CN108084288A - 高效的黄芪多糖提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了高效的黄芪多糖提取方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，首先以石油醚对黄芪粉末进行回流脱脂处理，在脱脂残渣中先后加入乙醇溶液、蒸馏水进行醇提与水提得浓缩液，以氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸对浓缩液进行脱蛋白处理，取脱蛋白后的黄芪多糖经醇提后得固形物，分别以乙醇溶液、无水乙醇、丙酮洗涤固形物得黄芪多糖。有益效果为：本提取方法简单易行，可以大大降低黄芪多糖被分离出去，提高黄芪多糖的得率与含量，降低成本。

Description

高效的黄芪多糖提取方法

技术领域

本发明涉及植物多糖提取领域，尤其是涉及高效的黄芪多糖提取方法。

技术背景

黄芪，又名绵芪。多年生草本，高50-100厘米。主根肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50-100厘米。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地。黄芪多糖是黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖，淡黄色，粉末细腻，均匀无杂质，具引湿性。黄芪多糖由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，这些单体主要通过α-型糖苷键进行连接，β-型糖苷键较少。可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，黄芪多糖本身是一种混合物，其结构较为复杂，众多学者对其结构的研究结果差异较大。

发明内容

本发明的目的在于提供高效的黄芪多糖提取方法，提取方法简单易行，黄芪多糖的得率与纯度较高，蛋白脱除彻底，黄芪多糖流失率较小。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：高效的黄芪多糖提取方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，具体包括以下步骤：

脱脂：称取45-50份黄芪粉末，用300-380份石油醚于55-60℃回流脱脂100-140分钟，回收石油醚，残渣挥干溶剂待用；以石油醚脱脂简单易控，不会破坏黄芪多糖的结构与性质，同时石油醚可以回收再利用，降低了成本；

提取：按质量体积比为1g︰3-5mL将体积分数80-89%的乙醇溶液加入到黄芪残渣中，于75-80℃水浴提取30-45分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，收集滤渣；在滤渣中加入8-10倍重量份的蒸馏水在55-60℃温度下提取，提取50-60分钟后过滤得滤液，滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高黄芪多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比60-65:12-15:1:0.12-0.15的比例混合均匀，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14-14.5:1；在不断搅拌下，按照体积比2-3:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器搅拌30-45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2-3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得黄芪多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除黄芪多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的黄芪多糖，从而可以大大降低黄芪多糖被分离出去的概率，提高黄芪多糖的得率与含量；

纯化：向黄芪多糖粗液加入5-8倍体积分数为90-95%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以95-98%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得黄芪多糖；黄芪多糖为棕黄色粉末，味微甜，具引湿性；经纯化后，黄芪多糖的纯度可达87%以上，大大提高了黄芪多糖的利用价值，黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量，黄芪多糖还能促进RNA及蛋白质合成，能延长细胞寿命,增强细胞代谢推迟老化，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，可作为免疫促进剂或调节剂。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1）氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除黄芪多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的黄芪多糖，从而可以大大降低黄芪多糖被分离出去，提高黄芪多糖的得率与含量；2）黄芪多糖为棕黄色粉末，味微甜，具引湿性；经纯化后，黄芪多糖的纯度可达87%以上，大大提高了黄芪多糖的利用价值，黄芪多糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，可作为免疫促进剂或调节剂。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

高效的黄芪多糖提取方法，包括以下步骤：

1）称取45份黄芪粉末，用300份石油醚于55℃回流脱脂100分钟，回收石油醚，残渣挥干溶剂待用；2）按质量体积比1g：3mL将体积分数80%的乙醇溶液加入到黄芪残渣中，于75℃水浴提取30分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2次，收集滤渣；在滤渣中加入8倍重量份的蒸馏水在55℃温度下提取，提取50分钟后过滤得滤液，滤渣按上述条件重复提取2次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；3）将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比60:12:1:0.12的比例混合均匀，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14:1；在不断搅拌下，按照体积比2:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器搅拌30分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得黄芪多糖粗液；4）向黄芪多糖粗液加入5倍体积分数为90%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以95%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得黄芪多糖；黄芪多糖为棕黄色粉末，味微甜，具引湿性；经纯化后，黄芪多糖的纯度可达87%以上，大大提高了黄芪多糖的利用价值，黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量，黄芪多糖还能促进RNA及蛋白质合成，能延长细胞寿命,增强细胞代谢推迟老化，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，可作为免疫促进剂或调节剂。

实施例2：

高效的黄芪多糖提取方法，包括以下步骤：

1）脱脂：称取50份黄芪粉末，用380份石油醚于60℃回流脱脂140分钟，回收石油醚，残渣挥干溶剂待用；以石油醚脱脂简单易控，不会破坏黄芪多糖的结构与性质，同时石油醚可以回收再利用，降低了成本；

2）提取：按质量体积比1g︰5mL将体积分数89%的乙醇溶液加入到黄芪残渣中，于80℃水浴提取45分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取3次，收集滤渣；在滤渣中加入10倍重量份的蒸馏水在60℃温度下提取，提取60分钟后过滤得滤液，滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高黄芪多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

3）脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比65:15:1:0.15的比例混合均匀，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.5:1；在不断搅拌下，按照体积比3:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得黄芪多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除黄芪多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的黄芪多糖，从而可以大大降低黄芪多糖被分离出去的概率，提高黄芪多糖的得率与含量；

4）纯化：向黄芪多糖粗液加入8倍体积分数为95%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以98%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得黄芪多糖；黄芪多糖为棕黄色粉末，味微甜，具引湿性；经纯化后，黄芪多糖的纯度可达87%以上，大大提高了黄芪多糖的利用价值，黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量，黄芪多糖还能促进RNA及蛋白质合成，能延长细胞寿命,增强细胞代谢推迟老化，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，可作为免疫促进剂或调节剂。

实施例3：

高效的黄芪多糖提取方法，包括：脱脂、提取、脱蛋白、纯化，具体包括以下步骤：

脱脂：称取48份黄芪粉末，用350份石油醚于56℃回流脱脂120分钟，回收石油醚，残渣挥干溶剂待用；以石油醚脱脂简单易控，不会破坏黄芪多糖的结构与性质，同时石油醚可以回收再利用，降低了成本；

提取：按质量体积比1g︰4mL将体积分数85%的乙醇溶液加入到黄芪残渣中，于78℃水浴提取30分钟，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2次，收集滤渣；在滤渣中加入9倍重量份的蒸馏水在58℃温度下提取，提取55分钟后过滤得滤液，滤渣按上述条件重复提取3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；醇提与水提结合可以大大提高黄芪多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯按照体积比64:14:1:0.12的比例混合均匀，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.4:1；在不断搅拌下，按照体积比2.8:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器搅拌35分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得黄芪多糖粗液；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除黄芪多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的黄芪多糖，从而可以大大降低黄芪多糖被分离出去的概率，提高黄芪多糖的得率与含量；

纯化：向黄芪多糖粗液加入7倍体积分数为92%的乙醇溶液，静置过夜后离心，分离出固形物，分别以96%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固形物，冷冻干燥，即得黄芪多糖；黄芪多糖为棕黄色粉末，味微甜，具引湿性；经纯化后，黄芪多糖的纯度可达87%以上，大大提高了黄芪多糖的利用价值，黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量，黄芪多糖还能促进RNA及蛋白质合成，能延长细胞寿命,增强细胞代谢推迟老化，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用，可作为免疫促进剂或调节剂。

本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述的黄芪多糖提取方法为：

脱脂：称取45-50份黄芪粉末，用300-380份石油醚于回流脱脂，回收石油醚，残渣挥干溶剂待用；

提取：将体积分数为80-89%的乙醇溶液加入到黄芪残渣中，水浴提取，过滤后取滤渣按同样条件水浴加热提取2-3次，收集滤渣；在滤渣中加入蒸馏水提取，提取后过滤得滤液，滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液并低温浓缩得浓缩液；

脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯混合均匀，在不断搅拌下，按照体积比2-3:1的比例将混合溶液缓慢倒入浓缩液中，密封后用磁力搅拌器搅拌30-45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出变性蛋白，按上述步骤重复操作2-3次，使提取液中的蛋白质脱除完全即得黄芪多糖粗液；

纯化：向黄芪多糖粗液中加入乙醇溶液，静置过夜后离心，分离并洗涤固形物，冷冻干燥，即得黄芪多糖。

2.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述脱脂步骤中，回流脱脂温度为55-60℃，时间为100-140分钟。

3.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述提取步骤中，以乙醇溶液提取时的质量体积比为1g︰3-5mL，提取温度为75-80℃，提取时间为30-45分钟。

4.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述提取步骤中，以蒸馏水提取时，蒸馏水的添加量为滤渣中重量的8-10倍，提取温度为55-60℃，提取时间为50-60分钟。

5.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，氯仿、正丁醇、乙酸、酒石酸二甲酯的体积比60-65:12-15:1:0.12-0.15。

6.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14-14.5:1。

7.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述纯化步骤中，向黄芪多糖粗液加入乙醇溶液的量为黄芪多糖粗液体积的5-8倍，乙醇溶液的质量分数为90-95%。

8.根据权利要求1所述的高效的黄芪多糖提取方法，其特征在于：所述纯化步骤中，分别以95-98%的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤固行物。