CN108070025A - 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 - Google Patents
一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108070025A CN108070025A CN201711001060.5A CN201711001060A CN108070025A CN 108070025 A CN108070025 A CN 108070025A CN 201711001060 A CN201711001060 A CN 201711001060A CN 108070025 A CN108070025 A CN 108070025A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- drug
- sequence
- penetrating
- penetrating peptides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 91
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 91
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims abstract description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 129
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 124
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 103
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 42
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 36
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 35
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 claims description 29
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 24
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 24
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 23
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical group [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 18
- -1 duramycin) Class compound Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 16
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 16
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 13
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 13
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 13
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 13
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 12
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 claims description 12
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 8
- QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N Methoxsalen Chemical compound C1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=COC1=C2OC QXKHYNVANLEOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PCWZKQSKUXXDDJ-UHFFFAOYSA-N Xanthotoxin Natural products COCc1c2OC(=O)C=Cc2cc3ccoc13 PCWZKQSKUXXDDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 claims description 7
- 229960004469 methoxsalen Drugs 0.000 claims description 7
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 7
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 claims description 6
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UBDZFAGVPPMTIT-UHFFFAOYSA-N 2-aminoguanidine;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=N[NH3+] UBDZFAGVPPMTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- OSBSXTGABLIDRX-UHFFFAOYSA-N 5-methylidenecyclohexa-1,3-diene Chemical compound C=C1CC=CC=C1 OSBSXTGABLIDRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 5
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 claims description 5
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 5
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims description 5
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 claims description 5
- MWYYLZRWWNBROW-UHFFFAOYSA-N 6-epiophiobolin A Natural products CC1CC(C=C(C)C)OC11C2CC=C(C=O)C(C(=O)CC3(C)O)C3CC2(C)CC1 MWYYLZRWWNBROW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C Chemical class CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N 0.000 claims description 4
- 108060002063 Cyclotide Proteins 0.000 claims description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 4
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- QJDWKBINWOWJNZ-OURZNGJWSA-N cinnamycin Chemical compound CC(C)[C@@H]1NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@H](Cc3ccccc3)NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc3ccccc3)NC(=O)[C@@H]3CNCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H]4NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSC[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CS[C@H]4C)C(=O)N[C@@H](CS[C@H]2C)C(=O)N3)NC1=O)[C@@H](O)C(O)=O)C(O)=O QJDWKBINWOWJNZ-OURZNGJWSA-N 0.000 claims description 4
- 108010063293 cinnamycin Proteins 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 229930184030 ophiobolin Natural products 0.000 claims description 4
- MWYYLZRWWNBROW-BDZRSQQBSA-N ophiobolin A Chemical compound C[C@H]1C[C@H](C=C(C)C)O[C@]11[C@@H]2C\C=C(C=O)/[C@@H](C(=O)C[C@@]3(C)O)[C@@H]3C[C@@]2(C)CC1 MWYYLZRWWNBROW-BDZRSQQBSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- RKCAIXNGYQCCAL-UHFFFAOYSA-N porphin Chemical compound N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 RKCAIXNGYQCCAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000009738 saturating Methods 0.000 claims description 4
- ZQFGRJWRSLZCSQ-ZSFNYQMMSA-N verteporfin Chemical compound C=1C([C@@]2([C@H](C(=O)OC)C(=CC=C22)C(=O)OC)C)=NC2=CC(C(=C2C=C)C)=NC2=CC(C(=C2CCC(O)=O)C)=NC2=CC2=NC=1C(C)=C2CCC(=O)OC ZQFGRJWRSLZCSQ-ZSFNYQMMSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003895 verteporfin Drugs 0.000 claims description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 3
- 108010067071 duramycin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 3
- SFWLDKQAUHFCBS-WWXQEMPQSA-N lancovutide Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCNC[C@H]4C(=O)N[C@@H](CC=5C=CC=CC=5)C(=O)NCC(=O)N5CCC[C@H]5C(=O)N[C@@H](CC=5C=CC=CC=5)C(=O)N[C@H]([C@@H](SC[C@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CSC3C)CSC2)C(=O)N4)C)C(=O)N1)C(O)=O)[C@@H](O)C(O)=O)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 SFWLDKQAUHFCBS-WWXQEMPQSA-N 0.000 claims description 3
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 claims description 3
- XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L (2-dodecoxy-2-oxoethyl)-[6-[(2-dodecoxy-2-oxoethyl)-dimethylazaniumyl]hexyl]-dimethylazanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].CCCCCCCCCCCCOC(=O)C[N+](C)(C)CCCCCC[N+](C)(C)CC(=O)OCCCCCCCCCCCC XINQFOMFQFGGCQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 2
- 239000007919 dispersible tablet Substances 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims description 2
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 claims description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 claims 2
- IBMWWEZVSIJDIW-UHFFFAOYSA-N C1=CC=CC=C1.N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 Chemical compound C1=CC=CC=C1.N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 IBMWWEZVSIJDIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 claims 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 claims 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 claims 1
- MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N dimethoate Chemical compound CNC(=O)CSP(=S)(OC)OC MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 47
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 41
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract description 16
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 66
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 51
- 101100007581 Entamoeba histolytica CPP1 gene Proteins 0.000 description 37
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 108010005652 splenotritin Proteins 0.000 description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 16
- 238000011160 research Methods 0.000 description 16
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 10
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 8
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 8
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- TUFFYSFVSYUHPA-UHFFFAOYSA-M rhodamine 123 Chemical compound [Cl-].COC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C(C=CC(N)=C2)C2=[O+]C2=C1C=CC(N)=C2 TUFFYSFVSYUHPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 6
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N Arg-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- CVXXSWQORBZAAA-SRVKXCTJSA-N Arg-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N CVXXSWQORBZAAA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- HPCOBEHVEHWREJ-DCAQKATOSA-N Gln-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HPCOBEHVEHWREJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 5
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000031016 anaphase Effects 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 5
- VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N chembl402140 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N/CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 210000001847 jaw Anatomy 0.000 description 5
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 5
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 5
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 4
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N Glu-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- YEKYGQZUBCRNGH-DCAQKATOSA-N His-Pro-Ser Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O YEKYGQZUBCRNGH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 4
- 101000616469 Polybia paulista Mastoparan-1 Proteins 0.000 description 4
- LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LVVBAKCGXXUHFO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 4
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 4
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 4
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 4
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 4
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 4
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 22,23-dihydroavermectin B1a Natural products C1CC(C)C(C(C)CC)OC21OC(CC=C(C)C(OC1OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C1)C(C)C=CC=C1C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC1)O)CC4C2 AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 8883yp2r6d Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O[C@@H]([C@@H](C)CC4)C(C)C)O3)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@@]21O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C1)[C@@H](C)\C=C\C=C/1[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\1)O)C[C@H]4C2 SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 0.000 description 3
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 3
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 3
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 3
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229960002418 ivermectin Drugs 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 3
- 239000002578 wasp venom Substances 0.000 description 3
- RCGXNDQKCXNWLO-WLEIXIPESA-N (2r)-n-[(2s)-5-amino-1-[[(2r,3r)-1-[[(3s,6z,9s,12r,15r,18r,19s)-9-benzyl-15-[(2r)-butan-2-yl]-6-ethylidene-19-methyl-2,5,8,11,14,17-hexaoxo-3,12-di(propan-2-yl)-1-oxa-4,7,10,13,16-pentazacyclononadec-18-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopent Chemical compound N([C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(/C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)C(C)C)=C\C)C(C)C)[C@H](C)CC)=O)C(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)CCCC(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(C)C RCGXNDQKCXNWLO-WLEIXIPESA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- HNXQXTQTPAJEJL-UHFFFAOYSA-N 2-aminopteridin-4-ol Chemical compound C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 HNXQXTQTPAJEJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFKRXESVMDBTNQ-UHFFFAOYSA-N 3-[18-(2-carboxylatoethyl)-8,13-bis(1-hydroxyethyl)-3,7,12,17-tetramethyl-22,23-dihydroporphyrin-21,24-diium-2-yl]propanoate Chemical compound N1C2=C(C)C(C(C)O)=C1C=C(N1)C(C)=C(C(O)C)C1=CC(C(C)=C1CCC(O)=O)=NC1=CC(C(CCC(O)=O)=C1C)=NC1=C2 KFKRXESVMDBTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCPFFGGFHNZBEP-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7-tetrachloro-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 QCPFFGGFHNZBEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100026596 Bcl-2-like protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N Gly-Arg-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- KFMBRBPXHVMDFN-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCNC(N)=N KFMBRBPXHVMDFN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000996663 Homo sapiens Neurotrophin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N Lys-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 102000004230 Neurotrophin 3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100033857 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 229960002749 aminolevulinic acid Drugs 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000000006 cell growth inhibition assay Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 2
- APEJMQOBVMLION-UHFFFAOYSA-N cinnamamide Chemical compound NC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 APEJMQOBVMLION-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 108010061297 didemnins Proteins 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 108010091711 kahalalide F Proteins 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 229940032018 neurotrophin 3 Drugs 0.000 description 2
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M thiazole orange Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.C1=CC=C2C(C=C3N(C4=CC=CC=C4S3)C)=CC=[N+](C)C2=C1 ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRYZPFWEZHSTHD-HEFFAWAOSA-O 2-[[(e,2s,3r)-2-formamido-3-hydroxyoctadec-4-enoxy]-hydroxyphosphoryl]oxyethyl-trimethylazanium Chemical class CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](NC=O)COP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C LRYZPFWEZHSTHD-HEFFAWAOSA-O 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical group CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005869 Activating Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010005254 Activating Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010061623 Adverse drug reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 1
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 1
- 241000251557 Ascidiacea Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001481710 Cerambycidae Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 1
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 1
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- KYHUYMLIVQFXRI-SJPGYWQQSA-N Didemnin B Chemical compound CN([C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@@H]([C@H](CC(=O)O[C@H](C(=O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N(C)[C@@H](CC=2C=CC(OC)=CC=2)C(=O)O[C@@H]1C)C(C)C)O)[C@@H](C)CC)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)O KYHUYMLIVQFXRI-SJPGYWQQSA-N 0.000 description 1
- 108700006830 Drosophila Antp Proteins 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102100028043 Fibroblast growth factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 102400001370 Galanin Human genes 0.000 description 1
- 101800002068 Galanin Proteins 0.000 description 1
- JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N Geldanamycin Natural products C1C(C)CC(OC)C(O)C(C)C=C(C)C(OC(N)=O)C(OC)CCC=C(C)C(=O)NC2=CC(=O)C(OC)=C1C2=O JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101001060280 Homo sapiens Fibroblast growth factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102000011716 Matrix Metalloproteinase 14 Human genes 0.000 description 1
- 108010076557 Matrix Metalloproteinase 14 Proteins 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000001621 Mucoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010093825 Mucoproteins Proteins 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010068425 Octamer Transcription Factor-3 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000279 Peptidyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- UZZSLJPOMCKRAC-UHFFFAOYSA-N [Sn].c1ccc2ncccc2c1 Chemical compound [Sn].c1ccc2ncccc2c1 UZZSLJPOMCKRAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- IYPRWQPJYRBHIS-UHFFFAOYSA-N acetic acid;uranium Chemical compound [U].CC(O)=O IYPRWQPJYRBHIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037842 advanced-stage tumor Diseases 0.000 description 1
- 102000009899 alpha Karyopherins Human genes 0.000 description 1
- 108010077099 alpha Karyopherins Proteins 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- MMCPOSDMTGQNKG-UHFFFAOYSA-N anilinium chloride Chemical compound Cl.NC1=CC=CC=C1 MMCPOSDMTGQNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003005 anticarcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017047 asymmetric cell division Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSXLETNRCMCRAQ-UHFFFAOYSA-N chembl383675 Chemical compound OC1=CC=CC(C=2C=3C=CC(N=3)=C(C=3C=C(O)C=CC=3)C3=CC=C(N3)C(C=3C=C(O)C=CC=3)=C3C=CC(N3)=C(C=3C=C(O)C=CC=3)C=3CCC=2N=3)=C1 KSXLETNRCMCRAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000002508 compound effect Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- KYHUYMLIVQFXRI-UHFFFAOYSA-N didemnin B Natural products CC1OC(=O)C(CC=2C=CC(OC)=CC=2)N(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)CC(O)C(C(C)CC)NC(=O)C1NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C1CCCN1C(=O)C(C)O KYHUYMLIVQFXRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N geldanamycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C/C=C\[C@@H](OC)[C@H](OC(N)=O)\C(C)=C/[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H](C)CC2=C(OC)C(=O)C=C1C2=O QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008384 membrane barrier Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 210000004914 menses Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- SLZIZIJTGAYEKK-CIJSCKBQSA-N molport-023-220-247 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CNC=N1 SLZIZIJTGAYEKK-CIJSCKBQSA-N 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N o-dihydroxy-benzene Natural products OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 210000001711 oxyntic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 1
- 229940109328 photofrin Drugs 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001553 poly(ethylene glycol)-block-polylactide methyl ether Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010011401 polyperforin Proteins 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000001855 preneoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012772 sequence design Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108010062760 transportan Proteins 0.000 description 1
- PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N transportan Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- DNYWZCXLKNTFFI-UHFFFAOYSA-N uranium Chemical compound [U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U][U] DNYWZCXLKNTFFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229940045949 wasp venoms Drugs 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
- A61K51/065—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules conjugates with carriers being macromolecules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用。本发明提供的细胞穿透肽，其选自如下氨基酸序列：序列1、序列2、序列3、序列4或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1‑5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。本发明提供了一种易于制备，分子量小，不易产生免疫排斥反应，穿透能力强，细胞内半衰期长的穿透性多肽(或称为细胞穿透肽)。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞膜穿透肽和细胞穿透肽复合物，还涉及该细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物的应用。
背景技术
细胞膜是一种磷脂双分子层，它是细胞内、外环境间的半透性屏障，具有选择通透性，保证了细胞内环境的相对稳定性。细胞膜屏障能够阻止某些物质，特别是有害物质由血液进入细胞内，有助于维持细胞的正常功能活动。青霉素作用于原核细胞的细胞壁，青霉素的结构与细胞壁的成分粘肽结构中的D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。真核细胞缺乏细胞壁，因此青霉素对真核生物几乎无任何毒性作用。近年发现真核生物一项重要的细胞免疫机制是攻击靶细胞的细胞膜完整性。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)的细胞质中储存有细胞膜成孔蛋白(Pore-forming protein)，又称穿孔素(Perforin)。当与病毒感染的细胞或肿瘤细胞等靶细胞密切接触相互作用后，CTL和NK细胞释放穿孔素，在靶细胞的细胞膜上形成多聚穿孔素管状通道，导致靶细胞迅速溶解破坏。穿孔素分子量为67kDa左右，由534个氨基酸组成。12-16个穿孔素分子插入靶细胞膜，多聚化形成多个异常的管状通道，其内径平均约16nm。细胞外的Na+、水分经该管道流入细胞内，而细胞内的K+及大分子物质经该管道流出，引起细胞渗透压改变，迅速导致细胞溶解死亡。然而，类似穿孔素的细胞膜破坏药物分子罕见报道，发明穿孔素类的药物无疑将开辟肿瘤和病毒等疾病治疗的新途径。
细胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)首先发现于1型人免疫缺陷病毒转录激活因子TAT(human immunodeficiency virus-1 transcription activator，HIV-1TAT)，TAT具有一个活化域(序列37-48，regionⅡ)，核定位域(序列49-57，regionⅢ)，还有一个活化增强域(序列58-72，regionⅣ)，它对病毒转运到细胞核发挥着重要作用。随着细胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)的发现和研究深入，CPPs药物开发逐渐显露出诱人的应用前景。近年的研究确定CPPs是一类以非受体依赖方式穿过细胞膜进入细胞的多肽，由50个左右氨基酸组成，可以通过人工合成，具有细胞毒性低，穿透能力强，免疫反应小，细胞代谢慢等优点。CPPs可以携带多种不同大小和性质的生物活性物质进入细胞，包括难以穿透细胞膜的蛋白质、多肽、寡链核苷酸、小分子化合物、染料、多肽核酸(peptidenucleo acid,PNA)、质粒DNA、siRNA、200nm的脂质体、噬菌体颗粒和超顺磁性粒子等，这一性质为其成为靶向药物的良好载体提供了可能。
CPPs可分为阳离子CPPs、两亲性CPPs和疏水性CPPs三类，至今发现的阳离子CPPs主要有TAT 49–57，Penetratin，Polyarginine，P22N，DPV3，DPV6等。TAT主要的功能序列是GRKKRRQRRR，该序列对于TAT的细胞穿透作用及载体运输作用至关重要。TAT对细胞膜的穿透特性是能量非依赖性，但是也可通过细胞膜的内吞作用进入细胞内。Penetratin是从自然界果蝇触角同源异构蛋白中发现的，可介导细胞外蛋白的内源化，Penetratin的细胞膜穿透性通过细胞膜上脂质体或者神经酰胺形成的结构域介导。阳离子CPPs序列主要含有精氨酸，赖氨酸，组氨酸等阳离子氨基酸。其中精氨酸的胍基基团可以和细胞膜上的带负电荷的磷酸盐、硫酸盐等形成氢键。因此，含有精氨酸的短肽可以在生理情况下穿透细胞膜，进入细胞内。赖氨酸正电荷和精氨酸类似，但是它没有胍基基团，因此穿透能力较精氨酸弱。有研究表明，阳离子CPP穿透细胞膜至少需要带有8个正电荷。两亲性CPPs具有亲脂基团及亲水基团，通过与细胞膜上粘多糖结合而穿透细胞膜。Transportan(GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL)是一种将甘丙肽和黄蜂毒素结合而形成的CPP，以能量依赖性和能量非依赖性两种形式进入细胞，它的细胞膜穿透作用强于TAT及Penetratin。疏水性CPPs主要由疏水性氨基酸组成，荷电量较少，细胞膜穿透性较弱，但疏水性CPPs可通过非共价键进入细胞内，对细胞膜影响较小，能最大限度保存细胞活力。
目前，越来越多的研究应用CPPs作为载体，将难以进入细胞内的分子，如纳米微粒，寡链核苷酸，抗癌药物等运载进细胞内。提高细胞对这些分子的吸收能力，降低耐药性，降低副作用。现有研究表明，有多种CPPs可进行药物分子的转运。在研究中将紫杉醇，甲氨蝶呤和阿霉素连接上CPPs后，可提高抗癌药物的抗癌作用，降低用药量，同时降低了抗癌药物的毒副作用。CPPs增加了肿瘤细胞膜的穿透性，因此可以抵抗肿瘤细胞的MDR，提高肿瘤药物在肿瘤细胞内的局部药物浓度。
CPPs连接抗肿瘤药物有多种不同的方法，其中有CPPs直接连接抗肿瘤药物。这主要应用于阿霉素，紫杉醇等较稳定抗癌药物的连接。在Jue-Yeon Lee的研究中发现，阿霉素连接TAT细胞穿透肽可提高阿霉素77.5％抗肿瘤活性，同时降低毒副作用。有学者将TAT同时连接阿霉素，紫杉醇两种抗癌药物，达到联合用药的效果，在阿霉素-紫杉醇聚合体中连接少量的TAT即可大幅度提高抗肿瘤药物的活性。
除了细胞毒性肿瘤化疗药物以外，以CPP为载体，进入细胞并发挥生物活性的还有蛋白质和核酸两类外源性物质分子。蛋白质类包括酶类、激素、生长因子、神经营养因子、细胞凋亡因子、细胞内信号转导分子等功能蛋白；核酸类包括质粒、双链DNA、反义寡核苷酸和干扰小RNA(small interfering RNA，siRNA)等。通常应用siRNA调节目标基因的活性，但是siRNA带有强烈的负电荷，很难通过细胞膜。而CPP带正电荷，按照一定比例与siRNA混合后可形成牢固的共价键或松散的非共价键连结，有学者将CPP与siRNA用双硫键进行连接，CPP导入细胞的转染效果优于脂质体siRNA复合物(Lipofectamin-siRNA)；血脑屏障严格限制蛋白质药物等大分子的进入，有学者论证了CPP可引导大分子神经营养物质通过血脑屏障，如通过CPP连结抗凋亡蛋白Bcl—xL，可增加该蛋白在脑组织的吸收，能抑制缺血引起的细胞凋亡，并显著降低了脑区坏死面积和神经损伤。
CPPs联合其它靶向性多肽，连接于药物分子聚合物上，实现药物对肿瘤的靶向运输及定向释放，其中有MT1-7F7p多肽，pH敏感型多肽等。MT1-7F7p是一种能特异性结合于肿瘤周新生血管及神经胶质瘤表面高表达的MT1-MMP分子上的多肽。将MT1-7F7p和CCPs结合于Taxol-PEG-PLA抗肿瘤药物聚合物上，可提高紫杉醇药物靶向释放于神经胶质瘤中，实现药物定向释放。H7K(R2)2是一种pH敏感性细胞穿透肽，它在pH值7.4的正常生理环境中处于稳定状态，但在pH值6.0的酸性环境中被活化，具有胞膜穿透性。由于肿瘤微环境呈酸性，pH值降低，因此H7K(R2)2在到达肿瘤酸性微环境中被活化，将抗肿瘤药物输送到肿瘤细胞中，提高肿瘤微环境局部药物浓度。CPPs越来越多的被应用于抗肿瘤药物靶向运输，定向释放的研究。
光敏药物如卟啉型光敏药物(Photofrin)、盐酸氨基酮戊酸(Aminolevulinicacid,ALA)、海姆泊芬(Hemoporfin)、维替泊芬、多替泊芬(Duteroporphyrin)、mTHPC、初卟啉锡(SnEtz)、甲氧沙林(Methoxsalen)、亚甲基兰、亚甲苯兰、苯卟啉衍生物，luteliumtexaphyrins(Lu-Tex)和卟非姆钠等光敏药物由于肿瘤选择性摄取率不高，治疗效果有限。依据CPPs细胞渗透和载体能力，将光敏药物连接于CPPs上同样可能增加光敏药物进入细胞内，有利于提高肿瘤光动力治疗效果。
罗丹明(Rhodamine)是一种荧光染料，属于邻苯二酚类多环化合物，主要包括罗丹明B(Rhodamine B)、罗丹明6G(Rhodamine 6G)、罗丹明123(Rhodamine 123)，是细胞荧光标记的常用试剂。罗丹明B分子式C28H31ClN2O3；分子量479.0175，长期服用具有致癌和致突变性；罗丹明6G由等重量的罗丹明B和盐酸苯胺加热至185～190℃保持1.5～2h，再用乙醇和无机酸加以酯化制得，罗丹明6G单独应用具有肿瘤细胞选择性细胞毒性，可与细胞浆中蛋白质发生化学反应，而使细胞失去活力；罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。罗丹明123用于对许多种细胞进行染色，包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性，此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。目前未见罗丹明B和罗丹明123用于抗肿瘤药物开发的研究报道。
目前的药物载体，主要有单克隆抗体、纳米材料、脂质体、腺病毒和细胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)等。其中，只有单克隆抗体作为载体可能达到靶向特异性。单克隆抗体载体具有靶向特异性高、亲和力强、稳定性好等优点。缺点是单克隆鼠源性抗体，在应用过程中将不可避免的引起人体内的人抗鼠抗体免疫应答，遗留医疗安全隐患；其次，抗体分子量较大，载药量少，组织细胞渗透性较弱，网状内皮系统和肝脏对抗体的非特异性吸收，均影响实体肿瘤的治疗效果；第三，抗体易受酸碱破坏，药物与抗体连接比例和连接效率不确定；第四，单抗的生产成本高，成功率低，批量生产复杂，生产周期较长，第五，单抗本身属于生物大分子，细胞膜的穿透能力较弱，不能满足携带药物进入细胞内的要求。纳米材料的优势在于对小分子或多肽药物的吸附力和载药量都很强，能运输足够的药物到组织细胞内。然而，纳米材料的组织细胞特异性较差，很容易被正常组织细胞吸附带来不必要的药物副作用。同时，纳米材料的人体毒性和稳定性尚未确定，有待长期临床研究论证。
肿瘤的细胞膜表面过度表达着O-糖基化粘蛋白、磷脂酰丝氨酸和唾液酸神经节苷脂等带负电荷的蛋白，导致肿瘤细胞表面携带网状负电荷。一些药物分子具有靶向细胞膜破坏的作用，如蛇孢假壳素(ophiobolin)、polybia-MPI黄蜂毒液多肽、大环寡肽(cyclotide)、肉桂霉素(cinnamycin)、肉桂酰胺格尔德霉素和耐久霉素(duramycin)。Polybia-MPI是一种从群居黄蜂毒液中提取出来的阳离子抗肿瘤多肽，其序列为IDWKKLLDAAKQIL，可形成α螺旋构象，以非极性脂质细胞膜为靶点，增加细胞膜通透性，使细胞溶解。膀胱癌、前列腺癌以及肿瘤血管内皮细胞对Polybia-MPI敏感。Kahalalide F是一种从海天牛鼠中提取出来的环缩肽，在80mg/kg浓度下对前列腺癌及乳腺癌细胞等具有选择性抑制作用，导致线粒体膜的溶解及溶酶体的增多。Kahalalide F治疗黑色素瘤和非小细胞肺癌已经进入Ⅰ/Ⅱ期临床研究。另一种环状多肽Didemnin B来源于海鞘提取物，阻碍细胞从G1期进入S期，促进肿瘤细胞的凋亡。Didemnin B治疗直结肠癌、转移性乳腺癌和胶质细胞瘤等已经进入Ⅱ期临床研究。此外，噬菌体展示技术筛选得到裸鼠CD133结合的7肽：LQNAPRS(LS-7)、FGF3受体结合的7肽：VLWLKNR(FP16)，APRIL结合的多肽AAAPLAQPHMWA,SSTTTSDKYLSA和SNLHDNNTEKNV均显示了较好的肿瘤抑制效果。依据CPPs细胞渗透和载体能力，将细胞膜破坏药物连接于CPPs上同样可能增加药物进入细胞内，有利于降低毒性，提高肿瘤治疗效果。
几十年来国内外已经投入了相当大的努力发展新的靶向性药物，但是这些抗肿瘤药物依然局限于肿瘤增殖的禁止药物(Parenti et al.,2014)、肿瘤细胞周期调节药物(Gabrielli et al.,2012)和肿瘤细胞凋亡和自噬引导药物等(Amaravadi et al.,2011)。这些药物对肿瘤靶向性不足常常使得肿瘤治疗过程中对正常细胞损伤过大，产生严重的并发症；进一步，传统化学治疗过程中容易发生肿瘤细胞耐药性，究其原因是肿瘤细胞分泌ATP转运蛋白等将化疗药物通过胞吐作用外排到细胞外，影响肿瘤治疗效果。因此有必要发现新的靶向性药物，提高抗肿瘤效率。
已经注意到肿瘤细胞膜过量表达磷脂酰丝氨酸和高糖基化粘蛋白(Peetla etal.2013；Hoskin and Ramamoorthy 2008)，带有较大比例的阴离子；而正常状态的细胞主要由磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂构成，呈现中性(Spector and Yorek 1985)。Polybia-MPI抗肿瘤阳离子多肽的研究显示，这样的结构有利于阳离子CPPs与肿瘤细胞膜静电结合，不仅为开发靶向肿瘤细胞的穿透肽药物载体提供了分子基础，也为开发破坏肿瘤细胞膜的穿透肽药物平台提供了可能，但是至今鲜见这种极具前景的破坏肿瘤细胞膜复合药物的报道。
发明内容
本发明为弥补现有技术的不足，提供一种新颖的细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及它们的应用。
本发明第一方面提供一种细胞穿透肽，其选自如下氨基酸序列：序列1、序列2、序列3、序列4或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1-5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列，例如，同一性可以达到50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上等等。
在更为优选的方案中，所述细胞穿透肽优选为序列1或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1或5具有至少50％同一性的氨基酸序列。
本发明第二方面提供一种细胞穿透肽复合物，其包含一种或两种以上细胞穿透肽，所述细胞穿透肽选自如下氨基酸序列的肽中的至少一种：序列1、序列2、序列3、序列4、序列5所示的氨基酸序列，或与序列1-5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列，例如，同一性可以达到50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上等等。在更为优选的方案中，所述细胞穿透肽复合物至少包括如下氨基酸序列中的一种或几种：序列1或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1或5具有至少50％同一性的氨基酸序列。
本发明第三方面提供一种核酸分子，其编码上文所述的氨基酸序列。
本发明第四方面提供一种载体，包含上文所述的核酸分子。
本发明第五方面提供一种宿主细胞，其包含上文所述的载体。
本发明第六方面提供一种复合物，包含细胞穿透肽和货物分子偶联而成的化合物，所述细胞穿透肽为上文所述的细胞穿透肽，还包含偶联于细胞穿透肽上的货物分子；优选的，所述复合物包含序列1和5中的至少一种。所述偶联可以是通过共价键或非共价键的方式连接。
本发明的优选实施方式中，所述货物分子优选为但不局限于具有药物活性的分子、具有标记作用的分子、具有靶向作用的分子中的至少一种。
本发明较为优选的实施方式中，所述生物膜破坏药物偶联于细胞穿透肽的氨基酸序列末端，优选为偶联于氨基末端。
本发明第七方面提供一种药物组合物，包括上文所述的复合物；优选的，还包括药学上允许的载体或辅料；优选的，所述药物组合物的剂型包括但不限于胶囊、软胶囊、片剂、口服液、分散片、冻干粉针、注射液或滴丸。所述载体或辅料可以是药学领域常用的稀释剂、赋形剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等等，根据剂型需要而具体选择。
本发明第八方面提供一种应用，上文所述的细胞穿透肽或细胞穿透肽复合物在制备如下a)-j)中的至少一种制剂中的应用：
a)用于治疗或预防肿瘤的制剂，优选的，所述肿瘤包括白血病、肉瘤、鳞状细胞癌或腺癌；
b)用于治疗或预防病毒感染的制剂；
c)生物膜破坏制剂；
d)荧光核素或放射标识试剂，优选的，所述荧光核素或放射标识试剂用于疾病诊断；
e)细胞毒性制剂；
f)光敏制剂；
g)基因治疗制剂；
h)神经营养制剂；
i)靶向制剂；
j)干细胞调节因子制剂。
在制备所述a)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与抗肿瘤药物或罗丹明B类化合物中的至少一种相偶联，其中，所述抗肿瘤药物优选为阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺或长春新碱中的至少一种，所述罗丹明B类化合物优选罗丹明B；
在制备所述b)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与抗病毒感染药物中的至少一种相偶联；
在制备所述c)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与生物膜破坏药物中的至少一种偶联，所述生物膜破坏药物优选为罗丹明B类化合物，更优选为罗丹明B；
在制备所述d)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与具有标记作用荧光试剂、核素或放射试剂中的至少一种偶联；
在制备所述e)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与细胞毒类药物中的至少一种相偶联，所述细胞毒类药物优选选自阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺和长春新碱中的至少一种；
在制备所述f)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与光敏药物中的至少一种相偶联，所述光敏药物优选选自甲氧沙林、盐酸氨基酮戊酸、海姆泊芬、维替泊芬、多替泊芬、mTHPC、初卟啉锡、亚甲基兰和亚甲苯兰、苯卟啉衍生物，lutelium texaphyrins(Lu-Tex)、卟非姆钠和血卟啉衍生物中的至少一种；
在制备所述g)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与基因药物中的至少一种相偶联；
在制备所述h)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与神经营养分子中的至少一种相偶联。
在制备所述i)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与具有靶向作用的分子中的至少一种相偶联；
在制备所述j)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与干细胞调节因子中的至少一种相偶联。
本发明第九方面提供一种应用，如上文所述的细胞穿透肽或细胞穿透肽复合物作为运载药物分子的载体，将运载的药物分子递送至目的细胞的细胞质和/或细胞核。可以是体外应用或体内应用。
本发明的优选实施方式中，所述药物分子可以包括抗肿瘤药物、抗病毒感染药物、生物膜破坏药物、细胞毒性药物、光敏药物、基因药物、神经营养分子、干细胞调节因子中的至少一种。
本发明的优选实施方式中，所述具有药物活性的分子包括抗肿瘤药物、抗病毒感染药物、生物膜破坏药物、光敏药物、细胞毒类药物、基因药物、神经营养分子、干细胞调节因子中的至少一种。生物膜破坏药物优选为罗丹明B类化合物。
本发明中，所述基因药物可以是：双链DNA、反义寡核苷酸和干扰小RNA(smallinterfering RNA，siRNA)等。如CPP连结抗凋亡蛋白Bcl—xL，血管内皮生长因子VEGFsiRNA和表皮生长因子HER siRNA等。
本发明的一种优选方案中，所述生物膜破坏药物优选为罗丹明B(Rhodamine B)类化合物，罗丹明6G和罗丹明123等；更优选为罗丹明B。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述光敏药物可以选自甲氧沙林(Methoxsalen)、盐酸氨基酮戊酸(Aminolevulinic acid,ALA)、海姆泊芬(Hemoporfin)、维替泊芬、多替泊芬(Duteroporphyrin)、mTHPC、初卟啉锡(SnEtz)、亚甲基兰和亚甲苯兰、苯卟啉衍生物，lutelium texaphyrins(Lu-Tex)、卟非姆钠和血卟啉衍生物(HpD)中的至少一种。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述细胞毒类药物可以选自阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺和长春新碱中的至少一种。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述神经营养分子例如可以是：神经生长因子NGF、脑源神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)，神经营养因子3(NT-3)、神经营养因子4/5(NT-4/5)、神经营养因子6(NT-6)、睫状神经营养因子(ciliaryneurotrophic factor,CNTF)、胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derivedneurotrophic factor,GDNF)和胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin like-growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)等等。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述干细胞调节因子例如可以是：调节细胞周期的各种周期素(Cyclin)和周期素依赖激酶(Cyclin－Dependent Kinase)、基因转录因子Oct4、影响细胞不对称分裂的细胞质因子和干细胞生长因子(Stem cell growth factors,SCF)等等。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述具有标记作用的分子包括荧光试剂、核素或放射试剂中的至少一种，作为一种示例，荧光试剂具体如罗丹明类化合物、异硫氰酸荧光素FITC、四氯荧光素(TET)、噻唑橙(TO)、吖啶橙(AO)和荧光素酶等等；核素或放射试剂如碳14、氢3(氚)、碘125、碘131、硫35、磷32等放射性同位素等等。
本发明中，在部分优选实施方式中，所述具有靶向作用的分子例如为CD34、CD56、CD3、表皮生长因子受体HER和血管内皮生长因子受体VEGFR等特异性结合的多肽或抗体。
本发明的细胞穿透肽作为运载药物载体可以引导细胞毒性药物进入细胞质和细胞核，增加药物利用效率，减少并发症的应用；也可以作为运载药物载体引导光敏药物进入细胞质和细胞核，增加光动力疗效，减少并发症的应用；也可以作为运载药物载体在引导siRNA、双链DNA、反义寡核苷酸等基因药物进入细胞质和细胞核，避免使用病毒载体等一些传统基因治疗方法时发生的毒副作用；还可以作为运载药物载体在引导神经营养分子通透血脑屏障进入神经元；还可以作为运载药物载体在引导干细胞调节因子进入细胞质和细胞核，调节干细胞生长、分化和创面愈合。
本发明提供的技术方案具有如下有益效果：
本发明提供一种易于制备，分子量小，不易产生免疫排斥反应，穿透能力强，细胞内半衰期长的穿透性多肽(或称为细胞穿透肽)。
本发明提供的细胞穿透肽富含碱性氨基酸，带正电荷，可迅速穿透细胞膜和核膜，可人工合成，具有无细胞毒性，安全性高等特点。
本发明提供的细胞穿透肽通过结合荧光或放射元素标识可制成诊断试剂，该细胞肽富含阳离子，可以选择性地与肿瘤细胞结合，富集于肿瘤细胞及其组织，可用于肿瘤等疾病的标识诊断。
本发明提供的细胞穿透肽结合罗丹明B形成的穿透肽细胞膜靶向破坏药物，可以与肿瘤细胞膜结合，渗透肿瘤细胞膜进入细胞质和细胞核，导致细胞膜破坏和细胞溶解死亡，使得本不具有显著抗癌效果的罗丹明B在与本发明的穿透性多肽结合后出现了显著的抗癌效果。
本发明基于穿透肽细胞膜靶向破坏药物的发现，也提供一种穿透肽细胞膜靶向破坏药物的制备方法，该方法是将具有细胞膜蛋白或磷脂破坏作用的化合物耦合于细胞穿透肽末端，利用细胞穿透肽的阳离子与细胞生物膜内的阴离子结合，暴露化合物作用的靶向分子，达到协同合作靶向破坏生物膜结构，溶解细胞，治疗疾病的作用。
本发明还提供一种穿透性多肽结合的光敏药物，增进了光敏药物的细胞膜和细胞核渗透，具有较好的抗癌效果。
本发明还提供一种穿透性多肽结合阿霉素形成的抗癌药物，增加了阿霉素的细胞膜和细胞核渗透，具有显著的抗癌效果。
采用本发明的细胞穿透肽，能够满足以下医学应用和医学研究的要求：
1)较大比例地选择性结合肿瘤细胞，富集于肿瘤组织，可以用于肿瘤组织标记诊断；2)可以穿透细胞膜和核膜，用于靶向细胞膜的药物开发；3)可以用于定位细胞核；4)可以作为载体，运载分子进入肿瘤细胞；5)可以作为载体，运载抗肿瘤药物进入细胞核；6)可以耦合罗丹明B等细胞膜破坏化合物，选择性破坏肿瘤细胞膜，导致肿瘤细胞溶解死亡。
本发明的细胞穿透肽具有以下优点：
1)该多肽穿透能力强，十分钟即可穿透肿瘤细胞膜，进入细胞核；2)该多肽运载能力强，能携带多种分子进入细胞核；3)该多肽分子量小，具有通透性好，不易变性，免疫原性低的特点；4)该多肽制备方便，成本低，可用人工合成方法直接合成，也可以通过基因工程的方法制备；5)该多肽无细胞毒性，经肝脏、肾脏和胃肠代谢。
本发明在优选方案中所提供的穿透肽罗丹明B细胞膜靶向破坏药物具有以下优点：
1)该穿透肽罗丹明B细胞膜破坏药物，选择性破坏肿瘤细胞膜，导致肿瘤细胞溶解死亡，对正常细胞毒性低。2)该穿透肽罗丹明B细胞膜破坏药物对白血病和肉瘤细胞杀伤效果较好；对鳞状上皮癌细胞和正常细胞无显著杀伤效果；3)该穿透肽罗丹明B细胞膜破坏药物能高度聚集于肿瘤组织，有利于该药的抗肿瘤效果。
附图说明
图1：本发明实施例中细胞穿透肽TCPP(Tumor Cell Penetrating Peotides,TCPP)预测的三维结构示意图；
图2：细胞穿透肽FITC-TCPP与肿瘤细胞膜结合和细胞渗透过程；
图3中的图A为细胞穿透肽FITC-TCPP与肿瘤细胞结合和渗透作用的浓度相关性；图3中的图B为细胞穿透肽FITC-TCPP对肿瘤细胞增殖抑制作用的影响；图3中的图C、D为FITC-TCPP多肽的动物体内分布和标记研究结果。
图4为本发明细胞穿透肽细胞毒性药物阿霉素(Tumour Cell PenetratingPeotides-Doxycycline，TCPP-Dox)的设计制备及其抗肿瘤作用的相关结果，其中，图4中的图A-C为TCPP-Dox穿透肽与肿瘤细胞膜结合和细胞渗透能力研究；4D：TCPP-Dox穿透肽的肿瘤细胞杀伤效率研究；
图5为本发明细胞穿透肽靶向细胞膜破坏药物(Tumour Cell PenetratingPeotides Damage Membrane,TCPP-DM)的设计制备和抗肿瘤应用研究的相关结果，共聚焦显微镜观察TCPP-DM穿透肽药物与肿瘤细胞膜结合和细胞质、细胞核渗透的观察结果；
图6为本发明肿瘤细胞穿透肽靶向细胞膜破坏药物TCPP-DM与肿瘤细胞株K562结合效率的流式细胞分析结果；
图7中各图为本发明肿瘤细胞穿透肽靶向细胞膜破坏药物TCPP-DM的抗肿瘤应用研究的相关结果；其中，图7中的图A，B：TCPP-DM穿透肽药物的肿瘤细胞增殖抑制作用；图7中的图C，D：TCPP-DM穿透肽药物治疗前期肿瘤的动物实验；图7中的图E，F：TCPP-DM穿透肽药物治疗后期肿瘤的动物实验；图7中的图G，H：TCPP-DM穿透肽药物治疗肿瘤的动物体内分布分析。
图8：TCPP-DM穿透肽药物诱导细胞凋亡的流式细胞研究结果；
图9：TCPP-DM穿透肽药物对肿瘤细胞增殖抑制实验的拟合分析；
图10中的图A-B为本发明肿瘤细胞穿透肽及其复合物的优化实验结果；
图11-12为本发明肿瘤细胞穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM抗肿瘤治疗的超微结构动态变化研究。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例和附图进一步阐述本发明的技术方案。
1.实验方法介绍
1.1试剂及仪器
试剂：CD14A重组蛋白购置于PeproTech,USA；T7Select人肝癌cDNA文库(Novagen,USA)；多肽购置于强耀生物科技有限公司，China；Cell Counting Kit-8(CCK-8)毒性检测试剂盒、Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购置于DOJINDO(东仁化学科技有限公司，Japan)；Importzole、Ivermectin购置于MCE，USA。
Importzole、Ivermectin购置于MCE，USA；K562，Jurkat，MNNG，MG63细胞株均来自于中山大学生命科学院张雁教授实验室；细胞培养基均购置于Sigma-Aldrich，USA。
使用仪器：流式细胞仪(分析)(FACSCalibur)，BD，USA；激光扫描共聚焦显微镜(TCS-SP5)，LEICA，Germany；全自动倒置荧光成像系统(Axio Observer Z1)，ZEISS，Germany；透射电镜，JEOL，Japan；小动物活体成像系统(IVIS Lumina XP SeriesⅢ)，PerkinElmer，USA。
实验动物：实验动物购置于中山大学实验动物中心东校区，SCXK(粤)2016-0029，动物实验伦理由中山大学伦理委员会审批通过。
1.2.细胞培养实验
将白血病细胞株K562、Jurkat细胞培养于RPMI 1640+10％FBS完全培养基中，将骨肉瘤细胞株MG63、MNNG细胞培养于DF+5％FBS完全培养基中，HFF细胞培养于DF+10％FBS完全培养基中，HUVEC细胞培养于SFM+5ng/mL EGF+10％FBS完全培养基中，将所有细胞培养于37℃，5％CO2培养箱中，当细胞密度达到80％时进行传代或者细胞实验。
1.3.共聚焦显微镜荧光观察实验
待细胞密度达到80％时，悬浮细胞直接离心弃去培养液，PBS缓冲液清洗一次，细胞计数，取5×10^5/ml细胞浓度悬液，加入TCPP多肽，使终浓度为3μmol，避光，常温下孵育15分钟。贴壁细胞则用PBS清洗1次，0.25％TE消化，离心，细胞计数，取2×10^5/ml细胞，种植于含有盖玻片的6孔板中，37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。加入本发明得到的细胞穿透肽TCPPs，使终浓度为3μMol，避光，常温下孵育5min，10min，15min，20min，25min，30min，1h。PBS缓冲液清洗3次，每次4分钟。用4％PFA固定15分钟。PBS缓冲液清洗3次，每次4分钟。使用含有DAPI防荧光淬灭剂封片，激光共聚焦显微镜下观察拍照。Importinα/β阻断实验则在孵育多肽前加入Importzole 25μMol或者Ivermectin 40μMol，37℃，孵育1h，后加入3μMol多肽孵育30min。
1.4.流式细胞检测
待细胞密度达到80％时，悬浮细胞直接离心弃去培养液，PBS缓冲液清洗一次。贴壁细胞使用PBS缓冲液清洗一次，0.25％TE消化细胞，离心，细胞计数。取5×10^5/ml细胞浓度悬液100μl，加入本发明后续实施例中所获得的的荧光穿透肽至1.5μMol或3μMol,常温孵育15分钟，PBS缓冲液洗3次，使用40μm滤膜过滤，流式分析仪分析。
1.5.细胞杀伤实验
在细胞培养过程中，当细胞密度达到80％时，悬浮细胞直接离心弃去培养液，PBS缓冲液清洗一次，细胞计数。贴壁细胞使用PBS缓冲液清洗一次，0.25％TE消化细胞，离心，细胞计数。取K562及Jurkat细胞5×10^5/ml，MG63，MNNG细胞1×10^5/ml，种植于96孔板中，每孔100μl。细胞杀伤实验分为穿透肽药物NC组(对照组)，1.5μMol组，3μMol组，7.5μMol组，15μMol组。在药物处理24小时及48小时后加入10μl CCK8试剂，37℃，5％CO2培养箱中培养1小时后使用多功能酶标仪在450nm波长下检测吸光值，每组重复3次。计算细胞活性百分比。
1.6.细胞增殖实验
将K562细胞直接离心弃去培养液，PBS缓冲液清洗一次，细胞计数。取K562细胞1×10^5/ml，种植于24孔板中，各细胞分为对照组及多肽药物处理组。每组设3个副孔。每天加入穿透肽药物，使终浓度为3μMol。从第2天开始，每天细胞计数。
1.7.多肽在小鼠体内分布实验
使用20mg/kg戊巴比妥钠以50mg/kg腹腔注射麻醉小鼠；将浓度为15μmol的穿透肽药物100μl鼠尾静脉注射到MNNG颌下皮下成瘤后裸鼠体内。使用PerkinElmer LuminaⅢ小动物活体成像系统对裸鼠成像，使用光谱分离方法，每10分钟拍摄图片一张，共拍摄2小时；使用光谱分离方法对小鼠体内荧光进行光谱分离，分析荧光在裸鼠体内分布情况。颈椎脱臼处死小鼠，解剖心，肝，脾，肺，肾，舌，脑，肿瘤等组织，再次曝光，确认多肽在组织分布情况。组织冰冻切片，丙酮固定，PBS洗3次，每次5min，DAPI染色5min，PBS洗3次，每次5min，防淬灭荧光封片剂封片，激光共聚焦下观察。
1.8.Axio Observer Z1观察
将MNNG骨肉瘤细胞以2×10^5细胞数种植于激光共聚焦皿中，37℃，5％CO2培养箱中过夜。将MNNG培养于Axio Observer Z1中，培养条件37℃，5％CO2。加入4.5μmol穿透肽药物，第1h每隔1min拍摄一张照片，第2h每隔2min拍摄一张照片，共拍摄2h。使用软件将照片合成视频。
1.9.透射电镜
将MNNG骨肉瘤细胞培养于10cm培养皿中，当生长至80％～90％时加入7.5μmol穿透肽药物，放置于37℃，5％CO2培养箱中孵育24h。PBS洗3次，加入2.5％戊二醛4℃固定过夜，PBS清洗3次每次10min。用1％饿酸固定，静置1.5h，PBS清洗3次每次10min。2％醋酸铀快染，4℃，1h。脱水，渗透，包埋，超薄切片，铀铅双染色，透射电镜观察。
下面结合附图对本发明的技术方案做进一步说明：
实施例一、细胞渗透肽的筛选、序列设计和合成
1.噬菌体展示技术筛选肿瘤细胞渗透肽
以肿瘤细胞膜蛋白为靶分子，利用“T7Select人肺癌cDNA文库(Novagen)”富集与细胞膜蛋白结合的噬菌体，经噬菌体结合、洗脱和富集的多次循环，直至噬菌体文库回收率不再增加，随机挑选48个单克隆噬菌体扩增后，通过分光光度计检测每个单克隆噬菌体与肿瘤细胞膜蛋白的结合效率。挑选与肿瘤细胞膜分子结合率高的单克隆噬菌体，经PCR及序列测定分析，确定氨基酸序列1可能为细胞穿透肽，共计54个氨基酸，其中碱性氨基酸29个，占比53.7％，赖氨酸：精氨酸：组氨酸是18：10：1，富含赖氨酸和精氨酸，命名为TCPP(TumourCell Penetrating Peotide)，其三维结构预测如图1。在TCPP基础上设计了TCPP1，TCPP2，TCPP3和TCPP4，其氨基酸序列依次如序列表中序列1-5所示。
实施例二、穿透肽标记物的设计制备、体内外细胞标记及渗透性研究
1、穿透肽标记物FITC-TCPP的合成
应用固相合成法，按照上述TCPPs氨基酸序列合成FITC-TCPP(通过商业合成公司上海强耀生物科技有限公司合成)。合成的方向是从C到N端，先将所要合成肽链的羧末端氨基酸的羧基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组分经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应接长肽链。这样的步骤重复多次进行下去，即缩合——洗涤——去保护——中和和洗涤——下一轮缩合，最后达到所需要合成的肽链长度。具体合成由下列几个循环组成：①去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用piperidine去除氨基的保护基团。②激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。③循环：这两步反应反复循环直到合成完成。接着合成的肽从树脂切割和去保护。最后被沉淀、洗脱、冷冻干燥，纯度＞95％，N末端耦合FITC(绿色荧光)标签FITC-TCPP，用于细胞学实验。
2、穿透肽标记物FITC-TCPP在肿瘤细胞标记中的应用
将肿瘤细胞培养于37℃，5％CO2培养箱中，细胞密度达到80％时，悬浮细胞直接离心弃去培养液，PBS缓冲液清洗一次，细胞计数，取5×10^5/ml细胞浓度悬液，加入FITC-TCPP多肽，使终浓度为3μmol，避光，常温下孵育15分钟。贴壁细胞则用PBS清洗1次，0.25％TE消化，离心，细胞计数，取2×10^5/ml细胞，种植于含有盖玻片的6孔板中，37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。加入FITC-TCPP多肽，使终浓度为20μg/ml，避光，常温下孵育15分钟。PBS缓冲液清洗3次，每次4分钟。用4％PFA固定15分钟。PBS缓冲液清洗3次，每次4分钟。使用含有DAPI防荧光淬灭剂封片，激光共聚焦显微镜下观察拍照。结果如图2所示，图中灰色为FITC-TCPP多肽结合的位置，证明了该多肽首先与肿瘤细胞膜结合，然后渗透到细胞质，再通过核膜渗透到细胞核内。图3A是不同浓度FITC-TCPP与K562细胞孵育30min结合效率，随着FITC-TCPP浓度升高，结合阳性细胞数量也升高，多肽与K562结合呈浓度相关。图3B显示FITC-TCPP对K562及MG63细胞毒性实验，结果发现FITC-TCPP对K562及MNG63并没有杀伤作用。
3、穿透肽标记物FITC-TCPP在体内组织器官标记中的应用
常规腹腔注射2％戊巴比妥钠麻醉小鼠，鼠尾静脉注射FITC-TCPP多肽100μl(1mg/ml),十分钟后开始小鼠体内成像；使用PerkinElmer LuminaⅢ小动物活体成像系统对裸鼠成像，每五分钟拍摄图片一张，使用光谱分离方法对小鼠体内FITC荧光进行光谱分离，分析荧光在裸鼠体内分布情况,共拍摄4小时；颈椎脱臼处死小鼠，解剖心，肝，脾，肺，肾等组织，再次曝光，确认多肽在组织分布情况；并进行组织冰冻切片，用含DAPI防淬灭封片剂封片，激光共聚焦显微镜下观察，结果如图3C所示，随着时间变化，穿透肽标记物FITC-TCPP经血液循环开始分布于口腔、头颈部、胸腹部。随着时间增加，头部、胸腹部荧光逐步消退，但是4小时以后依然在口腔、肝脏、肾脏、膀胱及肠道依然聚集，尿液中可见荧光排泄。图3D显示小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、舌、颌下组织在体外的荧光成像；在实验中通过对各脏器的组织切片观察，发现FITC-TCPP主要富集在肝、肾、肺、舌及颌下组织。
这些实验结果表明本发明的细胞穿透肽标记物可用于肝、肾、肺、舌及颌下组织等组织器官的标记。
实施例三、穿透肽细胞毒性药物的设计制备及抗肿瘤作用
1、肿瘤细胞穿透肽阿霉素(TCPP-DOX)细胞毒性药物的设计制备
在上述实施例二穿透肽TCPP和FITC-TCPP制备过程中，分别偶联阿霉素(购自意法玛西亚)，制备成FITC-TCPP-Dox(即TCPP-Dox)和FITC-Dox。用HPLC纯化多肽，将纯化后的溶液冻干，避光，既得到纯品。在密封包装，-20度保存以前，分别取少量的成品多肽，做MS的分子量鉴定和HPLC分析的纯度鉴定，鉴定结果显示成FITC-TCPP-Dox药物及FITC-Dox药物合成成功。
2、肿瘤细胞穿透肽阿霉素FITC-TCPP-Dox及FITC-Dox药物的肿瘤细胞杀伤实验
按照常规细胞培养方法，K562和MNNG细胞浓度分别为1×105/ml和5×104/ml，各自应用RPMI1640和DF培养液，种植于96孔板中，每孔100μl；药物浓度分组为3.5μM，7μM，13.5μM，35μM，每浓度各设置3个副孔；于培养0h及24h添加药物，培养后24h及48h加入CCK8试剂10μl，孵育1h后测定CCK8吸光值，计算细胞杀伤效果。实验结果参见图4A，K562及MNNG这两种肿瘤细胞系对FITC-TCPP-Dox肿瘤药物与FITC-Dox抗肿瘤药物吸收率对比分析，结果显示K562及MNNG对FITC-TCPP-Dox的细胞结合效率较FITC-Dox抗肿瘤药物高。图4B两组荧光密度分析显示FITC-TCPP-Dox与K562及MNNG两种肿瘤细胞结合荧光强度(平均IDO：0.077±0.022及0.055±0.015)显著高于FITC-Dox组(平均IDO：0.028±0.033及0.019±0.006)。图4C显示K562细胞与FITC-TCPP-Dox及FITC-Dox结合的流式细胞分析结果，FITC-TCPP-Dox与K562细胞结合率(93.7％)显著高于FITC-Dox组(6.3％)。图4D比较FITC-TCPP-Dox及FITC-Dox对K562及MNNG细胞杀伤效果分析，结果显示FITC-TCPP-Dox对K562及MNNG在24h时即产生杀伤作用，起效快，且细胞毒性作用较FITC-Dox强。
实施例三的试验结果表明本发明的肿瘤细胞穿透肽偶联抗肿瘤药物有利于增加药物的吸收，增加抗肿瘤治疗效果。
实施例四、肿瘤细胞穿透肽靶向细胞膜破坏药物(Tumour Cell PenetratingPeotides Damage Membrane,TCPP-DM)的设计制备和抗肿瘤应用研究
1、肿瘤穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM的设计制备和筛选
在上述实施例二穿透肽TCPP制备过程中，偶联细胞膜化合物罗丹明B(RhodamineB，红色荧光)，制备成肿瘤穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM，用HPLC纯化多肽，将纯化后的溶液冻干，避光，既得到纯品。在密封包装，-20度保存以前，分别取少量的成品多肽，做MS的分子量鉴定和HPLC分析的纯度鉴定，鉴定结果显示成TCPP-DM药物合成成功。
2、肿瘤穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM的肿瘤细胞增殖抑制实验
首先分析肿瘤穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM的肿瘤细胞结合和渗透能力，在K526细胞培养液中添加3μMol的TCPP-DM药物，分别于添加后5min,10min,15min,20min,25min,30min,1h用共聚焦显微镜观察药物与细胞结合和渗透特性，结果如图5所示：在5min时TCPP-DM结合于细胞膜，10min时渗透到细胞浆，15min时渗透到细胞浆和细胞核，20min和30minTCPP-DM渗入的细胞核固缩，1hour细胞核无DAPI染色，表明细胞凋亡坏死。
图6显示TCPP-DM与肿瘤细胞株K562结合效率的流式细胞分析结果，不同浓度TCPP-DM与K562细胞孵育30min结合效率，随着TCPP-DM浓度升高，结合阳性细胞数量也升高，TCPP-DM与K562结合呈浓度相关。
图7A和7B显示TCPP-DM对不同类型肿瘤细胞进行CCK8细胞增殖抑制实验，结果发现从3μMol浓度开始TCPP-DM对K562、Jurkat、MG63、MNNG等肿瘤细胞即有显著的增殖抑制作用，且随浓度升高，抑制作用增强，但是对正常血管内皮细胞株HUVEC的增殖无显著抑制作用。图7B进一步研究TCPP-DM对K562细胞增殖的长期抑制效果，结果发现从第三天开始K562增殖被抑制，统计第5、6天细胞存活率，发现TCPP-DM处理组细胞生存数量显著低于空白对照组。通过研究TCPP-DM对正常血管内皮细胞株HUVEC的增殖影响，结果发现TCPP-DM对HUVEC细胞增殖无显著抑制作用。
图8应用AnnexinⅤ/PI染色，分析TCPP-DM处理引导K562及包皮成纤维细胞株HFF的细胞凋亡情况，结果显示TCPP-DM药物3μMol浓度处理24h后K562有22.7％细胞处在凋亡晚期，而HFF处在凋亡晚期细胞为3.76％。
图9，对K562及MG63细胞增殖抑制实验进行拟合分别为 拟合程度较好，经计算，TCPP-DM对K562及MG63的半数致死量分别为10.35μMol及11.4μMol。
以上实验结果表明：将一些本身细胞毒性较小的化合物与肿瘤细胞穿透肽耦合以后，可以选择性诱导肿瘤细胞凋亡，显著抑制肿瘤细胞增殖，这些肿瘤包括但不限于白血病细胞K562、Jurkat和骨肉瘤细胞MG63、MNNG。
3、肿瘤穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM抗肿瘤治疗的动物实验研究
培养骨肉瘤细胞MNNG于DF+5％FBS中，当MNNG生长至80％-90％时收集细胞。将MMNG以1×10^6细胞数注射于25只4～5周龄BALB/c nod小鼠颌下皮下。裸鼠随机分组，分为早期治疗组及后期治疗组，每组5只。早期治疗组于皮下注射MNNG骨肉瘤细胞1×10^6细胞数后24小时开始鼠尾静脉给药，后期治疗组注射MNNG 7天后开始隔天鼠尾静脉给药，早期治疗组分为对照(NC)组，TCPP-DM药物5mg/kg组；后期治疗组分为对照(NC)组，TCPP-DM药物5mg/kg组，阿霉素(Dox)4mg/kg组，共给药5次。早期治疗组从出现肿瘤后开始每天监测肿瘤体积，后期治疗组从出现肿瘤后开始隔天检测肿瘤体积，给药5次后处死小鼠。
图7C和7D显示早期治疗组TCPP-DM抗肿瘤治疗的动物实验结果，因早期治疗组及其对照组中各有两只裸鼠未成瘤，予以排除。图7E和7F显示后期治疗组TCPP-DM抗肿瘤治疗的动物实验结果。TCPP-DM抗肿瘤治疗的动物MNNG皮下成瘤的体积均小于未治疗对照组，且与4mg/kg阿霉素治疗效果相类似。该动物实验表明TCPP-DM具有明显的抗肿瘤治疗效果。
进一步的研究，如图7G和7H显示，TCPP-DM除了分布于小鼠体内的肝、肾、肺等代谢器官以外，主要富集肿瘤区域，有利于药物对肿瘤治疗和利用药物进行肿瘤诊断及随访。这种肿瘤富集效应可能与阳离子TCPP与肿瘤细胞膜静电结合有关，不仅有利于TCPP-DM的肿瘤选择性治疗，也可用于肿瘤的体内标记和诊断。
实施例五、肿瘤细胞穿透肽及其复合物的优化实验
为了进一步明确TCPP的功能区域和优化其细胞穿透能力，发明人在TCPP基础上设计和合成了TCPP1，TCPP2，TCPP3和TCPP4，并分别偶联罗丹明B制备成TCPP1-DM，TCPP2-DM，TCPP3-DM和TCPP4-DM。图10A和10B显示上述多肽药物的肿瘤细胞结合和渗透实验的流式细胞分析，将TCPP序列中的两个KKRK序列改变成AAAA序列后发现TCPP1-DM穿透肽药物对K562细胞的穿透能力显著下降；将单独KKRK序列改变成AAAA的TCPP2-DM和TCPP3-DM对穿透肽渗透K562细胞的能力并没有明显影响；值得注意的是将TCPP中EGGR序列后的氨基酸去掉后的TCPP4-DM显著提升了TCPP的渗透能力。
实施例六、肿瘤细胞穿透肽细胞膜靶向破坏药物TCPP-DM抗肿瘤应用的超微结构动态变化
图11，在Axio Observer Z1下观察TCPP与MNNG孵育2h的动态观察，结果显示穿透肽渗透使细胞膜形成逐渐增大的空泡，同时细胞逐步皱缩，当空泡破裂后，细胞完全凝固死亡。相同形态箭头所示细胞内空泡及细胞皱缩死亡情况的前后对比。
图12显示是MNNG细胞在TCPP-DM 7.5μMol处理24h后的透射电镜观察，结果显示MNNG细胞内形成空泡，部分双层核膜分离，核仁深染，线粒体及核糖体分解。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，故凡未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州一代医药科技有限公司
<120> 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用
<130> 123
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 54
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)...(54)
<223> 人工序列（对应于TCPP）
<400> 1
Ser Ser Lys Glu Lys Lys Lys Gly Lys Lys Arg Lys Lys Lys Arg Glu
1 5 10 15
Arg Glu Gly Gln Lys Glu Gly Gly Arg Arg Lys Glu Lys Arg Lys Glu
20 25 30
Lys Lys Arg Lys Glu Gly Gly Arg Glu Gly Arg Lys Glu Gly Arg Lys
35 40 45
Ser Ala Asp His Pro Ser
50
<210> 2
<211> 54
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)...(54)
<223> 人工序列（对应于TCPP1）
<400> 2
Ser Ser Lys Glu Lys Lys Lys Gly Ala Ala Ala Ala Lys Lys Arg Glu
1 5 10 15
Arg Glu Gly Gln Lys Glu Gly Gly Arg Arg Lys Glu Lys Arg Lys Glu
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Glu Gly Gly Arg Glu Gly Arg Lys Glu Gly Arg Lys
35 40 45
Ser Ala Asp His Pro Ser
50
<210> 3
<211> 54
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)...(54)
<223> 人工序列（对应于TCPP2）
<400> 3
Ser Ser Lys Glu Lys Lys Lys Gly Ala Ala Ala Ala Lys Lys Arg Glu
1 5 10 15
Arg Glu Gly Gln Lys Glu Gly Gly Arg Arg Lys Glu Lys Arg Lys Glu
20 25 30
Lys Lys Arg Lys Glu Gly Gly Arg Glu Gly Arg Lys Glu Gly Arg Lys
35 40 45
Ser Ala Asp His Pro Ser
50
<210> 4
<211> 54
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)...(54)
<223> 人工序列（对应于TCPP3）
<400> 4
Ser Ser Lys Glu Lys Lys Lys Gly Lys Lys Arg Lys Lys Lys Arg Glu
1 5 10 15
Arg Glu Gly Gln Lys Glu Gly Gly Arg Arg Lys Glu Lys Arg Lys Glu
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Glu Gly Gly Arg Glu Gly Arg Lys Glu Gly Arg Lys
35 40 45
Ser Ala Asp His Pro Ser
50
<210> 5
<211> 40
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)...(40)
<223> 人工序列（对应于TCPP4）
<400> 5
Ser Ser Lys Glu Lys Lys Lys Gly Lys Lys Arg Lys Lys Lys Arg Glu
1 5 10 15
Arg Glu Gly Gln Lys Glu Gly Gly Arg Arg Lys Glu Lys Arg Lys Glu
20 25 30
Lys Lys Arg Lys Glu Gly Gly Arg
35 40
Claims (18)
1.一种细胞穿透肽，其特征在于，其选自如下氨基酸序列：序列1、序列2、序列3、序列4或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1-5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。
2.一种细胞穿透肽复合物，其特征在于，其包含一种或两种以上的细胞穿透肽，所述细胞穿透肽选自具有如下氨基酸序列的肽：序列1、序列2、序列3、序列4或序列5所示的氨基酸序列，或与序列1-5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。
3.一种核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1或2所述的氨基酸序列。
4.一种载体，其特征在于，包含权利要求3所述的核酸分子。
5.一种宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求4所述的载体。
6.一种复合物，其特征在于，包含细胞穿透肽和货物分子偶联而成的化合物，所述细胞穿透肽为权利要求1所述的细胞穿透肽；优选的，所述细胞穿透肽的氨基酸序列如序列1或序列5所示。
7.根据权利要求6所述的复合物，其特征在于，所述货物分子为罗丹明B(RhodamineB)，所述罗丹明B偶联于细胞穿透肽的氨基酸序列末端，优选为偶联于氨基末端。
8.根据权利要求6所述的复合物，其特征在于，所述货物分子选自具有药物活性的分子、具有标记作用的分子、具有靶向作用的分子中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的复合物，其特征在于，所述具有药物活性的分子包括抗肿瘤药物、抗病毒感染药物、生物膜破坏药物、光敏药物、细胞毒类药物、基因药物、神经营养分子、干细胞调节因子中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的复合物，其特征在于，所述生物膜破坏药物偶联于细胞穿透肽的氨基酸序列末端，优选为偶联于氨基末端。
11.根据权利要求9或10所述的复合物，其特征在于，所述生物膜破坏药物为蛇孢假壳素(ophiobolin)、大环寡肽(cyclotide)、肉桂霉素(cinnamycin)和耐久霉素(duramycin)类化合物；优选为蛇孢假壳素。
12.根据权利要求9所述的复合物，其特征在于，所述光敏药物选自甲氧沙林、盐酸氨基酮戊酸、海姆泊芬、维替泊芬、多替泊芬、mTHPC、初卟啉锡、亚甲基兰和亚甲苯兰、苯卟啉衍生物，lutelium texaphyrins(Lu-Tex)、卟非姆钠和血卟啉衍生物中的至少一种；
所述细胞毒类药物选自阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺和长春新碱中的至少一种。
13.根据权利要求8所述的复合物，其特征在于，所述具有标记作用的分子包括荧光试剂、核素或放射试剂中的至少一种。
14.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求6-13任一项所述的复合物；优选的，还包括药学上允许的载体或辅料；优选的，所述药物组合物的剂型为胶囊、软胶囊、片剂、口服液、分散片、冻干粉针、注射液或滴丸。
15.一种应用，其特征在于，权利要求1所述的细胞穿透肽或权利要求2所述的细胞穿透肽复合物在制备如下a)-j)中的至少一种制剂中的应用：
a)用于治疗或预防肿瘤的制剂，优选的，所述肿瘤包括白血病、肉瘤、鳞状细胞癌或腺癌；
b)用于治疗或预防病毒感染的制剂；
c)生物膜破坏制剂；
d)荧光核素或放射标识试剂，优选的，所述荧光核素或放射标识试剂用于疾病诊断；
e)细胞毒性制剂；
f)光敏制剂；
g)基因治疗制剂；
h)神经营养制剂；
i)靶向制剂；
j)干细胞调节因子制剂。
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，在制备所述a)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与抗肿瘤药物或罗丹明B类化合物中的至少一种相偶联，其中，所述抗肿瘤药物优选为阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺或长春新碱中的至少一种，所述罗丹明B类化合物优选罗丹明B；
在制备所述b)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与抗病毒感染药物中的至少一种相偶联；
在制备所述c)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与生物膜破坏药物中的至少一种偶联，所述生物膜破坏药物优选为罗丹明B类化合物，更优选为罗丹明B；
在制备所述d)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与具有标记作用荧光试剂、核素或放射试剂中的至少一种偶联；
在制备所述e)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与细胞毒类药物中的至少一种相偶联，所述细胞毒类药物优选选自阿霉素、多西他赛、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺和长春新碱中的至少一种；
在制备所述f)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与光敏药物中的至少一种相偶联，所述光敏药物优选选自甲氧沙林、盐酸氨基酮戊酸、海姆泊芬、维替泊芬、多替泊芬、mTHPC、初卟啉锡、亚甲基兰和亚甲苯兰、苯卟啉衍生物，lutelium texaphyrins(Lu-Tex)、卟非姆钠和血卟啉衍生物中的至少一种；
在制备所述g)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与基因药物中的至少一种相偶联；
在制备所述h)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与神经营养分子中的至少一种相偶联。
在制备所述i)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与具有靶向作用的分子中的至少一种相偶联；
在制备所述j)的制剂中应用时，所述细胞穿透肽与干细胞调节因子中的至少一种相偶联。
17.一种应用，其特征在于，如权利要求1所述的细胞穿透肽或权利要求2所述的细胞穿透肽复合物作为运载药物分子的载体，将运载的药物分子递送至目的细胞的细胞质和/或细胞核。
18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述药物分子包括抗肿瘤药物、抗病毒感染药物、生物膜破坏药物、细胞毒性药物、光敏药物、基因药物、神经营养分子、干细胞调节因子中的至少一种。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711001060.5A CN108070025B (zh) | 2017-10-24 | 2017-10-24 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
| PCT/CN2018/089742 WO2019080504A1 (zh) | 2017-10-24 | 2018-06-04 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711001060.5A CN108070025B (zh) | 2017-10-24 | 2017-10-24 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108070025A true CN108070025A (zh) | 2018-05-25 |
| CN108070025B CN108070025B (zh) | 2019-11-19 |
Family
ID=62159630
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711001060.5A Active CN108070025B (zh) | 2017-10-24 | 2017-10-24 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108070025B (zh) |
| WO (1) | WO2019080504A1 (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019080504A1 (zh) * | 2017-10-24 | 2019-05-02 | 中山大学附属口腔医院 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
| CN110893236A (zh) * | 2019-10-09 | 2020-03-20 | 中山大学 | 溶酶体靶向的抗体药物偶联物及其应用 |
| CN111588858A (zh) * | 2019-02-01 | 2020-08-28 | 张大慈 | 组合物用于制备治疗癌细胞的药物的用途 |
| CN111789963A (zh) * | 2019-04-04 | 2020-10-20 | 苏州健雄职业技术学院 | 一种肿瘤靶向的药物载体及其制备方法和应用 |
| CN114702553A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 上海市第六人民医院 | 一种多肽mdosr3及其合成方法与应用 |
| CN116253805A (zh) * | 2023-03-23 | 2023-06-13 | 深圳霁因生物医药转化研究院 | 一种多肽、水凝胶和用途 |
| CN116785409A (zh) * | 2023-08-23 | 2023-09-22 | 青岛汇丰动物保健品有限公司 | 一种多肽在制备提高家禽肠道健康的兽药中的应用 |
| CN118127120A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-06-04 | 吉林医药学院 | 一种测试BaxBH3类药物穿透性的方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103998458A (zh) * | 2011-08-30 | 2014-08-20 | 医学研究理事会 | 具有中央疏水域的细胞穿透肽 |
| CN104428310A (zh) * | 2012-06-26 | 2015-03-18 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 细胞穿透肽和鉴定细胞穿透肽的方法 |
| CN104736553A (zh) * | 2012-09-13 | 2015-06-24 | 日内瓦大学 | 细胞穿透肽 |
| CN105829336A (zh) * | 2013-10-17 | 2016-08-03 | 首尔大学校产学协力团 | α-螺旋细胞穿透肽多聚体、其产生方法及其用途 |
| CN106255699A (zh) * | 2014-03-10 | 2016-12-21 | 汉阳大学校产学协力团 | 细胞穿透肽和使用其输送生物活性物质的方法 |
| CN106852146A (zh) * | 2014-05-21 | 2017-06-13 | 塞克洛波特斯公司 | 细胞穿透肽及其制备和使用方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108070025B (zh) * | 2017-10-24 | 2019-11-19 | 中山大学附属口腔医院 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
-
2017
- 2017-10-24 CN CN201711001060.5A patent/CN108070025B/zh active Active
-
2018
- 2018-06-04 WO PCT/CN2018/089742 patent/WO2019080504A1/zh active Application Filing
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103998458A (zh) * | 2011-08-30 | 2014-08-20 | 医学研究理事会 | 具有中央疏水域的细胞穿透肽 |
| CN104428310A (zh) * | 2012-06-26 | 2015-03-18 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 细胞穿透肽和鉴定细胞穿透肽的方法 |
| CN104736553A (zh) * | 2012-09-13 | 2015-06-24 | 日内瓦大学 | 细胞穿透肽 |
| CN105829336A (zh) * | 2013-10-17 | 2016-08-03 | 首尔大学校产学协力团 | α-螺旋细胞穿透肽多聚体、其产生方法及其用途 |
| CN106255699A (zh) * | 2014-03-10 | 2016-12-21 | 汉阳大学校产学协力团 | 细胞穿透肽和使用其输送生物活性物质的方法 |
| CN106852146A (zh) * | 2014-05-21 | 2017-06-13 | 塞克洛波特斯公司 | 细胞穿透肽及其制备和使用方法 |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019080504A1 (zh) * | 2017-10-24 | 2019-05-02 | 中山大学附属口腔医院 | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 |
| CN111588858A (zh) * | 2019-02-01 | 2020-08-28 | 张大慈 | 组合物用于制备治疗癌细胞的药物的用途 |
| CN111789963A (zh) * | 2019-04-04 | 2020-10-20 | 苏州健雄职业技术学院 | 一种肿瘤靶向的药物载体及其制备方法和应用 |
| CN111789963B (zh) * | 2019-04-04 | 2021-12-28 | 苏州健雄职业技术学院 | 一种肿瘤靶向的药物载体及其制备方法和应用 |
| CN110893236A (zh) * | 2019-10-09 | 2020-03-20 | 中山大学 | 溶酶体靶向的抗体药物偶联物及其应用 |
| CN114702553A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-05 | 上海市第六人民医院 | 一种多肽mdosr3及其合成方法与应用 |
| CN114702553B (zh) * | 2022-04-02 | 2023-05-26 | 上海市第六人民医院 | 一种多肽mdosr3及其合成方法与应用 |
| CN116253805A (zh) * | 2023-03-23 | 2023-06-13 | 深圳霁因生物医药转化研究院 | 一种多肽、水凝胶和用途 |
| CN116253805B (zh) * | 2023-03-23 | 2023-10-24 | 深圳霁因生物医药转化研究院 | 一种多肽、水凝胶和用途 |
| CN116785409A (zh) * | 2023-08-23 | 2023-09-22 | 青岛汇丰动物保健品有限公司 | 一种多肽在制备提高家禽肠道健康的兽药中的应用 |
| CN116785409B (zh) * | 2023-08-23 | 2023-11-07 | 青岛汇丰动物保健品有限公司 | 一种多肽在制备提高家禽肠道健康的兽药中的应用 |
| CN118127120A (zh) * | 2024-05-07 | 2024-06-04 | 吉林医药学院 | 一种测试BaxBH3类药物穿透性的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019080504A1 (zh) | 2019-05-02 |
| CN108070025B (zh) | 2019-11-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108070025B (zh) | 一种细胞穿透肽和细胞穿透肽复合物及二者的应用 | |
| Zhu et al. | Transferrin/aptamer conjugated mesoporous ruthenium nanosystem for redox-controlled and targeted chemo-photodynamic therapy of glioma | |
| Hu et al. | Glioma therapy using tumor homing and penetrating peptide-functionalized PEG–PLA nanoparticles loaded with paclitaxel | |
| Ju et al. | Liposomes, modified with PTDHIV-1 peptide, containing epirubicin and celecoxib, to target vasculogenic mimicry channels in invasive breast cancer | |
| Zhang et al. | Cell-permeable NF-κB inhibitor-conjugated liposomes for treatment of glioma | |
| Ghafary et al. | Design and preparation of a theranostic peptideticle for targeted cancer therapy: Peptide-based codelivery of doxorubicin/curcumin and graphene quantum dots | |
| JP2020121977A (ja) | 疎水性薬物担体および抗菌剤としての使用のための両親媒性ペプチドナノ微粒子 | |
| Kang et al. | A brain tumor-homing tetra-peptide delivers a nano-therapeutic for more effective treatment of a mouse model of glioblastoma | |
| CN112386709B (zh) | 一种靶向多肽修饰的载药脂蛋白纳米递药系统及其制备和应用 | |
| Gao et al. | Multiple functionalized carbon quantum dots for targeting glioma and tissue imaging | |
| Lu et al. | A dual receptor targeting-and BBB penetrating-peptide functionalized polyethyleneimine nanocomplex for secretory endostatin gene delivery to malignant glioma | |
| Gao et al. | A progressively targeted gene delivery system with a pH triggered surface charge-switching ability to drive angiogenesis in vivo | |
| CN113633625B (zh) | 一种杂膜负载氧化磷酸化抑制剂的纳米药物及其制备方法 | |
| CN106413738A (zh) | 受体靶向构造物和其使用 | |
| Chu et al. | Protein based biomaterials for therapeutic and diagnostic applications | |
| US11622990B2 (en) | VAP polypeptide and use thereof in preparation of drug for targeted diagnosis and treatment of tumor | |
| Wang et al. | Autophagy inhibition changes the disposition of non-viral gene carriers during blood-brain barrier penetration and enhances TRAIL-induced apoptosis in brain metastatic tumor | |
| Zhao et al. | Construction of functional targeting daunorubicin liposomes used for eliminating brain glioma and glioma stem cells | |
| Lee et al. | Dual-functional cyclic peptide switch on mesoporous nanocontainers for selective CD44 targeting and on–off gatekeeping triggered by conformational transformation | |
| Yang et al. | Co-delivery of paclitaxel and doxorubicin using polypeptide-engineered nanogels for combination therapy of tumor | |
| RU2451509C1 (ru) | Противоопухолевый препарат | |
| Zheng et al. | Hypoxia-responsive calixarene-grafted self-assembled peptide hydrogel for inflammation suppression in ischemic stroke | |
| Yang et al. | A near-infrared two-photon-sensitive peptide-mediated liposomal delivery system | |
| Ning et al. | Genetically engineered macrophages as living cell drug carriers for targeted cancer therapy | |
| Lee et al. | Cyclic iRGD peptide as a dual-functional on–off gatekeeper of mesoporous nanocontainers for targeting NRP-1 and selective drug release triggered by conformational conversion |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |