CN108041274A - 预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂 - Google Patents

预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂，由以下重量份的中草药制备而成：草果20～30份、黄连20～30份、丁香20～30份、水蛭20～30份。本发明来源于纯天然药物，经合理配比获得，具有低残留、低耐药、无毒副作用、防治效果良好等优点。试验证明，在易发病的时间针对性的使用本发明的添加剂，可有效预防罗非鱼链球菌病的发生。

Description

预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂
技术领域
本发明属于复方中草药饲料添加剂技术领域，尤其涉及一种预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂。
背景技术
链球菌是一种广泛分布于自然界的溶血性革兰氏阳性菌，常引起哺乳类动物疾病，特别易感人类和牛。链球菌也是近十年淡水与海水养殖鱼类最为严重的水生病原菌之一，温水性鱼类受链球菌的危害更为严重。
在全世界的热带、亚热带地区，罗非鱼已有几十年的养殖历史，可谓历史悠久。目前中国已经成为世界上的罗非鱼生产大国，中国罗非鱼养殖年产量居世界第一。除了西藏和青海等高原地区外，罗非鱼在我国30多个省市广泛养殖。但是，近年来链球菌病在国内各地区暴发流行，导致大批罗非鱼死亡，造成巨大经济损失。
发病的鱼要及时进行治疗，但是，在多数情况下，口服抗生素效果不佳，主要原因是抗生素采用拌饲投喂，而受感染鱼几乎已闭口停食；投喂抗生素期间，虽可一定程度减少病鱼的死亡率，然一旦停喂，死亡率会再次增高。此种情况下，养殖户常常延长喂药时间或者增加用药量，这又诱导抗药性菌株产生，还可造成鱼肉中药物残留。对于罗非鱼链球菌病的防治强调“防重于治”，目前尚无高效的商品化疫苗能预防罗非鱼链球菌病。中草药制剂作为天然药物，因其低残留、低耐药的特点成为未来防治链球菌病的研究方向。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种纯天然提取、低残留、低耐药、无毒副作用、防治效果良好的预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂，由以下重量份的中草药制备而成：草果20～30份、黄连20～30份、丁香20～30份、水蛭20～30份。
上述饲料添加剂，将中草药粉碎磨成粉末，采用水煎醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得。
水煎醇沉法包括以下步骤：称取草果20～30份、黄连20～30份、丁香20～30份、水蛭20～30份，按质量体积比1∶5加水浸泡0.5h，之后100℃水浴1h，过滤；滤渣再按质量体积比1∶5加水继续水浴，过滤，重复两次；所得滤液合并，3000r/min离心30min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入95％酒精，使混合液乙醇浓度达80％，静置24h，旋转蒸发回收酒精至药液浓度为1g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
上述饲料添加剂的使用方法，将添加剂按60～160mL药液/kg饲料拌入基础饲料投喂。
针对罗非鱼链球菌病缺乏安全有效药物的问题，发明人采用纯中草药，经合理配比获得了本发明预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂。具体方析如下：草果为毛茛科植物草果、三角叶草果、峨嵋野连或云南草果的根茎，具有抗溃疡、抑制胃酸分泌、抗炎镇痛、抑菌作用，对金色葡萄球菌、霍乱弧菌、链球菌作用较强；黄连是唇形科植物黄连的干燥根，是常用中草药，其味苦，性寒，具有清热燥湿、泻火解毒、抗菌作用；丁香的根(丁香根)、茎叶(丁香茎叶)亦供药用，有抗菌、强心、利尿、镇吐等药理作用；水蛭为单子叶植物薯蓣科黄独的块茎，有解毒消肿，抗菌消炎、化痰散结、凉血止血等功效。
本发明来源于纯天然药物，具有低残留、低耐药、无毒副作用、防治效果良好等优点。试验证明，在易发病的时间针对性的使用本发明的添加剂，可有效预防罗非鱼链球菌病的发生。
具体实施方式
实施例1预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂的制备
表1预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂配方
序号 草果 黄连 丁香 水蛭
1 20g 20g 30g 30g
2 30g 25g 25g 20g
3 25g 25g 25g 25g
4 25g 30g 25g 20g
5 20g 25g 25g 30g
参考表1的配方，取中草药分别制备配方一至五的添加剂，先将中草药粉碎磨成粉末，采用水煎醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得，具体如下：按配方称取各原料，按质量体积比1∶5加水浸泡0.5h，之后100℃水浴1h，过滤；滤渣再按质量体积比1∶5加水继续水浴，过滤，重复两次；所得滤液合并，3000r/min离心30min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入95％酒精，使混合液乙醇浓度达80％，静置24h，旋转蒸发回收酒精至药液浓度为1g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
使用方法：在高温季节针对性的使用进行防疫，以防止疾病的发生。将配方1至5的药液分别按药液饲料比60、80、100、120、160mL/kg，用喷雾器将其均匀喷洒于相应质量的基础日粮上，混匀，使其充分被饲料吸收，阴干24h备用。将含添加剂饲料每日按体重的3％的量投喂，连续使用7天。结果：感染对照组发病后死亡率达到95.83％，对照药物氟苯尼考治疗组死亡率为70.83％，保护率为26.08％。复方中草药饲料添加剂预防效果显著，高剂量组(120ml/kg)、中剂量组(60ml/kg)、低剂量组(30ml/kg)的保护率分别为47.82％、34.78％、26.08％，均明显高于氟苯尼考治疗组和感染对照组。
复方中草药饲料添加剂对罗非鱼链球菌病预防效果的研究
1材料方法
1.1材料
(1)实验用菌
无乳链球菌临床分离株，由广西大学药理实验室分离鉴定保存。实验用菌复壮：菌种划线接种于羊血平板培养基，37℃培养16～18h。挑取单个菌落，接种至5％血清脑心浸出液肉汤培养基中，37℃培养至16～18h。使用时用生理盐水10倍稀释备用。
(2)实验用药
复方中草药饲料添加剂(按实施例1配方3制备)。
氟苯尼考，购自北京华邦动物药业有限公司
(3)实验用鱼
吉富罗非鱼(体重50～100g/体长8～15cm)，由广西水产研究所提供。
1.2方法
(1)复方中药饲料添加剂的制备
制法同实施例1。
将药液分别按一定药液饲料比(mL/kg)，用喷雾器将其均匀喷洒于相应质量的基础日粮上，混匀，使其充分被饲料吸收，阴干24h备用。氟苯尼考添加量为0.05g/kg。
(2)实验用鱼准备
采用吉富罗非鱼(体重50～100g/体长8～15cm)，由广西水产研究所提供，实验前暂养于水产研究所1立方米大水缸中。
(3)实验用菌
实验前取菌种，划线纯于血平板进行纯培养。37℃培养16～18h。再用生理盐水洗下菌落，采用比浊法配置成7.5×108CFU/mL菌液备用。
(4)实验处理
取罗非鱼180尾，分为感染不给药组，低剂量组(30ml/kg)，中剂量组(60ml/kg)，高剂量组(120ml/kg)，氟苯尼考对照组以及生理盐水对照组。感染对照组和生理盐水对照组只给空白料，其余各组投喂相应含药饲料。投喂7天后用无乳链球菌临床分离株进行腹腔注射攻毒，攻毒菌量为7.5×108CFU/mL，每尾0.2M1。攻毒后观察7天，统计罗非鱼死亡情况，并观察攻毒后罗非鱼的病症变化。死亡罗非鱼采取脑组织接种于血平板于37℃培养，观察有无链球菌生长。按各组鱼死亡数计算组方对罗非鱼的保护率。保护率计算方法：保护率＝(阳性感染组死亡数-试验组死亡数)/阳性感染组死亡数×100％。
2实验结果
攻毒后7天各组死亡情况统计如表2：
表2实验结果
日期 30ml/kg 60ml/kg 120ml/kg 氟苯尼考 空白对照 阴性对照
总数 24 24 24 24 24 24
死亡数 17 15 12 17 23 0
剩余 7 9 12 7 1 24
死亡率 70.83％ 62.50％ 50％ 70.83％ 95.83％ 0％
保护率 26.08％ 34.78％ 47.82％ 26.08％
对死亡鱼采取脑组织接种血平板，经培养均发现有链球菌生长。第7天之后没有发现死鱼，存活罗非鱼全部处死，采取脑组织接种于血平板，未见有链球菌生成。
3实验结论
本发明的饲料添加剂能有效预防罗非鱼链球菌病的发生，取得了预期成果，值得进一步开发利用。

Claims (4)

1.一种预防罗非鱼链球菌病的复方中草药饲料添加剂，其特征在于由以下重量份的中草药制备而成：草果20～30份、黄连20～30份、丁香20～30份、水蛭20～30份。
2.根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于：将中草药粉碎磨成粉末，采用水煎醇沉法提取，再经旋转蒸发浓缩，即得。
3.根据权利要求2所述的饲料添加剂，其特征在于所述水煎醇沉法包括以下步骤：称取草果20～30份、黄连20～30份、丁香20～30份、水蛭20～30份，按质量体积比1∶5加水浸泡0.5h，之后100℃水浴1h，过滤；滤渣再按质量体积比1∶5加水继续水浴，过滤，重复两次；所得滤液合并，3000r/min离心30min；上清于旋转蒸发仪浓缩，加入95％酒精，使混合液乙醇浓度达80％，静置24h，旋转蒸发回收酒精至药液浓度为1g/mL；115℃高压灭菌15min，-20℃保存备用。
4.权利要求1所述饲料添加剂的使用方法，其特征在于：将添加剂按60～160mL药液/kg饲料拌入基础饲料投喂。
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