摘的芦荟叶，如有必要，首先进行水洗去除表面泥沙、沥干后去皮(去除叶片两侧的刺及上下表皮)，保留“果肉”部分。
对去皮后的“果肉”进行切块处理，切成小丁(长、宽、高不超过3cm)。
对切成小丁的芦荟果肉进行高温处理，这里所指的高温处理方式为水浴(水温不低于50℃)或高温蒸气(温度不低于90℃)处理。
如果采用高温水浴的话，则水洗步骤可以省略，过滤后即获得芦荟提取液；如果采用高温蒸气处理则用少量的水洗涤芦荟果肉丁，合并收集洗涤液及蒸气冷凝液即获得芦荟提取液。
实施例1
本实施例涉及一种基于新鲜芦荟叶去皮后高温提取芦荟多糖等水溶性物质的方法，具体步骤如下：
步骤1：芦荟叶的清洗、去皮
取新鲜健康3年生(或以上)的芦荟全叶，洗净沥干、去皮(将叶片两侧的刺及上下表面绿色表皮去净)，保留“果肉”部分。
步骤2：切块
将去皮的芦荟叶“果肉”切成小丁(规格为边长不超过1.0cm的长方体小块)。
步骤3：高温处理
将切好的芦荟丁按料液比1：2放入90℃水浴锅中处理30分钟，期间不断搅拌物料。
步骤4：收集芦荟提取液
将上述混合液经过滤处理，混合液先经300目的筛网过滤，收集后的滤液经0.22μm滤膜过滤，滤液即为芦荟提取液。
实施例2
本实施例涉及一种基于新鲜芦荟叶去皮后高温提取芦荟多糖等水溶性物质的方法，具体步骤如下：
步骤1：芦荟叶的清洗、去皮
取新鲜健康3年生(或以上)的芦荟全叶，洗净沥干、去皮(将叶片两侧的刺及上下表面绿色表皮去净)，保留“果肉”部分。
步骤2：切块
将去皮的芦荟叶“果肉”切成小丁(规格为边长不超过1.0cm的长方体小块)。
步骤3：高温处理
将切好的芦荟丁放置于具有不锈钢网的密闭容器中，通入110℃蒸气(蒸气量为芦荟丁重量的20％)处理20分钟。
步骤4：水洗收集芦荟提取液
待蒸气处理结束后，采用喷淋的方式水洗芦荟丁(水用量为芦荟丁重量的75％)，混合液先经300目的筛网过滤，收集后的滤液经0.22μm滤膜过滤，滤液即为芦荟提取液。
效果实施例
以实施例2制备得到的芦荟提取液为样品，进行实验。
(一)芦荟提取液多糖含量测定
以苯酚-硫酸法测定多糖含量。
以葡萄糖作为参照，绘制标准曲线。如图1所示。
依此法测定最后过滤后的芦荟提取液中多糖含量为：1.8mg/mL。由于芦荟提取液中含有较多的多糖成分，而多糖由于其亲水性，在作为化妆品添加剂使用时，常体现为润肤保湿功效。
(二)芦荟提取液抗氧化能力测试
采用DPPH自由基清除实验来测试芦荟提取液的抗氧化能力。
DPPH自由基清除实验原理：DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。
操作步骤：
不同浓度1mL样品溶液加2mL的20μg/mL DPPH甲醇溶液，避光30min，紫外分光光度计测定A517的吸光度。
DPPH·清除率％＝(1-A样品/A对照)×100％
试验采用维生素E作为阳性对照，测试待测样品(芦荟提取液)的抗氧化能力。试验结果如图2所示。
上述试验结果表明，虽然芦荟提取液的DPPH自由基清除能力不及阳性对照样品维生素E，但体现了较强的抗氧化能力，表明芦荟提取液作为化妆品中功效成分可能具有较好的抗氧化抗衰老功效。
(三)促细胞增殖试验
采用3T3细胞作为测试细胞株，采用CCK-8试剂盒检测。
背景说明：Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是检测细胞增殖、细胞存活和细胞毒性的试剂盒，是一种基于WST-8(化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用快速高灵敏度检测试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用水溶性四唑盐-WST-8，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜(formazan)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈良好线性关系。
实验步骤：
(1)3T3细胞2000cells/well，37℃，5％CO2细胞培养箱培养24h。
(2)样品浓度：采用最后过滤收集的芦荟提取液作为起始浓度，首先稀释40倍作为待测起始浓度，往下倍比稀释9个梯度(用培养基进行稀释)，加样50μL/孔，每孔补加50μL培养基至100μL，对照组则只加培养基100μL，每个浓度设立3个复孔。
(3)48h后加入10μL wst-8；37℃，2h，测定OD450。
试验重复3次，结果统计如图3所示。
试验结果表明，芦荟提取液具有较好的促细胞增殖活性，可能有利于皮肤细胞的新陈代谢和损伤修复。
总之，本发明提取方法针对芦荟叶中多糖等水溶性活性成分，在保证提取率的前提下有效缩短提取时间，节省用水，不使用有机溶剂，环保又高效。所得芦荟多糖提取液具有良好的保湿性能，并具有一定的抗氧化活性以及促细胞增殖活性、有效减少具有潜在皮肤刺激性的蒽醌类物质(芦荟蒽醌类物质主要存在芦荟叶片表皮，因此通过去除叶片表皮的方法当然可以有效降低芦荟蒽醌类物质的含量，从而减少提取液对皮肤的刺激性)。
芦荟提取液的用途：可以作为医药或化妆品原料、食品添加剂等。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种芦荟提取液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)对新鲜采摘的芦荟叶，如有必要，首先进行水洗去除表面泥沙、沥干后去皮，保留“果肉”部分；
(2)对去皮后的“果肉”进行切块处理，切成小丁，所述小丁的长、宽、高不超过3cm；
(3)对切成小丁的芦荟果肉进行高温处理，这里所指的高温处理方式为水浴或高温蒸气处理；
(4)如果采用高温水浴的话，则水洗步骤省略，过滤后即获得芦荟提取液；如果采用高温蒸气处理则用少量的水洗涤芦荟果肉丁，合并收集洗涤液及蒸气冷凝液即获得芦荟提取液。
2.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的去皮是指去除叶片两侧的刺及上下表皮。
3.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述芦荟叶为健康2年以上的芦荟叶。
4.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述小丁的长、宽、高不超过1cm。
5.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(3)中所述高温处理的过程中不断对物料进行搅拌，待高温水浴处理后对物料进行初过滤处理，滤液还可进一步做无菌过滤处理或低温保存或通过添加防腐剂的方式保存制备的芦荟提取液；
所述的初过滤处理为纱布或滤布或筛网处理；
所述的无菌过滤处理为0.22μm或0.20μm滤膜过滤处理。
6.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(3)中所述水浴的温度不低于50℃；料液比不低于1：5。
7.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
步骤(3)中所述高温蒸气处理的温度不低于90℃。
8.根据权利要求1所述的芦荟提取液的制备方法，其特征在于：
如果高温处理的方式采用蒸气处理的话，则采用100℃以上的高温蒸气对芦荟果肉进行处理几秒钟至数小时，蒸气处理后再用少量的水进行洗涤芦荟果肉，收集料液，然后进行过滤处理；
所述的过滤处理为先进行初过滤处理，滤液还可进一步做无菌过滤处理或低温保存或通过添加防腐剂的方式保存制备的芦荟提取液；
所述的初过滤处理为纱布或滤布或筛网处理；
所述的无菌过滤处理为0.22μm或0.20μm滤膜过滤处理。
9.一种芦荟提取液，其特征在于通过权利要求1～8任一项所述的制备方法制备得到。
10.权利要求9所述的芦荟提取液在医药或化妆品原料、食品添加剂中的应用。
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