CN108076878A - 一种苹果脱毒嫩梢嫁接方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种苹果脱毒嫩梢嫁接方法：预先消毒嫁接工具；对经脱毒处理长至15‑20cm的新梢顶部4‑5cm处的叶片进行带毒情况检测，脱除目标病毒的新梢保留顶端1‑2片幼叶剪下长3‑4cm的梢尖作为接穗；所用无毒砧木为主茎直径≥1.5cm的盆栽无毒一年生砧木苗，于距离地面25‑35cm高度处剪砧；嫁接后梢尖和接口部位套袋保湿，人工气候室内保湿培养10‑15天后练苗，得到苹果脱毒苗。按照本发明提供的方法，可以对成熟度不够、受季节性限制、组培或反季节引种等特殊途径获得的梢尖随时进行苹果苗嫁接保存和繁殖，不仅解决了常规嫁接方法嫩梢嫁接成活率低的问题，还为脱毒苗木繁殖开辟了新的方法。

Description

一种苹果脱毒嫩梢嫁接方法

技术领域

本发明属植物栽培领域，具体涉及一种苹果脱毒嫩梢嫁接方法。

背景技术

苹果病毒病害是严重影响果品产量和品质的主要因素之一。苹果树被病毒侵染后，终生带毒，病毒在果树体内增殖，干扰、破坏树体的正常生理机能，导致长势减退，产量下降，品质变劣，不耐贮藏，给苹果生产造成严重危害。目前，已发现和鉴定的苹果病毒有40多种，其中在世界范围内产生重大危害的主要包括苹果褪绿叶斑病毒(Apple chloroticleaf spot virus,ACLSV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspotilarvirus,PNRSV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)和绿皱果病毒(Apple green crinkle virus,AGCV)等6种。苹果植株感染病毒后，在自然条件下无法脱除，为杜绝传染，只能挖除。人工高温处理和微茎尖组织培养是脱除病毒获得无病毒种条、种苗的基本方法。然而茎尖培养脱毒过程中，微茎尖难以再生、是否脱毒受材料数量影响难以检测，微茎尖脱毒仍停留在实验室阶段；而植株高温脱毒处理后脱毒部位主要在新梢顶端的梢尖，接穗过长、过度木质化会降低脱毒率。然而由于梢尖尖端未木质化或半木质化，组织不充实、含水量高、容易脱水，导致脱毒茎尖或梢尖嫁接难以成活，一般成获率在5％以下，极大地限制了脱毒种苗的使用。目前苹果嫁接繁殖中接穗和砧木都采用组织器官充分成熟、枝条木质化或半木质化的新梢或一年生枝进行枝接或芽接，成功率高达90％以上。但脱毒中脱毒茎尖繁殖只能采用梢尖嫁接，为进一步提高梢尖嫁接成活率，本发明提供一种苹果脱毒梢尖嫁接方法，成功率可达90％以上。

发明内容

本发明的目的是针对现有苹果嫁接技术容易携带植物病毒、组培茎尖嫁接成活率低的不足而提供一种可操作性强、成活率高、不易携带病毒的嫁接繁殖方法，采用先对母本植株脱毒处理，检测新梢脱毒情况，对新梢末端未受病毒侵染的梢尖部分取下，再进行嫁接繁殖，解决了常规嫁接不能脱除病毒、茎尖嫁接成活率低且难以操作的问题，可显著提高脱毒材料的嫁接成活率，从而快速获得大量无病毒植株，进而为苹果苗木的无病毒化繁育和无病毒化栽培提供种源和繁殖技术保障。

本发明所采用的技术原理：由于植物的体细胞具有全能性，即任何一个植物体细胞都具植物发育所需要的全部基因，具有发育成母体植株的能力。因此，理论上植物的任意器官都可以进行无性繁殖，形成新的植株，苹果茎尖嫁接和无性繁殖已经证明了其可行性，但不同器官和组织的嫁接成活率可能受环境条件影响。目前，苹果梢尖嫁接成活率低的主要限制因素为：枝条发育不充实，组织含水量高，保水能力差，环境湿度低，容易脱水，导致枝条嫁接后、愈合前脱水干枯。因此，通过创造嫁接后高湿环境条件，减少接口和接穗部位水分散失，可以提高嫁接成活率。

本发明提供的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其为预先消毒嫁接工具；所用无毒砧木为主茎直径≥1.5cm的盆栽无毒一年生砧木苗，于距离地面25-35cm高度处剪砧；对脱毒处理的新梢顶部4-5cm处的叶片进行带毒情况检测，脱除目标病毒的新梢保留顶端1-2片幼叶剪下长3-4cm的梢尖作为接穗；嫁接后梢尖和接口部位套袋保湿，人工气候室内保湿培养10-15天后练苗，得到苹果脱毒苗。

本发明提供的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，包括如下步骤：

1)将嫁接工具预先消毒；

2)准备主茎直径≥1.5cm的盆栽无毒一年生砧木苗，在距离地面25-35cm高、枝条光滑处用水平剪除顶端部分，余下的部分作为砧木；

3)脱毒处理长出的新梢长度达到15-20cm时，对新梢顶部4-5cm处叶片的带毒情况进行检测，将脱除目标病毒的新梢保留顶端1-2片幼叶，剪下长3-4cm的梢尖作为接穗；

4)通过插皮接法进行嫁接；

5)在整个梢尖和接口部位套入白色透明薄膜袋，在接口下端的砧木上绑扎封闭和固定保湿；

6)将嫁接苗植株在人工气候室保湿培养10-15天；

7)新梢有新叶发出时，表明梢尖嫁接成活，逐天降低湿度，再移至自然条件下。

其中，步骤1)所述嫁接工具，为枝剪和嫁接刀，枝剪用于剪下嫩梢，嫁接刀用于削、切接穗和砧木。

其中，步骤1)所述预先消毒，为预先通过灼烧或酒精表面消毒。

其中，步骤2)所述盆栽无毒一年生砧木苗在网室中隔离保存。

其中，步骤3)所述脱毒处理，可选择现有技术中任一植物脱毒方式，优选自以下任一方式：

a离体组织培养脱毒；

b经高温、射线、臭氧、化学杀毒剂或生物灭活处理脱毒；

c快速生长脱毒；

d其他处理脱毒。

其中，步骤3)所述脱除目标病毒，为脱除苹果6种常见病毒。苹果6种常见病毒为苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)、苹果茎沟病毒(Apple stemgrooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot ilarvirus,PNRSV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skinviroid,ASSVd)和绿皱果病毒(Apple green crinkle virus,AGCV)等6种。

其中，步骤3)所述检测，检测后24小时内进行嫁接。

其中，步骤4)所述插皮接法具体为：在砧木上横截口外缘韧皮部位置处垂直向下纵切，划开韧皮部1-2cm；将待嫁接梢尖末端削成马耳形，长度2-3cm；将梢尖底部的马耳形尖头部分插入砧木横截面与纵向开口处砧木的木质与韧皮部之间的缝隙中，马耳形平面部分面向砧木木质部，轻轻向下推入梢尖至梢尖马耳形切口仅露上部白线；进行包扎固定。

其中，所述包扎固定为将砧穗贴合后，用嫁接膜自下向上逐圈拉紧缠绕固定接口，确保不漏伤口、不进水、不漏气、不松动。

其中，步骤5)所述白色透明薄膜袋为150mm×150mm的透明塑料薄膜袋。

其中，步骤6)所述保湿培养，其培养条件为：光强>10000lux、空气温度25-28℃、空气相对湿度93-95％、土壤相对湿度80-85％、光周期16h照光/8h黑暗。

本发明还提供所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法在苹果育苗、脱毒及栽培中的应用。

按照本发明提供的方法，可以对成熟度不够、受季节性限制、组培苗或反季节引种、脱毒等特殊途径获得的苹果嫩梢随时进行嫁接保存和繁殖，不仅解决了常规嫁接方法嫩梢嫁接成活率低的问题，还为苹果脱毒和脱毒苗木繁殖创立了新的方法。

本发明提供的苹果脱毒梢尖嫁接方法具有以下优点：

1、梢尖嫁接与常规嫁接方法相比，不仅能够突破季节限制，在生长期随时进行，而且提高了嫁接成活率。

2、能够采用更小的嫁接体，降低了繁殖过程中病毒病害的携带和传播机率。

附图说明

图1是实施例1中苹果脱毒梢尖嫁接技术流程图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1苹果脱毒梢尖嫁接方法的实际应用

于2017年7月16日对脱毒苹果植株进行嫁接。

所用苹果接穗品种为嘎拉、工藤富士、2001富士、烟富3、烟富0、烟富8、信浓金、新乔纳金、静香、SH6、M9-T337，所用无毒砧木为G935，所用的嫁接方法为插皮接，梢尖嫁接流程参见图1，具体如下：

(1)枝剪、嫁接刀等所用器具均需先消毒处理，备用无毒砧木G935苗地面直径≥1.5cm；

(2)嘎拉苹果母本盆栽植株在37℃高温处理30天后，在新梢顶端4-5cm处取叶片检测病毒，标记检测部位，检测无毒的新梢于距离梢尖3-4cm处从原带毒植株上用无毒修枝剪剪下；

(3)采用插皮接法嫁接，在砧木上横截口外缘韧皮部位置处垂直向下纵切，划开韧皮部1-2cm；将待嫁接梢尖末端削成马耳形，长度2-3cm。将接穗梢尖底部的马耳形尖头部分插入砧木纵向开口处木质与韧皮部之间的缝隙中，马耳形平面部分面向砧木木质部，轻轻向下推入梢尖至接穗马耳形切口仅露上部白线。用嫁接膜自下向上逐圈拉紧缠绕固定接口和接穗，确保接合面不错位、不漏伤口、不进水、不漏气、不松动。

(4)将整个梢尖和接口部位从上端套入150mm×150mm透明薄膜袋，在接口下端的砧木上用嫁接膜绑扎封闭和固定保湿；

(5)保湿培养：将嫁接苗植株在人工气候室(光强>10000lux、空气温度25-28℃、空气相对湿度93-95％、土壤相对湿度80-85％、光周期16h照光/8h黑暗)保湿培养15天；新梢有新叶发出时，每天降低相对湿度5％，达到自然湿度(40-50％)后，于傍晚太阳落山后移至自然条件下培养；

本实施例共嫁接60株，成活54株，嫁接成活率达90％以上；获得9个苹果品种和2种矮化砧木脱毒苗木50株，脱毒率83.3％。

实施例2本发明梢尖嫁接方法与普通梢尖嫁接方法对比

于2017年8月10日对脱毒苹果进行嫁接。

所用苹果接穗品种为嘎拉，所用砧木为脱毒G935，所用的嫁接方法为插皮接，专利方法实施过程与上例相同，传统方法参照《果树栽培概论》(高等教育出版社，1999)实施；各嫁接50株，50天后统计成活率和脱毒率。

通过本专利提供的苹果3.0-4.0cm脱毒梢尖嫁接技术，共嫁接50株，成活42株，嫁接成活率达84％；获得脱毒苗木35株，脱毒率70％。普通梢尖嫁接方法共嫁接50株，成活12株，嫁接成活率24％，获得脱毒苗11株，脱毒率22％。可见本方法在成活率和脱毒率方面远远优于传统的梢尖嫁接法。

本技术接穗部位较短，体积较小，靠近顶端生长点，降低了带毒的概率，此外采取了保湿嫁接和保湿培养措施，极大地提高了成活率。苹果梢尖嫁接技术的建立同时为梨、杏、桃、葡萄、樱桃等果树脱毒和无毒苗木的繁育提供了借鉴。

Claims (10)

1.一种苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，其为预先消毒嫁接工具；所用无毒砧木为主茎直径≥1.5cm的盆栽无毒一年生砧木苗，于距离地面25-35cm高度处剪砧；对经脱毒处理长至15-20cm的新梢顶部4-5cm处的叶片进行带毒情况检测，脱除目标病毒的新梢保留顶端1-2片幼叶剪下长3-4cm的梢尖作为接穗；嫁接后梢尖和接口部位套袋保湿，人工气候室内保湿培养10-15天后练苗，得到苹果脱毒苗。

2.根据权利要求1所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将嫁接工具预先消毒；

2)准备主茎直径≥1.5cm的盆栽无毒一年生砧木苗，在距离地面25-35cm高、枝条光滑处用水平剪除顶端部分，余下的部分作为砧木；

3)脱毒处理长出的新梢长度达到15-20cm时，对新梢顶部4-5cm处叶片的带毒情况进行检测，将脱除目标病毒的新梢保留顶端1-2片幼叶，剪下长3-4cm的梢尖作为接穗；

4)通过插皮接法进行嫁接；

5)在整个梢尖和接口部位套入白色透明薄膜袋，在接口下端的砧木上绑扎封闭和固定保湿；

6)将嫁接苗植株在人工气候室保湿培养10-15天；

7)新梢有新叶发出时，表明梢尖嫁接成活，逐天降低湿度，再移至自然条件下。

3.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤1)所述嫁接工具，为枝剪和嫁接刀。

4.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤3)所述脱毒处理，选自以下任一方式：

a离体组织培养脱毒；

b经高温、射线、臭氧、化学杀毒剂或生物灭活处理脱毒；

c快速生长脱毒；

d其他处理脱毒。

5.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤3)所述脱除目标病毒，为脱除苹果6种常见病毒。

6.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤3)所述检测，检测后24小时内进行嫁接。

7.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤4)所述插皮接法具体为：在砧木上横截口外缘韧皮部位置处垂直向下纵切，划开韧皮部1-2cm；将待嫁接梢尖末端削成马耳形，长度2-3cm；将梢尖底部的马耳形尖头部分插入砧木横截面与纵向开口处砧木的木质与韧皮部之间的缝隙中，马耳形平面部分面向砧木木质部，轻轻向下推入梢尖至梢尖马耳形切口仅露上部白线；进行包扎固定。

8.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤5)所述白色透明薄膜袋为150mm×150mm的透明塑料薄膜袋。

9.根据权利要求2所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法，其特征在于，步骤6)所述保湿培养，其培养条件为：光强>10000lux、空气温度25-28℃、空气相对湿度93-95％、土壤相对湿度80-85％、光周期16h照光/8h黑暗。

10.权利要求1-9任一项所述的苹果脱毒嫩梢嫁接方法在苹果栽培中的应用。