CN108029884A - 一种猪饲料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种猪饲料的制备方法，将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，得到猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为0.1～50:950～999.9。本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理，溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，方便后续提取。

Description

一种猪饲料的制备方法
技术领域
本发明涉及一种猪饲料的制备方法。
背景技术
饲料是猪养殖业发展的物质基础，关系到国家粮食与食品安全和养殖业的可持续发展。我国是猪肉的生产和消费大国。为了提高猪肉的产量与适量，预防疾病，追求利益，养殖户往往在猪饲料中添加大量抗生素、激素以及化学合成药物等，进而使药物残留日益严重，使猪肉的质量严重下降，严重影响了人类身体健康，随着人们水产品消费水平的不断增加，具有安全问题的猪肉必须得到全面而彻底的解决。本发明的增肥猪饲料，采用健康的绿色食材，营养丰富，在保证猪肉品质的同时，增肥效果明显。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种猪饲料的制备方法，本发明可以促进猪的生长和改善猪肉肉质。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种猪饲料的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，得到猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为0.1～50:950～999.9；
所述猪饲料原料包括新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、膨润土、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素E、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠中的一种或任意比例的两种以上。
一种猪饲料的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，经烘干后，即得猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为0.1～50:950～999.9；
所述猪饲料原料包括新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、膨润土、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素E、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠中的一种或任意比例的两种以上。
所述海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70％，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21％，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤a)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
步骤3)所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
步骤4)所述混合培养基至含水量为60％，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
步骤5)混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC31192和CICC 10168。
发明具有以下有益技术效果：
1、本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理，溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，方便后续提取。
2、本发明采用好氧兼厌氧的产氨棒杆菌在缺氧条件下发酵，生产ATP，ATP是一种高能磷酸化合物，在细胞中，它能与ADP的相互转化实现贮能和放能，从而保证了细胞各项生命活动的能量供应；产氨棒杆菌在无氧的猪肠道内可以继续产生ATP，供给猪能量，有利于猪的催肥。
3、通过融冻法提高产氨棒杆菌细胞的通透性，可以使产氨棒杆菌产生的ATP更容易从细胞膜中渗透到细胞外，产物效果明显好于未经处理的产氨棒杆菌的产物。
具体实施方式
下面结合具体实例进一步说明本发明。
实施例1
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，即为猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为5:995；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、氯化钠、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例2
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，即为猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为10:990；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、氯化钠、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为35℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例3
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，即为猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为20:980；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、氯化钠、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为45℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例4
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，即为猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为40:960；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米油、氯化钠、硫酸钾、赖氨酸、谷氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质1次，匀质温度均为40℃，匀质时间为30min，匀质压力为25MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例5
将海藻提取物按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，得到猪饲料；海藻提取物和猪饲料原料的质量比为10:990；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、氯化钠、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取物按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质3次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，第三次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例6
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，即为猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为5:995；所述猪饲料原料是新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、氯化钠、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素C、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠按照质量比650:240:30:15:15:10:15:5:13:3:1:2:0.5:0.2:0.1:0.1:0.1的组合物。
其中海藻提取液按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：
实验一：
普通处理(搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5制备的溶菌酶处理相比，数据见表1
表1
回收率(％) 酶活性(U/mg)
普通处理 72.7 14567
实施例1 91.7 21101
实施例2 84.7 19831
实施例3 88.3 20790
实施例4 91.7 20903
实施例5 89.3 20737
由表1实施例1和普通处理制备的溶菌酶相比，本发明无论是在溶菌酶回收率，还是酶活性方面都明显好于普通处理；由实施例1至实施例3制备的溶菌酶比较可以看出匀质温度对溶菌酶的回收率和活性还是有一定影响，其中实施例1采用40℃总体效果最好；由实施例1、实施例4和实施例5制备的溶菌酶比较可以看出匀质压力和次数对溶菌酶的回收率和活性也有一定影响，并非压力越大，时间越长就越好，综合比较实施例1制备的效果最佳。
实验二：
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1供试材料：针对采用普通猪饲料(除未加海藻提取液外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(除制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外，其它制作方法与实施例1一致)、对比2(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例1和实施例6对同一批猪(大约克)进行饲养，饲养3个月。
1.2试验设计：试验设5个处理，分别为普通猪饲料(除未加粉状海藻提取液外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(除制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外，其它制作方法与实施例1一致)、对比2(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例1和实施例6。对同一批猪进行饲养，每个处理100头猪，饲养3个月后，记录猪死亡率、猪平均体重和肉料比。
本实验除实验用处理不同外其他管理均一致。
2结果与分析
普通猪饲料(除未加粉状海藻提取液外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(除制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外，其它制作方法与实施例1一致)、对比2(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例1和实施例6处理相比，数据见表1。
表1各处理对猪死亡率、的影响
死亡率(％) 起始平均体重(kg) 最终平均体重(kg) 肉料比
普通饲料 5 17.3 86.4 1:3.38
对比1 3 17.2 88.9 1:3.26
对比2 2 17.3 89.3 1:3.24
实施例1 0 17.4 94.7 1:2.86
实施例6 1 17.5 92.6 1:2.99
由表1可以看出本发明喂养的猪较普通饲料喂养的猪死亡率低，生长快，采用融冻法处理的产氨棒杆菌制备的猪饲料实施例1和实施例2效果明显好于对比1(除产氨棒杆菌未经融冻法处理直接使用外，其它制作方法均与实施例1一致)；由实施例1和对比2(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)数据比较可以得知溶菌酶制备过程中通过匀质后效果好于普通搅拌；采用新鲜海带提取的提取物的实施例1效果又好于采用晾干海带提取的提取物的实施例6。猪出栏后，对猪肉口感进行调查，实施例1的满意度最高。

Claims (9)

1.一种猪饲料的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，得到猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为0.1～50:950～999.9;
所述猪饲料原料包括新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、膨润土、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素E、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠中的一种或任意比例的两种以上。
2.一种猪饲料的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：
将海藻提取液按照一定质量比添加到猪饲料原料中混匀，通过造粒后制得的颗粒，经烘干后，即得猪饲料；海藻提取液和猪饲料原料的质量比为0.1～50:950～999.9;
所述猪饲料原料包括新玉米、大豆粕、玉米胚芽粕、石粉、矿质磷酸氢钙、棉籽粕、水解羽毛粉、玉米酒精槽、膨润土、硫酸钠、赖氨酸、蛋氨酸、维生素E、氯化胆碱、植酸酶、甜菜碱和丁酸钠中的一种或任意比例的两种以上。
3.如权利要求1或2所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：所述海藻提取液按照以下步骤进行：
1）、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2）、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3）、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4）、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70%，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21%，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5）、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3）得到的海藻滤液加入到步骤4）得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
4.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a）菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10%的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b）融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤a）得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液 1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g;
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
5.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗
脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
6.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：步骤3）所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
7.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：步骤4）所述混合培养基至含水量为60%，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12%，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
8.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：步骤5）混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
9.如权利要求3所述的猪饲料的制备方法，其特征在于：所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
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